MCF-7人乳腺癌细胞HE染色
乳腺癌细胞株整理(二)2024
乳腺癌细胞株整理（二）引言：乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，也是世界范围内死亡率最高的癌症之一。
研究乳腺癌细胞株对于深入了解乳腺癌的发生机制、预防和治疗具有重要意义。
在之前的文档《乳腺癌细胞株整理（一）》中，我们介绍了一部分常用的乳腺癌细胞株。
而本文将继续介绍一些其他有代表性的乳腺癌细胞株并对其特点进行概述。
正文：1. 非侵袭性乳腺癌细胞株：- MCF-7细胞株：MCF-7细胞株是一种常用的非侵袭性乳腺癌细胞系，其来源于人类乳腺癌的原发灶。
这种细胞株生长速度较慢，呈悬浮状态，对雌激素敏感，可用于乳腺癌治疗药物的筛选和雌激素受体相关研究。
- T47D细胞株：T47D细胞株也是一种常用的非侵袭性乳腺癌细胞系，它是从人类乳腺癌的转移灶中建立的。
这种细胞株对雌激素敏感，并且表达雌激素受体。
T47D细胞株可用于研究乳腺癌细胞的增殖、分化以及基因表达调控等。
2. 侵袭性乳腺癌细胞株：- MDA-MB-231细胞株：MDA-MB-231细胞株是一种高度侵袭性的乳腺癌细胞系，可模拟乳腺癌的转移和侵袭过程。
这种细胞株生长迅速，可以形成肿瘤，在体内可产生肺和骨转移。
MDA-MB-231细胞株广泛应用于研究乳腺癌的转移机制、肿瘤微环境以及疗效评估。
- BT-474细胞株：BT-474细胞株是一种来源于人类乳腺癌的转移灶中的细胞株。
这种细胞株表达人类表皮生长因子受体2（HER2）的过度表达。
BT-474细胞株对药物的敏感性较高，可用于研究HER2信号通路的调控及其在乳腺癌中的作用。
3. 耐药性乳腺癌细胞株：- MCF-7/ADR细胞株：MCF-7/ADR细胞株是已知的耐药性乳腺癌细胞株之一。
这种细胞株对化疗药物多药耐药性发生，可用于研究药物耐药机制以及开发新的治疗策略。
- MCF-7/TAM细胞株：MCF-7/TAM细胞株是一种对于抗雌激素药物铁曲红素（TAM）耐药的细胞系。
该细胞株经长期的体内暴露于TAM药物而产生耐药性，可用于研究抗雌激素治疗耐药机制。
HE染色资料介绍
普通染色又称常规染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。
它是病理技术中最常用的一种方法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法，以达到准确，完整的病理诊断。
一、染色目的病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同的方法，将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。
例如，HE染色，好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。
清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染色技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，方能提高。
如果染色不好，切片染色一团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染色结果的好坏直接关系到诊断的准确性。
二、染色的作用1．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为碱性。
酸性染料中有染色作用的为阴离子，碱性染料中有染色作用的为阳离子，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。
在染色时，细胞核中的酸性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生作用，由于反应的部位不同，结果着色有异。
2．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。
由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。
一般来说，染色的学说还有许多，但说服力强的仅有上述两种。
但不管怎么样解释，实际上完成的每一种染色，都与上述两种学说分不开，它们的作用是相辅相成，同时存在的。
三、染色方法及步骤1．人工苏木素-伊红染色法（HE法）(1)切片浸入二甲苯中5-10min；(2)切片浸入二甲苯中5-10min；(3)100%酒精1min。
(4)100%酒精1min。
(5)95%酒精1min。
HE染色
HE染色实验步骤及常见问题解析一、HE染色HE染色全名为苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色方法，是最基本的也是最重要的病理学染色技术。
一张质上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。
HE染色是目前国内外病理诊断上广泛采用的常规染色方法。
切片质量的好坏，可直接影响疾病诊断的及时与准确性。
因此，能制作出一张高质量的HE染色切片，是必须掌握的技术之一。
二、染色原理1.细胞核染色原理：苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。
细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2.细胞浆染色原理：细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。
当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。
因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
3.分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。
在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离而褪色。
经苏木精染色后，必须用0.5%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去，在进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。
he染色评分标准
he染色评分标准
HE染色评分标准通常用于评估组织或细胞的病理学样本质量，以及在某些情况下，用于量化病变的严重程度。
具体评分标准可能因应用场景和实验室而异，但以下是一个通用的HE染色评分标准，仅供参考：
1. 组织结构：观察组织样本的结构是否清晰，细胞排列是否整齐。
根据组织的完整性，可以给予0-5分的评分，其中0分表示组织结构完全破坏，5分表示组织结构完整且清晰。
2. 细胞核染色：观察细胞核的染色情况，包括染色质分布、核膜清晰度以及核仁是否清晰。
根据染色质量，可以给予0-5分的评分，其中0分表示染色质量极差，5分表示染色质量非常好。
3. 细胞质染色：观察细胞质的染色情况，包括质膜和细胞质的染色质量。
根据染色质量，可以给予0-5分的评分，其中0分表示染色质量极差，5分表示染色质量非常好。
4. 细胞活性：观察细胞的活性状态，包括细胞的代谢活性、增殖能力和形态特征。
根据细胞的活性，可以给予0-5分的评分，其中0分表示细胞活性极差，5分表示细胞活性非常好。
综合以上四个方面，可以对HE染色样本进行全面的评分。
总分为0-20分，其中0分表示样本质量极差，20分表示样本质量非常好。
在病理学诊断中，可以根据实际需要和实验室标准对HE染色评分标准进行调整和优化。
HE染色实验步骤
HE染色实验步骤染色实验是生物学中常用的染色技术，用于观察细胞结构、细胞器和染色体等生物学特征。
在这个实验中，我们将使用HE染色法来染色细胞和组织切片。
HE染色法是最常用的组织染色方法之一，用于观察组织结构和组织细胞的形态。
以下是HE染色实验的步骤：1.准备组织标本在进行染色实验之前，首先需要准备好需要染色的组织标本。
组织标本可以是新鲜的组织样本，也可以是已固定和包埋的组织切片。
在准备组织标本时，需要确保组织标本的质量和完整性，以保证染色结果的准确性。
2.制备切片将组织标本切割成薄片，通常厚度在5-10微米之间。
为了获得更好的染色效果，切片应该尽可能薄且均匀。
切片可以使用切片刀或者切片机进行切割。
切片完成后，将切片放在载玻片上，待干燥。
3.脱脂和脱水将切片放入甲醇中脱脂，去除切片中的脂肪物质。
脱脂时间一般为1-2分钟。
脱脂完成后，将切片依次浸入95%乙醇、70%乙醇和蒸馏水中进行脱水处理，时间每次均为1-2分钟。
脱水处理的目的是去除切片中的水分，以便后续染色。
4.染色处理将脱水后的切片依次浸入hematoxylin染料、蒸馏水、酸性洗涤剂和eosin染料中进行染色处理。
hematoxylin染料用于染色细胞核，eosin染料用于染色胞质。
染色时间根据实验需要，通常为1-10分钟。
染色完成后，将切片洗净并进行脱水处理。
5.脱水和封片将染色后的切片依次浸入70%乙醇、95%乙醇和透明剂中进行脱水处理。
脱水完成后，将切片放入透明剂中进行透明化处理，以使组织切片更加透明。
最后，将切片放入显微镜载玻片上，加入透明胶封片，并静置干燥。
6.观察和记录将封片好的切片放入显微镜中，用适当的倍数镜头观察组织结构和细胞形态。
观察时，可以记录下细胞核的形态、胞质的颜色和组织结构等信息。
通过观察和记录，可以得到关于组织和细胞的详细信息，为后续研究和分析提供参考。
7.结果分析根据观察和记录的结果，对染色切片进行分析和比较。
免疫组化HE染色步骤
免疫组化HE染色步骤免疫组化和HE染色是在病理学中常用的技术，用于对组织样本进行分析和诊断。
下面将详细介绍免疫组化和HE染色的步骤。
免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过使用抗体来检测组织样本中特定抗原的技术。
它可以用于确定细胞或组织中特定蛋白质的位置和表达水平。
免疫组化主要包含以下步骤：1.取得组织样本：首先需要从患者的切除组织或活检组织中获取样本。
样本通常以固定和包埋的形式保存在蜡块中。
2. 切片：将蜡块切割成非常薄的切片（通常为4-5um）。
这些切片通常被放置在载玻片上。
3.去蜡和脱水：跳过这一步，因为该步主要是用于从蜡中去除组织样本。
已经固定在切片上的组织样本无需这一步。
4.抗原检出：在这一步中，需要使用一种抗体来标记想要检测的抗原。
这个抗体会与目标蛋白质结合，并形成一种可以用来检测的复合物。
5.清洗：使用缓冲液对切片上的抗体复合物进行清洗，以去除未结合的抗体。
6.显色：在这一步中，需要使用一种可独特识别的物质来标记已结合的抗体。
典型的显色素有DAB、VIP等。
7.顶气及封片：使用适当的溶剂和覆盖剂对切片进行顶气和封片，以保护其结构并使其可供观察。
通过观察组织样本中的抗原的显色情况，可以确定抗原在组织中的分布和表达水平。
免疫组化广泛应用于病理学诊断中，可以帮助医生进行肿瘤分类、病理分级以及预后评估等。
HE染色（Hematoxylin and Eosin staining）是一种常用的组织染色技术，主要用于病理学的初步观察和诊断。
HE染色主要包含以下步骤：1.取得组织样本：与免疫组化相同，首先需要从患者的切除组织或活检组织中获取样本。
样本通常以固定和包埋的形式保存在蜡块中。
2. 切片：将蜡块切割成非常薄的切片（通常为4-5um）。
这些切片通常被放置在载玻片上。
3.去蜡和脱水：类似于免疫组化，这一步主要用于从蜡中去除组织样本。
4.染色：在这一步中，使用两种染色剂：血红素和紫杉醇。
用蜂毒抑制肿瘤的研究进展
蜂毒多肽空间稳定免疫脂质体的制备及体外对肿瘤细胞的选择性蜂毒是工蜂毒腺和附腺分泌出的具有芳香气味的一种透明毒液，贮存在毒囊中，蛰刺时由蛰针排出。
其化学成分比较复杂，包括多肽类、酶类和非肽类物质。
主要有效成分是蜂毒素、蜂毒神经肽、磷脂酶A、透明质酸酶、多巴胺和组织胺等。
其中，蜂毒素足蜜蜂毒的主要成分，约占蜂毒千重的50％。
蜂毒素具有很高的生物活性，现代药理研究表明它具有抗炎、镇痛、抑制血小板凝集、抗艾滋病及抗肿瘤等多种作用。
近年来，有关蜂毒的抗肿瘤作用及其潜在的临床应用价值日益引起人们的重视。
1抗肿瘤作用机制1.1 直接杀伤肿瘤细胞张氏等应用胡蜂毒素对小鼠肿瘤模型( S ) 进行肿瘤杀伤作用和治疗作用的实验研究，发现胡蜂毒对小鼠肿瘤细胞有直接杀伤作用和一定的治疗作用。
蜂毒主要活性成分蜂毒素体外对多种实验性肿瘤有具杀伤作用，并且l/μmol/L浓度的蜂毒素，阻止肿瘤细胞的增生，而不抑制正常细胞的生长和克隆率。
通常认为蜂毒素使细胞线粒体膜溶解，使细胞的正常呼吸受到抑制，因而肿瘤组织氧化磷酸化的过程受到抑制，氧化功能被破坏，导致目肿瘤组织生长抑制。
1.2 免疫调节作用1909年，Paulehrlich提出了免疫反应是机体对抗肿瘤的主要机制的概念。
一般来说，人体免疫系统主要有三方面的功能，即防御病原微生物感染的防护功能、消除体内“杂质”的自我稳定功能和对自身或受外界刺激所产生的各类变异细胞进行识别和杀灭的免疫监管功能。
要实现上述功能，就必须使免疫系统处于相对平衡的稳定状态，一旦平衡破坏，就可能导致疾病发生。
其中，免疫监管功能与肿瘤的发生和发展有着密切的关系。
国外早有研究报道蜂毒素参与抗肿瘤T细胞应答。
朱氏等的研究表明，蜂毒0.32、0．63 mg/kg能增加加s 肉瘤鼠T淋巴细胞酯酶阳性染色率，表明具有增强T淋巴细胞功能的作用。
蜂毒0．32mg/kg 能增强s肉瘤鼠网状内皮系统(RES对碳粒廓清能力，具有增强RES单核巨噬细胞的吞噬功能作用。
mcf7分子分型
mcf7分子分型
MCF7是一种乳腺癌细胞系，属于ER阳性乳腺癌。
MCF7细胞系是乳腺癌
细胞系中较为常见的一个，它是雌激素受体阳性（ER+）的细胞系，这意味着它对雌激素具有较高的亲和力和依赖性。
MCF7细胞系的分子分型有多种，常见的包括：
1. Luminal A型：这种类型的乳腺癌细胞通常表达高水平的ER和PR（孕
激素受体），但HER2基因扩增和蛋白表达较低。
这种类型的乳腺癌对激素治疗和内分泌治疗敏感，预后相对较好。
2. Luminal B型：这种类型的乳腺癌细胞也表达高水平的ER和PR，但HER2基因扩增和蛋白表达较高。
这种类型的乳腺癌对激素治疗和内分泌治疗有一定敏感性，但可能对化疗和靶向治疗更敏感。
3. HER2过表达型：这种类型的乳腺癌细胞HER2基因扩增和蛋白表达较高，ER和PR表达较低。
这种类型的乳腺癌对化疗、靶向治疗和曲妥珠单抗治疗敏感，但可能对激素治疗不敏感。
4. 三阴性乳腺癌：这种类型的乳腺癌细胞ER、PR和HER2基因表达均为阴性。
这种类型的乳腺癌对激素治疗、内分泌治疗和靶向治疗不敏感，通常需要采用化疗等治疗方案。
需要注意的是，MCF7细胞系的分子分型并不是绝对的，不同的实验条件和研究结果可能会有所不同。
因此，在实际的实验设计和研究中，需要根据具体情况进行分子分型分析和验证。
HE染色操作常规流程
HE染色操作常规流程1.实验前准备：1.1收集待染色的样本（如组织切片、细胞涂片等），确保样本保存完整和无污染。
1.2准备好所需的染色试剂：包括有水洗试剂（如去离子水）、染色试剂（如伊红、伊红酒精和亚甲蓝）、染色剂工作液（如伊红酒精和亚甲蓝溶液）等。
2.试片处理：2.1将组织切片或细胞涂片分别放入热腺管或玻璃片上。
2.2连续经过苯酚甲酸苯酯脱脂、乙醇梯度洗脱等步骤，去除样本中的脂肪和碱性物质，以减少后续染色的干扰。
2.3用去离子水洗涤样本，使其充分湿润，除去残存的试剂。
3.染色操作：3.1把处理好的样本放入腺管或玻璃片，倒入伊红酒精溶液中，用大约15-30分钟染色，使细胞和组织成为红色。
3.2轻轻用清水漂洗试品，去掉多余染色液。
3.3加入亚甲蓝液，使样本转为蓝色，使细胞核染色成深蓝色，时间为1-2分钟。
3.4再次用清水将试品漂洗干净。
4.固定和封片：4.1用醋酸纤维素或氯仿等溶剂固定染色后的试片，使试样中的颜色得以固定。
4.2在试片上加一滴封片剂（如封片胶）。
4.3将盖玻片缓慢地放在试片上，使封片剂均匀地覆盖整个样本。
4.4将封片剂封住，使细胞和组织样本能够在显微镜下观察。
5.显微镜观察：5.1将染色好的试片放在显微镜下，调整镜头，适当调节光线强度和聚焦位置，以便观察样本的细节。
5.2观察细胞和组织的形态、染色强度和细胞核的染色情况，并进行必要的记录和照片拍摄。
以上就是HE染色操作的常规流程。
通过此流程，我们可以对细胞和组织样本进行染色，从而得到对染色体分辨和鉴定的结果。
这一技术使我们能够更好地了解细胞和组织样本中的结构和功能，对于生物学和遗传学的研究具有重要意义。
he染色解读
HE染色，全称为苏木精-伊红染色（Hematoxylin and Eosin Staining），是生物学和医学领域中常用的一种细胞和组织染色方法。
它主要用于观察细胞核的形态结构、染色体的分布以及细胞质的成分。
HE染色方法简单、结果清晰，因此在病理学、细胞学和遗传学等领域得到了广泛的应用。
HE染色的原理是通过化学反应使细胞和组织中的特定成分着色，从而呈现出不同的颜色。
在HE染色过程中，首先使用苏木精（Hematoxylin）对细胞核进行染色，使其呈现出深蓝色或紫蓝色；然后使用伊红（Eosin）对细胞质进行染色，使其呈现出粉红色或红色。
通过对比两种颜色的分布，可以清晰地观察到细胞核和细胞质的结构。
HE染色的主要步骤如下：1. 切片制备：将组织切成薄片，通常厚度为4-10微米。
切片的质量直接影响到染色结果的准确性和清晰度。
2. 固定：将切片放入固定液中，使细胞内的蛋白质凝固，防止后续染色过程中细胞结构的破坏。
3. 脱水：将固定后的切片依次放入不同浓度的酒精溶液中，使水分逐渐减少，有利于染料的渗透。
4. 渗透：将切片放入含有苏木精的染液中，使染料渗透到细胞内。
此时，细胞核内的DNA 与苏木精结合，呈现出深蓝色或紫蓝色。
5. 清洗：将切片从染液中取出，用清水冲洗，去除多余的染料。
6. 分化：将切片放入含有酸性溶液的染液中，使细胞核内的苏木精与酸性溶液反应，呈现出不同的深浅程度。
这一步骤有助于区分细胞核的不同区域。
7. 清洗：将切片从染液中取出，用清水冲洗，去除多余的酸性溶液。
8. 脱水：将切片依次放入不同浓度的酒精溶液中，使水分逐渐减少，有利于染料的渗透。
9. 渗透：将切片放入含有伊红的染液中，使染料渗透到细胞质中。
此时，细胞质内的蛋白质与伊红结合，呈现出粉红色或红色。
10. 清洗：将切片从染液中取出，用清水冲洗，去除多余的染料。
11. 透明：将切片放入透明剂中，使切片透明化，便于观察。
12. 封片：将透明后的切片放在载玻片上，用封片胶封住，避免水分蒸发和污染。
增殖缺陷型腺病毒介导人内皮抑素基因抗乳腺癌的实验
增殖缺陷型腺病毒介导人内皮抑素基因抗乳腺癌的实验【摘要】目的通过建立裸鼠乳腺癌肿瘤模型，在体内实验中进一步证实携带人内皮抑素基因的增殖缺陷型腺病毒Ad hE的抗肿瘤作用。
方法在BALB/c裸鼠皮下种植人乳腺癌细胞MCF7，建立移植瘤模型。
在瘤体内注射Ad hE治疗，观察肿瘤生长，免疫组化检测肿瘤细胞内皮抑素的表达和计数肿瘤间质中微血管的数量。
结果 Ad hE 具有明显抑制肿瘤细胞生长的作用，瘤体内注射重组腺病毒后4周，Ad hE治疗组肿瘤体积为（225.3±90.2）mm3，明显小于Ad LacZ 病毒对照组（794.9±189.8）mm3和空白对照组（890.7±102.5）mm3。
免疫组化显示，乳腺癌细胞在感染腺病毒后能够有效表达内皮抑素，阳性细胞比率超过60％以上。
Ad hE治疗组瘤组织中血管数量（16.3±7.3）明显少于空白对照组（54.6±17.6）和Ad LacZ病毒对照组（49.8±21.2）。
结论增殖缺陷型腺病毒介导人内皮抑素的表达，具有明显抑制肿瘤细胞生长的作用。
【关键词】腺病毒内皮抑素乳腺癌基因治疗0 引言近年来，抗肿瘤血管生成的基因治疗策略倍受关注［1］，已发现的多种具有抑制肿瘤血管生成的活性物质中以血管抑素和内皮抑素最为引人注意［2，3］。
前期我们构建了携带人内皮抑素基因（human endostatin，hE）的增殖缺陷型腺病毒Ad hE，并在体外细胞学实验中证实Ad hE感染乳腺癌细胞株MDA MB231和MCF7后，可介导内皮抑素基因的高效表达，且表达的内皮抑素可明显抑制人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞的生长［4］。
在此基础上，本文通过建立裸鼠乳腺癌模型，开展体内实验进一步证实Ad hE的抗肿瘤作用。
1 材料与方法1.1 材料来源携带人内皮抑素基因（Human endostatin, hE）的增殖缺陷型腺病毒Ad hE和携带报告基因LacZ的增殖缺陷型腺病毒Ad LacZ 由我们自己构建并保存，人乳腺癌细胞株MCF7购于美国ATCC细胞库，鼠抗人hE单克隆抗体、鼠抗人CD31单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术公司。
苦瓜皂苷对人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用的影响
Ｌ Ｉ Ｓ Ｈ Ｉ Ｚ Ｈ Ｅ Ｎ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ｉ Ｎ Ｅ Ａ Ｎ Ｄ Ｍ Ａ Ｔ Ｅ Ｒ Ｉ Ａ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ａ Ｒ Ｅ Ｓ Ｅ Ａ Ｒ Ｃ Ｈ ２ ０ １ ３ Ｖ Ｏ Ｌ ． ２ ４ Ｎ Ｏ ． ２
ＭＣ Ｆ一 ７细胞 的生长抑制作 用； ＨＥ染 色观 察皂苷作 用后癌 细胞 的形 态学 变化 ； 免疫 荧光 染色检 测 Ｂ ｃ ｌ 一２的 阳性表 达率 变化 ； 流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡率。结果 Ｍ Ｔ Ｆ法得 到苦瓜 皂苷与 ＭＣ Ｆ一 ７细胞 生长抑制率之 间存在 浓度依
２ ． ８ ４± ０ ． ９ ３ ２ ． Ｏ ８± ０ ． ５ １ ２ ． １ ０± ０ ． ３ ９
３ ２ ４ ± ０ ． ９ １ ２ ２ ８ ± ０ ． ４ ９ ２ ． ０ ４ ± Ｏ ． ５ ０
３ ． ２ ０± ０ ． ８ ６ ２ ． ７ ４ ± ０ ６ ４ ２ ． ０ ８ ± ０ ． ４ ８ ＋・１ ． ９ ０ ± ０ ． ４ ４ １ ． ７ ０± ０ ． ３ ９ ２ ． １ ２ ± ０ ． ６ ０
２ ｈ
３ ． ０ ５±１ ． ０ ５
３ ｈ
３ ． ６ ３±１ ． ０ ４
４ ｈ
４ ． １ ０±０ ． ９ ９
５ ｈ
４ ． ２ ５±１ ． ３ ５
６ ｈ
４ ． ６ ４±１ ． ８ ７
洁口爽（ 小）２ ． ９ ４ ± ０ ． ６ ５ 洁口爽（ 大）２ ． １ ０ ± ０ ． ５ ５ 地塞米松 １ ． ５ ０ ± Ｏ ． ０ ５ ， Ｐ＜ ０ ． ０ １ ； ｎ＝ １ ０
苦瓜 皂 苷对 人乳 腺 癌 ＭＣ Ｆ 一 ７细胞 增 殖作 用 的影 响
HE染色原理
HE染色原理详解1. 引言HE（Hematoxylin and Eosin）染色是一种广泛应用于组织切片染色的方法。
它是组织学研究中最常用的染色方法之一，可以用于观察和识别不同类型的组织细胞、细胞器和细胞组分，对于发现和诊断疾病具有重要的意义。
本文将详细介绍HE染色的基本原理以及每个步骤的具体操作。
2. HE染色基本原理HE染色使用两种染料，即天青（Hematoxylin）和伊红（Eosin）。
天青染色核酸物质，如细胞核和核染色质；伊红则染色细胞质和细胞器。
这两种染料相互作用，形成了HE染色效果。
2.1 天青（Hematoxylin）染色原理天青是一种天然染料，通过与组织中的阴离子基团结合而发生染色反应。
天青与酸性物质结合形成的盐类在碱性条件下呈现出蓝色或紫色，使得细胞核等含有核酸的区域染色深蓝色。
天青染色可以分为以下几个步骤：1.组织固定：将待染的组织标本进行固定，一般使用10%中性缓冲福尔马林。
2.脱水：将组织标本通过逐渐浓度递增的酒精溶液进行脱水处理。
3.清洁：用去嵌剂的醛固定液对组织标本进行处理。
4.蜡包埋：将组织标本放入熔蜡中，使其浸透均匀。
5.切片：用梯度旋转切片机切取薄片。
6.抗静电：使用正电极处理切片以减少静电。
7.染色：将切片浸入天青染料中，使其染色蓝色。
8.除碱：用醋酸或其他酸性溶液将切片除去多余的天青染料。
9.脱水：逆序使用乙醇溶液将切片脱水。
10.透明：用透明度递增的有机溶剂对切片进行透明化处理。
11.封片：将切片放入玻璃片中，并用固定剂固定。
2.2 伊红（Eosin）染色原理伊红是一种酸性染料，其分子中含有阳离子染色基团。
伊红可与细胞质内的嗜多染色质、酸性粒细胞内的颗粒以及胶原纤维等物质结合，形成染色沉淀，使细胞质等区域呈红色。
伊红染色可以分为以下几个步骤：1.脱蜡：将切片放入去蜡剂中，去除组织标本中的蜡质。
2.脱水：使用递减浓度的酒精溶液对切片进行脱水处理。
3.染色：将切片浸入伊红染料中，使其染色红色。
MCF-7细胞
MCF—7人乳腺癌细胞MCF-7细胞描述：MCF-7细胞保留了多个分化了的乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成圆形复合物(domes)。
该细胞含有Tx—4癌基因。
肿瘤坏死因子α（TNF alpha）可以抑制MCF—7细胞的生长. 抗雌激素处理细胞能调变IGFBP’S的分泌。
MCF-7细胞增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。
请按照正确的培养方法来解冻、传代，以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进行。
货号规格培养基运输保存C00401×106个/管DMEM+10% FBS干冰运输液氮保存质量控制：本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV）、支原体.培养条件：37℃,5％ CO2，PH值7。
2～7.4，无菌恒温培养。
细胞相关操作（注意：细胞操作都需严格按照无菌操作）收到复苏好的贴壁细胞的处理方法：1。
先从外包装盒拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜；2。
在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌,请立即拍照，并将细胞丢掉;3。
将培养瓶置于37°C，5％ CO2的无菌培养箱中培养4-6小时；4。
倒掉多余的培养基,留正常体积的培养基；5。
重新将培养瓶置于37°C,5％ CO2的无菌培养箱中培养过夜；6. 第二天传代。
收到冻存细胞的处理方法：1.37°C水浴预热培养基；迅速搅动2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）;3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min;4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；5.置于37°C,5% CO2培养箱中培养（培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧）；6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
细胞传代1。
当细胞融合度达到90％以上时，给细胞传代;2.37°C水浴预热培养基；3。
MCF细胞
MCF-7人乳腺癌细胞MCF-7细胞描述：MCF-7细胞保留了多个分化了的乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成圆形复合物（domes）。
该细胞含有Tx-4癌基因。
肿瘤坏死因子α（TNF alpha）可以抑制MCF-7细胞的生长。
抗雌激素处理细胞能调变IGFBP’S的分泌。
MCF-7细胞增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。
请按照正确的培养方法来解冻、传代，以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进行。
货号规格培养基运输保存C00401×106个/管DMEM+10% FBS干冰运输液氮保存质量控制：本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。
培养条件：37℃，5% CO2，PH值7.2~7.4，无菌恒温培养。
细胞相关操作（注意：细胞操作都需严格按照无菌操作）收到复苏好的贴壁细胞的处理方法：1. 先从外包装盒拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜；2. 在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌，请立即拍照，并将细胞丢掉；3. 将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养4-6小时；4. 倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基；5. 重新将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养过夜；6. 第二天传代。
收到冻存细胞的处理方法：1.37°C水浴预热培养基；迅速搅动2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；5.置于37°C，5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)；6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
细胞传代1.当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；2.37°C水浴预热培养基；3.在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞；4.显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基终止消化；5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；6.将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min；7.弃上清，加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶），混匀细胞悬液，确保细胞均匀分布；8.将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养。
甲基硒酸对乳腺癌细胞增殖及生长影响的研究
甲基硒酸对乳腺癌细胞增殖及生长影响的研究摘要：目的：研究分析甲基硒酸对乳腺癌细胞增殖及生长影响。
方法：在乳腺癌细胞系MCF-7中使用浓度不同的甲基硒酸，分别在不同的时间对乳腺癌细胞体外增殖、形态以及生长造成的影响进行观察分析。
借助噻唑盐法对细胞的增殖进行测定，并借助光学显微镜对细胞的形态以及生长状况进行观察。
结果：甲基硒酸对乳腺癌细胞的体外增殖可产生显著的抑制效果，甲基硒酸作用于乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用，且会随着药物浓度的增加而增加；甲基硒酸对乳腺癌细胞的生长也有一定的抑制效果，能够致使乳腺癌细胞出现核碎裂以及消失，乳腺癌生长以及形态改变会随着药物浓度以及作用时间的增加而增加。
结论：甲基硒酸对乳腺癌细胞的体外增殖、生长具有一定的抑制作用，能够使乳腺癌细胞的形态发生变化，有望能够成为乳腺癌疾病预防以及治疗的一种新式方法。
关键词：甲基硒酸；乳腺癌细胞；增殖；生长影响乳腺癌（mammarycarci）是危害世界女性生命健康的主要疾病，发病率和死亡率已分别位居第二位和第五位，且呈现不断增长趋势。
在我国女性的恶性肿瘤中乳腺癌以居首位，对妇女的身心健康造成严重的威胁，对家庭生活的稳定也产生了一定影响，同时也对社会造成一定医疗负担。
在乳腺癌的治疗中，传统方法较多应用放化疗以及手术手段进行治疗，对患者也会有一定的身心影响，且有较大的损伤[1]。
本文通过体外实验，研究甲基硒酸（MSA）能够影响人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖以及生长，为进一步探讨元素硒的抗癌作用机制，提供一定的理论依据促进硒向预防以及治疗乳腺肿瘤的靶向性提供有效依据。
1 资料与方法1.1 一般资料选购来自长春天药科技有限公司的人乳腺癌细胞株MCF-7，另选购来自Sigma公司的甲基硒酸。
选自百奥生物公司的噻唑盐试剂盒。
来自杭州四季青生物工作有限公司的胎牛血清。
1.2 分组方法1.2.1借助噻唑盐法对细胞增殖进行检测在研究过程中，需要将使用MSA的组别设为干预组，将未使用MSA的组设置为对照组，将干预组以浓度不同作为依据进行划分，分别为：2.5、5、10、20微摩尔每升4组。
mcf7细胞形态特征
MCF7细胞形态特征引言MCF7细胞是人乳腺癌细胞系中最常用的一种，广泛应用于乳腺癌研究领域。
研究MCF7细胞的形态特征有助于了解其生物学行为、发展机制以及药物治疗的效果。
本文将详细介绍MCF7细胞的形态特征。
MCF7细胞的外观MCF7细胞是一种上皮样肿瘤细胞，其外观呈现典型的上皮样形态。
每个MCF7细胞通常为单个圆形或椭圆形，直径约为15-20微米。
在显微镜下观察，可以看到这些细胞具有较大的、圆形的细胞核，并且位于一个透明的质膜内。
细胞核结构MCF7细胞核通常位于细胞中央，呈圆形或椭圆形。
在染色质染色后，可以看到核内有许多深染色、颗粒状结构，这些是染色体。
此外，在核内还可见到明亮的核仁，核仁的数量和大小因细胞状态而异。
核糖体RNA合成的活跃程度通常可通过核仁的形态特征来反映。
细胞质结构MCF7细胞的质膜清晰可见，质膜内包含丰富的细胞质。
在细胞质中，可以看到许多小颗粒状结构，这些是线粒体。
线粒体是细胞内能量产生的场所，其数量和形态可以反映细胞的代谢状态。
此外，在MCF7细胞中还可以观察到内质网（endoplasmic reticulum, ER）和高尔基体（Golgi apparatus）。
内质网是一种复杂的膜系统，参与蛋白质合成和修饰过程。
高尔基体则参与蛋白质转运和分泌。
细胞连接方式MCF7细胞之间存在着多种连接方式，主要有紧密连接、间隙连接和黏附连接。
紧密连接通过紧密连接带将相邻细胞上皮层紧密地结合在一起，形成一个完整的上皮层。
间隙连接则通过通道蛋白将相邻细胞之间的质膜连接在一起，实现细胞间的物质传递。
黏附连接是通过黏附蛋白将细胞表面的黏附结构相互连接，增强细胞间的黏附力。
细胞运动MCF7细胞在培养基中呈现较为有限的运动能力。
通常情况下，MCF7细胞以静止状态为主，仅偶尔出现扩展和移动。
这与其上皮样特征相符合。
然而，在某些条件下，如培养基中添加足够的营养物质或刺激剂，MCF7细胞也可以表现出明显的迁移和侵袭能力。
肿瘤细胞爬片HE染色方法
抗肿瘤药物对肿瘤细胞抑制及细胞形态观察实验导读细胞是生物体形态结构、生理功能和发育分化等生命现象的基本单位。
人体细胞种类繁多，大小不一，形态多样，结构和功能都不同。
每个细胞都由细胞膜、细胞质和细胞核三部分组成。
各种细胞具有一定的形态结构特点，合成与功能相关的特殊蛋白质，表达某种代谢特点和功能活动，即为细胞的表型。
为观察不同细胞或细胞在不同环境下的状态，染色是最常用、且最直观的方法。
染色是组织或细胞的某些成分与染料的化学结合或物理吸附作用而显色的过程。
染料是一种有机化合物，它们含有不饱和的基团，例如亚硝基（－N=O）、偶氮基（－N=N－）等称为发色团。
各种染料由于它们的发色团不同，显示的颜色就不同。
此外，染料还含有一些碱性基团如氨基（－NH2）或酸性基团如羧基（－COOH）或磺基（－SO3H），称为助色团。
含有氨基的染料是碱性染料，它在溶液内带阳电荷，为阳离子染料，它和组织内的酸性物质有亲和力。
含有羧基和磺基的染料是酸性染料，它在溶液内带阴电荷，为阴离子染料，它与组织内的碱性物质有亲和力。
5-氟尿嘧啶作为嘧啶类似物,用于固体瘤的治疗已经有近50年的历史。
目前作为首选抗代谢药用于临床治疗胃癌、乳腺癌等多种癌症。
5-氟尿嘧啶在细胞内先转变为5-氟-2-脱氧尿嘧啶核苷酸，后者抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻断脱氧尿嘧啶核苷酸转变为脱氧胸腺嘧啶核苷酸，从而抑制DNA的生物合成。
此外，通过阻止尿嘧啶和乳清酸掺入RNA，达到抑制RNA 合成的作用。
为细胞周期特异性药，主要抑制S期细胞。
各种组织或细胞的基本组成成分都是蛋白质、糖蛋白、或脂蛋白，蛋白质分子中既含有碱性的氨基，有含有酸型的羧基，它是两性电解质。
氨基和羧基在溶液内均可电离，如羧基的电离大于氨基时则蛋白质带阴电荷，此时它和阳离子的碱性染料亲和力大；如氨基的电离大于羧基时则蛋白质带阳电荷，此时它和阴离子的酸性染料亲和力大。
在一定的pH值时，某种蛋白质带有阴电荷和阳电荷的数目相等，此pH为该种蛋白质的等电点，此时蛋白质为不带电荷的两性物质，着色不佳。
乳腺癌中shh、ptch和smo蛋白过表达的临床病理学意义
乳腺癌中shh、ptch和smo蛋白过表达的临床病理学意义张金子;张凤艳;林贞花;玄延花【摘要】目的研究Hedgehog信号通路中shh、ptch和smo蛋白过表达在乳腺浸润性导管癌及导管内原位癌中的临床病理学意义.方法采用免疫组化EnVision 法检测111例浸润性导管癌、40例导管内原位癌和21例正常乳腺导管上皮组织芯片中shh、ptch和smo蛋白的表达情况,并分析其相关性.结果 shh、ptch和smo蛋白在正常导管上皮中表达呈阴性或弱阳性,但在浸润性导管癌(shh74.8%,ptch 68.5%,smo 65.8%)和导管内原位癌(shh 100%,ptch 100%,smo 90%)中阳性表达率明显增高,差异有统计学意义(P均<0.001).乳腺导管癌中shh蛋白的表达率在Ki-67和c-erbB-2阳性组明显高于阴性组(P均<0.05);而且与淋巴结转移相关(P<0.05).此外,shh、ptch和smo蛋白表达与乳腺癌患者的年龄、ER、PR、p53蛋白的表达及组织学分级和临床分期等特征均无显著性.Spearman相关分析显示,在乳腺癌组织中shh的表达分别与ptch(r=0.55,P<0.01)、smo(r=0.58,P<0.01)的表达呈正相关;而且ptch的表达又与smo的表达呈正相关(r=0.495,P<0.01).结论 shh、ptch和smo蛋白表达检测可以作为乳腺癌的辅助诊断指标,而且shh对判定乳腺癌的预后有一定作用.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2010(026)005【总页数】5页(P518-522)【关键词】乳腺肿瘤;Hh信号通路;免疫组化【作者】张金子;张凤艳;林贞花;玄延花【作者单位】延边大学医学院病理学教研室,延吉,133000;延边大学医学院病理学教研室,延吉,133000;延边大学医学院病理学教研室,延吉,133000;延边大学医学院病理学教研室,延吉,133000【正文语种】中文【中图分类】R737.9Hedgehog(Hh)信号通路在动物正常胚胎发育和器官形成中具有重要作用。