实验7 直接抗人球蛋白实验ppt课件
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未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
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受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
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结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
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注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。 ❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗
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阴性对照Biblioteka Baidu1 1
阳性对照
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受检者标本检测
❖ 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
实验七 直接抗人球蛋白试验
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第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
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直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被
不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
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受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
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人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
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致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
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抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗
- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 ❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈
阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性
。
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实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
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进一步分析。
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直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
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第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
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直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
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受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
待检管 1
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结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
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注意事项
❖ 标本采集后应尽快进行试验，试验延迟或中途停止可能使抗体从细胞上释 放出来。
❖ 待检红细胞一定要用盐水洗涤至少3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋 白，以防止假阴性结果。
❖ 离心时间和离心力要按标准操作。 ❖ 若果要了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗
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阴性对照Biblioteka Baidu1 1
阳性对照
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受检者标本检测
❖ 混匀，1000g离心15s，观察凝集反应，记录结果。
❖ 如果使用的是多特异性抗球蛋白试剂或抗C3抗球蛋白试剂，将 未出现反应的试管置室温孵育5min，再离心，观察凝集。
❖ 实验结果阴性时，应按照试剂说明书要求验证阴性结果的正确性 。加1滴IgG致敏5％红细胞悬液于未出现凝集的试管中，1000g 离心15s，观察凝集，记录结果。
实验七 直接抗人球蛋白试验
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第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
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直接抗人球蛋白试验原理 ： 直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被
不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
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受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
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人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
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致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
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抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗
- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 ❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈
阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳性
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实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
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进一步分析。
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直接抗人球蛋白试验临床意义
检测体内红细胞是否被不完全抗体或补体致敏,可用于： 1）新生儿溶血病胎（婴）儿致敏红细胞检测 2）自身免疫溶血性贫血的诊断 3）溶血性输血反应的研究
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第二部分 直接抗人球蛋白试验操作
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直接抗人球蛋白试验难点： 难以获取致敏红细胞标本？
解决方案： 试剂红细胞+IgG抗D血清（人工致敏RBC)