实验7 直接抗人球蛋白实验ppt课件
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《抗人球蛋白试验》课件
监测治疗效果和复发
抗人球蛋白试验在监测治疗效 果中的应用
抗人球蛋白试验在预测复发风 险中的应用
抗人球蛋白试验在评估治疗效 果和复发风险中的局限性
抗人球蛋白试验在临床实践中 的应用案例
抗人球蛋白试验的 注意事项
试验前的准备
确保试验环境清洁、无菌 准备试验所需的试剂和仪器 确保试验人员具备相应的专业知识和技能 确保试验对象符合试验要求，并签署知情同意书
抗人球蛋白试验的 发展趋势和展望
抗人球蛋白试验的进展
抗人球蛋白试验的发展历程 抗人球蛋白试验的应用领域 抗人球蛋白试验的技术进步 抗人球蛋白试验的未来发展趋势
抗人球蛋白试验的未来发展方向
应用领域：拓展到更多疾病 诊断和治疗领域
标准化：建立统一的检测方 法和标准，提高检测结果的
可比性
技术进步：提高检测灵敏度 和准确性，降低检测成本
抗人球蛋白试验的优缺点
优点：操作简单，结果准确， 可用于检测多种疾病
缺点：需要专业人员操作， 成本较高，可能存在假阳性
和假阴性结果
抗人球蛋白试验的 应用
诊断自身免疫性疾病
抗人球蛋白试验： 用于检测自身免疫 性疾病的抗体
自身免疫性疾病： 免疫系统攻击自身 组织或器官的疾病
应用：抗人球蛋白 试验可以帮助诊断 多种自身免疫性疾 病
应用：用于诊断和治疗多种 疾病，如系统性红斑狼疮、
类风湿性关节炎等
目的：检测人体内是否存在 抗人球蛋白抗体
重要性：有助于医生制定更 准确的治疗方案，提高患者
的生活质量
抗人球蛋白试验的 方法
直接抗人球蛋白试验
原理：通过检测血清中抗人球蛋白抗体的含量，来判断是否感染了某些疾病 步骤：取患者血清，加入抗人球蛋白抗体，观察反应结果 结果判断：如果出现凝集反应，说明患者感染了某些疾病 注意事项：试验过程中要避免污染，保证结果的准确性
实验7 直接抗人球蛋白实验
2021/6/16
16
结束语
若有不当之处，请指正，谢谢！
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
2021/6/16
10
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
进一步分析。
2021/6/16
5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
2021/6/16
6
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
2021/6/16
7
直接抗人球蛋Biblioteka 试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
2021/6/16
13
结果判定
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
2021/6/16
8
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
抗人球蛋白试验PPT课件
7.Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾没 有妊娠Rh阳性胎儿者，间接反应阳性，第一次输 血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变 为阳性
.
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
抗人球蛋白
自身抗体
直接Coombs试验
.
7
4.结果解释
阳性：待检标本RBC已致敏IgG不完全抗体 或补体；
阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体 。
.
8
间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验原理：
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不 完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上 相应的抗原。
9.阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性 发作后用抗补体血清做试验直接反应常为 阳性。
.
16
我们科室Coombs试验已开展，报告方法： 1、接收标本； 2、完成试验； 3、免疫组中免疫手工中报告结果。
.
17谢谢.18 Nhomakorabea抗人球蛋白试验
马强虎
.
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs） 等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验
，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库姆 斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为 第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗
体，使红细胞凝集。
.
2
抗人球法是检测不完全抗体的经典方法， 分为直接试验(直接反应)和间接试验(间 接反应)。
2.新生儿同种免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血 病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血 输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合 引起 的溶血病，直接常为阴性或弱阳性，间接反 应为阳性.
.
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
抗人球蛋白
自身抗体
直接Coombs试验
.
7
4.结果解释
阳性：待检标本RBC已致敏IgG不完全抗体 或补体；
阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体 。
.
8
间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验原理：
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不 完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上 相应的抗原。
9.阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性 发作后用抗补体血清做试验直接反应常为 阳性。
.
16
我们科室Coombs试验已开展，报告方法： 1、接收标本； 2、完成试验； 3、免疫组中免疫手工中报告结果。
.
17谢谢.18 Nhomakorabea抗人球蛋白试验
马强虎
.
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs） 等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验
，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库姆 斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为 第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗
体，使红细胞凝集。
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2
抗人球法是检测不完全抗体的经典方法， 分为直接试验(直接反应)和间接试验(间 接反应)。
2.新生儿同种免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血 病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血 输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合 引起 的溶血病，直接常为阴性或弱阳性，间接反 应为阳性.
实验直接抗人球蛋白实验
第10页，共15页。
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须 单克隆IgG抗D血清致敏）
第11页，共15页。
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。 按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC
5％阴性对照RBC
5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
录结果。
第13页，共15页。
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集者直接抗球 蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
第14页，共15页。
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白， 以防止假阴性结果。
第9页，共15页。
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min，分离血 浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份的压积红细胞 各5滴混匀，备用； 2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积的单克隆 IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min； 3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍体积的 NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制成约5％的致敏红 细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备用
——直接抗人球蛋白试验阳性
第3页，共15页。
致敏红细胞
抗人球蛋白直ຫໍສະໝຸດ 抗人球蛋白试验第4页，共15页。
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗- C3
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须 单克隆IgG抗D血清致敏）
第11页，共15页。
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。 按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC
5％阴性对照RBC
5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
录结果。
第13页，共15页。
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集者直接抗球 蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
第14页，共15页。
注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白， 以防止假阴性结果。
第9页，共15页。
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min，分离血 浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份的压积红细胞 各5滴混匀，备用； 2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积的单克隆 IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min； 3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍体积的 NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制成约5％的致敏红 细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备用
——直接抗人球蛋白试验阳性
第3页，共15页。
致敏红细胞
抗人球蛋白直ຫໍສະໝຸດ 抗人球蛋白试验第4页，共15页。
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗- C3
抗人球蛋白试验ppt课件
抗人球蛋白试验
马强虎
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs） 等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验 ，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库姆 斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为 第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗
体，使红细胞凝集。
2
抗人球法是检测不完全抗体的经典方法， 分为直接试验(直接反应)和间接试验(间 接反应)。 直接Coombs试验：是检查被检红细胞上 有无不完全抗体。 间接Coombs试验：是检查血清中游离的 不完全抗体。
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
9.阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性 发作后用抗补体血清做试验直接反应常为 阳性。
16
我们科室Coombs试验已开展，报告方法： 1、接收标本； 2、完成试验； 3、免疫组中免疫手工中报告结果。
自身抗体
直接Coombs试验
7
4.结果解释 阳性：待检标本RBC已致敏IgG不完全抗体
或补体； 阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体
。
8
间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验原理：
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不 完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上 相应的抗原。
在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不 完全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏
13
3.药物诱发的免疫性溶血性贫血 ①α-甲基多巴型：直接及间接反应均阳性。 ②青霉素型：直接反应阳性，间接反应阴性 ③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为IgM，偶有IgG 型者，直接反应为阳性，间接反应阴性
马强虎
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs） 等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验 ，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库姆 斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为 第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗
体，使红细胞凝集。
2
抗人球法是检测不完全抗体的经典方法， 分为直接试验(直接反应)和间接试验(间 接反应)。 直接Coombs试验：是检查被检红细胞上 有无不完全抗体。 间接Coombs试验：是检查血清中游离的 不完全抗体。
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
9.阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性 发作后用抗补体血清做试验直接反应常为 阳性。
16
我们科室Coombs试验已开展，报告方法： 1、接收标本； 2、完成试验； 3、免疫组中免疫手工中报告结果。
自身抗体
直接Coombs试验
7
4.结果解释 阳性：待检标本RBC已致敏IgG不完全抗体
或补体； 阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体
。
8
间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验原理：
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不 完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上 相应的抗原。
在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不 完全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏
13
3.药物诱发的免疫性溶血性贫血 ①α-甲基多巴型：直接及间接反应均阳性。 ②青霉素型：直接反应阳性，间接反应阴性 ③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为IgM，偶有IgG 型者，直接反应为阳性，间接反应阴性
实验7 直接抗人球蛋白实验
学习交流PPT
16
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
学习交流PPT
8
受检标本
红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀） 1000g 离心3min 分离上层血浆
2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min）
（注意操作轻柔，防溶血！）
3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
• 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗 IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。
• 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈 阴性反应。
• 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性。
学习交流PPT
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实验重点掌握： • 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
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10
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
• 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将未 出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
• 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。 加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心 15s，观察凝集，记录结果。
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结果判定
实验7 直接抗人球蛋白实验
进一步分析。
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5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
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6
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
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7
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
实验七 直接抗人球蛋白试验
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1
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
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2
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
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11
受检者标本检测
• 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。 按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
1
阴性对照 1 1
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阳性对照
1 1
12
受检者标本检测
• 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
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16
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
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14
注意事项
• 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
• 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白， 以防止假阴性结果。
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5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
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6
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
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7
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
实验七 直接抗人球蛋白试验
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1
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
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2
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
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11
受检者标本检测
• 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对照。 按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
1
阴性对照 1 1
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阳性对照
1 1
12
受检者标本检测
• 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
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❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
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14
注意事项
• 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
• 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白， 以防止假阴性结果。
实验直接抗人球蛋白实验优秀课件
致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗
- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
实验直接抗人球蛋白实验优秀 课件
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
实验7 直接抗人球蛋白实验
❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
2021/6/16
13
结果判定
2021/6/16
9
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
2021/6/16
16
结束语
若有不当之处，请指正，谢谢！
进一步分析。
2021/6/16
5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
2021/6/16
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第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
2021/6/16
7
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
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8
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
2021/6/16
13
结果判定
2021/6/16
9
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
2021/6/16
16
结束语
若有不当之处，请指正，谢谢！
进一步分析。
2021/6/16
5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
2021/6/16
6
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
2021/6/16
7
直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
2021/6/16
8
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
实验7直接抗人球蛋白实验
注意事项：避免干扰因素， 确保实验准确性
解读方法：结合临床资料， 综合分析结果
直接抗人球蛋白实 验的局限性
直接抗人球蛋白实验的局限性之一是可能出现假阳性结果，即错误地将正常红细胞判定为阳性。 假阳性结果可能是由于抗体与红细胞结合的亲和力不足或抗体浓度过高导致。 抗体与红细胞结合的亲和力不足可能导致实验结果不稳定，容易出现假阳性或假阴性。 抗体浓度过高可能导致非特异性结合增加，从而产生假阳性结果。
直接抗人球蛋白实 验的步骤
采集静脉血液样本 避免溶血和污染
分离血清或血浆 记录样本信息
准备试剂和器材： 确保所需的试剂 和器材已经准备 好，包括抗人球 蛋白抗体、离心
机、试管等。
样本处理：将 待检测的样本 进行离心处理， 分离出血浆和
红细胞。
抗体孵育：将 抗人球蛋白抗 体与离心后的 红细胞混合， 孵育一定时间。
红细胞上的抗原与特异性抗体结合后，可引起红细胞凝集，出现阳性反应。
未结合抗体的红细胞不会发生凝集，呈现阴性反应。
通过观察凝集程度，可以判断待测血清中抗体的含量。
直接抗人球蛋白实验的原理是利用抗原抗体反应的特异性，将抗人球蛋白抗体与待测血清中的红细胞结合，观察 是否发生凝集反应。 抗人球蛋白抗体与红细胞上相应的抗原结合后，可引起红细胞凝集，从而判断待测血清中是否存在相应的抗体。
正确使用试剂：使用经 国家药品监督管理局批 准的合格试剂，确保实 验结果的准确性。
标准化操作：严格按 照试剂盒说明书进行 操作，避免操作过程 中的人为误差。
避免交叉污染：在实验 过程中，要确保不同样 本之间的交叉污染，以 免影响实验结果。
阳性结果：可能存在自身 抗体
阴性结果：不能完全排除 自身抗体存在
直接抗人球蛋白实 验的局限性之一是 可能出现假阴性结 果。
实验7 直接抗人球蛋白实验
2021/6/16
9
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
进一步分析。
2021/6/16
5
直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
2021/6/16
6
第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
2021/6/16
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直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
2021/6/16
16
结束语
若有不当之处，请指正，谢谢！
❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
2021/6/16
13
结果判定
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
2021/6/16
10
未致敏红细胞（阴性对照）：
取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。 （无须单克隆IgG抗D血清致敏）
抗人球蛋白试验 PPT
抗人球蛋白试验
抗人球蛋白试验
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs）
等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验 ，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库 姆斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作 为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异
抗体，使红细胞凝集。
抗人球蛋白试验
4.冷凝集素综合征： 直接反应阳性，间接反应阴性（ 37℃）。由于本病红细 胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗 IgG或抗IgM抗血清做试验时则结果阴性，如以抗补体的 抗血清做试验则直接反应阳性。
抗人球蛋白试验
14
5.红细胞血型不合引起的输血反应
6.ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的 血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏 以前，直接反应阳性
1.撕开检测卡的封膜于反应腔中依标记分别加入 相应的0.5%筛选细胞LIM悬液100ul，各管再 加入待检血浆或血清25ul；
2.将检测卡37℃孵育≧10 min，取出，置离心 机1800r/min 1min, 2500r/min 1min离心；
3.取出，结果判读；（方法同上）
抗人球蛋白试验
10
同种异型抗体
7.Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾没 有妊娠Rh阳性胎儿者，间接反应阳性，第一次输 血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变 为阳性
抗人球蛋白试验
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
体存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物 。 但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗 原抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。 加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全 抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼 可见的凝集。 这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红 细胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。
抗人球蛋白试验
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs）
等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验 ，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库 姆斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作 为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异
抗体，使红细胞凝集。
抗人球蛋白试验
4.冷凝集素综合征： 直接反应阳性，间接反应阴性（ 37℃）。由于本病红细 胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗 IgG或抗IgM抗血清做试验时则结果阴性，如以抗补体的 抗血清做试验则直接反应阳性。
抗人球蛋白试验
14
5.红细胞血型不合引起的输血反应
6.ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的 血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏 以前，直接反应阳性
1.撕开检测卡的封膜于反应腔中依标记分别加入 相应的0.5%筛选细胞LIM悬液100ul，各管再 加入待检血浆或血清25ul；
2.将检测卡37℃孵育≧10 min，取出，置离心 机1800r/min 1min, 2500r/min 1min离心；
3.取出，结果判读；（方法同上）
抗人球蛋白试验
10
同种异型抗体
7.Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾没 有妊娠Rh阳性胎儿者，间接反应阳性，第一次输 血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变 为阳性
抗人球蛋白试验
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
体存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物 。 但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗 原抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。 加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全 抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼 可见的凝集。 这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红 细胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。
实验7-直接抗人球蛋白实验PPT课件
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 ❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可
呈阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳
性。
14
实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
15
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
3
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和
抗- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
进一步分析。
9
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
10
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
12
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
呈阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳
性。
14
实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
15
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
3
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和
抗- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
进一步分析。
9
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
10
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
12
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
实验7直接抗人球蛋白实验
洗涤红细胞
将红细胞洗涤多次， 去除血浆中的干扰物 质。
进行实验
将抗人球蛋白血清与 洗涤后的红细胞混合， 观察反应结果。
结果判定
根据显微镜下观察到 的反应结果，判断是 否为阳性或阴性。
02
实验材料
实验器材
01
试管
用于混合和离心处理。
02
移液管
用于精确测量溶液。
03
离心机
用于分离血清和红细胞。
04
显微镜
05实验总结与展望Fra bibliotek实验总结
实验原理
直接抗人球蛋白实验是一种用于检测红细胞表面是否存在不完全抗体（IgG和IgM）的 实验。这些不完全抗体可以引起红细胞凝集，导致溶血性贫血。
实验步骤
实验包括洗涤红细胞、加抗体、离心和观察结果等步骤。
实验结果
实验结果为阳性或阴性，阳性结果表明存在不完全抗体，阴性结果表明不存在不完全抗 体。
阳性结果
若直接抗人球蛋白实验结果为阳性， 则表示样本中存在针对红细胞抗原的 抗体，即红细胞抗原已被致敏。
结果解读
阴性解读
阴性结果通常表明患者未发生免疫性溶血性贫血等疾病，但 也需要结合其他检查结果和临床表现进行综合判断。
阳性解读
阳性结果提示患者可能存在免疫性溶血性贫血等疾病，需要 进一步检查和确诊。同时，阳性结果也可能出现在某些生理 或非免疫性因素导致红细胞抗原暴露的情况下。
观察红细胞凝集现象。
实验试剂
抗人球蛋白抗体
用于检测红细胞上的抗体。
盐水
用于清洗红细胞。
缓冲液
维持实验体系的pH值。
标记抗体
用于标记红细胞上的抗体。
实验样本
患者血清
含有待检测的抗体。
实验7 直接抗人球蛋白实验
——直接抗人球蛋白试验阳性
学习交流PPT
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致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
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4
抗球蛋白试剂通常有三种： • 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗-
C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 • 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG • 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 • 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
• 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将未 出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
• 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。 加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心 15s，观察凝集，记录结果。
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结果判定
进一步分析。
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直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 直接抗人球蛋白试验操作
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直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
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受检标本
红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀） 1000g 离心3min 分离上层血浆
2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min）
（注意操作轻柔，防溶血！）
3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
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致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
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4
抗球蛋白试剂通常有三种： • 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗-
C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 • 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG • 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 • 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
• 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将未 出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
• 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性。 加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g离心 15s，观察凝集，记录结果。
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结果判定
进一步分析。
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直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 直接抗人球蛋白试验操作
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直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
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受检标本
红细胞悬液配制：
1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀） 1000g 离心3min 分离上层血浆
2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min）
（注意操作轻柔，防溶血！）
3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
抗人球蛋白试验(直接法)
抗人球蛋白试验（直接法）简介抗人球蛋白试验（直接法）是一种常见的免疫学实验方法，用于检测机体内特定抗体（抗人球蛋白抗体）的水平和活性。
通过这一试验可以评估机体对人球蛋白的免疫反应情况，是许多研究和临床诊断工作中重要的实验手段之一。
实验原理抗人球蛋白试验（直接法）基于抗原-抗体相互作用的原理。
人球蛋白是一种外源蛋白，当人体受到人球蛋白的免疫刺激后，机体会产生抗人球蛋白抗体。
通过将待测血清与标准人球蛋白溶液混合反应，通过测定溶液中抗体与抗原结合的程度，进而评价该血清中抗人球蛋白抗体的水平。
实验步骤1.准备试剂：标准人球蛋白溶液、待测血清、辅助试剂等。
2.取等量的标准人球蛋白溶液和待测血清，混合均匀。
3.将混合溶液孵育一段时间，促使抗体与抗原结合。
4.添加特定试剂，使未结合的物质沉淀或产生其他特定反应。
5.通过光密度仪或其他检测仪器测定光密度值，计算出抗体水平。
实验结果分析实验结果以光密度值或其他测量指标呈现，一般抗体水平较高的样本对应较高的光密度值。
通过比较待测样本的结果与标准曲线或对照组的结果，可以判断该样本中抗人球蛋白抗体的水平及活性。
应用领域抗人球蛋白试验（直接法）在免疫学研究、临床诊断以及药物疗效评价等领域有着广泛的应用。
例如，在自身免疫性疾病的诊断中，该试验可帮助医生评估患者的免疫系统功能状态；在药物疗效评价方面，可用于监测药物对患者免疫功能的影响。
结论抗人球蛋白试验（直接法）是一种重要的实验技术，可以用于评估机体对人球蛋白的免疫反应水平。
通过本实验，我们可以深入了解机体免疫系统的功能状态，为研究和临床诊断提供有力的支持。
《抗球蛋白试验》课件
解释研究背景和目标。
有哪些相关研究？
回顾过去的研究和发现。
实验目的
1 为什么进行这项实验？ 2 有哪些假设和预期结 3 实验对现实世界有什
果？
么影响？
介绍实验的目的和意义。
提出实验的假设和预期结 果。
讨论实验结果可能带来的 应用价值。
实验步骤
1
准备工作
介绍实验前的准备工作，如准备实验材
样本采集
2
结果是否出乎意料？
讨论实验结果与预期结果之 间的差异。
结果对其他研究有何启 示？
探讨实验结果对未来研究的 影响。
实验结论
1 实验顺利完成
总结实验的目标和实验结 果。
2 结论的实践意义
强调实验结果对实际应用 的重要性。
3 展望未来的研究
提出未来研究的方向和可 能性。
参考文献
1. 作者1. (年份). 标题1. 2. 作者2. (年份). 标题2. 3. 作者3. (年份). 标题3.
3
实验操作
解释实验具体的步骤和实验条件。
数据收集
4
说明如何收集实验数据并记录结果。
实验结果
实验数据
展示实验数据的盈亏表，以图像 形式呈现。
数据分析
结果总结
对实验结果进行深入分析和解读。 总结实验结果并得出结论。
结果分析
实验结果验证了什么？
解释实验结果与研究背景的 关系。
《抗球蛋白试验》PPT课 件
欢迎大家来到本次《抗球蛋白试验》PPT课件。在这个课件中，我们将探索该 实验的研究背景、实验目的、实验步骤、实验结果、结果分析、实验结论以 及参考文献。让我们一起来进入这个引人入胜的主题吧！
研究背景
为什么进行这项研究？
有哪些相关研究？
回顾过去的研究和发现。
实验目的
1 为什么进行这项实验？ 2 有哪些假设和预期结 3 实验对现实世界有什
果？
么影响？
介绍实验的目的和意义。
提出实验的假设和预期结 果。
讨论实验结果可能带来的 应用价值。
实验步骤
1
准备工作
介绍实验前的准备工作，如准备实验材
样本采集
2
结果是否出乎意料？
讨论实验结果与预期结果之 间的差异。
结果对其他研究有何启 示？
探讨实验结果对未来研究的 影响。
实验结论
1 实验顺利完成
总结实验的目标和实验结 果。
2 结论的实践意义
强调实验结果对实际应用 的重要性。
3 展望未来的研究
提出未来研究的方向和可 能性。
参考文献
1. 作者1. (年份). 标题1. 2. 作者2. (年份). 标题2. 3. 作者3. (年份). 标题3.
3
实验操作
解释实验具体的步骤和实验条件。
数据收集
4
说明如何收集实验数据并记录结果。
实验结果
实验数据
展示实验数据的盈亏表，以图像 形式呈现。
数据分析
结果总结
对实验结果进行深入分析和解读。 总结实验结果并得出结论。
结果分析
实验结果验证了什么？
解释实验结果与研究背景的 关系。
《抗球蛋白试验》PPT课 件
欢迎大家来到本次《抗球蛋白试验》PPT课件。在这个课件中，我们将探索该 实验的研究背景、实验目的、实验步骤、实验结果、结果分析、实验结论以 及参考文献。让我们一起来进入这个引人入胜的主题吧！
研究背景
为什么进行这项研究？
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受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
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人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
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未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
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受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
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结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
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注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。 ❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗
实验七 直接抗人球蛋白试验
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第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
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直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被
不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
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致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
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抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗
- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
进一步分析。
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直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
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第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
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直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
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阴性对照 1 1
阳性对照
1 1
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受检者标本检测
❖ 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 ❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈
阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性
。
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实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
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受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
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人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
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未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
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受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
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结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
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注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。 ❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗
实验七 直接抗人球蛋白试验
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第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
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直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被
不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
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致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
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抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗
- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
进一步分析。
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直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
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第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
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直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
1
阴性对照 1 1
阳性对照
1 1
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受检者标本检测
❖ 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 ❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈
阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性
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实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
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