医学分子生物学实验报告

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分子生物学实验总结报告

实验总结报告摘要1、通过PCR 扩增，琼脂糖凝胶电泳回收得到外源基因parb,进行BglⅡ和Xba I 双酶切；抽提质粒pIJ86601，进行BamH I和Xba I 双酶切；将两者的酶切产物通过连接转化，培养后抽提质粒进行电泳，测序，检测重组质粒是否构建成功。

测序结果显示未构建成功。

2、用相同的方法构建表达载体PGEX-sco3330，由于时间问题尚未完成。

3、诱导蛋白表达，蛋白纯化，蛋白脱盐，bradford法进行蛋白含量测定以及SDS-PAGE电泳和免疫印迹试验（Western Blotting）。

实验内容：一、构建质粒pIJ86601-parb(一)获取外源基因parb1.PCR扩增PCR体系：200µl体系中，高保真pfuDNA聚合酶10X buffer，40 µl；10mM Mixed dNTP，5 µl；PrimerA，5 µl；PrimerB，5 µl；高保真pfu酶，2 µl；DMSO，20 µl；双蒸水，120 µl；模板1μl。

PCR程序设定Temp[℃] Time next turns Gradient[℃]1: 98.0 10min2: 98.0 30S3: 60.0 30S 30.04: 72.0 30S 2 3 45: 72.0 10min6:16.0 1h2.琼脂糖凝胶电泳切胶回收目的DNA1)通过电泳将目的片段与其他DNA尽可能分开,然后用干净的手术刀割下含需回收DNA的琼脂块,放入1.5ml离心管中。

2)按每300µl/100mg的比例加入Binding Buffer,置于50-60℃水浴中10分钟,使胶彻底融化。

加热融胶时，每2分钟混匀一次。

3)将融化的胶溶液转移到套放在2ml收集管内的UNIQ-10柱中，12,000rpm室温离心2 min。

4)取下UNIQ-10柱,倒废液，将柱放回同一收集管, 加入500µl WashSolution,12,000 rpm室温离心30秒。

医学分子生物学pcr实验报告

医学分子生物学pcr实验报告医学分子生物学PCR实验报告一、实验目的•理解PCR原理及其在医学分子生物学中的应用•掌握PCR实验操作流程及技巧•学会分析实验结果并撰写实验报告二、实验原理•PCR是聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction) 的缩写•通过使用DNA聚合酶对特定DNA片段进行指数级扩增•用于诊断疾病、基因检测、基因表达分析等领域三、实验材料•被测样本DNA•引物 (Primer) 对•2x Taq Master Mix•无水乙醇•DNase/RNase-free deionized water•加热式PCR仪•凝胶电泳设备及相关试剂四、实验步骤1.设计并合成引物•根据目标序列选择特异性引物•检查引物的特异性和二聚体形成情况2.准备PCR反应混合液•按照实验设计，计算并配置各试剂的浓度和体积•将样本DNA、引物、2x Taq Master Mix和DNase/RNase-free水混合3.PCR扩增•设定PCR仪的温度和循环次数参数•将反应混合液放入PCR仪，开始扩增4.PCR产物检测•准备1%琼脂糖凝胶，加入适量甲醛•将扩增后的PCR产物进行凝胶电泳•观察电泳结果，分析PCR产物的分子量和条带强度5.结果分析及报告撰写•根据实验结果，分析样本中目标基因的存在与否•撰写实验报告，并对实验过程和结果进行讨论五、实验注意事项•避免引物二聚体的产生，以提高实验特异性•掌握PCR扩增的温度、时间和循环次数参数•减少实验中的污染，以提高实验准确性•正确分析实验结果，避免误判六、实验结果分析•经过PCR扩增后，观察到目标基因片段的明显条带•结果符合预期，证明实验成功•对异常结果进行讨论，分析可能的原因及改进措施七、结论•PCR实验在医学分子生物学中具有重要意义•通过本次实验，我们掌握了PCR实验的操作流程和技巧•实验结果可为疾病诊断、基因检测等提供有力依据Hello! How can I help you today? If you have any questions or need assistance, feel free to ask.。

分子生物学试验报告

分⼦⽣物学试验报告分⼦⽣物学实验报告实验⼀真核基因组DNA的制备与分析⼀、实验步骤1、材料处理（1）取0.5cm的⽼⿏尾巴组织块，⽤⽣理盐⽔洗净，剪碎⾄糜状。

（2）将上述组织碎末加⼊盛有500uL裂解液的2mL离⼼管中，37℃⽔浴1h。

2、⽤蛋⽩酶K和苯酚处理细胞裂解液（1）加50uL蛋⽩酶K，温和的将酶混⼊粘滞的溶液中。

（2）将裂解细胞的悬浮液置于55℃⽔浴3h，不时的温和旋动该粘滞溶液，⾄看不到明显的组织块为⽌。

（3）将溶液冷却⾄室温，加500uL的Tris平衡酚，缓慢的来回颠倒离⼼管⾄两相混合形成乳浊液，于室温以5000g离⼼10min，使两相分开。

（4）⽤⼤⼝径移液管将上层粘稠的⽔相移到⼀洁净的离⼼管中，⽤酚重复抽提2次。

（5）第三次酚抽提后，将⽔相移⾄另⼀离⼼管中，于室温加100uL的10M⼄酸铵和1000uL 的⼄醇，转动离⼼管使溶液充分混合，DNA⽴即形成沉淀，通常可⽤吸管将沉淀从⼄醇溶液中移除。

如果DNA沉淀为碎⽚，则与室温离⼼收集。

（6）DNA沉淀⽤70%的⼄醇洗涤，离⼼收集。

将离⼼管于室温下放置实验台上，直⾄⼄醇挥发殆尽。

不要使DNA沉淀完全⼲燥，否则极难溶解。

（7）待沉淀将近透明后加适量的TE溶解DNA，通常需要12-24⼩时使DNA完全溶解，将DNA 溶液存于4℃.3、DNA琼脂糖凝胶电泳检测（1）制备0.6%的琼脂糖凝胶。

（2）取适量DNA样品，与凝胶上样缓冲液混合，加⾄上述凝胶上样孔内。

（3）取适量标准DNA溶液同样加⾄凝胶上样孔内。

（4）电泳，电压为1V/cm，距离以阳极⾄阴极为准。

（5）电泳结束后，将凝胶放⼊含溴化⼄锭（0.5ug/mL）的⽔中室温浸染10min，⽤紫外灯观察凝胶和照相。

⼆、实验结果如上图所⽰，基因组DNA在0.6%琼脂糖凝胶上跑出30kb左右的单⼀条带（λDNA/Hin d III Marker），但有个别组的样没有明显的条带出现。

三、结果分析提取的基因组DNA⽚段只有30kb左右，偏⼩。

分子生物学实验报告

分子生物学实验报告
实验目的：
通过本次实验，我们旨在探究DNA复制、基因表达和蛋白质合成等分子生物学的基本原理，加深对分子水平生物学过程的理解，培养实验操作技能和科学思维能力。

实验材料与方法：
1. 实验材料：大肠杆菌（E. coli）细菌菌斑、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、琼脂糖、琼脂糖电泳试剂、PCR扩增仪、电泳仪等。

2. 实验步骤：
a. DNA提取：取一支含E. coli细菌菌斑的移液管，用DNA提取试剂盒提取DNA。

b. PCR扩增：将提取的DNA加入PCR试剂盒中进行PCR扩增反应。

c. 原核表达：将扩增后的DNA片段转入大肠杆菌进行原核表达。

d. SDS-PAGE电泳：将蛋白质样品加入琼脂糖凝胶，通过电泳进行蛋白质分子量的分离。

实验结果与分析：
1. DNA提取：成功提取到E. coli细菌的DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳观察到DNA的带型。

2. PCR扩增：成功扩增出目标DNA片段，并经过验证测序结果正确。

3. 原核表达：大肠杆菌成功表达了目标蛋白质，通过SDS-PAGE电泳观察到目标蛋白质的条带。

4. SDS-PAGE电泳：观察到蛋白质的分子量差异，验证了蛋白质的分离效果。

结论与讨论：
通过本次实验，我们成功实现了DNA提取、PCR扩增、原核表达和蛋白质分离等分子生物学实验步骤，从而全面了解了分子生物学过程的基本原理。

实验结果表明，实验操作规范，结果可靠，为今后的科研工作和实验基础奠定了坚实的基础。

同时，也发现了实验中的一些不足之处，提出了改进的建议，为进一步的研究工作提供了参考。

参考文献：
无。

分子生物学实验报告

分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。

本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。

实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。

本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。

材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。

2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。

3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。

结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。

这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。

讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。

DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。

这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。

实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。

本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。

材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。

2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。

3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。

结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。

这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。

讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。

RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。

这种选择性转录是基因调控的关键。

实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。

医学分子生物学pcr实验报告(一)

医学分子生物学pcr实验报告(一)医学分子生物学PCR实验报告实验目的•学习PCR技术，掌握PCR反应原理和实验方法；•学习医学分子生物学领域常用的PCR应用；•掌握PCR实验中常见的影响因素和如何进行优化。

实验原理PCR全称聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种体外合成指定DNA片段的技术。

PCR反应利用酶的催化作用，在被扩增的DNA模板链两端加上引物，以特异性地使已有的DNA模板链进行链式扩增，从而获得足够多的同一DNA片段。

该技术可用于检测肿瘤、病原体、遗传性疾病等。

实验步骤1.基本PCR反应体系制备：–PCR反应缓冲液–dNTP混合物–分别设计好两个引物（正向引物和反向引物）–模板DNA–TaqDNA聚合酶–离心管和PCR机2.模板DNA的制备：从体液、组织、细胞中提取整个基因组DNA或RNA，转录成cDNA，制备PCR反应模板。

3.PCR扩增程序设置：一般包括以下几个步骤：–初始变性–循环性变性–引物杂交–扩增延伸4.PCR反应涂片与分析：–扩增产品置于琼脂糖凝胶上进行电泳–加载DNA负载荷后，以常数电压进行电泳–观察扩增片带和分析DNA的扩增程度实验优化•引物的优化•Mg离子的优化•模板DNA浓度的优化•温度参数和循环次数的优化•酶的优化实验结果与分析获得扩增片段之后，通过电泳分析进行检测和分析。

可根据扩增带的大小、数量和与目标DNA带的匹配情况来判断PCR扩增反应的效果。

同时可使用DNA分子量标准品分析扩增产品的分子量。

实验结论本次实验通过PCR技术，成功扩增出目标DNA片段，并进行了分析和检测。

该技术在医学生物学领域有着广泛的应用前景。

同时，实验结果还提示了PCR反应参数的优化对实验结果的重要性。

实验中遇到的问题和解决方法在实验过程中，我们遇到了以下问题： 1. PCR反应涂片上没有扩增片带； 2. 扩增后带有杂带。

对于第一个问题，我们分析可能是引物的设计不好或浓度太低，或者是模板DNA浓度不够，导致扩增失败。

分子生物学实验报告全解(有图有真相)

分子生物学实验报告慕蓝有志班梦想学院目录实验一细菌的培养 (2)实验二质粒DNA的提取 (4)实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (7)实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (9)实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (11)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (14)实验七RNA分离与纯化 (17)实验八RT-PCR扩增目的基因cDNA (19)实验九质粒载体和外源DNA的连接反应 (21)实验十感受态细胞的制备及转化 (23)实验十一克隆的筛选和快速鉴定 (25)实验十二地高辛标记的Southern杂交 (27)实验十三阿拉伯糖诱导绿色荧光蛋白的表达 (31)思考题 (32)分子实验心得总结 (33)实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。

二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。

质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。

特别是常用的大肠杆菌。

大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。

它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。

当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。

然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。

最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。

此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。

培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。

实验室中最常用的是LB培养基。

三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂1. 胰蛋白胨2. 酵母提取物3. 氯化钠4. 1mol/L NaOH5. 琼脂粉6. 抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1. 培养皿2. 带帽试管3. 涂布器4. 灭菌锅5. 无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）6. 恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g细菌培养用酵母提取物5gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。

分子生物学实训报告

一、实训背景分子生物学是研究生物大分子如蛋白质、核酸的结构与功能的一门学科。

随着生命科学技术的不断发展，分子生物学在医学、农业、环境保护等领域发挥着越来越重要的作用。

为了更好地理解和掌握分子生物学的基本理论和技术，我们开展了为期两周的分子生物学实训课程。

本次实训旨在通过实际操作，加深对分子生物学理论知识的理解，提高实验技能，培养科研素养。

二、实训目的1. 熟悉分子生物学实验室的基本操作规程和安全规范。

2. 掌握DNA提取、PCR扩增、酶切、电泳等分子生物学实验技术。

3. 理解基因克隆、基因表达、蛋白质分析等分子生物学实验原理。

4. 提高团队协作和沟通能力，培养科研素养。

三、实训内容1. 实验室基本操作与安全规范（1）熟悉实验室布局，了解各种仪器的使用方法。

（2）学习实验室安全操作规程，掌握实验室废弃物处理方法。

（3）进行实验前的准备工作，如配制试剂、消毒、无菌操作等。

2. DNA提取（1）了解DNA提取的原理和常用方法。

（2）学习酚-氯仿法提取DNA。

（3）对提取的DNA进行质量检测，如A260/A280比值、琼脂糖凝胶电泳等。

3. PCR扩增（1）了解PCR扩增的原理和步骤。

（2）设计PCR引物，进行PCR反应。

（3）对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。

4. 酶切（1）了解酶切原理和酶切反应条件。

（2）学习限制性内切酶的用法。

（3）进行酶切反应，对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。

5. 电泳（1）了解电泳原理和电泳技术。

（2）学习琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等电泳技术。

（3）对DNA、蛋白质等生物大分子进行电泳分离和检测。

6. 基因克隆、基因表达、蛋白质分析（1）了解基因克隆、基因表达、蛋白质分析的基本原理。

（2）学习相关实验技术，如载体构建、重组表达、蛋白纯化等。

（3）对克隆的基因、表达的蛋白进行检测和分析。

四、实训过程1. 实验前准备（1）查阅相关文献，了解实验原理和操作步骤。

（2）配制实验试剂，确保实验用品齐全。

分子生物学实验报告

分子生物学实验报告实验目的：探究基因在DNA复制过程中的作用及其表达机制。

实验材料与方法：材料：1. DNA模板：提取自大肠杆菌细胞中的质粒DNA。

2. DNA聚合酶：用于合成新的DNA链。

3. 引物：用于DNA聚合酶的引导和定向合成DNA。

4. dNTPs：脱氧核苷酸三磷酸盐，提供新的核苷酸单位供DNA聚合酶使用。

方法：1. DNA复制反应：将DNA模板、DNA聚合酶、引物和dNTPs混合在一起，加入适量缓冲液和镁离子，并在适温条件下进行DNA复制反应。

2. DNA扩增：通过PCR技术，利用引物的特异性，从DNA模板中扩增目标序列。

3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于分离和检测PCR产物，通过电泳迁移率差异判断扩增产物的大小。

实验结果：1. DNA复制反应成功进行，获得了新的DNA链。

2. PCR反应成功扩增目标序列，观察到明显的放大带。

3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳显示PCR产物的大小符合预期。

实验分析与讨论：本实验通过模拟DNA的复制过程，成功合成了新的DNA链，并通过PCR技术扩增了目标序列。

这一结果验证了基因在DNA复制过程中的作用。

在DNA复制过程中，DNA聚合酶是关键的酶类。

DNA聚合酶能够识别DNA的模板链，并根据模板链的信息合成新的互补链。

在实验中，添加了引物和dNTPs，引物可以定向和引导DNA聚合酶的合成，dNTPs则提供了能量和碱基单位，支持DNA聚合酶的复制活动。

PCR技术是一种重要的生物分子技术，其通过引物的特异性识别和引导，扩增目标序列。

实验中，选择了适当的引物序列，使其能够与目标序列特异性地结合，并保证扩增反应的特异性和选择性。

PCR反应可以在短时间内扩增大量的目标DNA序列，为后续的分析和研究提供了足够的样品。

聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的分析方法，通过电场驱动DNA分子在凝胶中迁移，根据分子大小的差异来判断扩增产物的大小。

在实验中，聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示出明显的PCR产物带，与预期的目标序列大小相符，说明PCR扩增反应成功，目标序列得到了扩增。

分子生物学实验3篇

分子生物学实验第一篇：PCR技术在分子生物学中的应用PCR（聚合酶链式反应）是分子生物学中一项广泛应用的技术，被用于DNA的扩增和检测。

PCR技术已经成为了分子生物学和生物医学研究的基础技术之一。

PCR技术被广泛的应用于遗传学、人类学、医学研究、植物学和动物学研究等各领域。

PCR技术的基本原理是：通过提取DNA，将DNA特异性引物与模板DNA相结合，利用热稳定DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸为反应体系提供能量，使其在一定条件下循环扩增目标DNA片段。

通过PCR扩增后的DNA片段可以进行进一步的分析和检测。

PCR技术的扩增具有明显的优势，可同时扩增不同长度的DNA片段，扩增时间短，扩增的精度和重复性高，且所需的样本量小。

PCR技术在分子诊断、基因组学和分子系统学等领域的应用不断扩展和深化。

随着PCR技术的不断发展，PCR在分子生物学研究中的应用越来越广泛，成为分子生物学研究的重要工具。

第二篇：RNA干扰技术在分子生物学中的应用RNA干扰（RNAi）是分子生物学中一种重要的现象，其中小分子RNA片段通过RNAi途径参与靶基因的沉默和调节。

RNAi技术是人类基因功能研究中最具前途的一种技术之一。

RNA干扰技术的基本原理是通过利用RNAi分子的特异性配对功能，引导RNAi分子与靶基因mRNA相结合，导致mRNA的降解和翻译的抑制，实现对基因表达的调控。

RNA干扰技术在分子生物学研究中有广泛的应用，如：功能基因的筛选、基因表达调节、基因功能验证等。

RNA干扰技术具有多种优点，如高效性、特异性强、节约时间、资源和成本等方面的优势，逐步成为生命科学研究中的重要工具。

在研究过程中，RNA干扰技术常用于寻找分子病理学中新的治疗靶点，鉴定靶点基因和靶点蛋白，为新药物的开发和临床治疗提供了重要的理论和实验基础。

第三篇：基因克隆技术在分子生物学中的应用基因克隆技术始于20世纪70年代，是指将DNA分子导入到载体中，使其在细胞中进行表达的过程。

分子医学概论实验报告

一、实验名称分子医学概论实验二、实验目的1. 了解分子医学的基本概念和原理。

2. 掌握分子生物学实验技术的基本操作。

3. 学习如何分析实验数据，并撰写实验报告。

三、实验原理分子医学是一门研究疾病发生、发展及治疗机制的科学，涉及分子生物学、遗传学、生物化学等多个学科。

本实验旨在通过分子生物学实验技术，了解基因表达调控、蛋白质功能研究等基本原理。

四、实验材料1. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、电泳试剂等。

2. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等。

3. 样本：细菌、细胞等。

五、实验步骤1. DNA提取：按照DNA提取试剂盒说明书操作，提取细菌或细胞的基因组DNA。

2. PCR扩增：根据目的基因设计引物，进行PCR扩增。

3. 电泳分析：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察扩增结果。

4. 数据分析：对电泳结果进行拍照，分析扩增产物的大小和纯度。

六、实验结果1. DNA提取：成功提取到基因组DNA，A260/A280值在1.8-2.0之间。

2. PCR扩增：成功扩增到目的基因片段，大小约为500bp。

3. 电泳分析：在凝胶上观察到清晰的目的基因条带。

七、讨论分析1. DNA提取：DNA提取是后续实验的基础，本实验成功提取到基因组DNA，为后续实验提供了可靠的材料。

2. PCR扩增：PCR扩增是分子生物学实验中常用的技术，本实验成功扩增到目的基因片段，表明实验操作正确。

3. 电泳分析：电泳分析是检测PCR产物的重要手段，本实验观察到清晰的目的基因条带，说明实验结果可靠。

八、实验结论1. 成功提取到基因组DNA，为后续实验提供了可靠的材料。

2. 成功扩增到目的基因片段，表明实验操作正确。

3. 实验结果可靠，为分子医学研究提供了实验依据。

九、注意事项1. 操作过程中要严格遵守无菌操作规程，防止污染。

2. 实验试剂要新鲜配制，确保实验效果。

3. 电泳过程中要注意电压和电流的稳定，防止电泳失败。

通过本次实验，我们对分子医学的基本概念和原理有了更深入的了解，掌握了分子生物学实验技术的基本操作，为今后的研究工作打下了基础。

分子生物学综合实验报告

分子生物学综合试验报告综合实验Ⅰ.Southern杂交（质粒DNA提取、PCR技术体外扩增DNA、质粒载体和外源DNA的连接反应、地高辛标记的Southern杂交）一.实验目的1.学习Southern杂交的原理及操作方法。

2.学习碱裂解法提取质粒的原理。

3.学习PCR反应的基本原理和实验技术；了解引物设计的一般要求。

4.掌握DNA体外连接的基本技能，了解连接反应的注意事项。

二.实验原理利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。

在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=4.8的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的碱裂解法提取质粒的主要原理是：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。

聚合酶链反应（PCR）是体外酶促合成DNA片段的一种技术，PCR进行的基本条件：DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）、引物、dNTP（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、Taq DNA聚合酶、反应缓冲体系。

PCR循环由三个步骤组成：变性、退火、延伸。

每一个循环的产物可作为下一个循环的模板，通过30个左右循环后，目的片段的扩增可达106倍。

DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。

DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来。

最常用的来源于T4噬菌体的T4DNA连接酶。

对于平末端或互补的粘性末端可直接进行连接反应。

一个片段是平末端，另一片段为粘性末端或两个片段都是粘性末端但不配对，则需要通过各种方式使其可一匹配或通过平末端进行连接。

通常采用末端补平、加同聚物尾、加接头等方式是目的片段之间能够匹配。

分子医学实验实验报告

一、实验名称分子生物学实验：基因表达调控研究二、实验日期2023年3月20日三、实验目的1. 了解基因表达调控的基本原理和方法；2. 掌握分子生物学实验操作技术；3. 研究特定基因在不同条件下的表达调控情况。

四、实验原理基因表达调控是指生物体内基因转录和翻译过程中，通过一系列分子机制对基因表达水平进行精确调控的过程。

本实验采用实时荧光定量PCR技术，检测特定基因在不同条件下的表达水平，以研究其表达调控机制。

五、主要仪器与试剂1. 仪器：实时荧光定量PCR仪、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等；2. 试剂：DNA模板、引物、PCR反应试剂、实时荧光定量PCR试剂、DNA提取试剂盒等。

六、实验步骤1. DNA提取：采用DNA提取试剂盒提取细胞总DNA；2. 引物设计：根据基因序列设计特异性引物；3. PCR扩增：以提取的DNA为模板，进行PCR扩增；4. 实时荧光定量PCR：将PCR产物进行实时荧光定量PCR，检测基因表达水平；5. 数据分析：分析实时荧光定量PCR结果，比较不同条件下基因表达水平的差异。

七、注意事项1. DNA提取过程中，应避免DNA降解；2. 引物设计应保证特异性，避免非特异性扩增；3. PCR扩增过程中，应控制好反应条件，避免假阳性结果；4. 实时荧光定量PCR过程中，应严格控制反应条件，保证数据准确性。

八、实验结果1. DNA提取：成功提取细胞总DNA；2. 引物设计：设计特异性引物；3. PCR扩增：成功扩增目的基因；4. 实时荧光定量PCR：检测到目的基因在不同条件下的表达水平差异。

九、讨论1. 实验结果表明，目的基因在不同条件下具有不同的表达水平，表明基因表达受到多种调控因素的影响；2. 通过实时荧光定量PCR技术，成功研究了目的基因的表达调控机制，为后续研究提供了实验依据；3. 本实验采用的技术手段较为成熟，为分子生物学实验提供了参考。

十、实验结论1. 成功提取细胞总DNA，设计特异性引物；2. 实时荧光定量PCR技术成功检测到目的基因在不同条件下的表达水平差异；3. 本研究为基因表达调控研究提供了实验依据，为进一步研究提供了参考。

分子生物学检验实习报告

一、实习背景分子生物学检验是现代医学检验的重要分支，通过分子生物学技术对生物大分子进行定性和定量分析，为疾病的诊断、治疗和预防提供科学依据。

为提高自身专业技能，本人于2022年8月至2023年8月在XX医院分子生物学检验科进行了为期一年的实习。

二、实习目的1. 熟悉分子生物学检验的基本原理和操作技术；2. 掌握实验室管理、生物安全等相关知识；3. 培养严谨的工作态度和团队协作精神；4. 提高临床应用能力和综合素质。

三、实习内容1. 实习期间，我主要参与了以下工作：（1）学习分子生物学检验的基本原理，包括DNA、RNA的提取、纯化、扩增、检测等；（2）掌握PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR等分子生物学技术；（3）熟悉基因测序、基因芯片等高通量检测技术；（4）参与临床样本的接收、处理、检测和结果分析；（5）协助带教老师进行实验室管理、生物安全管理等工作。

2. 在实习过程中，我重点学习了以下内容：（1）DNA、RNA的提取：掌握了不同来源样本的DNA、RNA提取方法，包括酚-氯仿法、试剂盒法等；（2）PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR：熟悉了PCR原理、操作步骤和结果分析，掌握了实时荧光定量PCR技术；（3）基因测序：了解了基因测序的基本原理、操作流程和数据分析方法；（4）基因芯片：学习了基因芯片的原理、应用和数据分析方法；（5）实验室管理：了解了实验室安全管理、生物安全管理等相关知识。

四、实习收获1. 技术能力：通过实习，我掌握了分子生物学检验的基本原理和操作技术，能够独立进行PCR、RT-PCR、实时荧光定量PCR等实验操作，为今后的工作打下了坚实的基础。

2. 理论知识：实习期间，我深入学习了分子生物学、遗传学等相关理论知识，提高了自己的综合素质。

3. 实践能力：通过参与临床样本的检测和结果分析，我提高了自己的临床应用能力，为今后从事相关工作积累了宝贵经验。

4. 团队协作：在实习过程中，我学会了与同事沟通、协作，共同完成工作任务，培养了团队精神。

医学细胞分子生物学实验

医学细胞分子生物学实验医学细胞分子生物学实验，这听起来就像是那种只有科学家才能懂的东西，对吧？但里面有很多有趣的事情，咱们可以轻松聊聊。

想象一下，咱们的身体就像是一座繁忙的城市，每个细胞都是一栋栋高楼大厦，里面住着无数的小居民。

它们每天忙忙碌碌，各自有各自的工作，有的负责运输，有的负责“生产”，还有的负责“安全”。

这就像是一个大团体，各司其职，相互配合。

要是有哪栋楼出问题，整个城市就可能陷入混乱。

嘿，听起来是不是有点像咱们生活中常见的情景？在实验室里，咱们就是那群忙碌的建筑工人，手里拿着工具，准备对这些小家伙进行一番研究。

比如，咱们可能会通过显微镜观察细胞，哇，那可是个壮观的景象。

细胞就像一个个小宇宙，里面有各种各样的结构，有的像是迷你的工厂，有的则像是储藏室。

每当看到这些细胞的时候，总会让人想起小时候玩的积木，一个个拼拼凑凑，真是让人惊叹不已。

咱们可能会进行一些实验，比如提取DNA。

想象一下，咱们像探险家一样，深入这些细胞的内部，寻找那条被称为“生命蓝图”的DNA链。

这个过程有点儿像剥洋葱，层层剥开，最终找到那颗珍珠。

嘿，提取出来的DNA可真是个小家伙，扭来扭去，像是在跟你打招呼。

咱们用化学试剂把它弄出来，仔细观察，简直像是发现了宝藏。

说到实验室，别忘了穿上白大褂，戴上手套。

安全第一嘛。

搞实验的时候，有时候会碰上些奇奇怪怪的现象。

比如，某个细胞可能不听话，突然就开始疯狂分裂，真是让人哭笑不得。

有时候就像是在看一场现场演出，那些细胞们都在台上翩翩起舞，难以置信。

不过，咱们可得认真对待这些现象，因为这可能会给咱们提供一些重要的信息。

实验也不是一帆风顺的。

咱们辛辛苦苦做了一整天的实验，结果数据却让人失望，心里那个失落，真是像吃了苍蝇一样。

不过，别灰心，这就是科学的魅力。

每一次失败都是一次学习的机会，咱们就像是勇敢的骑士，永远在追寻着真理的道路上。

再说，谁说失败不能带来乐趣呢？朋友们会聚在一起，聊起那些搞笑的实验经历，大家一起哈哈大笑，真是人生一大乐事。

分子生物学实验一二报告

分子生物学实验一二报告实验一：DNA提取引言：DNA提取是分子生物学实验中的基础实验，通过提取DNA我们可以进一步进行分子生物学上的一系列实验。

DNA提取的目的是从细胞中分离出DNA，常用于构建基因库、PCR扩增等实验。

材料与方法：1.取一定数量的细胞样本，如细菌、植物、动物组织等。

2.加入细胞裂解缓冲液，将细胞破裂释放DNA。

3.加入蛋白酶K以降解蛋白质。

4.加入酒精使DNA沉淀，并用无菌纯水洗涤DNA沉淀。

5. 用Tris-EDTA缓冲液溶解DNA。

6.用紫外可见光谱仪检测DNA浓度和纯度。

结果与讨论：通过以上步骤，我们成功地从细胞中提取出了DNA。

观察到DNA溶液呈现典型的黄绿色，说明DNA浓度较高。

利用紫外可见光谱仪检测DNA的浓度和纯度，结果显示DNA浓度为2μg/μL，纯度（A260/A280）为1.8，表明提取的DNA质量良好。

实验二：PCR扩增引言：PCR全称聚合酶链式反应，是一种快速、特异性并且高灵敏度的DNA扩增技术。

PCR可以扩增出目标DNA的大量复制品，常用于基因克隆、基因突变分析等实验。

材料与方法：1.准备PCR反应体系，包括目标DNA，引物，聚合酶、缓冲液及dNTPs。

2.将反应体系加入PCR仪中，设置好反应条件（温度、时间）。

3.进行PCR扩增反应。

4.用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。

结果与讨论：通过PCR扩增反应，我们成功得到了目标DNA的扩增产物。

在琼脂糖凝胶电泳中观察到明显的目标DNA条带，且相对应的分子量与预期一致。

这表明PCR扩增反应成功地复制出了目标DNA，并得到纯净的PCR产物。

结论：通过DNA提取实验，我们成功地从细胞中提取出了DNA，并通过PCR扩增技术得到了目标DNA的扩增产物。

这些结果验证了我们实验的有效性，并为后续的分子生物学研究奠定了基础。

附注：以上报告仅为示例，实际报告应根据具体实验结果和实验目的进行撰写。

分子生物学实习报告

一、实习目的本次分子生物学实习旨在通过实验操作，使学生掌握分子生物学的基本理论、基本技术和基本技能，提高学生的动手能力和实验操作技能，培养学生严谨的科研态度和良好的实验习惯。

二、实习时间2021年6月1日至2021年6月30日三、实习地点某高校分子生物学实验室四、实习内容1. DNA提取（1）实验原理：DNA提取是分子生物学实验的基础，主要目的是从细胞中提取纯净的DNA。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA。

（2）实验步骤：①将细胞裂解，使细胞内容物释放出来；②加入酚-氯仿溶液，振荡混匀，使蛋白质和脂质等杂质溶解于酚相；③加入饱和NaCl溶液，使DNA沉淀；④离心，收集DNA沉淀；⑤用TE缓冲液溶解DNA，进行后续实验。

2. PCR扩增（1）实验原理：聚合酶链反应（PCR）是一种体外扩增特定DNA片段的方法。

本实验采用PCR技术扩增目的基因。

（2）实验步骤：①设计引物：根据目的基因的序列，设计一对引物；②配制PCR反应体系：包括模板DNA、引物、dNTPs、Taq聚合酶等；③进行PCR扩增：按照94℃预变性、60℃退火、72℃延伸的循环条件进行扩增；④琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。

3. DNA测序（1）实验原理：DNA测序是确定DNA序列的方法。

本实验采用Sanger测序法。

（2）实验步骤：①将PCR产物进行纯化，去除引物和dNTPs；②进行测序反应，包括PCR扩增和终止反应；③进行毛细管电泳分离，检测DNA序列。

五、实习心得1. 通过本次实习，我对分子生物学的基本理论和基本技术有了更深入的了解，提高了自己的实验操作技能。

2. 在实验过程中，我学会了如何设计实验方案、配制试剂、操作仪器等，为今后的科研工作打下了基础。

3. 实验过程中，我体会到严谨的科研态度和良好的实验习惯的重要性。

只有严格按照实验步骤进行操作，才能得到可靠的实验结果。

4. 在实验过程中，我学会了与同学合作，共同解决问题。

这对我今后的科研工作具有重要意义。

分子生物学实验技术

《分子生物学实验技术》实验报告实验一碱裂解法小量提取质粒DNA一、实验原理二、在碱性环境中, 细菌膜破裂释放内容物。

染色体DNA变性分开, 而质粒DNA虽变性但仍处于缠绕状态。

将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下, 染色体DNA.大分子量的RNA和蛋白质在SDS的作用下形成沉淀, 而质粒DNA仍然为可溶状态。

通过离心, 可除去大部分细胞碎片、染色体DNA.RNA及蛋白质, 最后用酚、氯仿抽提纯化得到质粒DNA。

三、操作步骤主要步骤1.细菌的培养2.细菌的收集和裂解3.质粒DNA的分离和纯化4.质粒的鉴定具体操作如下:1.取1.5 ml过夜菌液于EP管中, 12 000 r/min离心1min, 弃去上清液。

2.加100 μl 溶液Ⅰ, 剧烈震荡使菌体悬浮均匀, 室温放置5min 。

3.加200 μl 溶液Ⅱ（现配现用）, 轻柔颠倒混匀4~6次, 室温放置5min 。

4.加150μl预冷溶液Ⅲ, 轻柔颠倒混匀4~6次, 冰上放置10分钟。

5. 12 000 r/m离心10 分钟(如果上清液仍然浑浊, 可将上清液移出, 再次离心5分钟）。

6.吸出上清液，加2.5倍体积的无水乙醇，混匀，室温放置10分钟，12 000r/min离心10分钟，沉淀DNA 。

7.弃上清，挥干，所得DNA溶于30μlddH2O中，用于后续试验。

三、实验结果获取极少量白色固体, 主要为DNA, 也不排除有蛋白质等杂质, 但是不影响后续实验的继续进行。

实验二氯化钙法进行质粒转化及筛选一、实验原理细菌处于0 ℃, 在CaCl2低渗溶液中, 菌体细胞膨胀成球形, DNA则与CaCl2形成抗Dnase的羟基－磷酸钙复合物粘附于细胞表面, 经42 ℃短时间热冲击处理, 促进细胞吸收DNA复合物, 在丰富培养基上生长数小时后, 球状细胞复原并分裂增殖, 重组子的基因在被转化的细菌中得到表达, 在选择性培养基平板上, 可选出所需的转化子。

分子生物学实验报告(2010版)

（20 -20 学年第学期）姓名____________________班级____________________学号____________________总评成绩________________ 指导教师________________实验时间__________年______月______日一、实验目的二、实验原理三、实验仪器与材料四、实验步骤五、实验结果与分析思考题：1、碱法提取质粒DNA 时应注意哪些问题？溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的作用分别是什么？2、描述质粒DNA 电泳图谱，并解释可能产生的现象及原因。

实验时间__________年______月______日一、实验目的二、实验原理三、实验仪器与材料四、实验步骤思考题：1、DNA在琼脂糖凝胶中的电泳迁移速率的影响因素有哪些？2、试说明琼脂糖凝胶电泳与你在生化实验中所学的聚丙烯酰胺凝胶电泳有何区别。

实验时间__________年______月______日一、实验目的二、实验原理三、实验仪器与材料四、实验步骤五、实验结果与分析思考题：1、重组实验中常用的酶有哪几类？分别起什么作用？2、利用限制性内切酶消化DNA时应注意哪些问题？为什么酶的使用量一般不能超过反应体系总体积的10%？如果酶加的过多会造成什么后果？3、DNA酶切反应不彻底的电泳图谱是怎么样的？DNA若发生降解，酶切图谱又如何？实验时间__________年______月______日一、实验目的二、实验原理三、实验仪器与材料四、实验步骤五、实验结果与分析思考题：1、降低退火温度对PCR结果有何影响？延长变性时间对PCR结果有何影响？循环次数是否越多越好？为什么？2、试分析没有PCR产物生成的可能原因。

3、在PCR产物分析时发现，除了目的产物带外，还存在其他的非目的产物条带，试分析产生该现象的原因并提出改进的方法。

4、获得了预期的单一目的条带，但产量较低，可能的原因有哪些？。