MS培养基及配制注意事项
MS培养基母液的配制与保存
仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH，0.1-1NHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。
优点：（1）保证各物质成分的准确性。
（2）便于配置时快速移取。
（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10X）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16．5g②KNO31900 mg/L 19．0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4．4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3．7g⑤KH2PO4170 mg/L 1．7g2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22．3 mg/L（21．4 mg/L）223mg②ZnSO4·7H2O8．6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0．025mg/L 0．25mg④CuSO4·5H2O0．025 mg/L 0．25mg⑤Na2MoO4·2H2O0．25 mg/L 2．5mg⑥KI 0．83 mg/L 8．3 mg⑦H3BO36．2 mg/L 62 mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml（即含0．25 mg的量）加入到母液中。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
MS培养基及配制注意事项
、MS培养基母液的配制母液编种号类1大元KNO3NH4NO3MgS04・7H201900165037017044022.38.66.20.831010101010100100100100100100100100100100100100100成分浓缩母液配制1升规定量倍数称取量体积培养基吸(mg)( ml)取量定容1900016500370017004400223086083252.52.5373027801002525 500050010500101000101000 1000100101000100 素KH2PO43微元CaCl2 2H2OMnSO4 4H2OZnSO47H2OKINa2MoO4・7H2O0.25 0.0250.02537.327.82.00.50.10.5100CuSO4.5H2O4CoCL2.6H2O4铁Na2-EDTA盐FeSO4.4H2O5有机甘氨酸盐酸吡哆醇盐酸硫铵素6 肌酸注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl22H20 单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2 2H20 配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100 倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeS04 7H20 和Na2-EDTA.2H20）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml 容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeS04 7H20 和Na2-EDTA.2H20 分别溶于450ml 蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
组织培养实验MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
组织培养实验-MS培养基及配制注意事项
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 组织培养实验-MS培养基及配制注意事项一、 MS 培养基母液的配制注意：1．除 CaCl22H2O 单独配制外，大量元素按照使用时高 10 倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在 500ml 烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl22H2O 配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩 100 倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（ FeSO47H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，母液成分 1 倍培养基用量浓缩倍数称取量（mg）母液体积（ml）配制 1 升培养基吸取量（ml）编号种类 1 大量元素KNO3 1900 10 19000 1000 100 NH4NO3 1650 10 16500 MgSO4 7H2O 370 10 3700 KH2PO4 170 10 1700 2 CaCl2 2H2O 440 10 4400 1000 100 3 微量元素 MnSO4 4H2O 22.3 100 2230 1000 10 ZnSO4 7H2O 8.6 100 860 H3BO3 6.2 100 620 KI 0.83 1000830 1000 1 Na2MoO4 7H2O 0.25 1000250 CuSO4.5H2O 0.025 100025 CoCL2.6H2O 0.025 100025 4 铁盐 Na2-EDTA 37.3 100 3730 1000 10 FeSO4.4H2O 27.8 100 2780 5 有机物甘氨酸 2.0 50 100 500 10 盐酸吡哆醇（VB6） 0.5 50 251 / 8盐酸硫铵素（VB1） 0.1 50 5 烟酸 0.5 50 25 6 肌醇 100 50 5000 500 10 定容在 1000ml 容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
MS培养基及配制注意事项
2． 称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制：
为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配 成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸 （NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米 素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。 激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸 需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母 液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃） 保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为 0.5mg时，则取1ml母液即可。
2.无菌操作可按以下步骤进行：
（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外 线灯进行杀菌； （2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯； （3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； （4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后搽拭工 作台面； （5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； （6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽 等； 材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切 割。（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要 剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉 污染。
MS培养基的配制
MS 培养基的配制1、配制几种母液（1）配制MS 大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。
倍。
分别称取分别称取名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 NH 4NO 3 165g 82.5 KH 2PO4 17g 8.5 KNO 3 190g 95 CaCl 2·2H 2O 44g 22 MgSO 4·7H 2O37g18.5各自配成1L 1L（（500ml 500ml）的母液。
各自倒入）的母液。
各自倒入1L 1L（（500ml 500ml）试剂瓶中，存放于冰箱中。
）试剂瓶中，存放于冰箱中。
）试剂瓶中，存放于冰箱中。
（2）配制MS 微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
倍母液。
依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）依次称取（注：溶好一个后，再加下一个）名称名称 重量重量 名称名称 重量重量 KI 0.083g Na 2MoO 4·2H 2O 0.025gH 3BO 3 0.62g CuSO 4·5H 2O 0.0025g MnSO 4·H 2O 1.69g CoCl 2·6H 2O 0.0025g ZnSO 4·7H 2O0.86g配成配成1L 母液，倒入1L 试剂瓶中，存放于冰箱中。
试剂瓶中，存放于冰箱中。
注：注：CuSO CuSO 4·5H 2O 和CoCl 2·6H 2O O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。
可先配成调整液。
分别称取CuSO 4·5H 2O 0.05g O 0.05g，，CoCl 2·6H2O ·6H2O 0.05g 0.05g各自配成100ml 的调整液，然后取5ml 就还有0.0025g 的量。
的量。
（3）配制MS 有机母液一般配制成100倍MS 有机母液。
MS培养基的配制
一、MS培养基的配制1. 培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的10倍或100倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
2. 按配方表配制MS培养基母液：大量元素50×，微量元素配100×，铁盐、有机成分配制成100×，母液贮存于4℃的冰箱中。
激素配成浓度为0.1mg/mL.3. 配制各种母液是，成分顺序加入，上一成分溶解后再加下一成分。
钙液和铁盐都单独配制。
生长素配制时，先用微量1MNaOH溶解，再以蒸馏水定容；细胞分裂素配制时，先用微量0.1MHCl溶解，再以蒸馏水定容。
二、MS母液配制取作表序号药品名称MS量(mg/L）扩大倍数母液量(g)定容取作量(mg/L)甲液NH4NO3KNO3MgSO4.7H20KH2PO41650190037017050×41.2547.59.254.25500ml 20钙液无水CaCl2440 100×11 500ml 20乙液MnSO4.4H2O或MnSO4. H2OZnSO4.7H2OH3BO3KI22.316.98.66.20.83100× 1.120.850.430.310.0415500ml 10铁盐Na2.EDTA.2H2OFeSO4.7H2037.227.8100× 1.861.39500ml 10有机成分盐酸吡哆醇(VB6)烟酸甘氨酸0.50.52100×0.0050.0050.02100ml 10丙液ⅠNa2MoO4.2H2O.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O0.250.0250.025100×0.01250.001250.00125500ml 10丙液Ⅱ肌醇100 100× 2 200ml 10丙液Ⅲ盐酸硫胺素(VB1) 0.4 50×0.02 100ml 2附注琼脂5.5-6.5g/L 蔗糖30g/LpH5.8-6.2备注：1钙液的母液量由于易沉淀所以取11g2丙液Ⅰ由于取的量太少所以先去12.5mg,溶于10mL水，再取1mL溶液稀释三、注意事项1、药品的质量问题：为了避免杂质及有害物质对组织培养的影响，必须注意药品质量，国内药品采用国际上通用标准，分为：一级，即保证试剂、优质纯试剂Guaranteed Reagent, GR级；二级，即分析纯试剂，Analytical Reagent, AR级；三级，即化学纯试剂，Chemical Pure, CP级；四级，即实验试剂，Laboratory Reagent, LR级。
MS培养基母液的配制与保存
仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH，0.1-1NHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。
优点：（1）保证各物质成分的准确性。
（2）便于配置时快速移取。
（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10X）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16．5g②KNO31900 mg/L 19．0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4．4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3．7g⑤KH2PO4170 mg/L 1．7g2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22．3 mg/L（21．4 mg/L）223mg②ZnSO4·7H2O8．6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0．025mg/L 0．25mg④CuSO4·5H2O0．025 mg/L 0．25mg⑤Na2MoO4·2H2O0．25 mg/L 2．5mg⑥KI 0．83 mg/L 8．3 mg⑦H3BO36．2 mg/L 62 mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml（即含0．25 mg 的量）加入到母液中。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
MS培养基配制中的五点注意[1]
![MS培养基配制中的五点注意[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/7595732e7375a417866f8fa2.png)
的，因为激素在低温环境中易析出沉淀，影响使用
效果。
3危险药品的使用与保管
尽管组织培养技术已经相当成熟，在高中教
学当中也逐渐地普及，但该技术并不安全。除注
意灭菌锅、超净台等大型仪器的使用安全外，最重
要的当属危险药品的使用与保管。原则上，MS培
用其他培养基，如N或B，培养基，无.. NHNO成
分，亦为组织培养所常用。..
(2)EDTA-Na2、CoC1，、2，.. 4一D
此三种药品为致癌物，配制时要带胶皮手套，
或两层塑料手套。ED TA—Na为金属螯合剂，有
一
定的粘性；.. CoCI：能够导致基因突变，遗传学实
验中也常用其作为致突变剂；.. 2，4-D是高效农药，
司承办
＼
；实验教学探究
一、P
如何增加生物实验教学的有效性
口徐晓红
浙江省杭州市第二中学.. 310053
摘要从提高教师自身实验素养、加强学生相关技能培养、加强学生质疑问题的能力等5个方面分析并提出了如何加强
生物实验教学的有效性。
关键词生物实验教学有效性
生物实验教学始终是中学教学中一个最为薄
制加热时间)，则培养基的.. pH自然地将处于最适
范围内。调解pH时最好用电子pH计，以保证精
确度。pH试纸的误差较大，要小心调节。可以将..
pH调到比最适值小一些，因为培养基在灭菌后，..
pH将变大。..
(收稿日期：2009．11．10)
·..
36 ‘.. EducationalEquipmentAndExperimentVo1．26，No．4，2 010
MS培养基的配制-母液法
• 配好的培养基一般放置1-2条观察无菌落 后方可使用
• 配好的培养基在15-20℃存放,并尽快在 一个月内使用
组培室的卫生?
• 定期消毒,熏蒸 • 组培污染物的处理 • 污染的培养材料或培
养瓶,灭菌后洗涤 • 升汞等,回收后集中
灭菌温度与灭菌时间和培养基体积的关系
培养基的配制（母液法）
• 培养基配制过程 • /v_show/id_XMTE2Nzg
3MjA=.html • /player.php/sid/XM
TE2Nzg3MjA=/v.swf
0.025
25
铁盐
Na2-EDTA
37.3
3730
FeSO4˙4H2O
27.8
100
2780
1000
10
微生素等
Gly VB1 VB2 VB6 肌醇
2.0
100
0. 1
5
0.5
525
100
5000
母液的配制
• 以MS培养基为例，其母液如下： • MS大量组份（扩大20倍）； • MS微量（扩大1000倍）； • MS有机组分（扩大50倍）； • MS铁盐（扩大100倍）；
2，配制分工：
• 1.配制母液 • MS大量------第1组 • MS微量------第2组 • MS有机------第3组 • MS铁盐------第4组 • 6-BA母液（50mL;1mg/ml） ------第5组 • NAA母液（50mL;1mg/ml） ------第6组 • 2,4-D母液（50mL,1mg/,mL)---第7组 • 0.1% 溶液升汞，2000mL ---第8组 • 来苏尔液—1000MmL-----第9组 • 75%酒精 ------------1000mL---第10组
MS培养基的配制
MS培养基配方表
编辑本段注意事项：
1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
2.母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
3.MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。
其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水
浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。
4.组织培养是否能够获得成功，主要取决于对培养基的选择。
不同的培养基具有不同的特点，也就适合于不同的植物种类和接种材料。
在开展组织培养项目时，首先要对各种培养基进行了解和分析，以便能从中选择合适的使用。
组培用的培养基一般包括基础培养基和激素，但是植物激素的种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料有变化，因此各培养基配方中均不列入植物激素。
常用的基础培养基除了有MS培养基，还有B5培养基，N6培养基。
ms基础培养基的配方及配制注意事项
ms基础培养基的配方及配制注意事项下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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实验二 MS培养基的配制与灭菌
实验二 MS培养基的配制与灭菌一、实验目的学会配置MS+I mg/L2.4-D+蔗糖 3% + 琼脂 0.8%二、实验原理2,4-D（二氯苯氧乙酸）属生长素的范畴。
在自然界中，生长素可影响到茎和节间的伸长向性顶端优势叶片脱落和生根等现象，在组织培养中，生长素被用于诱导细胞的分裂和根的分化，其中2,4-D（二氯苯氧乙酸）被广泛用于愈伤组织的诱导。
三、实验材料1.实验器械：灭菌锅，电磁炉，三角瓶量筒，酒精灯，镊子，解剖刀，超净工作台， pH，试纸，电子天平等。
2.实验药品：MS母液，蒸馏水， 2,4-D，升汞，乙醇，无菌水等。
四、（一）配置培养基（1L MS培养基的配置）1.瓶塞制作2.盖纸的准备及配置100mg/L（100ml）的2,4-D（二氯苯氧乙酸）3.称取8g/L（0.8%）的琼脂置于不锈钢的锅中，加蒸馏水直到培养基最终容积的3/4，在电炉上加热溶解。
待琼脂溶解后再加30/L(3%)的蔗糖，用玻璃棒搅拌均匀。
4.分别加入一定量的各种贮备液，包括生长调节物质和其他的特殊补加物。
5.加蒸馏水定容。
6.分均匀后，用1.0或0.1mol/LNaOH或HCl调节培养基的pH (5.4~7.0)。
7.把培养基分装到所选用的培养容器中（约25~30mL）。
8.用包在纱布中的棉塞（它不仅能阻止微生物污染，而且还可以使气体自由交换），然后再用牛皮纸套在棉塞上（防止棉塞在高温灭菌时吸湿）。
（二）培养基的灭菌1.把已经装入了培养基的培养容器置于灭菌锅中进行灭菌（在灭菌之前，必须注意水至吃水线，防止烧干，接通电源升温后，首先要排净锅内的冷空气，然后在121℃ 1.06kg/cm2或者0.105MPa的条件下灭菌15至20min）。
2.灭菌结束后，切断电源，让锅内气体自然下降，待压力表指针回到零后，再打开放气阀，排除剩余蒸汽，打开锅盖取出培养基（过早开阀放气会造成锅内气压骤降，引起培养基沸腾外溢）。
（三）最后清理实验室。
MS培养基的配制,灭菌等注意事项
一、MS培养基母液注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
实验一 MS培养基母液的配制与保存
实验一MS培养基母液的配制与保存一、目的要求1、通过MS培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能；2、掌握培养基各种母液的保存方法。
二、仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0. 1 -1N NaOH，0.1-1N HCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
三、方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10×）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量（10×）50升量（50×）①NH4NO31650 mg 16.5g②KNO31900 mg 19.0g③CaCl2·2H2O （CaCl2）440 mg （） 4.4g④MgSO4·7H2O（MgSO4）370 mg （） 3.7g⑤KH2PO4170 mg 1.7g2、MS微量元素母液（100×）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量100升量（100×）①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22.3mg（21.4 mg）223mg（214 mg）②ZnSO4·7H2O8.6 mg 86mg③H3BO3 6.2 mg 62 mg④KI 0.83 mg 8.3 mg⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg 2.5mg⑥CuSO4·5H2O0.025 mg 0.25mg⑦CoCl2·6H2O0.025mg 0.25mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0.25 mg×10=2.5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0.25 mg的量。
MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
ms基本培养基母液的配制方法
ms基本培养基母液的配制方法一、准备所需材料1. 酸性植物激素溶液：包括吲哚乙酸（IAA）、纯度较高的激素（如6-苄基腺嘌呤，BA）等。
2. 碱性植物激素溶液：如生长素（GA3）等。
3. 无机盐溶液：包括硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸钾、硼酸、锌硫酸、硼酸等。
4. 维生素溶液：如次黄嘌呤核苷酸（NAA）等。
5. 蔗糖溶液：用于提供能量和碳源。
6. 琼脂：用于凝固培养基。
二、配制步骤1. 称取适量的无机盐溶液成分，按照MS基本培养基的配方比例将各种盐溶解在蒸馏水中，常用的浓度为1/2或1/4的MS培养基。
2. 将酸性植物激素溶液和碱性植物激素溶液分别加入到溶液中，注意控制激素的浓度。
3. 加入维生素溶液，按照配方比例加入到溶液中。
4. 加入适量的蔗糖溶液，用来提供能量和碳源。
5. 最后将琼脂加入到溶液中，搅拌均匀。
6. 调节溶液的pH值，通常为5.8左右。
7. 用蒸馏水补充溶液至总体积，并充分搅拌均匀。
8. 将配制好的培养基溶液进行高温高压灭菌处理，一般条件下为121摄氏度，压力为0.1MPa，持续20分钟。
三、注意事项1. 在配制过程中，要保持实验室卫生，使用无菌操作。
2. 使用高质量的试剂和蒸馏水，避免杂质的干扰。
3. 激素的浓度要根据实验需要进行调整。
4. 配制过程中要注意酸碱度的调节，尽量控制在5.8左右。
5. 琼脂的加入要充分搅拌均匀，避免结块。
6. 灭菌处理要按照规定的条件进行，确保培养基的无菌性。
通过以上步骤，我们可以成功地配制出MS基本培养基的母液。
这种培养基在植物组织培养、植物细胞和胚胎发生研究中起着重要的作用。
根据实验的需要，可以在母液的基础上进一步调整培养基的成分和浓度，以满足不同植物材料的培养要求。
希望以上内容对您有所帮助。
MS培养基母液的配制与保存
实验一MS培养基母液的配制与保存一、目的要求1、通过MS培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能；2、掌握培养基各种母液的保存方法。
二、仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0. 1 -1N NaOH，0.1-1N HCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
三、方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10×）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量（10×）50升量（50×）①NH4NO31650 mg 16.5g②KNO31900 mg 19.0g③CaCl2·2H2O （CaCl2）440 mg （） 4.4g④MgSO4·7H2O（MgSO4）370 mg （） 3.7g⑤KH2PO4170 mg 1.7g2、MS微量元素母液（100×）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量100升量（100×）①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22.3mg（21.4 mg）223mg（214 mg）②ZnSO4·7H2O8.6 mg 86mg③H3BO3 6.2 mg 62 mg④KI 0.83 mg 8.3 mg⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg 2.5mg⑥CuSO4·5H2O0.025 mg 0.25mg⑦CoCl2·6H2O0.025mg 0.25mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0.25 mg×10=2.5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0.25 mg的量。
MS培养基母液的配制与保存
仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH，0.1-1NHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。
优点：（1）保证各物质成分的准确性。
（2）便于配置时快速移取。
（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10X）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16．5g②KNO31900 mg/L 19．0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4．4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3．7g⑤KH2PO4170 mg/L 1．7g2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22．3 mg/L（21．4 mg/L）223mg②ZnSO4·7H2O8．6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0．025mg/L 0．25mg④CuSO4·5H2O0．025 mg/L 0．25mg⑤Na2MoO4·2H2O0．25 mg/L 2．5mg⑥KI 0．83 mg/L 8．3 mg⑦H3BO36．2 mg/L 62 mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml（即含0．25 mg的量）加入到母液中。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
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一、MS培养基母液的配制
注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制
按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，
定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
1．制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2．称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
．生长调节剂母液配制：
为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。
激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。
称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为0.5mg时，则取1ml母液即可。
二、培养基配制和灭菌
一．养培养基配制程序
(一).母液吸取量的计算
配制培养基的升数
公式1：母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————
母液浓缩倍数
培养基要求的含量
公式2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂）
母液每CC的含量
（二）各种母液按顺序编号排列
A.大量元素；
B.CaCl2.2H2O；
C.微量元素；
D.铁盐；
E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
(三)配制培养基（1000ml）
1.琼脂: 称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止.
2.蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼脂的300ml蒸馏水中。
3.各种母液的吸取（培养基1L）
（1）用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml
（2）分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml
（3）用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml
（4）移取激素
将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80℃左右，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求5.8~6.0，过酸过碱则用1N NaoH和1N HCL调整。
二．分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装到25-30个三角瓶中，每个三角瓶约30ml左右（一般占试管、三角瓶容量1/4~1/3左右）注：培养基勿碰瓶壁。
三.包装：分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进行灭菌。
用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。
三、高压蒸汽灭菌锅的使用方法
具体操作步骤：
1. 高压锅放水至平把架；
2. 把包扎好的培养基装入高压锅;
3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀.
4. 然后接通电源.
5. 压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)。
6. 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12MPa时，关闭电源，待指针下降至0.11MPa时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟。
7. 灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待高压锅内的空气完全排除后，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。
8.经过灭菌的营养培养基不宜放置太长，应尽早使用，但为了在使用前能检查培养基有无微生物污染，可将培养基置于25℃下保存4天，如果培养基需要贮存较长时间，可在4℃低温下保存。
灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格，无论哪种型号，操作的步骤都很相近。
进水→放进培养基→盖紧锅盖→关上放汽阀→检查安全阀→接上加热源→待压力升至0.05MPa时排锅内冷空气，关上放气阀→0.11MPa(121℃)下灭菌20~25分钟，保持稳定压力→除热源→逐渐打开放气阀→锅内空气排除完后→开放锅盖→稍冷后取出培养基。
四、无菌操作技术
（一）植物材料表面——消毒剂灭菌
从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。
这些污染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。
因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一过程叫做接种。
1.接种步骤：
第一步：清理材料→→流水冲洗→→加入吐温（或洗衣粉）清洗
→→自来水冲洗
第二步：对材料的表面浸润灭菌：70%酒精浸10-30秒→→无菌水
第三步：灭菌剂处理→→0.1-1%升汞5-8 min（或其他灭菌剂）
第四步：无菌水进行冲洗
注意事项：
１.灭菌剂一般要临时配制，现配现用．升汞可以短期储存．
２.对去除较容易的灭菌剂灭菌后无菌水冲洗３-４次，升汞一般５-８次，每次不少于３min ３.灭菌时要轻轻的搅拌，消除气泡，使消毒更彻底．
４.灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。
５.灭菌液要充分浸没材料
2.无菌操作可按以下步骤进行：
（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外线灯进行杀菌；（2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯；
（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；
（4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。
然后搽拭工作台面；
（5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；
（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；
（如叶片切成0.5cm2材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切割。
的小块；茎切成含有一个节的小段。
微茎尖要剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。
常用植物激素
四、常用药品的配置方法
1.1mol/L HCl的配制：根据盐酸的密度37%盐酸溶液的密度为1.19克/毫升，假设要配制1000ml 1mol/L HCl，则需要盐酸的物质的量为1mol，所以需要量取37%的盐酸为1*36.5/37%/1.19=82ml
2.1mol/L的NaOH的配制：称40gNaOH，然后融于1000ml的蒸馏水中。
（定容到100ml）
3.95%的酒精配制成75%的酒精：用量筒量取750ml的95%酒精加入200ml的蒸馏水即可得到75%的酒精。
如果用无水酒精配制75%的酒精，则量取750ml的无水酒精，再加水250ml。
4.0.1%的升汞配制：先称取1克升汞粉末，然后用蒸馏水溶解最后定容到1000ml。
5. 1mg/ml的2.4-D的配制：称取0.1g2.4-D，用少量1mol/LnaOH或酒精助溶，然后定容到100ml。
6.1 mg/ml的6-BA的配制：称取0.1g6-BA，用少量1mol/L HCl或1mol/LNaOH助溶，然后定容到100ml。
7.0.5mg/ml的NAA的配制：称取0.05gNAA，用少量95%酒精助溶，然后定容到100ml。