分子实验室、细胞实验室常用配方
最全常用缓冲液配方及缓冲范围
最全常用缓冲液配方及缓冲范围缓冲液是一种能够维持溶液pH值相对稳定的溶液。
它可以减少酸碱反应的影响，使物质在酸碱环境中保持稳定。
在生命科学实验室和工业生产中，常用的缓冲液有许多种。
下面是最常用的一些缓冲液配方及其缓冲范围。
1. Phosphate缓冲液：Phosphate缓冲液通常由磷酸二氢盐和磷酸氢二盐组成。
它的pH范围为2.1-7.4，在生物化学和细胞生物学实验中得到广泛应用。
配方1：-0.1M磷酸二氢盐，pH2.0-2.8-0.2M磷酸氢二盐，pH5.8-7.4配方2：-0.1M磷酸二氢盐，pH2.1-3.1-0.2M磷酸氢二盐，pH5.6-7.42. Tris缓冲液：Tris缓冲液由三羟甲基氨基甲烷（Tris）和其酸盐组成。
它的pH范围为7-9，在分子生物学和生化实验中广泛使用。
配方：- 1 M Tris HCl，pH 7.4-9.0- 1 M Tris base，pH 7.0-9.23.MES缓冲液：MES缓冲液是一种针对中性pH值（5.5-6.7）的缓冲液，常用于细胞生物学和酶活性实验。
配方：-0.1MMES，pH5.5-6.74.HEPES缓冲液：HEPES缓冲液是一种适用于细胞培养和酶活性实验的缓冲液，其pH 范围为6.8-8.2配方：-0.1MHEPES，pH6.8-8.25.CAPS缓冲液：CAPS缓冲液是一种适用于生化实验的缓冲液，其pH范围为9.7-11.1配方：-0.1MCAPS，pH9.7-11.1这些是最常用的缓冲液配方及其缓冲范围，可以根据实验的需要选择合适的缓冲液。
需要注意的是，在配制缓冲液时应使用高纯度的化学品，并根据实验要求精确控制缓冲液的pH值。
此外，在实验过程中应注意缓冲液的保存和稳定性，以确保实验结果的准确性。
PBS缓冲液的配制方法
PBS缓冲液的配制方法在免疫组化和细胞培养中，常用到PBS缓冲液。
以下是我们实验室的配方，供大家参考：A液：0.1mol/L磷酸二氢钾将1.361g磷酸二氢钾(KH2PO4，分子量136.09)加入100ml双蒸水中。
B液：0.1mol/L磷酸氢二钠将1.78g酸酸氢二钠(Na2HPO4.2H2O，分子量177.99)加入100ml双蒸水中。
或者将3.58g酸酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O，分子量358.14)加入100ml双蒸水中。
pH值。
A液(ml)。
B液(ml)5.60.9.50.0.255.91.9.00.1.006.24.8.00.2.006.47.7.00.3.006.64.6.00.4.006.81.5.00.5.006.98.4.00.6.007.17.3.00.7.007.38.2.00.8.007.73.1.00.9.008.04.0.50.9.50免疫组化常用的PBS只包含Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠）、NaH2PO4•2H2O（磷酸二氢钠）和NaCl。
用于细胞培养的PBS需要含有氯化钾。
配方如下：取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L，浓度为0.01M。
PBS缓冲液的配方如下：取8g NaCl、0.2g KCl、3.63g Na2HPO4•12H2O和0.24gKH2PO4，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调节pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。
PBS缓冲液是实验室中最常用的缓冲液之一，但不同实验室的配方可能不同。
以下是我的总结：母液的配制：0.2M Na2HPO4：取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml水。
0.2M NaH2PO4：取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水。
不同浓度的PBS(pH=7.4)的配制：先配制0.2M PBS(pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4即可。
实验室常用溶液配制
实验室常用溶液配制实验室常用溶液的配置Amp+/Kan+:贮存液浓度为50mg/mL称取500mg于10mL超纯水中溶解，抽滤后1mL分装到离心管中，于-30℃冻存X-gal：贮存浓度为20mg/mL称取20mg X-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30℃中用锡箔纸包裹后避光保存，不需要过滤除菌IPTG：贮存浓度为0.84mol/L称取2g IPTG溶于8mL超纯水中，用水定容到10mL，用0.22um 的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中并于-30℃保存CaCl2：贮存浓度为1mol/L称取1.11g CaCl （或者CaCl:2H2O 1.4698g）溶于8mL超纯水中，定容到10mL，用0,22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中，并于-30℃保存LB培养基：胰蛋白胨（Tyrtone）10g/L酵母提取物（Yeast Extraction）5g/L氯化钠10/L根据经验用NaOH调节PH为7.2-7.6，然后高压蒸汽灭菌，注意及时从灭菌锅中取出无DNA酶的RNA酶：将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/L Tris-Cl（PH7.5）、15mmol/L NaCl 中，配成10mg/mL 的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃Bradford 贮存液95%乙醇100mL88%磷酸200mLG 250 0.35g室温下可储存，一般4℃Bradford 工作液Bradford贮存液30mL双蒸水425mL95%乙醇15mL88%磷酸30mL储存于4℃超声破碎缓冲液KCl 300 mM 22.37 gKH2PO450 mM 6.81 gEDTA 1 mM 0.292 g (EDTA-2Na-2H2O) 0.372 g定容至1 L，调pH至8.0包涵体洗涤液KCl 300 mM 22.37 gKH2PO4 50 mM 6.81 gEDTA 5 mM 1.46 g (EDTA-2Na-2H2O) 1.86 g尿素 2 M 120 gTriton X-100 0.5% 5 ml脱氧胆酸钠盐0.1% 1 g定容到1 L 调pH至8.0匀浆缓冲液（pH=7.5）成分：20mM HEPES 0.002mol=0.476g 加入0.952g1.5mM MgCl20.00015mol=0.0036g 加入0.0072g 0.2mM EDTA 0.00002mol=0.00584g 加入0.01168g 0.1M NaCl 0.01mol=0. 58g 加入1.16g0.5mM 钒酸钠0.00005mol=0.0092g 加入0.0184g 加100mL水进行溶解，NaOH调pH至7.50.2mM DTT 总体积500μL加入0.1μL0.4mM PMSF 总体积500μL加入20μL1%SDS 加入50μL 10% SDS其中DTT和PMSF匀浆之前加入，SDS匀浆之后离心之前加入DTT配成1M母液，溶于0.01M乙酸钠（pH=5.2）中，过滤除菌PMSF配成10mM母液，溶于异丙醇10*PBSNaCl 80.0669 gKCl 2.0129 gNa2HPO414.1960 gKH2PO4 2.4496 g水定容至1L，使用时稀释10倍，用NaOH调pH至7.4Start with 800 mL of distilled water to dissolve all salts. Adjust the pH to 7.4 with HCl. Add distilled water to a total volume of 1 liter. The resultant 1x PBS should have a final concentration of 10 mM PO43?, 137 mM NaCl, and 2.7 mM KClIf used in cell culturing, the solution can be dispensed into aliquots and sterilized by autoclaving (20 min, 121°C, liquid cycle). Sterilization may not be necessary depending on its use. PBS can be stored at room temperature or in the fridge. However, concentrated stock solutions may precipitate when cooled and should bekept at room temperature until precipitate has completely dissolved before use.转膜缓冲液（含有SDS）1L剂量甘氨酸 2.9gTris 5.8gSDS 0.37g甲醇200mL水800mL10×蛋白电泳缓冲液1L剂量Tris 碱(Mr 121.14) 30.2g甘氨酸(Mr 75.07) 188gSDS (Mr 288.38) 10 g加水至1L用时稀释10倍即可30％丙稀酰胺1L 剂量丙烯酰胺290gN,N’-亚甲基双丙稀酰胺10g溶于600ml蒸馏水中，加热至37℃溶解，补足体积至1L，过滤，且pH不大于7.01 M Tris-Cl（pH6.8）60.55 g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml1.5 M Tris-Cl（pH8.8）90.83g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml。
实验室常用染色液和试剂配方
实验室常用染色液和试剂配方染色液和试剂在实验室中被广泛使用，用于各种科学研究和实验。
它们可以用来染色细胞、分析化合物和反应产物、诊断疾病等。
下面是一些常用的染色液和试剂配方。
1. Hematoxylin-Eosin染色液：Hematoxylin-Eosin（HE）染色液是一种经典的组织染色方法，常用于病理学研究和诊断。
配方如下：- Hematoxylin染色液：将5 g hematoxylin溶解在100 mL乙醇中，加入2 mL盐酸和900 mL蒸馏水，最后调节pH值为5-6-酸性酒红染液：将0.5g酸性酒红溶解在100mL乙醇中。
- Eosin染色液：将0.5 g eosin溶解在100 mL乙醇中。
2. Giemsa染色液：Giemsa染色液用于染色细胞，特别是白细胞，常用于血液学和微生物学研究。
配方如下：- Giemsa染色液：将4 g Giemsa粉末溶解在1 L蒸馏水中。
可以加入2 mL甲醇增强染色效果。
3.厌氧培养试剂：用于厌氧条件下培养微生物的试剂。
配方如下：- Thioglycollate培养基：将11.5 g thioglycollate溶解在1 L蒸馏水中，加热至溶解。
- Dithiothreitol（DTT）溶液：将1 g DTT溶解在100 mL蒸馏水中，用10 mL离心管分装，-20℃保存。
4. Bradford试剂：用于蛋白质的浓度测定，常用于生物化学和分子生物学实验。
配方如下：- Coomassie Brilliant Blue G-250：将100 mg染料溶解在50 mL浓硫酸中，加热至溶解。
再用1 L蒸馏水稀释至30%浓度。
5. Gill's胶片显影试剂：用于胶片的显影，常用于分子生物学实验。
配方如下：-显影溶液A：将1.5g氯化钴和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.8-显影溶液B：将3g溴化钾和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.86.RIPA裂解缓冲液：用于细胞或组织的裂解，提取蛋白质或RNA，常用于生物化学和分子生物学实验。
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍 (2021-04-23 11:01:29)转载▼标签：分子生物学细胞生物学常用实用技术根本实验室技术生物学实验教育常用的分子生物学根本技术核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的根本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。
其根本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下〔适宜的温室度及离子强度等〕可按碱基互补原成双链。
杂交的双方是待测核酸序列及探针〔probe〕,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。
核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的DNA或RNA片段。
根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。
固相杂交固相杂交〔solid-phase hybridization〕是将变性的DNA固定于固体基质〔硝酸纤维素膜或尼龙滤膜〕上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。
斑步杂交〔dot hybridization〕是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后参加过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。
该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永别离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。
该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。
印迹杂交〔blotting hybridization〕Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反响，用放射性自显影或酶反响显色，检测特定大小分子的含量。
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red)2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
实验室常用溶液配制
0.25%胰酶-EDTA的配制细胞消化胰酶的配制对一般细胞0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2 称胰酶0.25g3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4 调PH7.45 仍在冰浴中6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。
低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2 ，增加消化效力实验常用溶液的配制1.革兰氏碘液：称碘化钾2g溶于100ml蒸馏水中，再加1g碘使其溶解，最后用蒸馏水稀释至300m1，盛于棕色瓶内，保存于暗冷处。
2.1.苯酚品红改良液（一）①A液：取3克碱性品红，溶于100ml 70％酒精中（此液可长期保存）。
②B液：取A液10m1，加入90ml 5％苯酚水溶液（一般在两周使用为好）。
③C液：取B液45m1，加入 6ml冰醋酸和6ml 37％甲醛。
④、苯酚品红改良液：取C液10m1，加入90ml45％冰醋酸和1克山梨醇。
2.2.苯酚品红改良液（二）：A液：碱性品红3g＋100ml 70％乙醇。
B液：A液10ml＋5％苯酚水溶液90m1。
C液：B液120ml＋冰醋酯12ml＋甲醛12ml。
D液：C液120ml＋45％冰醋酸480ml。
在D液中加1％山梨醇（600mlD液中加 6g山梨醇），此液配好后至少放4一5天方可使用，可保存几年。
3.1.甲基绿一哌罗宁混合染液（一）：①醋酸缓冲液（pH4.8）0．2mol.L-1醋酸（A.R）（取1.2ml加蒸馏水至100ml）4份0．2mol.L-1醋酸钠（A.R）（取2．72g加蒸馏水至100ml）6份。
实验室常用试剂和缓冲液配方
实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液种类繁多，根据实验需求，可以根据不同的试剂和缓冲液配方来满足实验要求。
以下是一些常见的试剂和缓冲液配方，以及其用途和制备方法。
1. 磷酸缓冲液（Phosphate buffer）磷酸缓冲液常用于生化和分子生物学实验中，用于控制溶液的pH值，适用于酸性和碱性条件下。
常见的配方包括0.1M磷酸盐缓冲液（pH7.2-7.4），需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。
2. 氯化钠溶液（Sodium chloride solution）氯化钠溶液是实验室中常见的缓冲液配方之一，通常用于调节生物样品的渗透压和离子浓度。
可以制备不同浓度的氯化钠溶液，常见的配方为0.9%氯化钠溶液（生理盐水）。
3. 碳酸氢盐缓冲液（Bicarbonate buffer）碳酸氢盐缓冲液常用于细胞培养和生理实验中，用于维持细胞培养基或实验液的pH稳定。
一种常见的配方为10mM碳酸氢盐缓冲液（pH7.2-7.4），需要用碳酸氢钠和盐酸来制备。
4. Tris缓冲液（Tris buffer）Tris缓冲液是一种常见的生化实验缓冲液，可以调节到不同的pH值。
常见的配方为50 mM Tris缓冲液（pH 7.4），需要用Tris（三氯甲烷磺酸，Tris-HCl）和盐酸来制备。
5. PBS缓冲液（Phosphate-buffered saline）PBS缓冲液是一种用于细胞和组织处理的常见缓冲液，具有稳定pH值和离子浓度的特点。
常见的配方为10mMPBS缓冲液（pH7.4），需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。
6. 甘氨酸缓冲液（Glycine buffer）甘氨酸缓冲液常用于蛋白质电泳实验中，用作电泳缓冲液和传递缓冲液。
常见的配方为25mM甘氨酸缓冲液（pH8.3），需要用甘氨酸和盐酸来制备。
7. BSA溶液（Bovine serum albumin solution）BSA溶液是实验室中常见的蛋白质标准物质，用于测定蛋白质浓度和酶活性等实验。
DMEM培养基配制方法
DMEM培养基配制方法DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种常用的细胞培养基，广泛应用于细胞培养、病毒繁殖和实验室研究中。
DMEM培养基含有多种必需和非必需氨基酸、糖类、维生素和盐类成分，提供了生长细胞所需的营养和环境。
以下是DMEM培养基的配制方法。
配制DMEM培养基的主要成分包括基础培养基、补充物和pH调节剂。
基础培养基：1.准备适量的无菌去离子水，用于稀释和配制DMEM培养基。
补充物：1.氨基酸：将提供的无菌氨基酸液中的每种氨基酸均匀混合，制得氨基酸混合液。
如有需要，可以根据实验需求添加特定的氨基酸。
2.糖类：将葡萄糖溶液与无菌去离子水混合，配制成葡萄糖溶液。
3.维生素：将提供的无菌维生素溶液与去离子水混合，制得维生素溶液。
4.盐类：将提供的无菌盐溶液与去离子水混合，制得盐溶液。
pH调节剂：1. 英文名Tris（Tris(hydroxymethyl)aminomethane）：是一种常用的pH缓冲剂。
取适量的Tris溶液。
2. 英文名Sodium bicarbonate：是一种重要的pH调节剂，可提供细胞培养中所需的碱性环境。
取适量的Sodium bicarbonate溶液。
先准备好所需的试剂和仪器，并保证它们是无菌的。
配制过程如下：1.取适量的基础培养基（DMEM），移至无菌培养瓶中。
2.依次向DMEM基础培养基中加入补充物。
首先加入氨基酸混合液，根据提供的比例将其加入培养基中，充分混合。
然后加入葡萄糖溶液、维生素溶液和盐溶液，依次混合均匀。
3. 加入适量的Tris溶液，用于调节pH值。
根据实验需求和DMEM配方，逐渐加入Tris溶液，同时用pH计测量pH值，直到达到所需的pH范围（通常为7.2-7.4）。
4. 加入适量的无菌Sodium bicarbonate溶液，用于调节和维持培养基的碱性环境。
根据实验需求和DMEM配方，逐渐加入Sodium bicarbonate溶液，充分混合。
分子实验室、细胞实验室常用配方
（一）WB相关试剂及常用缓冲液●●10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度）AP粉末 1gddH20 10ml●10％SDS（十二烷基硫酸钠）：SDS粉末 10gddH20定容到 100ml注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡●6X蛋白质sample bufferTris-HCl(1M,pH6.8) 30mLSDS 10g甘油 30mLDTT（154.25） 9.3g溴酚蓝 0.06gdd H20 定容至100mL●10XPBS缓冲液的配制：NaCl 80gKCl 2gNa2HPO4 14.4g（十二水合36g）KH2PO40 2.4g加800 mLddH2O,根据开始的pH用NaOH或HCL调pH到7.4，调好pH再定容到1升。
配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度●PBST(1X)PBS(1X) 500mlTween 20 500μl●50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液配制1L溶液各成分的用量Tris粉末 242g冰醋酸 57.1mlNa2EDTA·2H2O 37.2gddH20定容到 1L●封闭液脱脂奶粉 5g叠氮钠 0.02g(现配现用时可不加)PBS 定容到100mL●脱色液：(室温)甲醇 165mL乙酸 50 mLH20 785 mLddH20 定容至1L●TBST(1X)TBS(1X) 500mlTween 20 500μl●Stripping buffer(可反复利用)温老师组配方10%SDS 10mlΒ-巯基乙醇 350 lTris-HCI（pH6.8） 6.25ml（6.06加到50mL水）加入ddH2O 至50mL●Stripping buffer(可反复利用)郭老师给配方甘氨酸 15gSDS 1gTween20 1mldd ddH2O 1L作这个buffer洗20min，然后用PBST洗3次，再重新封闭孵抗体。
（二）细胞和细菌培养基、抗生素●SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 20g酵母提取物 5g氯化钠 0.5g1mol/L氯化钾 2.5ml用水补足体积到1L。
生物实验室常用试剂的配制
化能力，要现配现用。 4.甲醛溶液 它常用来杀灭细菌、病毒。通常以2～5%溶液消 毒器具。本品又可作实验室熏蒸消毒。 5.漂白粉 本品含有效氯为25～30%，有强杀菌力，能消毒、 防腐、防臭和溶解坏死组织，但作用时间短。 十二、麻醉剂 它可分挥发性 (如乙醚)和非挥发性 (如氨基甲酸 乙酷)两类。前者作用时间短麻醉深度容易掌握，动物麻醉后也 容易苏醒；后者作用的时间比较长，用法简单，但麻醉后苏醒 较慢，不大容易掌握麻醉的深浅程度。在中学生物实验申，使 用较多的是乙醚和氨基甲酸乙酷两种。 1.乙醚 无色液体，味灼烈，有强挥发性和易燃性。乙醚能使 中枢神经系统发生暂时性机能麻痹。乙醚吸入法是最常用的麻 醉方法。 2.氨基甲酸乙脂 它是无色的柱状结晶或白色颗粒粉末，其水 溶液是比较温和的麻醉药，安全度大，多数实验动物都可使用， 更适用于小动物。
生物实验室常用试剂的配制
一、检验酸碱性的试剂 1.酚酞试液 取0.1酚酞，溶解在100mL60~90%的乙醇溶液里， 装在试剂瓶内密闭保存。酚酞试液在碱性溶液中呈红色。 2.麝香草酚酞(百里酚酞)试液 把0.1g白色的麝香草酚酞溶解在 100mL90%乙醇里制得。当pH值由9.4~10.6时，颜色为无色至 蓝色。 3.溴甲酚紫指示剂 将0.1g溴甲酚溶于9.25mL的0.02mol/L氢氧 化钠溶液中，加蒸馏水稀释至250mL制得。当pH值由6.2~6.8 时，颜色由淡黄色变为淡紫色，变色点在pH6.7。 二、定性鉴定某些物质的试剂 1.鉴定葡萄糖的试剂 (1)班氏(Benedict)试剂 a.在600mL蒸馏水中溶解173g柠檬酸钠和100g无水碳பைடு நூலகம்钠， 冷却后稀释到850mL。
五、干燥剂 干燥剂对游离水往往具有化学结合的作用，物理吸附作用或 两种作用兼有。选用干燥剂应注意其本身和被干燥的物质有无 化学作用，以免引起被干燥物质的破坏或吸收。常用干燥有: 1、氧化钙 (cao) 白色固体，碱性氧化物，可干燥氧、氨、 氨、胺等气体，不可用来干燥酸性气体，如二氧化碳、氯化氢、 硫化氢。 2、碱石灰 白色固体，呈碱性。它由氧化钙粉末加入氢氧化 钠溶液，经充分混和后置铁皿中于200～250℃下干燥而成。可 以干燥氨、胺等气体。常用于避免水或二氧化碳进入反应系统 的装置中。 3、硅胶 半透明，内表面很大的多孔性固体，对水有强烈的 吸附作用。可干燥氧、氮、氨、胺等气体。常用于干燥器中。 含有钴盐的硅胶，叫变色硅胶，干燥时呈蓝色，吸水后呈粉红 色。硅胶吸附水后可以在120℃烘干再用。 其他的干燥剂还有五氧化二磷、氯化钙、硫酸钙、氧化铝、 氧化钡、硫酸镁、硫酸钠、碳酸钾和高氯酸镁等。
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法实验室中常用的培养基有很多种，包括通用培养基、选择性培养基、富集培养基等。
下面以常用的LB培养基和M9培养基为例，介绍它们的配制方法。
1. LB培养基（Luria-Bertani agar）LB培养基是一种通用培养基，适用于许多不同类型的细菌。
它由三种主要成分组成：蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配方如下：-蛋白胨：10克-酵母提取物：5克-NaCl：10克-精制水：1000毫升步骤如下：1)在一个大容量烧杯中加入蛋白胨、酵母提取物和NaCl。
2)加入适量的精制水，搅拌溶解。
3) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。
4)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。
2.M9培养基M9培养基是一种无机盐培养基，常用于细菌的生长和培养。
它的配方相对简单，由无机盐、葡萄糖和维生素B1组成。
配方如下：-Na2HPO4：6克-KH2PO4：3克-NaCl：0.5克-NH4Cl：1克-葡萄糖：0.4克-维生素B1：0.1克-精制水：1000毫升步骤如下：1)在一个大容量烧杯中加入Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和NH4Cl。
2)加入一部分的精制水，搅拌溶解。
3)加入葡萄糖和维生素B1，搅拌均匀。
4) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。
5)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。
以上是LB培养基和M9培养基的配制方法的简要介绍。
当然，实验室中还有很多其他种类的培养基，它们的配制方法也各有不同，需要根据具体的实验目的和细菌类型进行调整。
在培养基配制过程中，应当注意严格按照配方比例配制，保持清洁卫生，避免污染，并注意高压灭菌的操作安全。
实验室常用溶液配方
常用溶液配方（细胞培养）PBS配制一、PBS配方配1L 25倍PBSNaCl 200gNa2HPO4-2H2O 36g 最难溶最后加或Na2HPO4-12H2O 72.4gNaH2PO4-2H2O 6.5g 或NaH2PO4 5g搅拌，1000ml定容，调PH值至7.2—7.4（细胞培养）1倍PBS配方NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.44g 或者Na2HPO4-12H2O 3.57gKH2PO4 0.24g加水定容至1L，调PH值7.2-7.4（细胞培养）10倍PBS配方NaCl 80gKCl 2gNa2HPO4 14.4g 或者Na2HPO4-12H2O 35.7gKH2PO4 2.4g（组化用）PBS配方配1L 10 倍PBSNaHPO4 10.9g 或Na2HPO4-12H2O 27.50gNaCl 90gNaH2PO4 3.2g 或NaH2PO4-2H2O 4.16g搅拌，1000ml定容，调PH至7.2，分装，常温保存配1倍PBS（0.01PBS）1.取50ml 10倍PBS，倒入容量瓶2.定容至500ml，摇匀，分装二、胰酶的配制：0.25%胰酶1倍PBS 1000ml胰酶粉（trypsin）2.5gEDTA 0.4g搅拌后4摄氏度过夜，然后用NaOH调PH值至7.2-7.4；用0.22um滤器（绿色滤器）过滤分装保存。
三、培养基配制L-DMEM配制1L培养液：L-DMEM 10gNaHCO3 2.2g双抗1%（11ml）胎牛血清110ml注：国产胎牛血清需要56℃，30min灭活加完混合后，用0.22um的滤器过滤除菌，4摄氏度保存。
低糖冻存液的保存冻存液：L—DMEM：血清：DMSO=6：3：1注：（DMSO要缓慢加入，以防散热不均，下面要垫上冰块，助散热。
配好后用0.22微米滤器过滤，分装，4℃保存1640培养液配制1L体系：1640干粉10.3g/LNaHCO3 2g双抗1%100倍谷氨酰胺10mlβ-巯基乙醇3.5 uL胎牛血清10%（灭活）0.22微米滤器过滤，4℃保存。
实验室常用溶液配制
实验室常用溶液的配置Amp+/Kan+:贮存液浓度为50mg/mL称取500mg于10mL超纯水中溶解，抽滤后1mL分装到离心管中，于-30℃冻存X-gal：贮存浓度为20mg/mL称取20mg X-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30℃中用锡箔纸包裹后避光保存，不需要过滤除菌IPTG：贮存浓度为0.84mol/L称取2g IPTG溶于8mL超纯水中，用水定容到10mL，用0.22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中并于-30℃保存CaCl2：贮存浓度为1mol/L称取1.11g CaCl （或者CaCl:2H2O 1.4698g）溶于8mL超纯水中，定容到10mL，用0,22um的一次性滤过器过滤除菌，1mL分装到离心管中，并于-30℃保存LB培养基：胰蛋白胨（Tyrtone）10g/L酵母提取物（Yeast Extraction）5g/L氯化钠10/L根据经验用NaOH调节PH为7.2-7.6，然后高压蒸汽灭菌，注意及时从灭菌锅中取出无DNA酶的RNA酶：将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/L Tris-Cl（PH7.5）、15mmol/L NaCl 中，配成10mg/mL 的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃Bradford 贮存液95%乙醇100mL88%磷酸200mLG 250 0.35g室温下可储存，一般4℃Bradford 工作液Bradford贮存液30mL双蒸水425mL95%乙醇15mL88%磷酸30mL储存于4℃超声破碎缓冲液KCl 300 mM 22.37 gKH2PO450 mM 6.81 gEDTA 1 mM 0.292 g (EDTA-2Na-2H2O) 0.372 g定容至1 L，调pH至8.0包涵体洗涤液KCl 300 mM 22.37 gKH2PO4 50 mM 6.81 gEDTA 5 mM 1.46 g (EDTA-2Na-2H2O) 1.86 g尿素 2 M 120 gTriton X-100 0.5% 5 ml脱氧胆酸钠盐0.1% 1 g定容到1 L 调pH至8.0匀浆缓冲液（pH=7.5）成分：20mM HEPES 0.002mol=0.476g 加入0.952g1.5mM MgCl20.00015mol=0.0036g 加入0.0072g0.2mM EDTA 0.00002mol=0.00584g 加入0.01168g0.1M NaCl 0.01mol=0. 58g 加入1.16g0.5mM 钒酸钠0.00005mol=0.0092g 加入0.0184g加100mL水进行溶解，NaOH调pH至7.50.2mM DTT 总体积500μL加入0.1μL0.4mM PMSF 总体积500μL加入20μL1%SDS 加入50μL 10% SDS其中DTT和PMSF匀浆之前加入，SDS匀浆之后离心之前加入DTT配成1M母液，溶于0.01M乙酸钠（pH=5.2）中，过滤除菌PMSF配成10mM母液，溶于异丙醇10*PBSNaCl 80.0669 gKCl 2.0129 gNa2HPO414.1960 gKH2PO4 2.4496 g水定容至1L，使用时稀释10倍，用NaOH调pH至7.4Start with 800 mL of distilled water to dissolve all salts. Adjust the pH to 7.4 with HCl. Add distilled water to a total volume of 1 liter. The resultant 1x PBS should have a final concentration of 10 mM PO43−, 137 mM NaCl, and 2.7 mM KClIf used in cell culturing, the solution can be dispensed into aliquots and sterilized by autoclaving (20 min, 121°C, liquid cycle). Sterilization may not be necessary depending on its use. PBS can be stored at room temperature or in the fridge. However, concentrated stock solutions may precipitate when cooled and should bekept at room temperature until precipitate has completely dissolved before use.转膜缓冲液（含有SDS）1L剂量甘氨酸 2.9gTris 5.8gSDS 0.37g甲醇200mL水800mL10×蛋白电泳缓冲液1L剂量Tris 碱(Mr 121.14) 30.2g甘氨酸(Mr 75.07) 188gSDS (Mr 288.38) 10 g加水至1L用时稀释10倍即可30％丙稀酰胺1L 剂量丙烯酰胺290gN,N’-亚甲基双丙稀酰胺10g溶于600ml蒸馏水中，加热至37℃溶解，补足体积至1L，过滤，且pH不大于7.01 M Tris-Cl（pH6.8）60.55 g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml1.5 M Tris-Cl（pH8.8）90.83g Tris 碱溶解于400ml 蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml。
常用分子生物学和细胞生物学实验技能技术总结介绍
精心整理常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍(2011-04-2311:01:29)转载▼标签：分子生物学细胞生物学常用实用技术基本实验室技术生物学实验教育常用的分子生物学基本技术核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。
其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。
杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe ）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA 和细胞总RNA 的已知 固相杂交Southern DNA 片段Northern 复杂的盐酸核生物（如人），则因工作量太大，表达的序列所占百分比较低（仅5％左右），价值不大。
cDNA 微点隈杂交（cDNAmicroarrayhybridization ）是指将cDNA 克隆或cDNA 的PCR 产物以高度的列阵形式排布并结合于固相支持物上（如：尼龙膜或活化的载玻片）以微点阵，然后用混合的不同DNA 探针与微点阵上的DNA 进行杂交。
再利用荧光、化学发光、共聚焦显微镜等技术扫描微点阵上的杂交信息。
它比差异杂交技术的效率高、速度快、成本低，适用于大规模的分析。
已成商品问世。
其缺点是无法克服保守的同源序列及重序对杂交信息的干扰。
寡核苷酸微点隈杂交（oligonucleotidemicroarrayhybridization ）是在特殊的固相支持物上原位合成寡核苷酸，使它共价结合于支持物表面，与平均长度为20-50nt 的混合RNA 或cDNA 探针进行杂交，以提高杂交的特异性和灵敏度。
应用共聚焦显微镜可检测跨越三个数量级的杂交信息。
适用于低丰度mRNA的检测，以区分基因家族不同成员的差异表达特征，或鉴定同一转录在不同组织和细胞中的选择性剪接。
实验室常用试剂配制
细胞培养PBS配方PBS即磷酸盐缓冲生理盐水，都是含有H2PO4-、HPO42- 缓冲体系和NaCl，用于调节渗透压，达到与人体相当的水平，分为含钾离子和不含钾离子两种。
1、不含钾离子的PBS配方（由NaCl，Na2HPO4和NaH2PO4三种成分组成，用于其它实验缓冲和稀释用）母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB（pH=7.4）的配制：先配 0.2M PB （pH=7.4，100ml）：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4，即可。
然后只需将0.2M PB （pH=7.4）按相应比例适当稀释即可，如：0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。
配好后加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。
* 其他各种另 PH值的 0.2M PB（100ml）配方：pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml）5.7 93.56.55.8 92 85.9 90 106.0 87.7 12.36.1 85 156.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51 496.9 45 557.0 38 627.1 33 677.2 28 727.3 23 777.4 19 817.5 16 847.6 13 877.7 10.5 0.57.8 8.5 91.57.9 7 938.0 5.3 94.7 .2、含钾离子的PBS配方（由NaCl，KCl，Na2HPO4和KH2PO4四种成分组成，一般用于组织培养）0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法：(免疫组化常用)称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可，高压灭菌。
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏（Loeffler）美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue）0。
3 克95%酒精毫升B液:氢氧化钾(KOH）0。
01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏（Ziehl）石炭酸复红染色液A液:碱性复红(Basic fuchsin）0。
3 克95%酒精10.O 毫升B液:石炭酸(苯酚）5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95％酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订）A液：结晶紫（Crystai violet) 2.5 克95％酒精25.0 毫升B液：草酸铵（NH4）2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95％酒精,使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI）碘液(革氏鉴别染色用）碘1。
0克碘化钾2。
0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液（革氏鉴别染色用）番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green）5。
0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95％酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液（英膜染色用）黑素（Nigrosin）10。
0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛）0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红（Congo red）2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液（放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20。
0毫升乳酸(比重l.21）10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10。
0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
各种缓冲液配方范文
各种缓冲液配方范文缓冲液是一种在化学、生物学和其他实验室应用中常用的溶液，用于稳定试剂的pH值，以保持实验条件的稳定性。
下面列举了几种常见的缓冲液配方。
1. Tris缓冲液Tris缓冲液是一种非常常见的缓冲液，常用于酶反应和核酸电泳。
它的配方如下：- 200 mM Tris-相应量的盐酸（pH值调节）2.PBS缓冲液PBS缓冲液是一种用于细胞培养和免疫试剂的常用缓冲液。
它的配方参考如下：-137mMNaCl-2.7mMKCl-10mMNa2HPO4-2mMKH2PO4-(pH值调节)3.HEPES缓冲液HEPES缓冲液是一种用于细胞培养和生化实验的常用缓冲液。
它的配方如下：-25mMHEPES-115mMNaCl-5mMKCl-1mMMgCl2-1mMCaCl2-(pH值调节)4.MES缓冲液MES缓冲液是一种用于生化实验和电泳的常用缓冲液。
它的配方如下：-50mMMES- 50 mM Tris-1mMEDTA-相应量的盐酸（pH值调节）5.ACES缓冲液ACES缓冲液是一种用于生化实验和细胞培养的常用缓冲液。
它的配方如下：-10mMACES- 5 mM Tris-10mMCaCl2-(pH值调节)6.TE缓冲液TE缓冲液是一种用于DNA和RNA实验的常用缓冲液。
它的配方如下：- 10 mM Tris-1mMEDTA-(pH值调节)以上列举的是一些常见的缓冲液配方，具体的配方和浓度可能会因实验目的和样品类型而有所不同。
在制备缓冲液时，应该按照实验要求仔细调节pH值，并使用高质量的试剂和纯水来制备缓冲液。
此外，一些缓冲液可能需要在特定的温度下保存或使用，因此在实验之前要对缓冲液的相关要求进行仔细了解和准备。
实验室常用溶液配制
实验室常用溶液配制0.25%胰酶-EDTA的配制细胞消化胰酶的配制对一般细胞0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O /2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2 称胰酶0.25g3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4 调PH7.45 仍在冰浴中6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。
低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2 ，增加消化效力实验常用溶液的配制1.革兰氏碘液：称碘化钾2g溶于100ml蒸馏水中，再加1g碘使其溶解，最后用蒸馏水稀释至300m1，盛于棕色瓶内，保存于暗冷处。
2.1.苯酚品红改良液（一）①A液：取3克碱性品红，溶于100ml 70％酒精中（此液可长期保存）。
②B液：取A液10m1，加入90ml 5％苯酚水溶液（一般在两周使用为好）。
③C液：取B液45m1，加入 6ml冰醋酸和6ml 37％甲醛。
④、苯酚品红改良液：取C液10m1，加入90ml45％冰醋酸和1克山梨醇。
2.2.苯酚品红改良液（二）：A液：碱性品红3g＋100ml 70％乙醇。
B液：A液10ml＋5％苯酚水溶液90m1。
C液：B液120ml＋冰醋酯12ml＋甲醛12ml。
D液：C液120ml＋45％冰醋酸480ml。
在D液中加1％山梨醇（600mlD液中加 6g山梨醇），此液配好后至少放4一5天方可使用，可保存几年。
3.1.甲基绿一哌罗宁混合染液（一）：①醋酸缓冲液（pH4.8）0．2mol.L-1醋酸（A.R）（取1.2ml加蒸馏水至100ml）4份0．2mol.L-1醋酸钠（A.R）（取2．72g加蒸馏水至100ml）6份。
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffl er)美蓝染色液A液：美蓝(Methyl ene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basicfuchsi n) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclke r改订)A液：结晶紫(Crysta i violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘 1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safran in O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malach ite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigros in) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congored)2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
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分子实验室、细胞实验室常用配方————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:ﻩ(一)WB相关试剂及常用缓冲液●RIＰA（１０0mI）(最后要调pH为７.4）终浓度分子量称取50mM 1２1.14 60５．7mg Ｔｒｉs-HCI（pH７.4)NaCI １50 ｍＭ５8.4４87６.６ｍgTritｏnＸ-1０0 1% 1mI脱氧胆酸钠1％１gEDTA １mM 292.24８２９.224８mｇSＤS 0．1％０.1gＰMSF（１00ｍM) 使用时每1ｍl加１０ｕl●10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度)AP粉末 1ｇddＨ2０ 10mｌ●1０%SDS(十二烷基硫酸钠）：SＤＳ粉末１0gｄdH20定容到 100ml注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡●6X蛋白质sample bufferTris-HCl(１M,ｐH6.８) 30ｍLＳＤＳ10ｇ甘油 30ｍLDTT（1５4.２5）９.3g溴酚蓝０．０6gdd H2０定容至10０mＬ●10XPBＳ缓冲液的配制：ＮaCｌ 80gKCl 2gＮa2ＨPＯ4 14．4ｇ(十二水合36g）KH２PO40 2.４g加800 mLddH2O,根据开始的pH用ＮaOH或ＨCL调pH到７.4,调好pH再定容到1升。
配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度●PBSＴ(1X)ＰBS(1X） 500mlTweeｎ 2０５０0μｌ●5０×Tris－乙酸（TＡE）缓冲液配制1Ｌ溶液各成分的用量Ｔris粉末 2４2ｇ冰醋酸 57.１ｍlNａ2EDTA·2H2O 3７.２gddH20定容到 1Ｌ●封闭液脱脂奶粉 5g叠氮钠 0．02g(现配现用时可不加)PBS 定容到1０0mL●染色液(室温)１L 500ml 200ml 100ｍl甲醇5０0ｍＬ25０100 50乙酸１０0 mL 5０20 10R2５0考马斯亮蓝0.5g 0.2５g ０.1 g ０．05 gH2０4０0 mL 20０8０40●脱色液：(室温)甲醇 165mＬ乙酸５0 ｍLH２０785 mＬ●8.8Buffer:（调ｐH至8．８，4度保存)1０0ml 200ｍlTris 18．17ｇ3６.３4g1０％SDS 4mＬ８mlddH２０定容至100mL 200ml● 6.８ Bufｆｅr: (调pH至６.8,４度保存)10０ｍl 200ｍlTris 6．０6g 12.１2g10％SDS 4mL 8mlｄdH20 定容至１00mＬ20０ml●转移缓冲液(1０×trａns bufｆeｒ）:（常温保存）1L ２L甘氨酸1４4g 288ｇTrｉs粉末30．3ｇ60.6ｄdＨ20 定容至１L 定容至2L使用时甲醇 200mＬ转移缓冲液（１0×）１０0 mＬｄdＨ２0 700 mL●电泳缓冲液(1０×）（ｒunｎing bｕffeｒ）:(常温保存）１L ２L甘氨酸144g 28８gTris粉末30.3g 60.6SDS 10g 2０gddH20 定容至1L 定容至2L●10Х)ＴＢS: （常温保存)NａCl 80.0ｇTｒis粉末 24．2gddH20 定容至１L●ＴBＳT(１Ｘ)TＢS(1X) 5０0ｍｌTweeｎ２0 ５0０μl●Stｒippiｎg ｂuffer(可反复利用)温老师组配方10％SDS 10ｍlΒ-巯基乙醇35０ lTriｓ－ＨCI（pH６.８） 6.２5mｌ（６.0６加到50mL水)加入ddＨ２Ｏ至5０mL●Stｒiｐping buffer（可反复利用)郭老师给配方甘氨酸15gＳDＳ1ｇTｗeeｎ20 １mlｄd ddH2O 1L作这个buffer洗20min，然后用PBST洗3次，再重新封闭孵抗体。
(二)细胞和细菌培养基、抗生素●LB培养基(当天灭菌后放4度存放)100０ml 500mｌ３０0 mｌ2５0 ｍl 200 ml 氯化钠10g 5ｇ３g 2．5g 2g蛋白胨10ｇ5g ３g ２．5g 2g酵母提取物5g 2.5g 1.5ｇ 1.25ｇ1gdｄH20 定容至１000ｍl 定容至500ml 定容至３0０mｌ定容至２50ｍl定容至２00ml●LB平板：(当天灭菌后倒平板,放4度存放）1000ｍl 50０ml ３０0 ml 250 ml ２00 ｍl 氯化钠10g 5g 3g ２．5g 2g蛋白胨１０ｇ5ｇ3ｇ 2.5g 2g酵母提取物5g 2．5g 1.5g 1.25g １g琼脂1５g 7．５ｇ４.５g 3．725g 3gddＨ2０定容至1000mｌ定容至500ml 定容至300ｍl定容至２50ml定容至2０0ｍl●ＳＯB培养基将下列组分溶解在0.９Ｌ水中：ﻫ蛋白胨2０gﻫ酵母提取物 5gﻫ氯化钠 0.5g1mol／L氯化钾 2．5ｍl用水补足体积到1L。
分成１00ml的小份,高压灭菌。
培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1mｌ灭过菌的1moｌ/Ｌ氯化镁●1M IＰTＧ（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为２３8．3）)溶液ＩＰTG粉末2．383gdｄH20 定容到10ｍl用0．22μm滤器过滤除菌,分装成1ｍl小份贮存于-20℃。
●Amｐ+（50mg/ml)Amp+粉末50ｍｇddＨ20 1ml注意：分装保存于－２０度,使用时按10０0:1的比例用●Kana＋（５0mｇ/ml)Kana +粉末 50mgddH２0 １mｌ注意:分装保存于-20度，使用时按１000:１的比例用●胰酶:抽滤,长期保存可放负20度粉末 0．25gEDＴＡ0.02-0.03g１XPＢS 100ｍl●高糖DＭＥM培养基:抽滤保存在4度粉末全部碳酸氢钠３.7gddH２0 定容到1Ｌ（用盐酸调pH值到：7.２-7．4)●Ｇ418母液(１00ｍg/ml）用０.22μM滤菌，分装存于-20度粉末 1gPＢS １0ml●zeocin母液（100mｇ/ml）用０.22μＭ滤菌,分装存于-２０度粉末1gｄｄH２Ｏ１0ｍl●Blaｓticidiｎ(１００mg／ml）用0.22μＭ滤菌,分装存于－２0度粉末０．3gPBS 1０ml(三）利用His－tag从细菌中纯化蛋白配方透析液配方终浓度母液浓度量取体积２0mM １Ｍ20ml Ｔrｉs-ＨＣl(pＨ:8．0)NaＣl 20mM 4Ｍ 5 mlMｇCl22mＭ１M 2 ｍｌＤTT 1mM１M １ｍl甘油50% 500ｍlddHO472 ml2●超声裂解液(ｌyｓｉｓbuffｅr):2011年做蛋白纯化时用Nａ3PＯ4(１64） 8.2ｇ(５0ｍM)NａCl （58.5）１7.55ｇ(30０mM)加8０0 mL dｄH2O溶解，用2M NaOH或者２ＭHCL 调pＨ到8.0,再定容到1升。
配好后用高压蒸气灭菌后常温保存。
●洗涤液(wａsh buffer):20１1年做蛋白纯化时用Na3PO４８.２g(5０mM)ＮａCl １7.55g(300mM）咪唑 0．６８１ｇ（1０mＭ)加8０0 mLdｄＨ2O溶解,根据开始的pＨ用2M NａＯH或者２M HCL调pH到８.0,调好pH 再定容到1升●洗脱液（elutiｏn bufｆer)：2０１１年做蛋白纯化时用Ｎａ3PO4 ８.2ｇ(5０mM)ＮaＣl 1７.5５g（３０0mM）咪唑1７.02５g(25０mＭ)加80０ｍLdｄH2O溶解，根据开始的pH用2ＭNaOH或者2ＭHCL调ｐH到8．0,调好pH再定容到１升)PrepEase®Ｈistｉｄｉｎe-Taggeｄ PｒoｔeiｎＰｕｒificaｔion Kits - Hｉgh Spｅci ficiｔy●８Ｘ LEＷ Bｕffｅr (Lyｓis-Equiｌiｂrｉｕｍ-Waｓｈ Buffer）：（室温保存）pH:８.０NaH2PＯ４.2H2O 6.240４g(4０0mM）NaCl 14.0２56ｇ(2．4M）dＨ2０定容到100 ｍL (调节ｐＨ：8．0）●4X Eｌutiｏn Ｂｕfｆer:(室温保存)ｐＨ:８.0NaH2PＯ4．2H２Ｏ 3.1202 g（２00ｍM)NａC l7.0128g（１.2M）咪唑６．81 g(1M）dH２０定容到100 mL(调节pH:8.0）●ＥＤＴA:（1０0mM)EDTA 2.92３ gdH２0 定容到100 mL●NiSO4:NiSO4 .6H2Ｏ２.6２8５g(１00mＭ）ｄH20 定容到100 mL●溶菌酶：（使用时1ml溶液加入2０uｌ)粉末 50ｍｇdｄH20 1ｍL(四)利用His-ｔag从细胞中富集蛋白配方●磷酸钠缓冲液按图示比例混合0．2 M Nａ2HＰO４溶液和０.2 MNaＨ２PO４溶液,得到两种缓冲液，pＨ分别调节成为8.0和６．3.pH ０.2 M Na2ＨPO4体积/mL 0.2 MNaH2PO4体积/mＬ6.3 11.２5 38.75８.0 47.35 2.65●细胞裂解液（最好新鲜配制,当天使用)Cｅllｌysis ｂuffer终浓度配１０mｌ配１5ml 配20ml 配40ml 配30ml盐酸胍（g) 6M 5．7318 8.5977 １1.46３６2２．927２17．１９５4Tｒis(ｇ) 10 mM ０．01２1140.0181７1 0.024228 0.048４56 0.036３42ｐH 8.0ｂuffer(mｌ) 100 mＭ 5 ７.5 10 20 15 (注意胍盐是有害试剂注意这里用的磷酸钠缓冲液pＨ必须8.0!）(注意二价阳离子螯合剂，还原剂,会导致镍从树脂上的洗脱)本实验的所有试剂中EDTA浓度不得超过1 mM,DTT浓度不超过5 ｍM，巯基乙醇浓度不超过20 mM。
●pＨ8.0的洗脱溶液（最好新鲜配制，当天使用）pH 8.0的wasｈbuffer 终浓度配1０0ｍl 配５0ｍｌ配20ml 配4０ml 配30mlUreａ尿素(g）8Ｍ48.04８24．02４9.6０96 1９.21９２1４.4144Ｔrｉs(g) 10 mM 0.１2114 0．06０57 0.０２42280.048456 0.036３42ｐＨ8.０Na３PO4buｆfer(ml)100 mM 50 25 10 20 15Ｔrｉton X-10０(ul) ０.１%(ｖol/vol)100 50 ２０40 3０b-mercａｐtoeｔhanol．巯基乙醇(ul)5 mM ３5 17．５７14 10．５●ｐＨ 6.3 ｗash buffｅr (现配现用)pH6．3的wａsｈｂuffer 终浓度100ml 配50ml 配30ｍl pＨ６.3的ｗasｈbｕｆｆｅrＵrea尿素(g）8Ｍ４8.048 ２４.024 １4．４144Urea尿素(g)Tris(g) 10 mM ０.12１１4 ０．06０570.036342 Ｔｒis(g）pH6．３Nａ３ＰO４ｂuffer(ml）100mM50 2５1５pH6.3Nａ3ＰO４buffeｒ(ml)TritｏｎX-100(ul）0.1％(vol/voｌ)１00 50 ３0 Triｔｏn X-10０（uｌ)注意使用pＨ为6.３的磷酸缓冲液,而且pH不得低于6,pH要精确配制,非常重要！Histｉｄine 的质子化，会导致镍树脂上的解离,所以要精确测定pＨ,并且以ｐH试纸校对，而不是仅仅依靠pH仪器。