平板菌落计数法ppt课件
菌落总数测定原理完整版PPT
平即食平即知平即情知平 即知知知食情食情食知知知食食食知平即食知知平即 统情食食情食情知食平即知情食知食 食食知食食食知食食情平即食知食平即食知食知平即平即 情食知情食情平即情情平即食知知食统食食知平即情平即平即食知食知情平即平即食 平即食食食食食平即平即平即食情食知食知 平即情知平即平即知情食统平即情知知知食平即食平即知食平即平即情情知情情食平即知食知情平即食板一品板一识板一境识板一识识识品境品境品识识识品品品识板一品识识板一计境品品境品境识品板一识境品识品品品识品品品识品品境板一品识品板一品识品识板一板一境品识境品境板一境境板一品识识品计品品识板一境板一板一品识品识境板一板一品板一品品品品品板一板一板一品境品识品识板一境识板一板一识境品计板一境识识识品板一品板一识品板一板一境境识境境品板一识品识境板一品菌 个 检 菌 个 点 菌 个 六 点 菌个 点 点 点 检 六 检 六 检 点 点 点 检 检 检 点 菌 个 检 点 点 菌 个菌 六 检 检 六 检 六 点 检 菌 个 点 六 检 点 检检 检 点 检 检 检 点 检 检 六 菌 个 检 点 检 菌 个 检 点 检 点 菌 个 菌 个六 检 点 六 检 六 菌 个 六 六 菌 个 检 点 点 检 菌 检 检 点 菌 个 六 菌 个 菌 个 检 点 检 点 六 菌 个 菌 个 检菌 个 检 检 检 检 检 个 菌 个 菌 个 检 六 检 点 检 点菌 个 六 点 菌 个 菌 个 点 六 检 菌 个 六 点 点 点 检 菌 个 检 菌 个 点 检 菌 个 菌 个 六 六 点 六 六 检 菌 个 点 检 点 六 菌 个 检落单样落单：落单：：落 单：：：样：样：样：：：样样样：落单样：落单 落样样：样：样落单：：样：样 样样：样样样：样样：落单样：样落单样：样：落单落单 ：样：：样：落单：：落单样：：样落样样：落单落单落单样样：：落
细菌菌落总数的测定ppt课件
食品中细菌菌落总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差； 菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检 验，才能对食品做出较全面的评价。
8
2、细菌总数 指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直 接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接显微 镜数。通常以1 g或1 mL样品中的细菌总数来表示。
11
五、 步骤 (一) 取样、稀释和培养
1、 以无菌操作取检样25g（mL），放于225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 的 灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振荡或研磨制成 1:10的均匀稀释液。
固体和半固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r/min的 速度处理1～2min，制成1:10的均匀稀释液。
32
10-3，10-4
48
10-3，10-4
4
284
152
37
10-2，10-3
5
26
12
5
10-2
6
无法计数 568
312
10-4
菌量/(个 /g或mL)
5.2x104 2.6x105 3.5x105
9.0x104
2.6x103 3.1x106
24
2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按如下公式计算： N=∑C/（n1+0.1n2）d…………（1 ) 式中： N ― 样品中菌落数； ∑C ― 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； nl ― 第一个适宜稀释度平板数； n2 ― 第二个适宜稀释度平板数； d ― 稀释因子（第一稀释度）。
9
平板菌落计数法
平板菌落计数法（一）目标请求进修平板菌落计数的基起源基础理和办法.（二）基起源基础理平板菌落计数法是将待测样品经恰当稀释之后,个中的微生物充分疏散成单个细胞,取必定量的稀释样液接种到平板上,经由造就,由每个单细胞发展滋生而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞.统计菌落数,依据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数.但是,因为待测样品往往不轻易完整疏散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞.是以平板菌落计数的成果往往偏低.为了清晰地阐述平板菌落计数的成果,如今已偏向应用菌落形成单位(colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来暗示样品的活菌含量.平板菌落计数法固然操纵较繁,成果须要造就一段时光才干取得,并且测定成果易受多种身分的影响,但是,因为该计数办法的最大长处是可以获得活菌的信息,所以被普遍用于生物成品磨练(如活菌制剂),以及食物.饮料和水(包含水源水)等的含菌指数或污染程度的检测.（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液.2．造就基牛肉膏蛋白陈造就基.3．仪器或其他器具1mL无菌吸管,无菌平皿,盛有4.5ml无菌水的试管,试管架,恒温造就箱等.（四）操纵步调l．编号取无菌平皿9套,分离用记号笔标明10-4.10-5.10-6.(稀释度)各3套.另取6支盛有4.5mL无菌水的试管,依次标是10-1.10-2.10-3.10-4.10-5.10-6.2．稀释用lmL无菌吸管汲取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品),准确地放0.5mL至10-1的试管中,此即为10倍稀释.将过剩的菌液放回原菌液中.将10-1试管置试管振荡器上振荡,使菌液充分混匀.另取一支lml吸管拔出10 1试管中往返吹吸菌悬液三次,进一步将菌体疏散.混匀.吹吸菌液时不要太猛太快,吸时吸管伸人管底,吹时分开液面,以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢.用此吸管汲取10-1菌液lmL,准确地放0.5mL至10-2试管中,此即为100倍稀释.其余依次类推.放菌液时吸管尖不要碰着液面,即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液,不然稀释不准确,成果误差较大.3．取样用三支1mL无菌吸管分离汲取10-4.10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL,对号放入编好号的无菌平皿中,每个平皿放0.2mL.不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀释菌液放入平皿臼,如许轻易加大统一稀释度几个反复平板间的操纵误差.4．倒平板尽快向上述盛有不合稀释度菌液的平皿中倒入熔化后冷却至45℃阁下的牛肉膏蛋白胨造就基约15mL/平皿,置程度地位敏捷旋动平皿,使造就基与菌液混杂平均,而又不使造就基荡出平皿或溅到平皿盖上.因为细菌易吸附到玻璃器皿概况,所以菌液参加到造就皿后,应尽快倒入熔化并于已冷却至45℃阁下的造就基,立刻摇匀,不然细菌将不轻易疏散或长成的菌落连在一路,影响计数.待造就基凝固后,将平板倒置于37℃恒温造就箱中造就.5．计数造就48h后,掏出造就平板,算出统一稀释度三个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行盘算,每毫升中菌落形成单位(cfu)=统一稀释度三次反复的平均菌落数×稀释倍数×5一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度盘算每毫升的含菌量较为适合.统一稀释度的三个反复对比的菌落数不该相差很大,不然暗示实验不准确.现实工作中统一稀释度反复对比平板不克不及少于三个,如许便于数据统计,削减误差.由10-4.10-5.10-6三个稀释度盘算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不该相差太大.平板菌落计数法,所选择倒平板的稀释度是很主要的.一般以三个持续稀释度中的第二个稀释度倒平板造就后所消失的平均菌落数在50个阁下为好,不然要恰当增长或削减稀释度加以调剂.平板菌落计数法的操纵除上述倾泻倒平板的方法以外,还可以用涂布平板的方法进行.二者操纵基底细同,所不合的是后者先将牛肉膏蛋白胨造就基熔化后倒平板,待凝固后编号,并于37℃阁下的温箱中烘烤30min,或在超静工作台上恰当吹干,然后用无菌吸管汲取稀释好的菌液对号接种于不合稀释度编号的平板上,并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布平均,平放于实验台上20～30min,使菌液渗入造就基表层内,然后倒置37℃的恒温箱中造就24～48h.涂布平板用的菌悬液量一般以0.1mL较为合适,假如过少菌液不轻易涂布开,过多则在涂布完后或在造就时菌液仍会在平板概况流淌,不轻易形成单菌落.。
细菌数量测定---标准平板计数法
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样 接种量即可换算出样品中的含菌数。由 于待测样品往往不易完全分散成单个细 胞。所以平板菌落计数法结果往往偏低。 现在常使用菌落形成单位。
三、实训仪器和材料
1、仪器：恒温培养箱。高压蒸汽灭菌锅，
电热套、托盘天平 吸量管、烧杯、三角瓶、培养皿、试管、 试管架、酒精灯 2试剂：大肠杆菌悬液、牛肉膏蛋白胨培 养基（营养琼脂培养基），生理盐水、盐 酸、氢氧化钠、蒸馏水
2、倒平板：在上述平皿中倒入熔化并冷 却至50℃左右的琼脂培养基约15~20 mL，置 水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，于37℃ 培养箱中倒置培养24h。
（五）计数
取出平皿，观察并计算菌落数。一般 选择平皿上长有30~300个菌落的稀释度 计算每毫升的菌落数最合适。
算出同一稀释度2个平皿上的菌落平 均数，并按下列公式计算： 活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上 的菌落平均数×稀释倍数×5
检验结果
稀释度
10-4
1 2 平均 1
10-5
2 平均 1
10-6
2 平均Biblioteka 菌落数活菌数 /mL
活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上的菌落平均数×稀释倍数×5
在上述平皿中倒入熔化并冷却至50左右的琼脂培养基约1520ml置水平位置迅速旋动混匀待凝固后于37培养箱中倒置培养24h
细菌数量测定---标准 平板计数法
一、实训目的
1、掌握菌液稀释的方法和步骤。
2、掌握浇混接种的操作步骤。 3、掌握菌落计数的原理与方法
二、实训原理
平板菌落计数法是将待测样品经适当 稀释后，其中的微生物充分分散为单个 细胞，取一定量的稀释液接种到平板上， 经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形 成的肉眼可见的菌落，即代表原样品中 的一个单细胞。
《细菌菌落计数》PPT课件
（2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标 准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状 菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
细菌菌落计数
精选课件ppt
1
▪直接法
✓血球记数板 ✓活菌染色：美蓝、吖啶橙、TTC
▪间接法
精选课件ppt
2
直接法—血球记数板
细菌计数板和血球计数板都用来侧微生物的总菌数。血球计数板用来测
较大微生物如酵母菌和霉菌孢子的总数，细菌计数板用来测细菌的总菌
数。两种计数板的构造相似，不同的是细菌计数板的深度仅为血球计数
6
精选课件ppt
7
• 适用领域：
1.广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料 和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。 2.疾病诊断
*泌尿系感染性疾病的诊断------尿培养 3.细菌感染及药物治疗效果
*临床病人 *实验动物
精选课件ppt
8
3、灭菌吸管取2～3个适宜稀释度的稀释菌 液0.1ml，分别注入灭菌平皿内，每个稀 释度重复做两个平板，涂布均匀后，置 37℃，培养24-48h。
12
3
4
5
6
0.1ml
1
样本
0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml
123456
实验十二 平板菌落计数法和光电比浊计数法
三、水产养殖水质净化、水产养殖水环境净化和水 产养殖池底净化处理处恶臭等。 功效：
• 1、快速分解水体中的残饵，粪便，死藻等，维护水质，有效 预防泛塘和鱼虾病害，减少换水量。 • 2、降解形成的小分子有机物及矿物质能促进藻类、原生动物 等的生长，为鱼虾提供活体饵料。 • 3、在水体中形成有益菌优势群种，抑制有害细菌的繁殖，维 持水体中的微生态环境平衡。 • 4、枯草芽孢杆菌本身是安全，有益的微生物，动物食入适量 菌体后，能减少鱼虾病害，提高鱼虾对饵料的消化吸收效率。 • 5、增强鱼虾的消化吸收功能，使其充分吸收利用饲料中营养 成分及天然色素，增强其天然着色度和使用风味，使鱼虾色泽 鲜亮。
二、基本原理——光电比浊计数法
当光线通过微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用 使光线的透过量降低。在一定的范围内，微生物细胞浓度 不透光度成反比，不光密度成正比，而光密度或透光度可 以由光电池精确测出。 用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度—— 菌数标准曲线。然后，就可以以样品液所测得的光密度， 从标准曲线中查出对应的菌数。 制作标准曲线时，菌体计数可采用血细胞计数板计数、平 板菌落计数或细胞干重测定等方法。本实验采用平板菌落 计数法。
2、平板菌落计数：
（1）编号：取无菌平皿9套，分别标明为10-4、10-5、10-6各三套， 另取6支无菌试管，装入4.5mL无菌水，依次标记为10-1、10-2、 10-3、10-4、10-5、10-6； （2）稀释：任选一支上述盛有已测OD值的菌悬液的试管，如1号试 管，精确地取0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。将10-1的 试管振荡混匀。另换一支吸头插入10-1试管中来回吹吸菌液三次， 进一步将菌体分散、混匀。再用此吸管精确吸取10-1菌液0.5mL至 10-2试管中，此即为100倍稀释，依次类推； （3）取样：用移液器分别吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌悬液各 0.2mL ，对号放入编好号的无菌平皿中； （4）倒平板：尽快向上述盛有丌同稀释菌液的平皿中倒入融化后 冷却至45℃的牛肉膏蛋白胨培养基约20mL，置水平位置迅速旋动 平皿，使培养基不菌液混合均匀； （5）培养：待培养基凝固后，平板倒置于37℃培养箱中培养48h；
平板菌落计数法
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载平板菌落计数法地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容平板菌落计数法（一）目的要求学习平板菌落计数的基本原理和方法。
（二）基本原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液。
2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。
3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
（四）操作步骤l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
平板菌落计数法和显微镜直接计数法
步骤
1. 制备酵母菌的菌悬液：酿酒酵母菌PDA斜面菌种一支，用无菌生理盐水，将菌苔洗
下，倒入装有玻璃珠的无菌三角瓶中，制成50 mL菌悬液。震荡，混匀。
2. 清洁血球计数板：镜检计数板，计数室内干净后才可以使用。如果有污物，先用自来
水冲洗血球计数板（切勿用硬毛刷刷洗），再用95%的酒精棉球轻轻擦拭，晾干后再次镜检。 盖玻片同样清洗和检查。
10-2
10-3
稀释度 菌落数之比
结果（菌落总 数，CFU/mL）
备注
1
1 365
164
2
2 760
295
3
2 890
271
4
150
30
5 多不可计 1 650
6
27ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
11
7 多不可计 305
20
—
1.6 ˣ 104（或
）
46 1.6(460/295)＜2 3.8 ˣ 104（或16 400） 两位以
思考题
1．测定时，融化后的固体培养基如果在40 ℃、45 ℃、55 ℃和60 ℃保温，测定结果和 50 ℃保温有何区别？ 2．本实验测定方法是十倍稀释，各梯度分别取样1 mL进行测定。如果只稀释至10-1，取 样1 mL、0.1 mL和0.01 mL进行测定，对结果有哪些影响？
原理
显微镜直接计数法：借助显微镜
谢谢
步骤
3. 加菌悬液：将盖玻片盖在计数室的上面，用细口滴管吹打菌悬液，充分混匀。然后吸
菌悬液，滴在计数室和盖玻片的边缘上，菌悬液自然渗入盖玻片和计数板间缝隙中。再用镊 子或接种环柄等轻压盖玻片，去除过多的菌悬液，以免实际的计数室体积变大。静置片刻， 待菌体自然沉降后，计数。
《平板菌落计数法》课件
02
稀释时需使用精确的稀释比，并 确保无菌操作，避免交叉污染。 稀释后的样品应尽快进行平板涂 布，以免菌落过度生长。
菌落计数的标准与误差控制
菌落计数是平板菌落计数的核心环节 ，需要遵循一定的标准。
计数时应选择菌落数在30-300之间的 平板进行计数，以减小误差。同时， 应定期对计数结果进行质量控制，确 保计数的准确性。
实验过程中的质量控制
质量控制是保证实验结果可靠性的重要手段。
实验前应对所有器具进行灭菌处理，确保无菌环境。实验过程中应定期对培养基、稀释液、样品等各 环节进行质量检查，及时发现并纠正问题。同时，应定期对实验人员进行培训和考核，提高实验技能 和素质。
04
平板菌落计数法的应用实例
在食品微生物检测中的应用
限制
平板菌落计数法对于一些特殊微生物的计数可能存在困难，如厌氧微生物、营 养要求较高的微生物等。此外，该方法需要较长时间的培养和计数，对于一些 快速繁殖的微生物可能不适用。
02
平板菌落计数法操作流程
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 培养基制备
总结词
培养基是菌落生长的温床，其制备是平板菌落计数法的第一 步。
详细描述
根据实验需求选择合适的培养基配方，按照比例称取所需的 成分，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀后调节pH值，然后进行 灭菌处理。灭菌后的培养基倒入无菌平板中，冷却备用。
THANKS
感谢观看
样品稀释
总结词
样品稀释是为了将菌落分散开来，便于计数。
详细描述
将待测样品进行稀释，通常选用生理盐水或磷酸盐缓冲液作为稀释液。按照适当 的稀释比例，将样品与稀释液混合均匀，确保每个菌落都能独立分散开来。
实验四 微生物的菌落形态观察平板菌落计数及菌种保藏(共69张PPT)
只是针对可人工培养的微生物来说，乐 观估计可人工培养的部分只占总数的 10%（保守估计只有1%）；
证据来源有两方面——分子生物学的探索；
和原位培养的比较。
实验内容一
——微生物菌落形态观察及区分
一、微生物的形态和菌落特征的比较表
细菌
单细胞微生物 酵母菌
菌丝状微生物 放线菌
霉菌
菌 主落 要 特 征细
（2）电化学法
（3）颜色变化
（4）流式细胞技术及激光扫描技术 （5）其它：热量法，放射测量法
说明：检测方法建立的基础——可 测、稳定、重现、可行、简便
浊度与微生物生物量测定
原理：
①细胞的存在会 造成光的散射， 降低光线的透过；
②在一定范围内 细胞浓度与吸光 度成正比
二、平板菌落计数的优缺点
▪ 优点：反映的是微生物活菌数量，可获得 活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检 验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水 （包括水源水）等的含菌指数或污染程度 的检测。
实验内容
▪ 微生物菌落形态观察及区分（细菌、放线菌、 霉菌、酵母菌——放在后面介绍）
▪ 平板菌落计数（细菌、放线菌、霉菌） ▪ 挑取单菌落接种于斜面 ▪ 介绍菌种保藏的原理和方法
对于一个样品，针对微生物来说 最想了解的问题（首要问题）
▪ 存在的微生物种类 ▪ 各类微生物的数量 ▪ 各类微生物的作用
细 菌 cfu数/平板
每毫升中的cfu数
稀释度
放
1
线 菌
cfu数/平板
每毫升中的cfu数
稀释度 1
霉 菌 cfu数/平板
每毫升中的cfu数
10-3
2
3 平均 1
10-2
2
《平板菌落计数法》课件
平板菌落计数法的实验步骤
1
准备工作
培养基的制备、实验器材的消毒、微生
涂布样品
2
物的接种。
涂布技巧、涂布密度的影响。
3
培养
培养条件、培养时间。
检查并计数
4
菌落数的计算方法、菌落形态的观察。
5
记录结果
实验注意事项
实验器材的消毒方法 涂布密度的掌握
培养基制备时的注意事项 培养条件的调整常见Biblioteka 题及解决方法《平板菌落计数法》
这是一篇关于平板菌落计数法的PPT课件。通过本课件，你将了解平板菌落计 数法的概念、应用领域、实验步骤和注意事项。
什么是平板菌落计数法
平板菌落计数法是一种常见的微生物计数方法，通过在培养基上培养微生物， 观察和计数形成的菌落，从而估计原始样品中的微生物数量。
平板菌落计数法的应用领域
对实验结果的分析和解读
在实验分析和解读时，你需要注意菌落形态、数量和培养条件等因素。
1 食品安全
用于检测食品中的细菌、霉菌等微生物污染情况。
2 医疗卫生
用于病原微生物的定性和定量检测，如细菌感染的诊断。
3 环境监测
用于评估土壤、水源等环境中微生物的种群数量。
平板菌落计数法的优缺点
优点
• 简单易行 • 成本低廉 • 结果可靠
缺点
• 无法区分不同种类的微生物 • 需要一定的培养时间 • 可能存在菌落重叠的情况
1 菌落生长过于密集
调整涂布密度或稀释样品。
2 菌落数量太少
使用适当的培养方法或增加接种量。
3 实验误差的控制
严格按照实验步骤操作，加强对实验环境的控制。
总结
实验步骤和注意事项
通过本课件，你已经了解了平板菌落计数法的实验步骤和注意事项。
实验七-平板菌落计数与接种PPT课件
.
4
四、实验过程
（一）平板菌落计数 （二）微生物的接种
.
5
（一）稀释平板菌落计数
1、 编号与稀释:
每组取无菌平皿6只，一个稀释度做3只。标明10－3 和10－4各3只。
2、制备土壤稀释液：
称取土壤1g，制备10－2 土壤稀释液，再取4只 无菌 试管稀释制备10－3 、10－4菌液。
3、倒平皿与平板涂布：
.
17
（3）穿刺接种（1支试管/人）
使用牛肉膏蛋白胨半固体培养基。用接种针从平皿上挑取 细菌单菌落，接入半固体培养基。 用接种针经火焰灭菌后，沾取少量菌种，垂直地穿入试管 固体培养基中心至底部，然后沿着原接种线将针拔出，要 做到手稳、动作轻巧迅速，最后塞上棉塞。再将接种针上 残留的菌体在火焰上烧掉。 在试管斜面上距试管口2～3cm处贴上标签。 37 0C恒温培养。
.
15
斜面划线法（a）和不同细菌直线接种长出的菌苔形态（b）
.
16
（2）液体接种法（1支试管/人）
使用牛肉膏蛋白胨液体培养基。 用接种环从平皿上挑取细菌单菌落，接入液体培养基。 放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～ 3cm处贴上标签。 37 0C恒温培养。 （在培养量比较大的情况下，液体接种宜采用移液管接种， 同时要求无菌操作。）
接好种的斜面试管口再次过火焰，棉塞底部过火焰后立即 塞入试管内。
将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼， 使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，使菌体爆 溅，造成污染。
放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～ 3cm处贴上标签。
280C恒温培养。
.
14
试管拔塞后过火灭菌和取菌
.
平板菌落计数法之欧阳家百创编
平板菌落计数法欧阳家百（2021.03.07）（一）目的要求学习平板菌落计数的基本原理和方法。
（二）基本原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液。
2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。
3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
（四）操作步骤l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
将多余的菌液放回原菌液中。
将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
另取一支lml吸管插入10 1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸人管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
平板菌落计数
平板菌落计数一、实验器材1土壤样品2培养基淀粉琼脂培养基（高氏一号培养基），牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基或马铃薯培养基3溶液试剂可溶性淀粉、牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、马铃薯、链霉素、孟加拉红水溶液NaCl、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、KH2PO4、高氏1号培养基配方：可溶性淀粉20gNaCl 0.5gKNO31gK2HPO4·3H2O 0.5gMgSO4·7H2O 0.5gFeSO4·7H2O 0.01g琼脂20g水1000mlpH 7.2-7.4配制时，先少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。
再称取其他各成分依次逐一溶化。
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制牛肉膏3g蛋白胨10g氯化钠5g琼脂20g水1000mLpH 7.0-7.2马丁氏培养基配方如下：KH2PO41gMgSO4·7H2O 0.5g蛋白胨5g葡萄糖10g琼脂15-20g1/3000孟加拉红水溶液100ml水800mlpH自然由于链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入。
可先将配成0.03%的链霉素溶液，临用前在培养基中加0.03%链霉素液100ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
马铃薯培养基配方马铃薯（去皮）200g葡萄糖（或蔗糖）20g琼脂15~25g水1000ml自然pH去皮马铃薯200g，切成小块，放入烧杯中煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底。
然后用双层纱布过滤，取滤液加糖（酵母菌用葡萄糖，霉菌用蔗糖），加热煮沸后加入琼脂，继续加热融化并补水至1000mL。
二、操作步骤1.稀释涂布平板法( 1 ) 倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏I号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基加热溶化待冷至55～60℃时，高氏I号琼脂培养基中加入10%酚数滴，马丁氏培养中加入链霉素溶液(终浓度为30μg/ml)，混合均匀后分别倒平板，每种培养基倒三皿。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
三.实验步骤
3．加样倒平板：
方法一：用不同的灭菌吸管分别吸取10-4、105、10-6稀释液1ml，分别注入3个灭菌培养皿 中。分别立即倾注约15ml已熔化并冷却到 45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基，并立即在 桌面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀 （每稀释度做3个）。另取一空的灭菌培养皿， 倾注牛肉膏蛋白胨培养基15ml，做空白对照。 培养基凝固后，倒置于37℃温箱中培养。
三.实验步骤
方法二：取0.2ml一定稀释度的样品，加 至冷却的平板中，用涂布器涂匀后，于 37℃温箱中培养。取10-4、10-5、10-6稀 释液，每个稀释度作三个，培养24-48h后，取出培养平板，并按下列 公式进行计算： 方法一：每毫升中菌落形成单位（cfu）=同 一稀释度的平均菌落数x稀释倍数 方法二：每毫升中菌落形成单位（cfu）=同 一稀释度的平均菌落数x稀释倍数x5 注： 一般选择每个平板上长有30-300个菌落 的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜。
三．作业： 计算菌体含量(单位:cfu/mL)。
平板菌落计数法
实验目的 学习平板菌落计数法。
实验原理
微生物的计数方法分为直接计数和间接计数。 直接计数是通过血球计数板将微量体积样品中 的微生物在显微镜下数出（详见实验三）。直 接计数所计为微生物总数（包括死细胞和活细 胞），而且适用于体积较大的微生物如酵母、 霉菌的孢子等。
实验原理
平板菌落计数法是一种典型的间接计数法。将 一定稀释度的样品均匀接种到固体平板培养基 中，培养长出单菌落后，可认为每个单菌落由 一个微生物长出，根据稀释倍数可计算样品中 的微生物浓度。该方法不受微生物的大小的限 制，所计的只是活的可培养微生物，而且可用 于混合微生物样品的计数。
三.实验步骤
1．编号 取无菌平皿9个，分别用记号笔标 明10-4、10-5、10-6（稀释度）各三 套。另取6支试管，加入9ml无菌水， 依次标明10-1 、 10-2、10-3、10-4、 10-5、10-6。
三.实验步骤
2．稀释 水样：用无菌吸管取1ml样品加入含9ml无菌水的10-1试管中， 此即为10倍稀释。将10-1试管振荡，充分混匀。用另一吸管吸 取10-1菌液1ml，加至含有9ml无菌水的10-2试管中，此即为100 倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6稀释依次类推。 固体样品：准确称取10g样品，加入90ml无菌水中，充分混匀 后即为10倍稀释。将10-1试管振荡，使其充分混匀。用另一吸 管吸取10-1菌液1ml，加至含有9ml无菌水的10-2试管中，此即为 100倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6依次类推。