生物技术制药考试复习资料整理版

第一章、绪论

1. 生物技术制药：采用现代生物技术，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品，称为生物技术制药。

2. 生物技术药物：采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物，称为生物技术药物。

3. 生物药物：指运用生物学、医学、生物化学等的研究成果，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术和药学等学科的原理和方法，利用生物体、生物组织、细胞、体液等制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。

4. 现代生物药物四大类型：⑴应用重组DNA技术制造的基因重组多肽，蛋白质类治疗剂；

⑵基因药物

⑶来自动物、植物和微生物的天然药物；

⑷合成与部分合成的生物药物。

5. 生物药物功能用途分类：⑴治疗药物，⑵预防药物⑶诊断药物。

6. 生物技术制药的特征：⑴高技术⑵高投入⑶长周期⑷高风险⑸高收益

7. 生物技术在制药中的应用：⑴基因工程制药：①基因工程药物品种的开发、②基因工程疫苗、③基因工程抗体、④基因诊断与基因治疗、⑤应用基因工程技术建立新药的筛选模型、⑥应用基因工程技术改良菌种，产生新的微生物药物、⑦基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用、⑧利用转基因动、⑨植物生产蛋白质类药物

⑵细胞工程制药：①单克隆抗体技术、②动物细胞培养

⑶酶工程制药

⑷发酵工程制药

8. 我国生物技术制药现状和发展前景（自己阐述观点）

第二章基因工程制药

1．基因工程生产哪些药：⑴免疫性蛋白，如各种抗原和单克隆抗体。⑵细胞因子，如各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子及凝血因子。⑶激素，如胰岛素、生长激素、心钠素⑷酶类，如尿激酶、链激酶、葡激酶、组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化物歧化酶等。

2. 利用基因工程技术生产药品的优点在于：

⑴利用基因工程技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用建立有效的保障。

⑵可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围。

⑶利用基因工程可以发现挖掘更多的内源性生理活性物质。

⑷内源生理活性物质在作为药物使用时，存在不足之处，可以通过基因工程和蛋白质工程读起进行改造。

⑸利用基因工程技术可以获得新型化合物，扩大药物筛选来源。

3. 上游阶段：是研究开发比不可少的基础，主要是分离目的基因、构建工程菌（细胞）。上游阶段的工作主要咋实验室内完成。

4. 下游阶段：是从工程菌（细胞）的大规模培养直到产品的分离纯化、质量控制等。下游阶段是将实验室成果产业化、商品化。

5. 制备基因工程药物的基本过程：获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌（或细胞）→培养工程菌→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检定→成品检定→包装

6. 宿主菌应该满足以下要求：⑴具有高浓度、高产量、高产率；⑵能利用易得廉价原料；

⑶不致病、不产生内毒素；⑷发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；⑸容易进行代谢调控；⑹容易进行重组DNA技术；⑺产物容易提取纯化

7. 宿主细胞分为两大类：⑴原核细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、芽孢杆菌、链霉菌等；⑵真核细胞：酵母、丝状真菌

8. 表达载体必须具备以下条件（特点）：

⑴载体能够独立地复制

⑵应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选。而且克隆位点应位于启动子序列后，以使克隆的外源基因得以表达。

⑶应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别。

⑷应具有阻遏子，使启动子收到控制，只有当诱导时候才能进行转录。

⑸应具有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录其他无关的基因，同时很强的终止子所产生的mRNA较为稳定。

⑹所产生的mRNA必须具有反义的起始信号，即起始密码AUG和SD序列，以便转录后能顺利翻译。

⒐密码子的偏爱性：在基因组中把使用频率高的同义密码子称为主密码子或偏爱密码子。此现象被称为密码子偏爱性

⒑融合蛋白：由一条短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的，称为融合蛋白。

⒒酵母的复制序列的几种不同载体：⑴YEp类（酵母附加体质粒）

⑵YRp类（酵母复制型质粒）

⑶YCp类(酵母着丝粒质粒)

⑷Yip类（酵母整合型质粒）

⒓基因工程菌的不稳定性：基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定的现象，质粒不稳定分为分裂不稳定和结构不稳定。

⒔质粒的分裂不稳定：指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象。

⒕产生的因素：⑴含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率，质粒丢失率与宿主菌、质粒特性和培养条件有关；⑵这两种菌比生长速率差异的大小

⒖提高质粒稳定性的方法：⑴选择合适的宿主菌

⑵选择合适的载体

⑶选择压力：（在培养基中加选择性压力如抗生素等）

⑷分阶段控制培养

⑸控制培养条件

⑹固定化

⒗分离纯化的基本过程：P47 流程图一般包括：细胞破碎、固液分离、浓缩与初步纯化、高度纯化直至得到纯品，成品加工。

⒘细胞的破碎方法：按是否外加作用力分为:机械法和非机械法

按所用方法的属性分为：物理法、化学法和生物法

物理破碎法：⑴高压匀浆法⑵高速珠磨法⑶超声破碎法⑷高压挤压法

化学破碎法：⑴渗透冲击⑵增溶法⑶脂溶法

生物破碎法：酶溶法

⒙疏水层析（HIC）：是利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团想好作用力的差异，对蛋白质组分进行分离的层析方法。

⒚亲和层析(AC)：是利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除。

⒛包含体：是无定形的蛋白质的聚集，不被任何膜所包围。

它是致密的不溶性蛋白和RNA的凝聚体，包含大部分的表达蛋白。

21. 基因工程药物的制造实例：

⑴干扰素：是人体细胞分泌的一种活性蛋白质，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性，是人体防御系统的重要组成部分。

⑵人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子：是糖蛋白

⑶人白细胞介素-2：是由T淋巴细胞分泌的一种糖蛋白，为一种多肽类药物，又称T细胞生长因子。

第三章动物细胞工程制药

1. 贴壁细胞：这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面,细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长，繁殖。

2. 悬浮细胞：这类细胞的生长不依赖支持物表面，可在培养液中呈悬浮状生长，如血液内的淋巴细胞和用以生产干扰素的Namalwa细胞等，细胞呈圆形。

3. 兼性贴壁细胞：有些细胞并不严格地依赖支持物，它们既可以贴附于支持物表面生长，但在一定条件下，它们还可以在培养基中呈悬浮状态良好地生长，这类细胞称之为兼性贴壁细胞。

4. 动物细胞的生理特点：①细胞的分裂周期长

②细胞生长需要贴附于基质，并有接触抑制现象

③正常二倍体细胞的生长寿命是有限的

④动物细胞对周围环境十分敏感

⑤动物细胞对培养基的要求高

（⑥动物细胞对蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同）

5. 原代细胞：是直接取自动物组织、器官、经过粉碎、消化而获得的细胞悬液

二倍体细胞系：原代细胞经过传达、筛选、克隆，从而从多种细胞成分的组织中挑选并纯化