胚胎培养液
商品化培养液对人类胚胎发育及妊娠结局的影响
商品化培养液对人类胚胎发育及妊娠结局的影响目的比较两种商品化序贯培养液Cook和Vitrolife对人类胚胎发育潜能及妊娠结局的影响。
方法回顾性分析2014年8月～2015年5月于南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心行体外受精（IVF）或卵胞浆内单精子注射（ICSI）的398例患者的临床资料。
根据受精方式与胚胎培养液不同进行分组，IVF周期分为Cook组（n = 103例）和Vitrolife组（n = 196例），ICSI周期分为Cook组（n = 40例）和Vitrolife组（n = 59例）。
比较同一受精方式下两种培养液组的受精率、正常受精率、卵裂率、可利用胚胎率、囊胚形成率、可利用囊胚率、临床妊娠率、胚胎种植率和早期流产率。
结果IVF和ICSI周期中，Cook组受精后第3天可利用胚胎率均显著低于Vitrolife组（31.22%比40.61%，33.43%比42.34%，P 0.05）。
见表1。
2.2 IVF/ICSI周期中Cook与Vitrolife培养液对胚胎发育及妊娠结局的影响IVF/ICSI周期中，Cook组的第3天可利用胚胎率显著低于Vitrolife组，而囊胚形成率及可利用囊胚率显著高于Vitrolife组，差异均有统计学意义（P 0.05）。
见表2。
2.3 不同培养液对取卵后第3天胚胎发育速度的影响对取卵后第3天胚胎的发育速度进行分析（Cook组共1716枚分裂胚，Vitrolife组共2922枚分裂胚）。
Cook组5～7个细胞的胚胎所占比例显著高于Vitrolife组，而Vitrolife组8～10细胞的胚胎所占比例显著高于Cook组，差异均有统计学意义（P 0.05）。
见表3。
3 讨论国际辅助生殖技术监督委员会（ICMART）和欧洲人类生殖与胚胎学会（ESHRE）的统计数据显示，通过辅助生殖技术受孕的孩子逐年增多，但其安全性还需进一步验证[11-12]。
植入前胚胎在体外培养过程中将经历从受精至内细胞团和滋养外胚层等不同细胞谱系的派生等过程，体外培养液可能会导致这些关键性事件发生改变进而可能会影响胚胎的后续发育[13-14]。
试管婴儿胚胎培养液
试管婴儿胚胎培养液试管婴儿胚胎培养液是在做试管婴儿过程中必不可少的重要的物质。
这是一段非常“幸福”的过程。
试管婴儿进行到受精的时候，精卵在体外结合形成受精卵，然后就会将受精卵放置在培养液中进行培养，这样做是为了模拟子宫环境，使得胚胎得到最好的发育。
那么。
我们通常使用到的培养液有哪些呢？“滔滔顾问”来为我们一一列举出来：第一种，Isolate梯度分析液。
包括Lower Layer高密度分析液和Upper Layer低密度分离液，用于精子分离。
第二种，IVF30。
用于受精、体外培养、胚胎移植和精子洗涤等。
第三种，Gamete30。
主要用于精子洗涤。
卵子清洗、ICSI操作等。
第四种，透明质酸酶。
主要用于去除颗粒细胞。
第五种，PVP液。
用于ICSI时精子制动。
第六种，卵泡冲洗液。
ASP、PBS。
第七种，组织培养油。
OVOIL，用于覆盖培养液。
第八种，囊胚培养液。
G2，用于囊胚培养期胚胎的培养与移植，使用时需加外源性蛋白(如HSA)。
取卵前一日下午准备取卵要使用的液体（也即准备培养液）过程：第一步，查看卵细胞数和E2值，估计培养皿数目并进行准备。
第二步，准备培养液。
第三步，卵泡冲洗液：ASP或PBS。
第四步，OCCC清洗液：每个3001培养皿中加入2.5ml Gamete30。
第五步，洗精液：每个患者准备4mlIVF30。
第六步，受精液：四孔培养皿中每孔加入100μl IVF30培养液，并在上面覆盖0.8ml 组织培养液，置于二氧化碳培养箱中平衡过夜。
用于卵母细胞的培养及受精。
第七步，将足够次日用的培养液放入培养箱。
准备培养液的注意事项：1、必须在专用的超净工作台内准备液体。
2、使用无菌操作技术。
3、准备以上培养液时应尽快，减少开封的培养液在培养箱外的时间。
4、加液体时，不能碰孔边，避免气泡。
5、仔细检查液体，确保其被组织培养油完全覆盖。
6 将培养皿放入培养箱时按先后顺序放置，以方第二天使用，避免拿错。
辅助生殖用培养液技术要求
辅助生殖用培养液技术要求随着科技的不断发展，辅助生殖技术已经成为解决不孕不育问题的有效手段之一。
而辅助生殖用培养液作为其中的重要组成部分，对于培养和保护胚胎发育起着至关重要的作用。
本文将就辅助生殖用培养液的技术要求进行探讨。
辅助生殖用培养液的基本要求是能够提供胚胎生长所需的营养物质和环境。
培养液中需要包含适量的氨基酸、糖类、脂类、维生素和无机盐等营养物质，以满足胚胎发育所需的能量和物质。
此外，培养液还应该具备维持适宜的温度、pH值和氧气浓度等环境条件的能力，以保证胚胎在培养过程中的生长和发育。
辅助生殖用培养液的无菌性要求非常高。
胚胎在培养液中的生长发育过程是一个极其微妙的过程，任何微小的污染物都可能对胚胎的发育产生不利影响。
因此，辅助生殖用培养液的制备过程必须严格控制，保证其无菌性，避免任何可能的污染。
辅助生殖用培养液的稳定性也是一个重要的技术要求。
由于胚胎的发育是一个时间较长的过程，因此培养液需要具备长时间的稳定性，以保证胚胎在整个培养过程中能够得到持续的营养和保护。
在辅助生殖用培养液的技术要求中，还有一个重要的方面是对于培养液成分的优化。
科学家们通过研究不同的培养液配方，不断优化培养液的成分，以提高胚胎的存活率和发育质量。
例如，一些研究表明，添加一定浓度的胎牛血清可以提高胚胎的存活率和发育能力。
而其他研究则发现，添加适量的维生素C和E可以减少胚胎的氧化应激，提高胚胎的发育质量。
因此，对于辅助生殖用培养液的优化研究，将会为辅助生殖技术的发展带来更多的机会和挑战。
总结起来，辅助生殖用培养液技术要求是非常严苛的。
它需要满足营养物质和环境条件的要求，具备无菌性，保持稳定性，并且不断优化其成分。
只有通过不断的研究和技术创新，才能够为辅助生殖技术的发展提供更好的支持和保障。
胚胎培养液的配制方法与流程
胚胎培养液的配制方法与流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求
动物细胞培养时对培养基的要求：培养基按其来源可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的营养成分与细胞在体内所需条件比较接近，但就细胞在体外生存的环境来说，合成培养液也有其独特之处，譬如成分便于控制和标准化。
体外培养的细胞直接生活于培养基中，无论何种培养基都应该能满足细胞生长所需的营养与生理的基本要求。
(1)营养成分：1）氨基酸合成培养液中的氨基酸以12种必需氨基酸为主，这些氨基酸不能由细胞自身合成，必需由培养液供给。
在氨基酸的成分中谷氨酰胺的作用特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在配制各种培养液中应补加一定量的谷氨酰胺。
2）单糖葡萄糖是最常用和最好的单糖3）维生素维生素在细胞代谢过程中必不可少，主要可以提供辅酶和辅基。
生物素、叶酸、泛酸、核黄素、维生素B12等等4）其他成分：细胞生长过程中除需钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素外，还需要一些微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼等。
此外，为优化细胞生存环境，合成培养基中有时还添加些其他成分，包括核酸降解物、抗氧化剂等。
（2）促生长因子及激素各种激素、生长因子对于促进细胞生长、维持细胞功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。
如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用。
各种生长调节因子的作用更加明显并具有特异性。
（3）pH大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响。
造成培养基pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的二氧化碳。
解决这一问题可采取两种方法：一是用具有一定缓冲能力的培养基，如使用NaHCO3-CO2缓冲系统，二是采用开放式培养的方法，使细胞代谢产生的二氧化碳及时逸出培养皿。
（4）渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定的耐受性。
注：天然培养基主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。
合成培养基是人工配制的培养基，给细胞提供一个近似体内生存的环境，又便于控制和标准化的体外生存环境，但合成培养基尚未成为十分完全的培养基。
胚胎培养液用途
胚胎培养液用途
胚胎培养液是一种用于辅助生殖技术中的妇产科和避孕器械，它能够提供胚胎所需的营养和环境。
以下是胚胎培养液的一些主要用途：
1. 在IVF（体外受精）中，胚胎培养液用于支持胚胎的正常发育。
在培养过程中，医生可以监测胚胎的发育情况，并选择最健康的胚胎进行移植，以提高妊娠成功率。
2. 胚胎培养液还可以在胚胎冷冻和胚胎植入前的基因检测中使用。
在胚胎冷冻过程中，胚胎被保存在低温下，以备将来使用。
培养液可以提供胚胎所需的保护和支持，以确保其在冷冻和解冻过程中的存活率和发育能力。
3. 除了在IVF中的应用，胚胎发育培养液还可以用于避孕器械的研发和测试。
通过在培养液中培养人工合成的胚胎模型，科研人员可以评估不同避孕器械对胚胎发育的影响，以确保其安全性和有效性。
总之，胚胎培养液在辅助生殖技术和避孕器械研发中具有重要作用，能够为胚胎提供必要的营养物质和稳定的环境，提高胚胎的存活率和发育能力。
各种培养液的配方
各种溶液的配制基础公式最终摩尔浓度 = 最初摩尔浓度/ 稀释倍数稀释倍数 = 稀释后液体总量 / 需稀释液体量。
最初摩尔浓度×需稀释液体量最终摩尔浓度 =稀释后液体总量例如，需稀释液体量 0.1ml, 浓度为1mmol/L, 最终稀释总量 4 ml , 最终的浓度0.025mmol/L 以配1000ml 液体为例, g = 分子量 * 摩尔浓度(M)(或mmol/1000)配50ml 0.1mmol/L CaCl2为例 g = 147 * 0.5/1000 / 20(1000/50) 0.003675g0.3mol/L 甘露醇 g = 182.2 * 0.3 /20(1000/50) 2.733g或X = 分子量×摩尔浓度（mol/L ）/ （ 1000/ 需要量）X = 分子量×摩尔浓度（mmol/L ）/1000 /（ 1000/ 需要量）各种浓缩液的配制1.FSH 浓缩液FSH（中科院）规格10mg/瓶，用10ml水稀释，即1mg/ml。
分装规格：250μl/管（即浓缩液），配50ml OM液时，加入浓缩液1管，即5μg/ml。
2．LH浓缩液LH（宁波）规格200IU/管，用2ml 水稀释，分装成8管。
分装规格：25IU/管（即浓缩液）。
配50ml OM液时，加入浓缩液2管，即0.5IU/ml。
3．17β-E2浓缩液E22.5mg 溶于100μl 乙醇, 然后用25ml水稀释，分装成25管，分装规格：100μg/ml/管（浓缩液）。
临用前，再分装成500μl/管，配50ml OM液时，加入浓缩液1管。
4．HMG浓缩液HMG（），含有FSH / LH 75IU。
用10ml无离子水稀释。
7.5IU/ml/管(即浓缩液)。
如配100ml OM时加入1管（1ml），即终浓度0.075IU/ml 。
5．Ca、Mg离子浓缩液PBS（200ml）用Ca、Mg离子浓缩液100ml：称取CaCI2.2H2O 2.64g(100×)、MgCI2.6H2O 2g （100×），溶于100ml水中，0.0264g + 0.02g/ml CaCI2.2H2O/MgCI2.6H2O(浓缩液)。
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求动物细胞培养时对培养基的要求：培养基按其来源可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的营养成分与细胞在体内所需条件比较接近，但就细胞在体外生存的环境来说，合成培养液也有其独特之处，譬如成分便于控制和标准化。
体外培养的细胞直接生活于培养基中，无论何种培养基都应该能满足细胞生长所需的营养与生理的基本要求。
(1)营养成分：1）氨基酸合成培养液中的氨基酸以12种必需氨基酸为主，这些氨基酸不能由细胞自身合成，必需由培养液供给。
在氨基酸的成分中谷氨酰胺的作用特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在配制各种培养液中应补加一定量的谷氨酰胺。
2）单糖葡萄糖是最常用和最好的单糖3）维生素维生素在细胞代谢过程中必不可少，主要可以提供辅酶和辅基。
生物素、叶酸、泛酸、核黄素、维生素B12等等4）其他成分：细胞生长过程中除需钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素外，还需要一些微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼等。
此外，为优化细胞生存环境，合成培养基中有时还添加些其他成分，包括核酸降解物、抗氧化剂等。
（2）促生长因子及激素各种激素、生长因子对于促进细胞生长、维持细胞功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。
如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用。
各种生长调节因子的作用更加明显并具有特异性。
（3）pH大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响。
造成培养基pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的二氧化碳。
解决这一问题可采取两种方法：一是用具有一定缓冲能力的培养基，如使用NaHCO3-CO2缓冲系统，二是采用开放式培养的方法，使细胞代谢产生的二氧化碳及时逸出培养皿。
（4）渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定的耐受性。
注：天然培养基主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。
合成培养基是人工配制的培养基，给细胞提供一个近似体内生存的环境，又便于控制和标准化的体外生存环境，但合成培养基尚未成为十分完全的培养基。
胚胎培养的操作步骤
胚胎培养的操作步骤一、获取胚胎在胚胎培养过程中，首先需要获取胚胎。
这一步骤通常在试管婴儿程序中进行，通过超排卵和人工受精等方法获取胚胎。
二、胚胎质量检查在获取胚胎后，需要对胚胎进行质量检查。
通过显微镜观察胚胎的形态和发育情况，评估胚胎的等级和发育潜力。
这一步骤有助于选择优质的胚胎进行培养。
三、胚胎培养液准备为了提供胚胎生长所需的营养物质，需要准备适当的胚胎培养液。
根据胚胎的发育阶段和实验需求，可以选择不同的培养液配方。
确保培养液的清洁度和适宜的温度，以维持胚胎的正常生长。
四、胚胎移植将经过质量检查的胚胎转移到准备好的培养液中，进行进一步的体外培养。
在这一步骤中，要确保胚胎在适宜的环境中顺利生长。
五、培养环境控制胚胎培养的环境对胚胎的生长至关重要。
控制培养室的温度、湿度、气体浓度等参数，确保环境条件适宜胚胎发育。
定期监测和记录环境数据，确保胚胎生长环境的稳定性。
六、观察胚胎发育在胚胎培养过程中，需要定期观察胚胎的发育情况。
通过显微镜观察胚胎形态变化，记录胚胎生长数据，评估胚胎的健康状况。
及时发现和处理异常情况，确保胚胎正常生长。
七、胚胎移植回体当胚胎发育到一定阶段时，需要将胚胎移植回母体或代孕母亲体内。
这一步骤需要根据程序指南和伦理要求进行。
确保移植过程中的安全性和有效性，关注移植后的护理和监测工作。
八、后续护理在胚胎移植后，对母体或代孕母亲进行适当的护理和监测。
这包括提供必要的医疗支持和心理辅导，以及定期进行产前检查。
密切关注母体和胎儿的健康状况，确保妊娠过程的顺利发展。
胚胎培养实验报告
一、实验目的1. 掌握胚胎培养的基本原理和操作步骤。
2. 观察胚胎在体外培养过程中的发育变化。
3. 学习胚胎培养技术在生殖医学和生物研究中的应用。
二、实验原理胚胎培养是利用人工手段，在适宜的条件下，模拟胚胎在母体内的发育环境，使胚胎在体外继续发育。
胚胎培养技术广泛应用于生殖医学、生物研究等领域。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：小鼠胚胎、培养皿、移液枪、显微镜等。
2. 试剂：胎牛血清、DMEM培养液、青霉素、链霉素、胰蛋白酶等。
四、实验方法1. 胚胎收集：将小鼠处死，取其输卵管，收集胚胎。
2. 胚胎消化：用胰蛋白酶消化胚胎，制成细胞悬液。
3. 胚胎计数：用移液枪吸取细胞悬液，滴加到计数板上，计数胚胎数量。
4. 胚胎培养：将胚胎细胞悬液接种到培养皿中，放入培养箱中培养。
5. 观察记录：每天观察胚胎发育情况，记录胚胎数量、形态变化等。
五、实验结果1. 胚胎发育过程：- 第1天：胚胎数量较少，细胞排列紧密。
- 第2天：胚胎数量增多，细胞排列开始松散。
- 第3天：胚胎数量继续增多，细胞排列更加松散，出现囊胚形态。
- 第4天：胚胎数量继续增多，囊胚形态明显，出现桑椹胚。
- 第5天：胚胎数量继续增多，桑椹胚形态明显，出现早期囊胚。
- 第6天：胚胎数量继续增多，早期囊胚形态明显，出现晚期囊胚。
2. 胚胎形态变化：- 胚胎细胞在体外培养过程中，形态逐渐发生变化，从单个细胞逐渐发育成囊胚、桑椹胚等。
六、实验讨论1. 胚胎培养技术是生殖医学和生物研究的重要手段，在人类辅助生殖、动物繁殖等方面具有广泛应用。
2. 胚胎培养过程中，影响胚胎发育的因素较多，如培养条件、细胞密度、培养基成分等。
3. 通过本实验，我们掌握了胚胎培养的基本原理和操作步骤，观察了胚胎在体外培养过程中的发育变化。
七、实验结论1. 本实验成功培养了小鼠胚胎，观察了胚胎在体外培养过程中的发育变化。
2. 胚胎培养技术在生殖医学和生物研究等领域具有广泛应用前景。
胚胎培养液对新生儿出生体重及身长的影响
胚胎培养液对新生儿出生体重及身长的影响目的探索体外受精（IVF）/卵胞浆内单精子注射（ICSI）新鲜分裂期胚胎移植周期中不同商品化胚胎培养液（Cook、Vitrolife）对新生儿出生体重及身长的影响。
方法回顾性分析2014年8月～2015年12月于南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心行IVF/ICSI术移植双分裂期胚胎成功分娩的1441例患者临床资料。
根据分娩胎数和胚胎培养液不同进行分组，单胎周期和双胎周期分别分为Cook组和Vitrolife组。
分别比较单胎组和双胎组中两种培养液培养后新生儿的出生体重和身长。
结果单胎组中，Cook组新生儿出生体重及身长较Vitrolife组差异无统计学意义（P > 0.05）；双胎组中，Cook组新生儿出生体重及身长较Vitrolife组差异无统计学意义（P > 0.05）。
结论两种商品化胚胎培养液（Cook、Vitrolife）在IVF/ICSI新鲜分裂期胚胎移植周期中对新生儿出生体重和身长无显著性影响。
[Abstract] Objective To investigate the effect of two commercial embryo culture media （Cook，Vitrolife）on the birthweight and length of newborns after fresh embryo transfer in IVF/ICSI. Methods The data of 1441 patients conceived through IVF/ICSI in Reproductive Medicine Center，the Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School from August 2014 to December 2015 were analyzed retrospectively. According to the fetal number and embryo culture media，these patients were divided into two groups：singletons group and twins group，both the two groups included Cook and Vitrolife subgroups. The birthweight and length of newborns were compared in singletons and twins groups. Results There were no significant differences in birthweight and length of the newborns between the Cook and Vitrolife subgroups in singletons group （P > 0.05）；while there were no significant differences in birthweight and length between the Cook and Vitrolife subgroups in twins group （P > 0.05）. Conclusion It can be concluded that embryos cultured in Cook and Vitrolife media after fresh cleavage embryo transfer do not affect the birthweight and length of newborns.[Key words] IVF；Embryo culture medium；Birthweight；Length隨着质量控制体系的逐步完善，商品化胚胎培养液逐步应用于人类胚胎，例如Vitrolife、G5、Cook、HTF和Quinn′s advantage[1-2]。
囊胚培养液中游离DNA的重要染色体整倍性研究
·长篇论著·囊胚培养液中游离ＤＮＡ的重要染色体整倍性研究黄锦 加加林 姚雅馨 陆思嘉 党玉姣 乔杰 刘平基金项目：国家重点研发计划（２０１８ＹＦＣ１００３１０４）；国家自然科学基金（８２０７１７２１）；北京大学第三医院院临床重点项目（ＢＹＳＹ２０１８０１５）作者单位：１００１９１，北京大学第三医院妇产科（黄锦，加加林，党玉姣，乔杰，刘平）；国家妇产疾病临床医学研究中心（北京大学第三医院）（黄锦，加加林，党玉姣，乔杰，刘平）；亿康基因科技有限公司（姚雅馨，陆思嘉）通信作者：刘平（ｐｉｎｇｌｉｕ７７０３＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ）【摘要】 目的 探讨利用培养液中游离ＤＮＡ检测对应囊胚的１３、１５、１６、１８、２１、２２号染色体整倍性的效率。
方法本研究共纳入２３９枚囊胚，所有的胚胎均来源于ＰＧＴ Ａ周期。
囊胚活检的滋养层细胞采用ＳＮＰ芯片检测胚胎的整倍性；培养液游离ＤＮＡ采用无创胚胎染色体筛查（ＮＩＣＳ）方法检测整倍性；采用盲法比较两者的结果。
计算ＮＩＣＳ在检测１３、１５、１６、１８、２１、２２号染色体整倍性的敏感性、特异性、诊断效率、阳性预测值和阴性预测值。
结果２３９枚囊胚中的２０９枚有ＮＩＣＳ结果，ＮＩＣＳ检出率为８７ ５％（２０９／２３９）。
ＮＩＣＳ方法在检测１３、１５、１６、１８、２１、２２号染色体的特异性、效率比较高，均＞９０％，ＮＩＣＳ结果的阴性预测值超过９７％；但是敏感性波动较大（３３％～１００％），阳性预测值较低（＜５０％）。
结论ＮＩＣＳ方法可以检测囊胚整倍性。
当ＮＩＣＳ结果显示这些重要染色体（１３、１５、１６、１８、２１、２２号染色体）为整倍体时，对应囊胚该条染色体整倍性几率高；但是当ＮＩＣＳ结果显示这些重要染色体为非整倍体时，对应胚胎并不一定为非整倍体。
【关键词】 游离ＤＮＡ； 非整倍体； 囊胚； 胚胎无创染色体筛查技术； 胚胎植入前遗传学检测【中图分类号】 Ｒ７１ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｅｕｐｌｏｉｄｙｏｆｃｅｌｌｆｒｅｅＤＮＡｉｎｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍＨＵＡＮＧＪｉｎ，ＪＩＡＪｉａｌｉｎ，ＹＡＯＹａｘｉｎ，ＬＵＳｉｊｉａ，ＤＡＮＧＹｕｊｉａｏ，ＱＩＡＯＪｉｅ，ＬＩＵＰｉｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＴｈｉｒｄＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９１，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｃｅｌｌｆｒｅｅＤＮＡｉｎｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉａｔｏｄｅｔｅｃｔｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１３，１５，１６，１８，２１ａｎｄ２２ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙｏｆｔｈｅｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｔｏｔａｌｏｆ２３９ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓｗｅｒｅｉｎｃｌｕｄｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ａｎｄａｌｌｗｅｒｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍＰＧＴ Ａｃｙｃｌｅｓ．ＳＮＰａｒｒａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅａｎｅｕｐｌｏｉｄｙｏｆｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｓｏｆｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｂｉｏｐｓｙ．ＮＩＣＳｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅａｎｅｕｐｌｏｉｄｙｏｆｃｅｌｌｆｒｅｅＤＮＡｉｎｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉａ．Ｗｅｃｏｍｐａｒｅｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｕｓｉｎｇｂｌｉｎｄ．Ｗｅａｌｓｏｃａｌｃｕｌａｔｅｄｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ，ｐｏｓｉｔｉｖｅｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅｖａｌｕｅａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅｖａｌｕｅｏｆＮＩＣＳｉｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ１３，１５，１６，１８，２１ａｎｄ２２ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ．ＲｅｓｕｌｔｓＡｍｏｎｇ２３９ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓｉｎｃｌｕｄｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，２０９ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓｈａｄＮＩＣＳｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＮＩＣＳｗａｓ８７ ５％（２０９／２３９）．ＴｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆＮＩＣＳｉｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ１３，１５，１６，１８，２１ａｎｄ２２ｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ９０％，ａｎｄｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅｖａｌｕｅｏｆＮＩＣＳｗａｓｏｖｅｒ９７％．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｆｌｕｃｔｕａｔｅｄｇｒｅａｔｌｙ（３３％～１００％），ａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅｖａｌｕｅｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎ５０％．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＮＩＣＳｃａｎｄｅｔｅｃｔｂｌａｓｔｏｃｙｓｔａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ．Ｗｈｅｎｔｈｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ１３，１５，１６，１８，２１，２２ａｒｅｅｕｐｌｏｉｄ，ｔｈｅｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙｉｓｈｉｇｈ．Ｔｈｅｅｍｂｒｙｏｉｓｎｏｔｎｅｃｅｓｓａｒｉｌｙａｎｅｕｐｌｏｉｄｗｈｅｎｔｈｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓａｒｅａｎｅｕｐｌｏｉｄ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｃｅｌｌｆｒｅｅＤＮＡ； ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ； ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔ； ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇ（ＮＩＣＳ）； ｐｒｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｇｅｎｅｔｉｃｔｅｓｔｉｎｇ 近年来胚胎培养液中存在游离ＤＮＡ（ｃｅｌｌｆｒｅｅＤＮＡ，ｃｆＤＮＡ）已经在生殖领域引起了越来越多的关注［１］。
人教版生物学案-专题3-3.2体外受精和早期胚胎培养-含解析
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3.2体外受精和早期胚胎培养一、试管动物技术1.含义:指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精,并通过培养发育为早期胚胎后,再经移植产生后代的技术。
2.主要技术:体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植。
3.意义:(1)解决动物生育率低的问题。
(2)实现良种动物的快速大量繁殖。
二、体外受精1.卵母细胞的三种采集方法和培养方法的比较:采集采集过程培养适用动物方法用激素处理用促性腺激素处理,使其排出更多的卵子,从输卵管中冲取卵子无需体外培养,可直接与获能的精子在体外受精实验动物,如小鼠、兔及家畜猪、羊等从已屠宰母畜的卵巢中采集从刚屠宰母畜体内摘取卵巢,再从卵巢中采集卵母细胞采集的卵母细胞需在体外培养成熟后,才能与获能的精子受精大家畜或大型动物,如牛活体采卵借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜等工具,直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞2.精子的采集和获能:3.受精:获能的精子和培养成熟的卵子,一般在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。
三、胚胎的早期培养2.培养目的:检查受精状况和受精卵的发育能力。
3.胚胎去向:当胚胎发育到适宜的阶段时,可将其取出向受体移植或冷冻保存。
【易错辨析】1.试管动物技术在操作过程中要严格进行无菌操作。
(√)2.哺乳动物的体外受精主要包括卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能及受精等步骤。
(√)3.体外受精后获得的受精卵需要立即移入母体子宫进行妊娠,以保证成活率。
(×)【分析】体外受精获得的受精卵需要移入发育培养液中培养一段时间,以检查受精状况和受精卵的发育能力。
受精卵发育到适宜阶段才能进行胚胎移植。
4.早期胚胎培养的培养液中,应含有一定量的CO2。
(√)5.早期胚胎培养与动物细胞培养的培养液通常都需加入血清。
(√)一、体外受精1.卵母细胞的采集和培养方法:(1)超数排卵技术:促性腺激素可作用于卵巢,促进雌激素的分泌,进而促进卵子的排出,从输卵管中冲取的卵子,已发育至减数第二次分裂中期,可直接与获能的精子进行受精作用。
胚胎培养液成分
胚胎培养液成分
胚胎培养液是用于人类或动物胚胎体外培育的一种液体营养物质，并包含了多种成分以支持胚胎的生长和发育。
以下是常见的胚胎培养液成分：
1. 氨基酸：胚胎需要氨基酸来合成蛋白质和细胞组分。
2. 葡萄糖：是胚胎的主要能量来源，有助于促进细胞分裂和发育。
3. 矿物质和微量元素：包括钙、镁、锌、铜等。
这些元素对于胚胎发育和细胞分裂过程中的酶催化有重要作用。
4. 维生素：胚胎需要维生素来支持其发育进程，例如维生素C 有助于抑制自由基的生成。
5. 氧气：胚胎需要充足的氧气来支持其能量代谢和细胞分裂。
6. 胎牛血清：在某些胚胎培养液中添加胎牛血清可以提供胚胎所需的生长因子和促进胚胎发育的物质。
总之，胚胎培养液是一个复杂的混合物，由多种成分组成，旨在支持胚胎的生长和发育。
不同类型的胚胎培养液可能具有不同的成分组合，以适应不同类型的胚胎培养需求。
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胚胎移植液工作原理
胚胎移植液工作原理
胚胎移植液是一种辅助生殖技术，其工作原理涉及多个方面。
首先，胚胎移植液是在体外受精（IVF）过程中培育出的受精卵发育成胚胎的培养液。
在IVF过程中，女性的卵子和男性的精子在实验室中结合，形成受精卵。
这些受精卵会在培养皿中放置，并在胚胎移植液的环境中进行培育。
其次，胚胎移植液提供了受精卵所需的营养和环境条件，以促进其正常的发育。
这种培养液中包含了各种营养物质、氨基酸、糖类和矿物质等，以满足胚胎在体外培育过程中的生长需求。
另外，胚胎移植液也提供了一种稳定的温度和PH值的环境，以模拟人体内子宫的生理条件，有利于受精卵的发育。
这种稳定的环境能够最大程度地模拟母体子宫内的生理条件，提供了一个适宜的生长环境，有助于受精卵的发育和成熟。
总的来说，胚胎移植液通过提供营养物质和稳定的生长环境，促进受精卵在体外培育过程中的正常发育。
这样，培育出的胚胎可以在一定程度上模拟自然受孕的过程，为后续的胚胎移植和妊娠奠定基础。
值得注意的是，胚胎移植液的配方和使用方法会根据不同
的实验室和医疗机构有所差异，因此在具体使用时需要遵循医生的建议和指导。
CZB培养液使用说明书
®南京爱贝生物科技有限公司CZB培养液使用说明书型号：M1650规格：100ml/瓶保存条件及有效期：4-8℃避光冷藏可保存3个月本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途CZB液为Chatot CL，Ziomek CA和Bavister BD于1989年发表的专为克服小鼠胚胎体外培养中2-cell 阻滞的培养液，并以三人的名字缩写简称为CZB液，是使用最为广泛的小鼠胚胎培养液，支持受精卵发育至囊胚阶段。
1.4-8℃冷藏避光保存，未开封可保存3个月。
开封后请在2周内使用，开封超过两周培养液请废弃。
每次使用后请用封口膜封口，防止空气进入。
2.请勿分装及冻存，分装可能会导致渗透压改变以及污染，冻融会导致局部离子浓度过高产生不溶沉淀，影响胚胎发育。
本产品出厂已通过鼠胚质控，由于可能存在运输及保存问题，用户收到培养液后需在2周内做预实验验证。
3.使用前请做滴并覆盖矿物油（石蜡油），在37℃、5%CO培养箱内平衡4小时以上后使用，推2荐过夜平衡。
4.产品为即用型培养液，已添加BSA、庆大霉素、酚红。
5.本产品适用于受精卵至囊胚期培养，中途不需要换液。
质量控制1.渗透压：277mOsmol。
2.pH：7.2-7.4。
3.通过无菌、无支原体及鼠胚（MEA囊胚形成率＞85%）检测。
培养液成分组分mMol/LNaCl81.62KCl 4.83KH2PO4 1.18MgSO4·····7H2O 1.18Glucose 5.55Gentamicin sulfate salt*0.025g/LSodium lactate28.00NaHCO325.00Phenol Red0.001(g/L)Sodium pyruvate0.27CaCl2·2H2O 1.70Na2-EDTA·2H2O0.11L-Glutamine 1.00BSA 4.00(g/L)—Richard Behringer，Manipulating the Mouse Embryo:A Laboratory Manual（Fourth Edition）*本产品用热稳定的庆大霉素替代双抗（青霉素-链霉素溶液），延长培养液有效期。
动物细胞培养与动物早期胚胎培养
动物细胞培养与动物早期胚胎培养
2012-03-01 10:45:38| 分类：默认分类 | 标签： |字号大中小订阅
1.培养液的成分
动物细胞培养：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素和血清等
胚胎培养液：无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等2.细胞培养添加核苷酸，胚胎培养不添加核苷酸的原因
细胞培养不是不添加核苷酸，细胞培养液有血清型和无血清型，那显然添加血清的细胞培养液营养成分全面，另外添加水解乳蛋白和各种生长因子。
无血清型营养成分明确，有商品化制剂，包含了各种必需氨基酸和叶酸等营养成分，细胞一般为干细胞或其他，可以自己合成核苷酸。
胚胎培养可能由于它的细胞功能相对固定，需要直接利用核苷酸。
因为人体内核苷酸的合成也是在固定部位的。
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胚胎培养液
胚胎培养液的主要成分包括：水、离子、能量物质、氨基酸、维生素、核酸前体、蛋白质、生长因子激素、缓冲系统及气体，都有商品化现成的培养液可供购买。
水是组成任何培养液的主要成分，在IVF实验室，一般使用Milipore-Q系统产生无致热原的高质量的水( Mii-o)准备培养液及洗涤所有玻璃制品及设备。
目前我们对离子在种植前的作用了解很少，因为在培养液中有许多复杂的相互作用，很难了解一种离子的单独作用。
哺乳动物的输卵管液的特征是高钾和高氯化物浓度。
Roblero等报告高钾有利于精子获能和胚胎发育，培养液中离子的最大作用是控制培养液的渗透压，而渗透压对于人的胚胎发育是很重要的。
种植前胚胎的营养物质包括丙酮酸、乳酸和葡萄糖，胚胎从2细胞发育至囊胚期的各个阶段所需要的各种营养物质的浓度是不同的。
氨基酸在种植前和种植期间对于哺乳动物的发育有生理作用，Hardy和Gardner等观察到在培养液中加入氨基酸可加速小鼠和金黄地鼠胚胎的发育。
人IVF中最常用的蛋白质的来源是血清，一般浓度为5%～10%。
蛋白质在胚胎培养液中的作用不仅仅是固定的氮的来源，并可作为有害金属离子的整合物。
但Caro等发现人胚胎在含有或不含有母亲血清的T6培养液中培养，其受精率、胚胎分裂率和妊娠率无明显差异。
大多数胚胎培养液利用碳酸氢盐／二氧化碳作为缓冲系统以维持培养液的生理pH值为7.2—7.4，这是哺乳动物细胞周围液体的生理性缓冲液。
其缺点是若培养液暴露在空气中时间过长，pH值迅速增加可引起胚胎损伤或坏死。
在培养液上覆盖一层油可减慢培养液中的气体交换。
磷酸盐( HERPES)作为缓冲系统可不需要二氧化碳内环境维持其在空气中的pH 值。
胚胎培养液中的两种气体是氧和二氧化碳，二氧化碳不仅维持碳酸氢盐缓冲液的pH值，还可使种植前各个阶段的小鼠胚胎与蛋白质和核酸结合。
大多数IVF中心应用5%的二氧化碳。
许多作者证明，在培养液中将氧的水平减低至5%～7%时，与空气中20%的氧相比对胚胎发育更有利。