Jagged 1在生理性和病理性新生血管形成中的表达变化

Jagged 1在生理性和病理性新生血管形成中的表达变化

目的观察Jagged 1在生理性和病理性新生血管形成中的表达变化，为肿瘤的治疗寻找新的靶点。方法体外培养血管内皮细胞免疫细胞化学法检测其Jagged 1的表达。建立鸡胚尿囊膜动态血管发育模型，免疫荧光化学和Western blot检测不同发育时期尿囊膜血管中Jagged 1的表达。免疫组织化学和Western blot检测正常结直肠组织和大、中、小三种尺寸的结直肠癌肿块中Jagged 1的表达。结果（1）免疫细胞化学结果显示，Jagged 1是细胞跨膜蛋白，表达于细胞膜上。（2）成功建立鸡胚尿囊膜动态血管发育模型，其免疫荧光和Western blot 结果显示，Jagged 1随着血管的发育而表达，随血管密度、血流量增加而表达上调。（3）免疫组化结果显示Jagged 1在结直肠癌中广泛表达，而在正常皮肤及结直肠组织中表达较少，Jagged 1的表达量同肿瘤的体积有关。结论Jagged 1在内皮细胞、血管发育初期和肿瘤新生血管中表达上调，表明其可能是新生血管形成的早期事件，参与诱导下游新生血管形成基因的表达。

[Abstract] Objective To research the role of Jagged 1 in physiological and pathological neovascularization. Methods The expression of Jagged 1 were detected in endothelial cells by immunocytochemistry.The expression of Jagged 1 were detected in blood vessel of chick chorioallantoic membrane by immunofluorescence and Western blot.The expression of Jagged 1 were detected in normal colorectal mucosa tissue and three colorectal cancers with large，median and small volume by immunohistochemistry and Western blot. Results （1）Results of immunocytochemistry showed that Jagged 1 is a cell transmembrane protein and express in the cell membrane. （2）Successfully established the dynamic blood vessel developmental model of chick chorioallantoic membrane，The dynamic blood vessel developmental model of chick chorioallantoic membrane showed that the vascular network in chorioallantoic membrane develops gradually with embryo age and reveals the process of neovascularization，vigorous growth and wilt dynamically.Results of immunofluorescence and Western blot revealed that Jagged 1 has different expression profiling at different period of vascular development.The expression of Jagged 1 increased with the increasing of physiologic vessels，vessel density，blood supply. （3）Results of immunohistochemistry performed on hemangioma and colorectal cancer，Jagged 1 was widely expressed in neonatal vessels originated from hemangioma proliferation and few expressed in normal skin tissue.The expression of Jagged 1 was related to the tumor size in colorectal cancer. Conclusion The expression of Jagged 1 up-regulated in endothelial cells，primary period of vascular development and tumor angiogenesis，which may be an early event in neovascularization involved in inducing the expression of downstream gene.

[Key words] Jagged 1;Angiogenesis;Chick chorioallantoic membrane

肿瘤的生长和转移，均呈明显的新生血管依赖性。因为新生血管是提供病理组织养分保证肿瘤生长增殖的基础，同时，肿瘤新生的血管使得肿瘤细胞与个体

的血管循环系统直接相通，这也是恶性肿瘤发生远处转移播散的必要条件。在实体肿瘤中，微血管网络承担着输送营养物质和排泄代谢废物的作用，是肿瘤生长和复发不可缺少的前提条件之一。肿瘤要达到1～2 mm3以上[1]，必须生成新的血管以阻止肿瘤细胞的凋亡。因此，如何有效的截断肿瘤的血供、抑制新生血管，已经成为肿瘤治疗及防止肿瘤扩散的研究方向。血管生成方面的研究很多，目前已有药物应用于临床，通过阻断肿瘤血管生成抑制其生长、复发和转移，其疗效不令人满意，因为血管生成的关键调控因素尚不清楚。

Jagged 1是哺乳动物中第一个被证实的Notch受体的配体，参与调控许多组织的生长发育，在肌肉形成、神经、血管发生和维持正常造血前体细胞及其增殖等过程中起着重要作用[2]，Jagged 1在肿瘤新生血管形成中也起了重要的作用，它在新生血管形成与肿瘤浸润、转移中的作用受到越来越多的关注。本研究建立鸡胚绒毛尿囊膜模型，动态观察血管发育不同时期Jagged 1的表达，探讨Jagged 1与血管发育的关系，并在正常的结直肠组织和不同大小结直肠癌组织中观察Jagged 1的表达，为肿瘤的治疗寻找新的靶点。

1 材料与方法

1.1 实验材料

人脐静脉内皮细胞株EA.HY926，由中南大学湘雅医学院细胞中心引进。种蛋购自衡阳联合养鸡公司，选用新鲜、大小适中的优质种蛋，半自动孵化箱自行孵育。在解放军169医院批准同意和告知患者家属同意后，收集解放军169医院外科手术切除的结直肠癌旁正常黏膜组织5例，结直肠癌新鲜标本15例，其中男11例，女4例；年龄28～75（平均56.9）岁；肿块直径≤3 cm患者、3 cm＜肿块直径≤5 cm患者、肿块直径＞5 cm患者各5例，手术切除的血管瘤旁正常皮肤组织和皮肤血管瘤新鲜标本各8例，其中男4例，女4例；年龄8～32（平均20.1）岁，所有标本均由病理组织学诊断证实。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养内皮细胞用含10%新生牛血清的DMEM培养液培养于37℃、5% CO2的恒湿培养箱中。细胞呈单层生长，铺满培养瓶后传代。传代时常规吸去培养液，用2.5 g/L胰蛋白酶消化，在显微镜下观察，发现胞质回缩、细胞间隙增大后，立即倾去胰酶，加适量含血清培养液吹打成单细胞悬液，调整细胞浓度用于实验。

1.2.2 鸡胚的培养及鸡胚绒毛尿囊膜模型的制备新鲜受精鸡卵以1‰新洁尔灭清洗后放入60%相对湿度的孵育箱内孵育，呈45°夹角，有气室的一头向上，1～10 d温度设定为37.8℃，11～19 d设定为37℃，20～21 d设定为36.8℃，每天翻蛋2～3次。从鸡胚发育的第1天开始，每隔24 h剥开一批种蛋（每批5枚），观察鸡胚绒毛尿囊膜的生长情况，直到第21天。剥制时，用眼科镊在种蛋的气室一端轻敲一个直径为0.5 cm的小洞，沿着洞的周围，用眼科镊慢慢夹掉卵壳，轻轻揭开卵壳膜，注意勿伤及血管，暴露整个尿囊膜部分。以甲醇和丙酮混合液