3,,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的浓度

3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定

3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。

本文将介绍该方法的操作步骤、原理及注意事项。

一、操作步骤1. 样品制备：精确称取适量糖样品，加入足量去离子水稀释至1 mL，摇匀。

2. 试剂制备：(1) Na2CO3试液：称取0.5 g Na2CO3加入50 mL去离子水中，溶解并稀释至1 L。

(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)重量浓度为1 g/L的甲醛溶液：按比例称取适量DNS和甲醛，在去离子水中稀释制成重量浓度为1 g/L的甲醛溶液。

3. 测定步骤：(1) 取3个试管，编号为A、B、C，并进行空白对照。

将A、B、C试管分别加入0.1 mL 样品，每个试管中加入相同量的0.9 mL去离子水。

在空白试管中加入相同量的去离子水代替样品。

(2) 在A试管中加入0.5 mL Na2CO3试液，摇匀。

(3) 将B试管浸于沸水中加热3-5分钟，使其中的还原糖完全还原。

(4) 在A、B两样品试管中加入0.5 mL甲醛溶液，摇匀并置于60℃水浴上加热10分钟。

(6) 加入1.5 mL水后，在空白对照试管和样品试管中均加入0.5 mL DNS溶液，摇匀。

(7) 在95℃水浴加热10分钟，并立即冷却至室温。

(8) 测量吸光度值，通过标准曲线计算样品中还原糖或总糖含量。

二、原理还原糖或总糖与Na2CO3在典型的碱性条件下发生醛基反应，把碳水化合物中的亲电基转化为醛基，再将其还原为对应的醇，生成糖醇和尿素等。

然后，在碱性条件下，醛基与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应，发生环化，生成糖醛酸化合物，这些化合物在pH9.0以下表现为桥形分子，具有紫色的吸收峰。

在高温条件下，DNS与糖醛酸化合物相结合，形成柿子色化合物，进一步增加吸收光的强度。

还原糖或总糖的含量可以通过比较样品的吸光度值和标准曲线来测定。

三、注意事项1. 避免试管附着并确保试管内部表面干净。

3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖

3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖：
(1)准备：3,5-二硝基水杨酸溶液、标准糖溶液和丙酮溶液。

(2)试验步骤：
① 将滴定管中的空白样加入3ml的丙酮溶液，轻摇均匀；
② 加入0.2ml的3,5-二硝基水杨酸溶液，轻摇混匀；
③ 加入4ml的0.5mol/L的硝酸溶液，轻摇均匀；
④ 加入一定量（0.02ml-0.2ml）的标准糖溶液，轻摇均匀，继续滴定；
⑤ 采用530nm处的吸光度值比较试样和标准曲线，求出样品中含有还原糖的浓度。

(3)结果判断：根据标准曲线求出样品中含有还原糖的浓度，可以得出样品中还原糖的含量。

3_5_二硝基水杨酸_DNS_比色法测定马铃薯还原糖含量的研究

山东７５２型紫外光栅分光光度计。１．１．４试剂
１ｍｇ·ｍＬ－１葡萄糖标准液：准确称取１ｇ的无水葡萄糖，待溶解后定容至１０００ｍＬ。
ＤＮＳ显色液：准确称取无水的３，５－二硝基水杨酸６．５ｇ溶解待用。无水氢氧化钠４０ｇ溶解后移入５００ｍＬ容量瓶，冷却后定容。将水杨酸溶解液移入１０００ｍＬ容量瓶并加入３２５ｍＬ的氢氧化钠，再加入１５ｍＬ丙三醇溶解定容至１０００ｍＬ贮存于棕色试剂瓶中。以上试剂均为分析纯。水为蒸馏水。１．２试验方法１．２．１吸收光谱的测定
量瓶中加水约２５ｍＬ，步骤同上。
１．２．４显色时间的确定
准确吸取１、２、４ｍＬ葡萄糖标准液分别加入
到５０ｍＬ的容量瓶中，各加５ｍＬＤＮＳ，并在沸水
浴中煮２、３、４、５、６、７、８、１０、１２、１４、１６、
１８、２０ｍｉｎ，步骤同上。
１．２．５稳定时间的确定
任意选择一个马铃薯样品提取液，准确吸取葡
的比较［Ｊ］．中国马铃薯，２００４，６：３３７－３３．［５］罗志刚，曾满枝，凌晨，等．３，５－二硝基水杨酸比色法测定烟
草中水溶性总糖．中国烟草科学，２０００，２：３４－３６．［６］齐香君，苟金霞，韩戌环君，等．３，５－二硝基水杨酸比色法测定
收稿日期：２００５－０８－１２作者简介：朱海霞（１９７９－），女，东北农业大学硕士研究生，从事马铃薯遗传育种研究。基金项目：国家“８６３”计划项目（２００４ＡＡ２４１１３３）资助 !通讯作者：Ｅ－ｍａｉｌ：ｐｏｔａｔｏ＠ｍａｉｌ．ｎｅａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
１材料与方法
１．１试验材料１．１．１马铃薯样品

总糖含量的测定—3, 5-二硝基水杨酸法

总糖含量的测定——3, 5-二硝基水杨酸法原理：在氢氧化钠或丙三醇的的存在下, 还原糖能将3, 5-二硝基水杨酸(DNS) 中的硝基还原成氨基, 生成氨基化合物, 此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈橘红色。

试剂：葡萄糖;3, 5-二硝基水杨酸(化学纯) ;酒石酸钾钠、苯酚、盐酸、氢氧化钠、无水亚硫酸钠(均为分析纯);超纯水。

仪器和设备：紫外可见分光光度计；电子天平（感量为0.0001g）；电热鼓风干燥箱；电热恒温水浴锅。

溶液的配制（1）DNS试剂的配制：称取18.2 g酒石酸钾钠、0.63 g3，5-二硝基水杨酸、2.1 g Na OH、0.5 g苯酚、0.5 g无水Na2SO3，分别加少量超纯水溶解，将酒石酸钾钠溶液放于45℃水浴锅，然后依次加入上述溶解好的试剂，边加边搅拌，取出后冷却至室温，加超纯水定容至100 m L，贮存于棕色瓶内，暗处保存，一周后使用。

（2）葡萄糖标准溶液的配制：将葡萄糖置于105℃中干燥至恒重，精密称取0.100g 葡萄糖于100mL烧杯中，加水溶解，定容至1000mL，即得浓度为0.1mg/mL的葡萄糖标准溶液。

样品溶液的制备：准确称取样品0.2g～1.0g，精确到0.0001g，于50 mL试管中，加入20 m L蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min，取出冷却，过滤入100 mL容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度，即为样品测定液。

标准曲线的制作：精密量取0.1mg/mL的葡萄糖标溶液0mL，0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1.0mL 置于25mL具塞比色管中，加入蒸馏水补充至2.0mL。

向试液中分别加入3 mL DNS显色剂，于沸水浴中加热9 min，立即冷却至室温，定容至刻度，显色20 min后于波长540 nm处，用可见分光光度计测定不同浓度葡萄糖混合溶液的吸光度，并以葡萄糖质量浓度 (x)为横坐标，吸光度 (y)为纵坐标，绘制葡萄糖溶液标准曲线。

实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定

实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。

2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。

实验一,3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定

实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。

2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。

实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定

百度文库- 让每个人平等地提升自我实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。

三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。

2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。

3,5 -二硝基水杨酸比色法测还原糖含量

一、概述还原糖是一类可溶于水的碳水化合物，通常具有甜味。

在食品加工和生产中，还原糖的含量是一个重要的指标。

测定食品中还原糖的含量对于保障产品质量和食品安全具有重要意义。

而3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的方法来测定还原糖的含量。

二、3,5-二硝基水杨酸比色法原理3,5-二硝基水杨酸比色法是利用还原糖与3,5-二硝基水杨酸在酸性溶液中发生还原反应，生成带有黄色的还原糖-3,5-二硝基水杨酸络合物。

通过比色测定络合物的吸光度，可以间接测定还原糖的含量。

这种方法的优点是操作简便、灵敏度高、准确性较好，因此被广泛用于食品、医药等领域的还原糖含量测定。

三、实验步骤1. 样品制备：将待测食品样品制成均匀的糊状。

2. 提取还原糖：将制好的样品用水提取，得到含有还原糖的提取液。

3. 混合试剂：将3,5-二硝基水杨酸试剂与提取液进行混合，使其发生化学反应生成还原糖-3,5-二硝基水杨酸络合物。

4. 比色测定：用比色计测定络合物的吸光度，据此计算出还原糖的含量。

四、实验注意事项1. 实验操作中需注意安全，避免接触到有毒化学品。

2. 实验操作要严格按照步骤进行，避免操作失误。

3. 比色计要保持清洁，以确保测定结果的准确性。

五、实验结果分析通过3,5-二硝基水杨酸比色法测定出的还原糖含量可以作为食品加工和质量控制的重要数据。

实验结果的准确性和稳定性对于保障产品质量和食品安全具有重要意义。

六、实验应用3,5-二硝基水杨酸比色法不仅在食品加工领域有重要应用，还在医药、化工等领域具有广泛的应用。

对该方法的研究和实际应用具有重要价值。

七、结论3,5-二硝基水杨酸比色法是一种简便、灵敏度高的测定还原糖含量的方法，具有较好的准确性和实用性。

在食品加工和生产中，该方法有着重要的应用价值，能够为保障产品质量和食品安全提供重要数据支持。

八、参考文献1. Zhang, Y.; Wu, X.; Chen, Z. A. M. Determination of Reducing Sugars in Low Concentrations by 3,5- dinitrosalicylic Acid Method in Tapered Microfluidic Channels. Anal. Chem. 2017, 89, 9750-9756.2. Miller, G. L. Use of Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of Reducing Sugar. Anal. Chem. 1959, 31, 426-428.以上就是3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量的一些基本内容，该方法的简便性和高灵敏度使其成为食品加工和生产中常用的一种检测手段。

3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定还原糖

樱桃还原糖测定-3,5－二硝基水杨酸比色法(DNS法)一．原理3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。

此法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较少，是一种很好的糖定量测定方法。

二．试剂1. 3,5－二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）先配置1% 3,5－二硝基水杨酸溶液；A液：溶解6.9 g结晶酚（苯酚）于15.2 mL 10％氢氧化钠中，并用水稀释至69 mL，再向此溶液中加入6.9 g亚硫酸氢钠；B液：称取255 g酒石酸甲钠，加到300 mL 10％氢氧化钠中，再加入880 mL 1％3,5－二硝基水杨酸溶液；将A液和B液相混合即得黄色的DNS试剂，保存于棕色试剂瓶中，在室温下放置7~10天后使用，保存期为两个月。

2. 葡萄糖标准曲线配制准确称取100 mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100 mL，保存于冰箱备用。

将1 mg/mL 葡萄糖标准溶液用蒸馏水按照下表进行稀释：三．样品制备和测定将樱桃果肉匀浆后，取约0.08 g的匀浆，加入4 mL蒸馏水混匀后静置进行提取，离心收集上清液备用。

将0.2 mL各浓度的葡萄糖标准溶液或（0.15 ml稀释至合适倍数的样品溶液）与0.15 mL DNS试剂混匀，沸水浴中加热5 min后立即用流动冷水冷却，加入2.15 mL蒸馏水（样品液加水7.2 ml）后测定OD520 nm。

以OD520 nm值为横坐标，以葡萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线。

（1）标准曲线：以1为例：取了0.2 ml稀释好的葡萄糖溶液，含糖质量0.02 mg，待测液总体积2.5 ml，葡萄糖液浓度为0.008 mg/mL，对应OD值。

OD值对应的是待测液中葡萄糖的浓度。

（2）待测液总糖含量：Y=kX+b。

Y：反应液样品的浓度。

Y*7.5：7.5ml反应液样品的总糖质量。

3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量

实验五 3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量一：目的了解3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的原理掌握总糖定量测定的操作方法二：原理还原糖是指含自由醛基或酮基的单糖（如葡萄糖）和某些具有还原性的双糖（如麦芽糖）。

它们在碱性条件下，可变成非常活泼的烯二醇。

遇氧化剂时，具有还原能力，烯二醇本身则被氧化成糖酸及其他产物。

黄色的3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比，在波长为540nm 处测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求得样品中还原糖的含量。

对于非还原性的双糖（如蔗糖）以及还原性很小的多糖（如淀粉），应先用酸水解法将它们彻底水解成单糖。

再借助于测定还原糖的方法，可推算出总糖的含量。

由于多糖水解时，在每个单糖残基上加了一分子水，因而在计算时，须扣除加入的水量，当样品里多糖含量远大于单糖含量时，则比色测定所得总糖含量应乘以COOHOHNO 2O 2N 还原糖COOHOHO 2N NH 23,5-二硝基水杨酸（黄色）3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色）C C H O OH OH C H C H 2OH OH( )n ( )n C H C OH OHC H H 2OH OH糖酸折算系数（1-18018= 0.9），即得比较接近实际的样品中总糖含量。

三：实验材料及设备 1、材料：面粉2、仪器：分光光度计电子天平沸水浴3、器材：刻度试管： 25mL ×8 容量瓶： 100mL ×2 锥形瓶： 100mL ×1移液管： 1mL ×2 2mL ×2 10mL ×2 烧杯： 250mL ×1 50mL ×1 滴管： 2 洗耳球： 2 滤纸： 11cm 坐标纸漏斗、洗瓶、白瓷板、试管架、移液管架、试管夹、玻棒：各1 四：试剂的配制1、葡萄糖标准液（1mg/mL ）预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。

3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖含量

3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖含量
3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用于测定糖含量的方法。

该方法基于糖的还原性，利用糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成一个特定的有色产物，通过测量这个有色产物的吸光度，可以确定糖的含量。

下面是该方法的步骤：
1. 准备一定浓度的3,5-二硝基水杨酸溶液。

可以将一定量的3,5-二硝基水杨酸粉末溶解在适量的溶剂（如醇）中，制备出一定浓度的3,5-二硝基水杨酸溶液。

2. 准备样品溶液。

将待测糖溶解在适量的溶剂中，制备出合适浓度的糖溶液。

3. 反应。

将一定量的样品溶液与一定量的3,5-二硝基水杨酸溶液混合，在适当的温度下进行反应。

4. 吸收测量。

将反应后的溶液用比色皿装入分光光度计中，设置波长（通常为540 nm），测量吸光度。

5. 构建标准曲线。

根据已知浓度的糖溶液，按照上述步骤测量吸光度，并绘制出吸光度与糖浓度之间的关系图。

可以根据标准曲线来确定未知样品中糖的含量。

需要注意的是，该方法只适用于对还原性糖进行测定，不适用
于非还原性糖的测定。

同时，实验过程中要注意操作规范和安全，避免接触有毒物质。

3,5-二硝基水杨酸比色法测定淫羊藿多糖的含量

淫羊藿
（ｒａｐｍｅｉＨｅｂＥｉｄｍ）为小檗科
（ｅｂｒａｅｅ植物朝鲜淫羊藿（ｐｍｄｕＢｒｅｉｃａ）ｄＥｉｅｉｍｋｒａｕａａ）燥地上部分。时珍在《草纲ｏｅｎｍＮｋｉ的干李本目》中称其有 “ 温，毒，筋骨，精气，辛无坚益补腰膝，
６％￣６４６９．％。结论：方法操作简便，定结果准确，复性好，用于淫羊藿多糖的含量测定。７该测重可关键词：淫羊藿；多糖；，一３二硝基水杨酸法５
ｄｉ０３６６ｉｎ１０－２７２１．１２ｏ：．９９．ｓ．８１６．２０．３１ｓ０００
ｐｌｓｃｈｒｄｅｎｅｉｉｉｏｙａｃａｉｓｉｐｍｅｄｕｍ．
Ｋｅｒｓｅｉｄｕｙｗｏｄ：ｐｍｅｉｍ；ｐｌｃｄｃｌｒｍｅｒｏｙａｃａｉｓ３５ｄｎｔｓｌｌａｉｏｏｉｔｄｒｃｅｙ
中图分类号：Ｑ２．Ｔ２４６
文献标志码：Ａ
文章编号：０８１６（０２０ — ０００１０— ２７２１）１０６ — ３
Ｄｅｅｍｉａｉｎ００ｙａｃａｉｅｐｍｅｉｍｔｔｒｎｔｏｆｌｓｃｈｒｄｓｉｅｉｄｕｗｉｈＤＮＳＭｅｈｄｐｎｔｏ
第２第１６卷期２１０２年１月
天
津
化

基于3,5-二硝基水杨酸比色法建立一种快速测定总糖含量的方法

基于3,5-二硝基水杨酸比色法建立一种快速测定总糖含量的方法任婧;李景富;张佳;刘俊芳;许向阳;姜景彬【摘要】本实验利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法对番茄果实总糖含量进行了测定,并初步建立了微型化DNS比色法测定总糖含量的实验方法和DNS比色法测定番茄总糖含量的最佳条件,对影响测定结果的因素:测定波长、显色剂用量、显色时间进行了单因素试验.结果表明,540 nm波长、0.2 mL DNS、沸水浴4 min为最佳测定条件.该最佳测定条件下,葡萄糖含量在20~200 μg与吸光值呈良好的线性关系.利用得到优化方法对4个番茄品种的总糖含量进行了测定,结果表明测定样品在1.5 h内的吸光值较为稳定,RSD为2.19%~2.88%.本研究得到番茄果实总糖含量测定的优化方法,是一种稳定、高效可行的测定方法,为番茄高糖品种的鉴定和筛选提供了依据.【期刊名称】《黑龙江科学》【年(卷),期】2017(008)010【总页数】4页(P66-69)【关键词】番茄;DNS;酶标仪【作者】任婧;李景富;张佳;刘俊芳;许向阳;姜景彬【作者单位】东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036;东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036;东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036;东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036;东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036;东北农业大学园艺园林学院,哈尔滨 150036【正文语种】中文【中图分类】TS255.7番茄(Lycopersicon esculentum Mill)，原产于南美洲的秘鲁和墨西哥，营养丰富，是人们餐桌上不可缺少的蔬菜。

番茄也是全世界种植最为普遍的蔬菜作物之一。

番茄含有VA、VC、叶酸、钾等主要的营养元素，其中富含的番茄红素可以清除人体内的活性氧自由基，延缓衰老，同时具有预防癌症、心血管疾病等功能[1]。

因此，近些年番茄果实的风味品质和营养含量也越来越受到人们的关注[2]。

生化实验3,5—二硝基水杨酸比色法测定糖的浓度预习报告

3,5—二硝基水杨酸比色法测定糖的浓度1、在样品的总糖提取时，为什么要用浓HCl处理?而在其测定前，又为何要用NaOH中和？答：总糖测定是建立在还原糖的测定的基础上的，经HCL处理是为了将所有的非还原糖水解还原成还原性糖，经过测定还原糖含量确定总糖含量。

在其测定前用NaOH中和，是因为HCL会消耗菲林试剂，所以必须要先中和来消除其影响。

2、标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什么要同步进行？答：实验操作时间差别大，吸光度会产生较大误差，虽然溶液在一定时间范围内是保持相对稳定的，但是分光光度计本身存在局限性，要求时间不能太长，所以标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定要同步进行。

3、比色测定的操作要点是什么？方法的基本原理是什么？答：比色测定方法的原理：用比较溶液颜色深浅的方法来测定有色溶液的浓度。

即光强度的减弱仅与有色溶液对光线的吸收有关。

溶液的浓度C愈大，液层厚度L愈厚（即光线在溶液中所经过的路程愈长），则溶液对光线吸收的愈多。

比色测定的操作要点：进行比色测定时，要选择合适的滤光片，因为有色溶液对光的吸收具有选择性，否则灵敏度很低，导致测量结果不准确。

在选择滤光片时，要使滤光片的颜色与待测溶液的颜色为互补色。

滤光片和有色溶液具有相似的透光特性，与它们本身颜色相同的色光，能够最大限度地透过。

而与它们本身颜色成互补的色光都能被最大地吸收，滤光片最大透过的光线应该是溶液最大吸收的光线。

4、72型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么？答：72型分光光度计的基本原理：分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。

样品的吸光值与样品的浓度成正比。

使用时的注意事项：对测量浓度有一定的范围要求，吸光度值控制在0.2～0.7之间,并且要求单色光垂直照射样品,试样要均匀，实验室的温度一般控制在10℃～25℃之间，正确选用分光光度计的比色皿，在使用中防止比色皿受污染，每次装入比色皿的溶液不要过满，一般装2/3即可,并在每次倒溶液时应小心操作,减少对进光面的擦洗次数,以防进光面磨损而影响透过率。

土壤纤维素酶活性测定二硝基水杨酸比色法

土壤纤维素酶活性测定（3,5- 二硝基水杨酸比色法）一、原理纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。

在纤维素酶作用下，它的最初水解产物是纤维二糖，在纤二糖酶作用下，纤维二糖分解成葡萄糖。

所以，纤维素酶是碳素循环中的一个重要的酶。

纤维素酶解所生成的还原糖与 3,5- 二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。

二、试剂1）甲苯2）1%羧甲基纤维素溶液：1g 羧甲基纤维素钠，用50%的乙醇溶至100ml。

3）pH5.5醋酸盐缓冲液：0.2mol/L 醋酸溶液11.55ml 95% 冰醋酸溶至1L；0.2mol/L 醋酸钠溶液16.4g C2H3O2Na或27.22g C2H3O2Na.3H2O溶至1L；取11ml 0.2mol/L 醋酸溶液和88ml 0.2mol/L 醋酸钠溶液混匀即成PH 5.5醋酸盐缓冲液。

4）3,5-二硝基水杨酸溶液：称1.25g二硝基水杨酸，溶于50ml 2mol/LNaOH和125ml水中，再加75g酒石酸钾钠，用水稀释至250ml（保存期不过7天）。

5）葡萄糖标准液（1mg/mL）预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。

准确称取50mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。

若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。

三、操作步骤葡萄糖标准曲线：分别吸1mg/mL的标准葡糖糖溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL于试管中，再补加蒸馏水至1mL，加DNS溶液3ml混匀，于沸腾水浴中加热5min，取出立即泠水浴中冷却至室温，以空白管调零在波长540nm处比色，以OD值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。

称10g土壤置于50ml三角瓶中，加入1.5ml甲苯，摇匀后放置15min，再加5ml 1%羧甲基纤维素溶液和5ml pH5.5醋酸盐缓冲液，将三角瓶放在37℃恒温箱中培养72h。

还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法

还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。

2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

面粉中还原糖的测定--3,5-二硝基水杨酸比色法

面粉中还原糖的测定
--3,5-二硝基水杨酸比色法
一、原理还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一
定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定。再求出样品中还原糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
将 6.3g DNS 和 262mL 2M NaOH 溶液，加到 500mL 含有 185g 酒石酸钾钠
的热水溶液中，再加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至 1000mL，贮于棕色瓶中备用。
三、操作步骤
1．制作葡萄糖标准曲线
取 6 支 20ml 具塞刻度试管编号，按表 1 分别加入浓度为 1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
面粉，中性滤纸。 2．主要仪器（1）比色管（2）具塞玻璃刻度：20mL×9 （3）烧杯（4）漏斗（5）容量瓶：100mL,1000mL （6）刻度吸管：1mL；2mL；10mL （7）恒温水浴锅（8）电子天平（9）紫外可见分光光度计 3．试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液
准确称取 80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容 100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
将浸出液（含沉淀）过滤到 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作
为还原糖待测液。
（2）显色和比色取 3 支 20mL 具塞刻度试管，编号，按表 2 所示分别加入待测液和显色剂，

碘量法和3,5一二硝基水杨酸(DNS)比色法测定食品中的还原糖

碘量法和3，5一二硝基水杨酸(DNS)比色法测定食品中的还原糖1．碘量法样品经处理后，取一定量样液于碘量瓶中，加入一定量过量的碘液和过量的氢氧化钠溶液，样液中的醛糖在碱性条件下被碘氧化为醛糖酸钠；反应液中过量的碘和氢氧化钠作用生成次碘酸钠，加入盐酸反应液呈酸性时碘析出。

用硫代硫酸钠标准溶液滴定析出的碘，则可计算出氧化醛糖消耗的碘量，从而计算出样液中醛糖的含量。

I2+2NaOH ——NaIO+NaI+H2ONaIO+NaI+2HCI——I2+2NaCl+H2O I2+2Na2S2O3——Na2S4O6+2NaI 在一定范围内，上述反应是彻低按化学反应式定量举行的，因此，可以利用化学反应式举行定量计算，而不用阅历检索表。

从反应式可计算出1mmol碘相当于葡萄糖180mg；麦芽糖42mg；乳糖360mg。

本法适用于各类食品，如硬糖、异构糖、果汁等样品中葡萄糖的测定，用于醛糖和酮糖共存时单独测定醛糖。

注重事项①本法自用法以来，在碱性试剂的挑选、反应体系的碱度、反应温度等方面举行了多次改进，主要是为防止酮糖氧化，降低共存的酮糖的影响，同时使碱性条件下醛糖与碘的反应彻低按当量反应式举行，以便于计算。

②当样品中含有乙醇、丙酮等成分时，会消耗碘，影响测定结果，应对样品举行处理。

③碘量法分常量法和微量法，主要区分在于测定时样液用量、试剂浓度及用量不同。

常量法用样液量20～25mL，样液含醛糖0.02％～0.45％；微量法用样液量5mL，检出量为O.25～1mg。

④此法协作挺直滴定法，也可用于葡萄糖和果糖共存时果糖的测定。

先用碘的碱性溶液把葡萄糖氧化，过量的碘用硫代硫酸钠溶液滴定除去，然后再用挺直滴定法测定果糖的含量。

2．3，5一二硝基水杨酸(DNS)比色法还原糖在氢氧化钠和丙三醇存在时，将3，5一二硝基水杨酸中的硝基还原为氨基，形成3一氨基一5一硝基水杨酸，在过量氢氧化钠碱性溶液中，该物质呈橘红色，并在540nm波特长有最大汲取值，其吸光度与还原糖含量呈线性关系。