SUMO蛋白酶使用说明
碧云天SUMO Protease产品说明书
SUMO Protease产品简介：碧云天生产的SUMO Protease (Small Ubiquitin-related Modifier Protease)，是一种重组表达的高度特异性识别SUMO 化修饰或SUMO 结构域，并水解SUMO 羧基端(C 端) x-Gly-Gly-x 肽段中Gly-Gly 后的肽键，从而去除SUMO 化修饰或者去除SUMO 融合表达蛋白中SUMO 结构域的蛋白酶。
本产品是一种来自Saccharomyces cerevisiae 的高活性的半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl protease) Ulp1 (Ubl-specific protease 1, ubiquitin-like protein-specific protease 1)基因片段的重组表达蛋白。
SUMO 是一种泛素样蛋白(Ubiquitin-like Protein)，是一种非常常见蛋白翻译后修饰(post-translation modification, PTM)，对于蛋白的稳定性、生物学功能有重要的调节作用。
SUMO 也常被作为一种非常高效和有用的标签用于蛋白的表达纯化，例如碧云天的D2918 pET-N-His-PreScission-SUMO 质粒就是一种在N 端同时表达His 标签和SUMO 标签的原核表达质粒。
将SUMO 作为标签和目的蛋白的氨基端(N 端)进行融合表达时可以改善目的蛋白的折叠，提高目的蛋白的可溶性和产量。
随后使用SUMO Protease 对SUMO 融合蛋白进行酶切,去除SUMO 标签就可以获得完全没有标签蛋白干扰的目的蛋白。
因此SUMO Protease 可以高效且特异性地用于从重组融合蛋白上完全切割去除SUMO 标签，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。
SUMO Protease 进行酶切时的最适pH 值为8.0，最佳酶切温度为30ºC 。
SUMO蛋白酶使用说明书
SUMO蛋白酶使用说明书货号：P2070规格：1000U(200μL)产品内容：试剂名称规格保存温度SUMO蛋白酶（5U/μL）200μL-80℃SUMO Protease Buffer2mL-20℃产品说明：SUMO蛋白酶也称Ulp，是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶，它能识别SUMO蛋白的三级结构，而不是氨基酸序列，因此可以高效而且特异性地将SUMO蛋白从重组融合蛋白上切割下来。
SUMO蛋白酶在较宽范围的反应环境体系中能保持较高的活性，如温度（4-30℃），PH(5.5-9.5)等，SUMO蛋白酶带有多聚His标签，便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除该蛋白酶。
保存条件：SUMO蛋白酶-80℃长期保存，可存储2年；首次使用后可置于-20℃保存，避免反复冻融。
SUMO Protease Buffer可置于-20℃保存。
酶活定义：在1×SUMO Protease Buffer(50mM Tris-HCl,1mM DTT,pH8.0)中，30℃反应1h，剪切>85％的2μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
使用方法说明：1.SUMO蛋白酶与需要酶切的目的蛋白比例：1：100。
2.酶切体系：融合蛋白1000μgSUMO Protease Buffer20μLSUMO蛋白酶2μLddHO定容至1000μL23.酶切条件：推荐4℃酶切过夜，用户可以根据自己研究的目的蛋白进行摸索，以下酶切分析图片可供参考。
4.酶切后可取少量样本进行SDS-PAGE分析，若要去除酶切后体系中的SUMO蛋白酶，可用His标签纯化树脂亲和层析。
酶切后电泳分析图:4℃酶切3h;5h;6h;7h;8h;10h;12h;22h后SDS-PAGE电泳图。
注意事项：1.为达到最好的酶切效果，请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。
2.对于大部分融合蛋白，SUMO蛋白酶最理想的反应液中NaCl的浓度为150mM。
然而，根据实际情况可在100mM-300mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。
蛋白翻译后修饰- SUMO化
分子机制研究套路（一）蛋白翻译后修饰- SUMO化课题：SUMO化A蛋白对B转录因子介导的C信号通路的调控1．概念介绍：蛋白质是生命活动中各种功能的执行者,其功能正常与否决定着生命活动能否有序、高效的进行，而其中蛋白质翻译后修饰起着至关重要的作用。
蛋白质翻译之后,翻译后修饰改变了蛋白质中氨基酸残基上的生物化学官能团,进而改变其化学性质或结构,使得蛋白质具有更为复杂的结构,更为完善的功能,更为精细的调节。
蛋白质的翻译后修饰过程极其复杂,已知的翻译后修饰种类有20多种。
但其中较为常见的主要是泛素化、磷酸化、乙酷化、SUMO化、甲基化以及糖基化。
类泛素（Small Ubiquitin-like Modifier, SUMO)化修饰作为一种重要的翻译后修饰方式对蛋白质的功能有广泛的调节作用,主要包括调节蛋白质的细胞定位,蛋白质之间的相互作用以及蛋白质的活性等方面。
据研究报道,在对SUMO化修饰的目的蛋白进行分析之后,SUMO化修饰主要发生在保守序列ΨKXE中的赖氨酸位点K上。
Ψ表示脂肪族氨基酸,更倾向于亮氨酸L、异亮氨酸I、缴氨酸V。
2．示意图：SUMO化修饰过程与泛素化类似,包含E1活化酶,E2结合酶和E3连接酶三个酶的级联反应。
SUMO在最初合成时是一种前体形式,像泛素一样,需要蛋白剪切酶进行活化加工,形成能够结合到底物赖氨酸上的异构肽键。
在啤酒酵母中,这一过程的剪切酶为Ulpl。
C端成熟的SUMO首先由SUMO活化酶E1所活化,E1是异二聚体蛋白复合物,由Uba2和Aosl所组成。
活化过程需要ATP的参与,通过SUMO腺苷中间体将SUMO与Uba2上的半胱氨酸残基通过硫酯键连接起来。
活化后的SUMO接下来被转移到SUMO结合酶E2 Ubc9的半胱氨酸残基上，SUMO连接酶E3结合并催化SUMO连接到底物蛋白上。
不同的SUMO化修饰底物有不同的SUMO连接酶E3, 而Ubc9则能够与各种底物蛋白相结合。
去SUMO化蛋白酶的生物学功能与作用基础研究
去SUMO化蛋白酶的生物学功能与作用基础研究程金科;左勇【摘要】SUMO, an ubiquitin-like protein, can covalently conjugate proteins and plays a role in the regulation of target protein functions and localizations. Similar to ubiquitin, SUMO modification is a dynamic process catalyzed by El, E2? and E3 and reversed by Sentrin/SUMO-specific proteases ( SENPs) . To date, 6 SENP members have been defined in human cells, each of which has different cell localization and target specificity. However, the physiologic functions of SENPs are not fully understood. By analysis of SENPs knock-out mice, we find that SENP1 regulates hypoxia-HIFla signaling or androgen receptor ( AR) signaling through positive feedback loop, and plays an important role in HIFlot or AR-involved physiologic and pathologic processes. We also find that SENP2 is essential for suppression of polycomb group protein-mediated gene silencing during heart development. These results reveal the critical roles of SENPs in the regulation of targets-involved signaling,%小泛素样修饰蛋白(SUMO)修饰是一种新发现的类泛素蛋白质修饰形式.SUMO修饰由活化酶E1、接合酶E2和连接酶E3等三个酶相继作用来完成.同时它又是一个动态的、可逆的过程,其去SUMO修饰的过程则是由SUMO特异性蛋白酶(SENP)家族来介导.在蛋白质SUMO修饰的动态过程中,SENP介导的去SUMO过程是决定其靶蛋白质SUMO修饰水平的一个主要因素,同时也是SUMOylation被调节的一个主要环节.SENP家族包括SENP1、SENP2、SENP3、SENP5、SENP6、SENP7等成员,每个成员具有不同的细胞内定位和底物特异性.虽然对其生化特性进行了大量研究,但SENP在参与的细胞生命活动过程中的作用并未十分了解.我们通过分析SENP1和SENP2基因敲除小鼠的表型,发现了SENP1通过正反馈机制调控缺氧-HIF1α和雄激素受体所介导的信号通路,从而在HIF1α与AR所参与的生理病理过程中发挥了重要作用.同时,我们发现SENP2通过调控PeG的活性,参与心脏的发育过程.这些结果表明SENP在调控其靶蛋白所参与的信号通路中发挥了重要作用.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(032)009【总页数】5页(P1117-1121)【关键词】小泛素样修饰蛋白;蛋白质修饰;SUMO特异性蛋白酶【作者】程金科;左勇【作者单位】上海交通大学医学院基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海市肿瘤微环境与炎症重点实验室,上海200025;上海交通大学医学院基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海市肿瘤微环境与炎症重点实验室,上海200025【正文语种】中文【中图分类】Q55小泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier protein，SUMO)是一种类泛素蛋白，它通过与底物蛋白共价连接来调节靶蛋白的定位和与其他生物大分子的相互作用等活性。
sumo酶切
sumo酶切酶切是生物学实验中常用的一种技术，主要用于DNA或RNA的切割。
在众多的酶切方法中，Sumo酶切是一种独特的、高效的切割方法。
Sumo酶切，全称是Small Ubiquitin-related Modifier (SUMO) enzyme cut，是一种利用SUMO蛋白酶对目标DNA 或RNA进行特异性切割的技术。
这种酶切方法的主要优点是其高度的特异性和效率。
首先，我们来了解一下SUMO蛋白酶。
SUMO蛋白酶是一种小分子量泛素相关修饰因子，它在细胞内的许多生物过程中起着关键的作用，包括蛋白质的修饰、转运和降解等。
SUMO蛋白酶的活性是通过其特殊的结构域来实现的，这个结构域可以识别并结合到目标DNA或RNA的特定序列上，然后通过其内部的催化活性进行切割。
Sumo酶切的过程通常包括以下步骤：首先，将SUMO蛋白酶与目标DNA或RNA混合在一起，形成一个反应混合物；然后，通过适当的条件（如温度、pH值、离子浓度等）使SUMO 蛋白酶发挥其活性，进行切割反应；最后，通过电泳或其他方法分离和检测切割后的产物，以确定酶切的效果。
Sumo酶切的应用非常广泛。
在基因工程中，它可以用于克隆、测序、突变和表达等步骤；在基因组学中，它可以用于DNA或RNA的分析和鉴定；在疾病研究中，它可以用于疾病的诊断和治疗等。
然而，尽管Sumo酶切具有许多优点，但它也有一些局限性。
例如，由于SUMO蛋白酶的特异性，它只能切割特定的DNA或RNA序列；此外，SUMO蛋白酶的活性也受到许多因素的影响，如温度、pH值、离子浓度等，这需要实验者进行精细的控制。
总的来说，Sumo酶切是一种高效、特异的DNA或RNA切割方法，它在生物学研究和实践中有着广泛的应用。
然而，要充分发挥其潜力，还需要进一步的研究和改进。
在未来，随着生物技术的进步和研究的深入，我们有理由相信，Sumo酶切将会在更多的领域得到应用，为人类的健康和福祉做出更大的贡献。
SUMO 蛋白酶说明书
SUMO Protease产品概述SUMO Protease（SUMO 蛋白酶，又称ULP蛋白酶）能够识别并且高效地将 SUMO（Small Ubiquitin-Like Modifier）从融合蛋白上切割下来。
相对于 EK 和 TEV 等蛋白酶的短小识别位点，SUMO 蛋白酶能够识别完整的 SUMO 序列，所以SUMO蛋白酶酶切反应有很高的特异性，且在较宽范围的反应环境体系中保持较高的活力，例如温度（4-30℃）、pH（5.5-9.5）等。
SUMO蛋白酶还具有多聚His 标签，便于融合蛋白切割后用Ni-NTA（产品货号：PAN001）去除。
SUMO Protease是自E.coli 表达经亲和纯化的重组蛋白酶。
酶活性单位定义在 30℃条件下反应 1 小时，能够切割5 µg 的反应底物达 90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。
溶液成分通善SUMO Protease推荐反应体系不同温度下的参考反应时间：1.4℃反应 15～16 小时2.16℃反应 4 小时3.25℃反应 1.5 小时4.30℃反应 1 小时蛋白酶纯度 > 95%, as determined by SDS-PAGE 通善SUMO Protease活性测试待测融合蛋白100µg，加入sumo protease 2µl，4℃反应16小时，取酶切前后样品SDS-PAGE检测，如右图所示 >90% 融合蛋白被切割。
储存条件长期储存于 -80℃，可保存2年；或小量分装后保存于 -20℃，可保存6个月，避免反复冻融。
10X SUMO Buffer置于 -20℃保存。
包装规格货号规格RPP003-500 500 URPP003-2000 2000 URPP003-10000 10000 U。
小分子泛素相关修饰物SUMO融合外源蛋白表达的研究进展
文章编号：2096-0387 (2018) 03-0152-03第4卷第3期 生物化工Vol.4 No.32018 年 6 月Biological Chemical EngineeringJun. 2018小分子泛素相关修饰物SUM O 融合外源蛋白表达的研究进展荣雅昕，王英超'张耀方，卢顺娇，周倩，陈慧慧(天津农学院基础科学学院，天津300384)摘要：S U M 0 (类泛素蛋白修饰分子）是一类具有高度保守序列的低分子量蛋白。
作为融合标签在蛋白质的融合表达得到 了广泛应用。
本文对SUM0融合表达系统的优点进行概述，并综述了其在原核生物和真核生物外源蛋白融合表达的研究情况。
关键词：融合外源蛋白；SU M 0;研究进展 中图分类号：Q786文献标志码：AResearch Progress on the Fusion of Foreign Protein by Small Molecule Ubiquitin PeptideRong Ya -xin , Wang Ying-chao , Zhang Yao -fang , Lu Shun -jiao , Zhou Qian,Chen H ui-hui(College of Basic Science , Tianjin Agriculture University , Tianjin 300384)Abstract ： SUMOwas a class of low molecular weight proteins with highly conserved sequences . As a fusion label , the fusion expression of protein has been widely used . In this paper , the advantages of SUMO fusion expression system were summarized and the progress in the fusion expression of exogenous proteins in prokaryotes and eukaryotes was reviewed .Key words ： Fusion of exogenous protein;Small ubiquitin-related modifer;Research progressSUMO 是存在于真核生物中起相关修饰作用的 一类蛋白质，具有调节蛋白转运、相互作用，维持基 因完整性等多种功能[1_3]。
蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明
蛋白质提取过程中常用的蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明一、蛋白酶抑制剂PMSF：特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶。
溶解性：溶于异丙醇、乙醇、甲醇和丙二醇里>10mg/ml。
在水溶液中不稳定。
在100%异丙醇，25℃时稳定至少9个月。
分子量：174.2使用：贮存浓度200mM，工作浓度1mMLeupeptin 亮肽素特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤溶酶和组织蛋白酶B。
溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。
4℃一周稳定，分成小份，冷冻在-20℃至少6个月。
分子量：C20H38N6O4 ×1/2 H2SO4:475.6 C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 × H2O:493.6使用：贮存浓度1mg/ml，工作浓度0.5 ug/ml (1mM)。
Aprotinin抑肽酶特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶、激肽释放酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的高活性。
不抑制凝血酶或因子X。
溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如0.1M tris，pH8.0）。
pH约7~8的溶液在4℃可保存1周，分装保存在-20℃可至少保存6个月。
避免反复冻融, pH>12.8的碱性环境可使其灭活。
分子量：6,512使用：贮存浓度1mg/ml，工作浓度0.06~2.0 ug/ml(0.01~0.3 uM)。
Pepstatin胃蛋白酶抑制剂特性：抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶、肾素、组织蛋白酶D、凝乳酶、许多微生物酸性蛋白酶溶解性：溶于甲醇约1mg/ml；可溶于乙醇，过夜溶解可达到1 mg/ml；在6当量乙酸中溶解度为300ug/ml。
4℃稳定一周，分装储存于-20℃时可保存1个月。
分子量：685.9使用：贮存浓度1mg/ml，使用浓度0.7 μg/ml(1 μM)。
EDTA-Na2特性：金属蛋白酶抑制剂溶解性：溶于水至0.5M，在pH8-9的条件下，4℃稳定至少6个月分子量：372.24使用：工作浓度0.2~0.5 mg/ml(0.5~1.3 mM)，不需现用现配，在溶液pH值调至8~9时再加入。
SUMO蛋白酶活性片段的表达、纯化及活性测定
SUMO蛋白酶活性片段的表达、纯化及活性测定
SUMO蛋白酶被认为在多种细胞过程中起着调节作用。
为了
进一步研究SUMO蛋白酶的生物学功能，需要进行其活性片
段的表达、纯化及活性测定。
首先，可以使用质粒构建技术从人类cDNA库中克隆SUMO
蛋白酶的一个片段，如Ulp1，Ulp2或Ulp3。
将其插入到表达
载体中，并进行适当的序列验证。
接下来，需要选择适当的宿主细胞进行表达。
常用的宿主细胞为大肠杆菌，但也存在其他表达系统，如酵母菌表达系统。
通过在表达时添加不同的诱导剂，可以控制蛋白的表达量和时机。
之后，需要对表达的蛋白进行纯化。
可以利用亲和纯化柱进行初步的纯化，然后再使用离子交换、凝胶过滤和透析等方式进行进一步的纯化。
纯化后的蛋白需要经过SDS-PAGE和Western blot验证。
最后，需要对SUMO蛋白酶活性片段进行活性测定。
可以观
察其对SUMO修饰蛋白的去SUMO化作用。
可以通过Western blot、荧光标记或质谱等方法进行定量。
活性测定的
结果可以用于进一步研究SUMO蛋白酶的生物学功能及调节
机制。
在表达、纯化和活性测定这一系列实验中，需要严格控制实验条件和研究方法。
同时，还需要注意跟踪和记录实验结果，以便后续分析和讨论。
SUMO蛋白酶说明书
SUMO Protease产品概述SUMO Protease（SUMO 蛋白酶，又称ULP蛋白酶）能够识别并且高效地将 SUMO（Small Ubiquitin-Like Modifier）从融合蛋白上切割下来。
相对于 EK 和 TEV 等蛋白酶的短小识别位点，SUMO 蛋白酶能够识别完整的 SUMO 序列，所以SUMO蛋白酶酶切反应有很高的特异性，且在较宽范围的反应环境体系中保持较高的活力，例如温度（4-30℃）、pH（5.5-9.5）等。
SUMO蛋白酶还具有多聚His 标签，便于融合蛋白切割后用Ni-NTA（产品货号：PAN001）去除。
SUMO Protease是自E.coli 表达经亲和纯化的重组蛋白酶。
酶活性单位定义在 30℃条件下反应 1 小时，能够切割5 µg 的反应底物达 90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。
溶液成分通善SUMO Protease推荐反应体系不同温度下的参考反应时间：1.4℃反应 15～16 小时2.16℃反应 4 小时3.25℃反应 1.5 小时4.30℃反应 1 小时蛋白酶纯度 > 95%, as determined by SDS-PAGE 通善SUMO Protease活性测试待测融合蛋白100µg，加入sumo protease 2µl，4℃反应16小时，取酶切前后样品SDS-PAGE检测，如右图所示 >90% 融合蛋白被切割。
储存条件长期储存于 -80℃，可保存2年；或小量分装后保存于 -20℃，可保存6个月，避免反复冻融。
10X SUMO Buffer置于 -20℃保存。
包装规格货号规格RPP003-500 500 URPP003-2000 2000 URPP003-10000 10000 U。
sumo 蛋白酶切割序列
sumo 蛋白酶切割序列
SUMO（Small Ubiquitin-like Modifier）是一种与泛素结构相似的蛋白质修饰标记，可通过共价连接到目标蛋白上。
SUMO修饰在细胞的许多生物学过程中都起着关键作用，包括基因表达、细胞周期、DNA修复等。
SUMO修饰通常是可逆的，即可以通过蛋白酶切割SUMO与底物蛋白之间的结合来去除SUMO标记。
SUMO蛋白酶（SUMO protease）负责这一切割过程。
SUMO蛋白酶的底物是被SUMO修饰的蛋白，通过切割可以将SUMO从底物上剥离。
SUMO蛋白酶识别SUMO标记的特定序列，这个序列通常被称为SUMO切割位点。
SUMO切割位点的一般序列为：
ψ-K-x-E
其中：
ψ代表一个大疏水性氨基酸（通常是亮氨酸，Leu），
K 代表SUMO修饰的赖氨酸（Lysine），
x 代表任意氨基酸，
E 代表谷氨酸酸（Glu）。
这个序列指明了SUMO蛋白酶在SUMO修饰的蛋白上切割的位置。
通过这样的切割，SUMO可以被有效地去除，从而影响底物蛋白的功能。
SUMO切割是调节细胞内SUMO修饰水平的一个重要机制。
1/ 1。
sumo标签序列氨基酸序列
sumo标签序列氨基酸序列sumo标签序列氨基酸序列的重要性与应用1. 引言在生物学研究中，特别是在蛋白质研究领域，了解蛋白质的结构和功能至关重要。
蛋白质通常需要通过与其他分子相互作用来发挥功能，而这些相互作用可以通过修饰蛋白质的特定位点来调节。
其中，一个重要的修饰方式是添加小的蛋白质标签，使蛋白质能够在实验室中更容易地进行检测和纯化。
sumo标签序列就是其中之一。
2. sumo标签序列的定义和结构Sumo标签序列（Small Ubiquitin-like Modifier）是一个短小的多肽序列，它可以与目标蛋白质的特定位点结合，并改变蛋白质的结构、定位和相互作用。
Sumo标签序列的典型结构为GG AT TACCT，其中GG为其起始位点，AT为附加序列，TACCT为其终止位点。
3. sumo标签序列的修饰作用Sumo标签序列的修饰作用在细胞中起着重要的调节功能。
它能够调节目标蛋白质的稳定性、亚细胞定位、相互作用，并参与信号转导、基因表达和细胞周期调控等关键生物过程。
通过与sumo标签序列的结合，目标蛋白质可以发生构象改变，从而改变其功能。
4. sumo标签序列在蛋白质纯化中的应用由于sumo标签序列的高亲和性和易于纯化的特点，它在蛋白质纯化中得到了广泛的应用。
科学家们经常使用sumo标签将目标蛋白质表达在宿主细胞中，并通过与sumo标签序列的结合来纯化目标蛋白质。
这种方法不仅能够提高目标蛋白质的纯度，还可以减少其他杂质的污染，从而更好地了解目标蛋白质的结构和功能。
5. sumo标签序列在研究生物学中的应用除了在蛋白质纯化中的应用，sumo标签序列在研究生物学中也发挥着重要的作用。
科学家们经常使用sumo标签来研究蛋白质相互作用、信号转导和细胞功能。
通过将sumo标签序列与目标蛋白质相互作用的位点进行突变，科学家可以探索蛋白质结构和功能的细微差异，并了解其在生物系统中的作用。
6. 个人观点和理解从我的了解来看，sumo标签序列作为一种修饰方式对蛋白质的研究至关重要。
SUMO-TAT-Sox2融合蛋白的表达及纯化
SUMO-TAT-Sox2融合蛋白的表达及纯化[摘要] 目的将小鼠Sox2基因、穿膜肽TAT以及小分子泛素样修饰蛋白SUMO融合并转入大肠杆菌中进行表达，最终获得大量具有高效穿膜活性的Sox2蛋白。
方法利用PCR技术扩增得SUMO-TAT融合基因，并插入到pET-3c载体。
再通过扩增获得小鼠Sox2基因，将其与pET3c-SUMO-TAT基础载体连接，构建得重组表达载体pET3c-SUMO-TAT-Sox2，然后转化到Rosseta(DE3)表达菌中，经IPTG诱导表达，使用Ni-NTA亲和层析进行分离纯化。
结果成功构建了pET3c-SUMO-TAT-Sox2原核表达载体，经终浓度为1 mmol /L的IPTG诱导4 h后表达约为57kDa的融合蛋白，以包涵体形式存在，Western Blotting检测显示良好特异性，经300 mmol/L咪唑洗脱可获得纯度较高的SUMO-TAT-Sox2融合蛋白。
结论得到大量带有穿膜肽TAT的融合蛋白Sox2，为今后利用重编程因子融合蛋白诱导体细胞重编程为iPS细胞奠定基础。
[关键词] Sox2基因；小分子泛素样修饰蛋白；TAT；原核表达；蛋白纯化转录因子Sox2属于HMG蛋白家族成员之一，具有维持胚胎干细胞自我更新能力，并能抑制中胚层细胞产生多种组织类型的细胞系的分化[1]。
Sox2可作为成体干细胞的分子标记物[2]。
范祖森等揭示了Sox2是通过招募介导组蛋白去甲基化和去乙酰化的NuRD复合物参与自噬调节，在细胞重编程过程中发挥重要作用[13]。
Sox2是通过转录激活SFRP2这一Wnt信号通路的拮抗因子，同时转录抑制WLS这一Wnt运输蛋白从而达到抑制经典Wnt信号通路的作用来实现从人胚胎干细胞向神经分化[4]。
由此可见，Sox2在在维持干细胞多能性以及细胞重编程中发挥重要作用。
小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier, SUMO)是一种与泛素在结构上十分相似的小分子多肽，作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不仅可以与靶蛋白N端结合来帮助其正确转运和折叠，且SUMO有利于增加蛋白的可溶性，能够大大提高蛋白质在大肠杆菌的表达量[35]。
蛋白质SUMO化修饰研究进展
SUMO 蛋白分布广 泛, 存在 于各 种真核 生物 细胞 中, 在芽殖酵母、线 虫、果蝇及培 养的脊 椎动物细 胞中 都有表达。但酵 母、线虫、果蝇 只存 在 一种 SUMO 基 因, 而在植物和脊 椎动物 体内包 含几 种不同 的 SUMO 基因。人类基因 组就编码了 四种不 同的 SUMO 蛋白, 分别为: SUMO1 (又称 P IC1, UBL1, sen trin, GMP1 或 SMT3C )、SUMO 2 (又 称 SMT3A 或 sen trin-3 )、SUMO 3 (又称 SMT3B或 sentrin-2)和 SUMO4。其中 SUMO 1~ SUMO 3在各种组织中均有表达, 而 SUMO 4则主要在肾 脏、淋巴结和脾脏中表达 [3 ]。
2 SUM O 化修饰的底物特点
到目前为止, 研究发 现能与 SUMO 结合被其 修饰 的蛋 白 有百 余 种, 例如 R anGAP1, PML, Sp100, IJ BA, p53 和 c-Jun等。通过对这些 SUMO 化靶分子的结构分 析发现, 它们大都包含一段短的的一致性序列 7 KXE, 其中 7 代表一个大的疏水性氨基酸, 通常是异亮氨酸、 亮氨酸或缬 氨酸、甲硫 氨酸 或苯 丙氨 酸; K 代 表赖 氨
SUMO蛋白酶说明书
SUMO Protease产品概述SUMO Protease（SUMO 蛋白酶，又称ULP蛋白酶）能够识别并且高效地将 SUMO（Small Ubiquitin-Like Modifier）从融合蛋白上切割下来。
相对于 EK 和 TEV 等蛋白酶的短小识别位点，SUMO 蛋白酶能够识别完整的 SUMO 序列，所以SUMO蛋白酶酶切反应有很高的特异性，且在较宽范围的反应环境体系中保持较高的活力，例如温度（4-30℃）、pH（5.5-9.5）等。
SUMO蛋白酶还具有多聚His 标签，便于融合蛋白切割后用Ni-NTA（产品货号：PAN001）去除。
SUMO Protease是自E.coli 表达经亲和纯化的重组蛋白酶。
酶活性单位定义在 30℃条件下反应 1 小时，能够切割5 µg 的反应底物达 90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。
溶液成分通善SUMO Protease推荐反应体系不同温度下的参考反应时间：1.4℃反应 15～16 小时2.16℃反应 4 小时3.25℃反应 1.5 小时4.30℃反应 1 小时蛋白酶纯度 > 95%, as determined by SDS-PAGE 通善SUMO Protease活性测试待测融合蛋白100µg，加入sumo protease 2µl，4℃反应16小时，取酶切前后样品SDS-PAGE检测，如右图所示 >90% 融合蛋白被切割。
储存条件长期储存于 -80℃，可保存2年；或小量分装后保存于 -20℃，可保存6个月，避免反复冻融。
10X SUMO Buffer置于 -20℃保存。
包装规格货号规格RPP003-500 500 URPP003-2000 2000 URPP003-10000 10000 U。
蛋白质SUMO化修饰循环通路在胚胎发育中的作用
蛋白质SUMO化修饰循环通路在胚胎发育中的作用张孝玲;郑军【摘要】SUMO modification is a reversible post-translational regulation of proteins. It resembles the three-dimensional structure of ubiquitin, but different functional outcomes derive from these two types of modification. It targets a variety of proteins within the nucleus, in the plasma membrane and cytoplasm of the cell. Numerous developmental proteins, including transcription factors and epigenetic regulators, have been identified as sumoylation substrates. It is covalently conjugated with specific lysine sites on target proteins through E1 activating enzymes, E2 binding enzymes and E3 ligase, and plays a regulatory role in cell function, such as controlling cell cycle, regulating transcription, regulating subcellular localization, etc. In recent years, several researches have uncovered many significant functions of the sumoylation in the early life of embryonic development. In the process of embryonic development, sumoylation involved in many molecular events in multiple aspects of the regulation of embryonic development, such as maintaining chromosome integrity and isolation, control of centromere aggregation and regulation of germ cell development and meiotic maturation etc. The review will generalize current information as to the function of sumoylation in the embryonic development. However, as the study has just been started, the full physiological function of the SUMO loop pathway in embryonic development remains to be further studied.%小分子泛素样调节蛋白(smallubiquitin-related modifier,SUMO)化修饰是一种可逆的蛋白质翻译后调节形式.SUMO与泛素结构相似,但功能迥异.SUMO底物可定位于细胞核、细胞膜及细胞质,绝大多数为转录因子和表观调节子.SUMO通过E1激活酶、E2结合酶和E3连接酶与靶蛋白上特定的赖氨酸位点共价结合,调节细胞功能,如控制细胞周期、调控转录、调节亚细胞定位等.近年许多研究证明,SUMO化修饰在早期胚胎发育中发挥重要作用.在胚胎发育过程中,蛋白质SUMO化修饰参与调控胚胎发育的多个环节中的多个分子事件,如维持染色体的完整性、分离控制着丝点聚集、调控生殖细胞发育及减数分裂成熟等.总结最新的研究成果,概括SUMO化修饰在胚胎发育中的作用.但由于该项研究刚刚起步,SUMO化循环通路在胚胎发育中的全部生理学功能仍有待进一步研究.【期刊名称】《国际妇产科学杂志》【年(卷),期】2017(044)006【总页数】5页(P605-609)【关键词】泛素;胚胎发育;蛋白质修饰,转译;小分子泛素样调节蛋白【作者】张孝玲;郑军【作者单位】300100 天津医科大学学院中心妇产科临床学院;300100 天津医科大学学院中心妇产科临床学院【正文语种】中文小分子泛素样调节蛋白（small ubiquitin-related modifier，SUMO）是一类结构及级联酶促反应与泛素化相似但功能迥异的小分子蛋白家族。
碧云天生物技术pET-N-His-PreScission-SUMO产品说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号pET-N-His-PreScission-SUMO产品编号 产品名称包装 D2918-1µg pET-N-His-PreScission-SUMO 1µg D2918-100µgpET-N-His-PreScission-SUMO100µg产品简介：pET-N-His-PreScission-SUMO 是一种用于表达N 端同时含有His 标签(His tag)和SUMO 标签(SUMO tag)双标签的目的蛋白的原核表达质粒。
His 标签有利于通过亲和层析方法进行目的蛋白的纯化，而SUMO 标签则有利于改善目的蛋白的折叠，增加目的蛋白可溶性和产量。
表达后的含有目的蛋白的融合蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His 标签但保留SUMO 标签，也可以通过SUMO Protease (P2310)酶切去除N 端的His 和SUMO 两个标签。
如果通过无缝克隆技术(Seamless Cloning Kit, 无缝克隆试剂盒)在SUMO 标签酶切位点后插入目的蛋白ATG 起始的序列，SUMO Protease 酶切后，可以确保表达的目的蛋白氨基端(N 端)刚好从甲硫氨酸(Methione)开始，不会增加或减少任何一个氨基酸，实现目的蛋白的完美正确表达。
本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac 操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。
在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N 端含有His 和SUMO 双标签的目的蛋白。
sumo标签蛋白纯化原理
sumo标签蛋白纯化原理引言：sumo标签蛋白纯化是一种常用的蛋白质纯化方法，通过在目标蛋白上连接sumo标签，利用sumo标签的特殊性质实现对蛋白的纯化。
本文将介绍sumo标签蛋白纯化的原理及其应用。
一、sumo标签的特性sumo标签是Small Ubiquitin-like Modifier（小泛素样修饰物）的缩写，是一种与泛素类似的蛋白质修饰物。
sumo标签具有以下特性：1. 高表达：sumo标签可以促进目标蛋白的高表达，提高目标蛋白的产量。
2. 可溶性：sumo标签可以提高目标蛋白的溶解度，并避免蛋白的聚集和不溶性。
3. 稳定性：sumo标签可以提高目标蛋白的稳定性，延长其半衰期。
二、sumo标签蛋白纯化原理sumo标签蛋白纯化是利用sumo标签的特性实现对目标蛋白的纯化。
其原理主要包括以下几个步骤：1. 构建sumo标签融合蛋白表达载体将sumo标签基因与目标蛋白基因连接，构建sumo标签融合蛋白表达载体。
这样，在转染目标细胞后，可以通过表达载体将sumo标签与目标蛋白一起表达。
2. 目标蛋白的高表达和溶解度提高sumo标签的表达可以促进目标蛋白的高表达。
此外，sumo标签还能提高目标蛋白的溶解度，避免蛋白聚集和不溶性的问题。
这对于高效蛋白纯化非常重要。
3. sumo标签蛋白的选择性结合经过表达后，sumo标签与目标蛋白会形成融合蛋白。
由于sumo标签的特殊性质，可以利用特定的亲和层析材料（如Ni-NTA琼脂糖）选择性地结合sumo标签融合蛋白。
4. 目标蛋白的纯化通过亲和层析的方法，sumo标签融合蛋白可以与亲和层析材料结合，并通过洗脱步骤将目标蛋白从杂质中分离出来。
这样就实现了对目标蛋白的高效纯化。
5. sumo标签的去除在获得纯化的目标蛋白后，可以通过特定的酶（如sumo蛋白酶）将sumo标签从目标蛋白上切除。
这样就可以得到不含有sumo标签的纯目标蛋白。
三、sumo标签蛋白纯化的应用sumo标签蛋白纯化是一种常用的蛋白质纯化方法，广泛应用于生物医学研究和生物工程领域。
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SUMO蛋白酶使用说明
货号：P2070
规格：1000U(200μL)
产品内容：
试剂名称规格保存温度
SUMO蛋白酶（5U/μL）200μL-80℃
SUMO Protease Buffer1mL×2-20℃
产品说明：
SUMO蛋白酶也称Ulp，是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶，它能识别SUMO蛋白的三级结构，而不是氨基酸序列，因此可以高效而且特异性地将SUMO蛋白从重组融合蛋白上切割下来。
SUMO蛋白酶在较宽范围的反应环境体系中能保持较高的活性，如温度（4-30℃），PH(5.5-9.5)等，SUMO蛋白酶带有多聚His标签，便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除该蛋白酶。
保存条件：
SUMO蛋白酶-80℃长期保存，可存储2年；首次使用后可置于-20℃保存，避免反复冻融。
SUMO Protease Buffer可置于-20℃保存。
酶活定义：
在1×SUMO Protease Buffer(50mM Tris-HCl,1mM DTT,pH8.0)中，30℃反应1h，剪切>85％的2μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
使用方法说明：
1.SUMO蛋白酶与需要酶切的目的蛋白比例：1：100。
2.酶切体系：
融合蛋白1000μg
SUMO Protease Buffer20μL
SUMO蛋白酶2μL
ddH
O定容至1000μL
2
3.酶切条件：推荐4℃酶切过夜，用户可以根据自己研究的目的蛋白进行摸索，以下酶切分析图片可供参考。
4.酶切后可取少量样本进行SDS-PAGE分析，若要去除酶切后体系中的SUMO蛋白酶，可用His标签纯化树脂亲和层析。
酶切后电泳分析图:
4℃酶切3h;5h;6h;7h;8h;10h;12h;22h后SDS-PAGE电泳图。
注意事项：
1.为达到最好的酶切效果，请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。
2.对于大部分融合蛋白，SUMO蛋白酶最理想的反应液中NaCl的浓度为150mM。
然而，根据实际情况可在100mM-300mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。
实验中要考虑融合蛋白中盐的浓度。
3.咪唑的浓度应低于150mM，若高于该浓度会影响SUMO蛋白酶的活性。