OVA诱导小鼠过敏性哮喘模型的建立

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BALB／c小鼠阴虚型过敏性哮喘模型的建立与评价

BALB／c小鼠阴虚型过敏性哮喘模型的建立与评价目的建立BALB/c小鼠阴虚型过敏性哮喘模型并进行评价。

方法采用腹腔注射与皮下注射卵清白蛋白（OV A）致敏、雾化吸入OV A激发的方法复制过敏性哮喘BALB/c小鼠模型，激发后期合并灌胃甲状腺素复制阴虚型过敏性哮喘模型。

在监测饮食、饮水及体质量的基础上，对支气管激发过程中哮喘行为学、肺功能及肺组织病理学等哮喘相关指标进行观测，同时对cAMP、cGMP及肺液清除功能等阴虚证相关指标进行考察。

结果阴虚哮喘模型组小鼠出现明显的哮喘症状，哮喘行为学综合评分明显升高，吸气峰流量、呼气峰流量、潮气量明显下降，呼吸频率增加，肺组织病理学可见明显的炎症反应；同时，阴虚哮喘模型组小鼠进食与饮水量明显增加，而体质量增长缓慢，肺组织湿重/干重比值下降，血清cAMP及cAMP/cGMP升高，cGMP下降，显示小鼠处于阴虚而阳相对亢盛的状态。

结论在OV A致敏、激发的基础上给予甲状腺素，可成功复制BALB/c 小鼠阴虚型过敏性哮喘模型。

Abstract：Objective To establish and evaluate a BALB/c mouse model of anaphylactic asthma with yin-deficiency syndrome. Methods Ovalbumin （OV A）was injected to sensitize and was inhaled to stimulate to replicate the BALB/c mouse model of anaphylactic asthma. Thyroxin was used for gavage during late stimulation to replicate the BALB/c mouse model of asthma with yin-deficiency syndrome. On the basis of monitoring food and water intake and body weight，asthma related indexes，such as asthmatic behaviors，respiratory function，lung histopathology，were detected，and yin-deficiency syndrome related indexes，such as cAMP and cGMP，and pulmonary fluid clearance were examined. Results The BALB/c mouse model of asthma with yin-deficiency syndrome showed obvious asthma symptoms；comprehensive scores of asthmatic behaviors increased significantly；inhaling peak flow，exsufflation peak flow，and tidal volume decreased significantly；lung tissue histopathology showed obvious inflammatory response. Meanwhile，food and water intake of BALB/c mouse model of asthma with yin-deficiency syndrome increased significantly；body weight increased slowly；wet/dry ratio of lung tissue decreased；cAMP and cAMP/cGMP increased，while cGMP decreased，which showed that the mice were in the condition of yin-deficiency and yang-excess. Conclusion Combining thyroxin at the basis of sensitivity induced by OV A is a good pattern to successfully replicate the BALB/c mouse model of anaphylactic asthma with yin-deficiency syndrome.Key words：anaphylactic asthma with yin-deficiency syndrome；animal model；BALB/c mice近年来，随着环境污染与过敏体质人群的增加，过敏性哮喘（以下简称“哮喘”）的发病率明显增加[1]；另一方面，随着社会观念的变化，偏瘦体质的人（特别是女性）越来越多，导致阴虚质偏颇体质人群迅速增加[2]。

(参考课件)OVA诱导小鼠过敏性哮喘模型的建立

定已经较为完善，大量可供使用的免疫学和分子学试剂，使得小鼠成为制备过敏性哮喘模型的最佳实验动物。小鼠逐渐成为了制作哮喘模型的实验动物的最佳选择。
（4）、相关研究表明，卵白蛋白（OVA）容易引起BABL/c小鼠产生气道高反应性和血清中IgE超敏反应的过敏反应 [1]。并且雌性BABL/c 小鼠的炎症反应更加显著，

研究进展
1.2 致敏原的选择
选择用尘于螨制的作话过价敏格性昂支贵气；管哮喘动物模型的致敏原主要有卵白若蛋是白病、毒真和菌真孢菌子则、制尘成螨哮、喘蟑模螂型变虽应为原临等床。中在通制过作控哮制喘病模原型体感的染过而程控中制，哮选喘择发不生同提的供致依敏据原，基但本其都稳能定制性作较出差各，种其不致同敏的的哮机制喘还模需型要，进但一是步几的乎研每究个；致敏原都有自己自身的缺点。蟑螂变应原、花粉以及职业性致敏原等由于种类繁多、模型制作很难标准化而使模型的复制变得非常复杂，因此在制作哮喘模型的过程中很少选择；虽然选择使用OVA作为致敏原，很难制作出重症哮喘模型，然而，OVA具有易于获得、免疫原性强、相关试剂可选择性大等特点，作为经典抗原，常与特定的佐剂联合使用。
OVA诱导小鼠过敏性哮喘模型的建立
1
Content (目录)
研究进展
重要性
病因病机
治疗方法
研究总结
研究进展
3
研究进展
近年来，随着社会工业化进程的加快，人们生活水平的提高，过敏性哮喘患者的数量呈上升趋势，研究者们也将如何治疗过敏性哮喘作为了一个重要的研究方向。为了研究过敏性哮喘的病因、发病机制和探索相应的治疗方法，因此对过敏性哮喘动物模型的建立尤为重要。本次实验的目的是建立BABL/c小鼠过敏性哮喘模型。

OVA诱导小鼠过敏性哮喘模型的建立PPT课件

◦ 3）针对金葡菌; 苯唑西林、氯唑西林。
◦ 4）重度CAP; 可考虑联合用药，如头孢曲松、头孢塞肟加大环内酯类抗生素。（大环内酯类抗生素也有免疫作用）。18岁以下儿童不用奎诺酮类、氨基糖苷类抗生素。 ◦ ◦ ◦ 用药72小时观察体温下降情况、全身症状改善否，呼吸道症状是次要的。如好，用药5---7天就可，效差换药，或加大剂量。二代以上头孢对B-内酰胺酶稳定。耐甲氧西林金葡菌耐药：万古霉素。肠杆菌：不动杆菌：头孢他定，头孢哌酮，产也氏菌：碳青霉烯类。铜绿假单胞菌：头孢哌酮加氨苄西林/舒巴坦等。2-3天如全身症状明显好转，及时转换为口服同样药。液可在同一类药重转换。 ◦ 重视阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸钾。 ◦ 如当地肺炎链球菌耐药率高，且未全程接种，可选用头孢曲松、头孢塞肟。 ◦ 对HAP，应非常重视病原微生物。
◦ 4）病原学诊断;
◦ 肺炎的诊断应包括以上4个方面。 ◦ 临床肺炎是包括了社区获得性肺炎（CAP）与医源性肺炎（HAP)，HAP时间概念应向基层延伸，如在门诊、急诊治疗中发生的肺炎（使用过抗生素），叫门急诊相关性肺炎,齐抗菌谱不同。
◦ 三、肺炎常见的病原及耐用情况： ◦ 注意定植菌在抗生素使用过程中可导致感染、耐药。 ◦ 1）病毒：年龄是判断病毒或细菌的一大因素。单纯病毒感染药占14—30%，呼吸道合胞病毒占第一位，其他有流感病毒，副流感病毒、腺病毒等。病毒感染随年龄增加而下降，但要注意新兴病毒如SAPS,,新型冠状病毒、高致病性禽流感等病毒。 ◦ 2）细菌：提倡对小儿CAP作血培养，约10 —15%阳性。痰培养多要做侵入性操作，有困难。 ◦ 发展中国家细菌感染源大于发达国家。常见细菌有肺炎链球菌、流感嗜血杆菌（注意侵袭2月以下小婴儿）卡拉莫拉菌，金黄色葡萄球菌。另药注意结核分枝杆菌。 ◦ 3)非典型病原体：肺炎支原体、肺炎衣原体、沙眼衣原体。肺炎支原体是5—15岁CAP常见病原。占 10—30%，流行期可达60%。沙眼衣原体是6月以内小儿常见病原。 ◦ 4）嗜军团菌可能是重症肺炎的病原。 5)也要注意也可能是混合感染。有60%肺炎查不出病原菌，与检测的方法、标本的采集方式、等有关，液与抗生素的使用有关。

一种病毒性哮喘模型制作方法的建立及评价

一种病毒性哮喘模型制作方法的建立及评价童黄锦;范欣生;许惠琴;王露;崔姣【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2008(29)3【摘要】目的评价用呼吸道合胞病毒(RSV)诱导鸡卵白蛋白(OVA)致敏,建立小鼠急性病毒性哮喘模型的方法及效果.方法 BALB/c小鼠100只,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS/PBS)对照组、PBS/RSV组、RSV/RSV组、OVA/PBS组和OVA/RSV组5组.应用OVA多点注射致敏、OVA气道雾化吸入结合RSV滴鼻激发复制急性病毒性哮喘模型.观察小鼠哮喘急性发作症状;动物体描箱法测定乙酰胆碱(Ach)激发条件下气道反应性(以肺阻力RL表示);支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞分类计数;HE 染色观察肺组织病理变化.结果①以45、135、405 μg/mL Ach激发时,与其他各组比较,OVA/RSV组RL均显著升高(P均<0.01);②BALF中炎性细胞分类计数,与其他各组比较,OVA/RSV组的细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞均显著升高(P均<0.01);③OVA/RSV组的肺组织病变程度重于其他各组(P均<0.01).结论 RSV诱导OVA致敏的方法建立小鼠急性病毒性哮喘模型是成功的.【总页数】4页(P349-352)【作者】童黄锦;范欣生;许惠琴;王露;崔姣【作者单位】南京中医药大学药学院药理学教研室,南京江苏,210029;南京中医药大学药学院药理学教研室,南京江苏,210029;南京中医药大学药学院药理学教研室,南京江苏,210029;南京中医药大学药学院药理学教研室,南京江苏,210029;南京中医药大学药学院药理学教研室,南京江苏,210029【正文语种】中文【中图分类】R562.25【相关文献】1.BALB/c小鼠阴虚型过敏性哮喘模型的建立与评价 [J], 王志旺;妥海燕;任远;李荣科;刘雪枫;程小丽2.一种新的氧化应激特征性哮喘模型的建立 [J], 梁正敏;文雪梅;廖晓光;徐杨峰;颜国庆;邓鑫;何家康3.SD大鼠哮喘模型建立方法及评价的比较研究 [J], 史琦; 李春雷; 孔艳华; 龙泓竹; 李阳溪; 阎玥; 李友林4.建立豚鼠哮喘模型的一种新方法 [J], 梁成结;陈江华;刘金保;罗灿峤5.一种改良型小鼠哮喘模型方法的建立及评价 [J], 田代印;符州;张燕;王莉佳;迟磊;李睿;戴继宏;罗晓菊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

玉屏风散抗OVA致小鼠过敏性哮喘的作用研究

玉屏风散抗OV A致小鼠过敏性哮喘的作用研究目的：观察玉屏风散（YPFS）抗OV A致小鼠过敏性哮喘的作用。

方法：建立OV A诱导的小鼠过敏性哮喘模型，第0，14天，分别腹腔注射20 μg OV A，自21 d时开始雾化吸入0.5% OV A溶液20 min，连续7 d。

空白对照组给予同体积的生理盐水。

YPFS低、中、高剂量组每天分别灌胃给予玉屏风散生药3.25，6.5，13 g·kg-1，模型组和空白对照组给予同体积生理盐水，阳性药组从雾化期开始腹腔注射地塞米松（DEX）1 mg·kg-1。

最后一次OV A雾化后24 h取血，进行血中嗜酸性粒细胞（Eos）计数，血清中IgE测定；收集支气管灌洗液（BALF）进行细胞计数、分类；取右侧肺组织研磨匀浆，检测细胞因子IL，4，IFN，γ，左侧肺上叶做病理组织学观察。

结果：模型组血中Eos及血清中IgE显著增高，BALF中出现大量Eos，肺组织病理显示支气管浆液性渗出，小管上皮细胞脱落，管腔狭窄或闭塞，且肺泡间隔变宽增厚，支气管周围淋巴细胞浸润。

肺组织匀浆中IL，4增加，IFN，γ/IL，4显著降低，YPFS各剂量组能降低血中Eos及血清中IgE含量，减少BALF中Eos，减轻上述模型的病理改变。

同时降低肺组织匀浆中IL，4含量，提高IFN，γ/IL，4。

结论：玉屏风散对OV A导致的过敏性哮喘有明显的抑制作用，表现为降低哮喘小鼠的血中Eos，IgE分泌，肺组织炎症细胞的浸润。

同时降低肺匀浆中IL，4的水平，提高IFN，γ/IL，4，抑制Th细胞向Th2极化。

标签：玉屏风散；过敏性哮喘；Eos；IgE；IFN，γ/IL，4支气管哮喘（简称哮喘）是由嗜酸粒细胞、淋巴细胞、肥大细胞等多种炎性细胞参与的慢性气道炎症，其发生机制可能与Th1/Th2细胞功能失衡和Th2细胞优势分化密切相关，表现为以支气管平滑肌收缩为主的过敏反应性症状[1]。

ova诱导小鼠过敏性哮喘模型的建立

研究进展
1.3 佐剂
佐剂可通过特异性或非特异性免疫增强作用使机体产生更多的抗体量，不仅可以减轻免疫耐受，还能节约使用的抗原量。在哮喘模型的制作中常选择铝佐剂，其中以氢氧化铝最常见。
研究进展
1.4 哮喘模型制备方法
制备过敏性哮喘模型的过程大概分为致敏和激发两个阶段，致敏和激发的药物一般选择OVA，致敏方式一般选择腹腔注射或腹腔注射与皮下注射相结合。激发方式一般选择雾化吸入或者滴鼻激发
研究进展
1.5 小鼠过敏性哮喘模型的评价指标
哮喘是一种慢性气道炎症性疾病，常常伴随着气道高反应和炎的行为学、气道反应性及病理学三个方面来判断。
• 主要包括以下四个方面：
a．外观：较实验前相比，出现毛发竖起，出现脸鼻部骚痒、烦躁、打喷嚏、腹式呼吸明显、口唇发紫、尾部紫绀等症状。 b．肺组织切片：可进行HE染色、MBP染色、刚果红染色及 EOS浸润等观察小鼠肺部的炎症情况。 c．细胞组分的测定：主要是测量其中的白细胞和嗜酸性粒细胞的数量。 d.生理功能指标：主要是测量小鼠的气道反应性，常用的方法是离体气道平滑肌收缩力测定法、肺阻抗（气道峰压测定法）和整体体积描记法。目前整体体积描记法是被认可的测定小鼠的气道反应性的方法，但也有研究认为该方法存在缺陷。此外，小鼠血清中IgE的测定，肺泡灌洗液中各种细胞因子的测定，如IL-4、IL-5、IL-10、IL-13等，都受到越来越高的重视，常用的检测方法是ELISA检测。这些指标的测定都对人们对小鼠哮喘模型的认识有重要作用。
病因病机
中医对此则有如下观点：宿痰内伏于肺，再加上外部感染、饮食的问题、精神疲惫意志消沉等原因导致痰阻了气道，从而导致了哮喘的发生。
治疗方法
a．抗生素治疗大环内酯抗生素可以发挥重要的治疗作用，一种新型大环内酯类药物阿奇霉素对由哮喘引起的肺部炎症情况有较强的治疗效果，同时副作用较小，临床上已经充分证明了其使用的安全性和有效性。 b．糖皮质激素治疗目前临床上广泛使用的糖皮质激素是治疗支气管哮喘最有效的药物，特点是能够快速减缓哮喘发作时的哮憋等症状。 c．支气管扩张剂治疗 d. 免疫治疗此方法的治疗机理是通过针对某些特定的过敏原进行防治，其治疗效果日益显著，目前免疫治疗已经成为有效治疗哮喘的常规方法之一。但是，由于免疫治疗方法的的应用时间还不长，该方法还需进行更深远的研究。 e．联合治疗经过实践证明，某一单一的治疗方法很难对治疗哮喘取得好的效果，人们往往选择多种治疗方式的联合治疗手段，以取得较好的治疗效果。

三种哮喘小鼠动物模型的对比研究

•论著.三种哮喘小鼠动物模型的对比研究黄超文赵强钟莲娣钟雪莺仝金斋黄炎明【摘要】目的探讨三种哮喘小鼠造模方式在病理改变、灌洗液中细胞组分、气道反应性、气道炎症指标等方面的差异。

方法分别采用屋尘蠕提取物（HDM）、卵清蛋白（OVA）和甲苯二异氧酸酯（TDI）构建小鼠哮喘模型,检测小鼠肺病理改变、肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞和上皮细胞数量、气道高反应性、炎症因子表达情况。

结果HDM、OVA所诱导的哮喘小鼠BALF中细胞组分主要以嗜酸性粒细胞为主。

三组哮喘小鼠在接受不同浓度的乙酰甲胆碱雾化后气道阻力明显增高，与浓度呈正相关，而HDM和OVA诱导的哮喘小鼠气道阻力较TDI组更高。

三组小鼠的血清IgE和BALF中嗜酸性粒细胞炎症指标IL-4、IL-5JL-13明显增高，TDI组所诱导的IgE和BALF IL-4JL-5JL-13均分别低于HDM组和OVA组。

结论不同造模方式建立的哮喘小鼠动物模型在气道反应性、气道炎症和病理特点各有不同，HDM哮喘小鼠和OVA哮喘小鼠具有典型的嗜酸性粒细胞哮喘表现，而TDI哮喘小鼠表现为混合细胞性哮喘动物模型。

【关键词】哮喘；动物模型；屋尘螭提取物；卵清蛋白；甲苯二异氤酸酯［中图分类号］R562.2［文献标识码］A DOI:10.3969/j.issn.1002-1256.2019.11.001支气管哮喘是一种由多种炎症细胞和炎症组参与的慢性气道变应性炎症,并以气道黏液高分泌、气道高反应性和气道重塑为主要特征⑴。

Brown Norway、Wistar大鼠、Sprague Dawly大鼠为常见的大鼠哮喘动物模型，而BALB/c小鼠、C57BIV6小鼠则是常见的哮喘小鼠动物模型⑷。

目前造模方式常采用屋尘蟻提取物（HDM）、卵清蛋白（OVA）、甲苯二异氤酸酯（TDI）、灭活的呼吸道合胞病毒（RSV）等刺激诱导哮喘动物模型⑶。

本研究拟建立HDM、OVA、TDI分别诱导的三种哮喘小鼠动物模型，对比其在气道反应性、气道炎症和病理方面的差异，评价各模型的优劣。

哮喘模型的建立

哮喘模型豚鼠国内1.腹腔注射10% OV A（国产），200 mg/kg。

15天以5% OV A雾化吸入诱导哮喘发作。

2.腹腔注射10% OV A（sigma Ⅲ）1 ml。

14天以1% OV A雾化吸入诱导哮喘发作，每次数秒至数分钟不等，连续5天。

3.腹腔注射10% OV A（sigma，没标明级别）1 ml，14天以0.05% OV A雾化吸入诱导哮喘发作，40 s/次/只，连续4次，15天，1% OV A激发2次，2 min/次/只，4 h后5min/次/只。

国外4.第1、5天腹腔注射100 μg OV A+100 mg Al（OH）3，1 ml生理盐水溶解。

14天以1μg /ml OV A雾化吸入诱导哮喘发作，1 h，连续7天。

5.第0、14天腹腔注射10 μg OV A+100 mg Al（OH）3。

18、19、20天以10 mg /ml OV A雾化吸入诱导哮喘发作，3 min。

6.第1天腹腔注射10 μg OV A+100 mg Al（OH）3。

14天以100μg /ml OV A雾化吸入诱导哮喘发作，1 h。

大鼠1.腹腔注射1 ml(含100 mg OV A +100 mg Al（OH）3，灭活百日咳杆菌疫苗5*109个)致敏，14天，1% OV A雾化吸入20 min2.第1、8天腹腔注射10% OV A、氢氧化铝混合液1ml，腰部两侧各取1点，每点皮下注射0.5 ml，共计2 ml。

第15天，3% OV A 40 ml喷雾激发，每次15分钟，隔日一次，共4周。

3. OV A ( Grade V，Sigma) 1 mg+氢氧化铝200 mg+生理盐水1 mL混悬液在大鼠两腹股沟、腹、前足跖，共4点作皮下注射，每点0.2mL，最后腹腔注射0 .2 mL，1 wk后重注射1次。

OV A ( Grade Ⅲ，Sigma) 10 g/l雾化吸入，30 min，连续6天。

小鼠1. 10%氢氧化铝凝胶配制成浓度为2 mg／ml OV A，每只小鼠在两后足足跖、两腹股沟、背部两点、腹腔，共7点，除腹腔注射0.2 ml，其余每点皮下注射0.05 ml，共计0.5 ml。

不同激发方式对小鼠过敏性支气管哮喘模型的影响

万方数据万方数据垦睦堡堕盘查！！！！生！旦箜！！鲞笙！！塑！望！』垦！！￡堡：垒！鲤坠！！！！：∑竺！：！！：盥！：！！表Ｉ不同激发方式哮喘组与正常组Ｐｅｎｈ％变化（互＿－－４－ｓ，％）注：与正常组比较，８Ｐ＜Ｏ．０５；与二次雾化２０ｍｉｎ激发组比较，。

Ｐ－（０．０５；与四次雾化２０ｍｉｎ撒发组比较·。

Ｐ＜Ｏ．０５道反应性与正常组无差异，造模失败。

２．４正常组和哮喘组小鼠肺组织病理形态学表现正常组小鼠肺组织光镜可见肺泡壁结构完整，肺泡腔内无渗出液，肺泡上皮细胞排列有序，肺泡壁厚度正常（图２）。

哮喘组小鼠肺组织光镜下可见肺泡壁结构受损，肺间质充血、水肿，肺泡壁增厚。

支气管、血管周围可见大量ＥＯＳ等炎症细胞浸润（图３）。

田１不同激发方式哮喘组与正常组Ｐｅｎｈ％变化哮喘组ＰＣＩ００均较正常组［（１２．２１士６．１０）ｇ／Ｌ］显著降低（Ｐ＜０．０５）。

三次滴鼻激发组ＰＣＩ００［（３．７５±１．７９）ｇ／ｌ。

］最低，并且显著低于四次雾化２０ｍｉｎ激发组［（５．１９±１．８８）ｇ／Ｌ］和三次雾化３０ｍｉｎ激发组［（５．９４±３．２７）ｇ／Ｌ］（Ｐ＜ｏ．０５），与二次雾化２０ｍｉｎ激发组［（５．１６士１．７４）ｇ／Ｌ］、三次雾化２０ｍｉｎ激发组［（４．２９±１．７５）ｇ／Ｌ］差异无统计学意义。

２．３ＢＡＩ，Ｆ炎症细胞分类哮喘组小鼠ＢＡＬＦ中嗜酸粒细胞比例（ＥＯＳ％）与正常组有显著差异（Ｐ＜０．００１）。

三次雾化３０ｍｉｎ和三次滴鼻激发哮喘组ＢＡＩ。

Ｆ中ＥＯＳ％显著高于两次雾化２０ｍｉｎ和三次雾化２０ｍｉｎ激发组（Ｐ＜Ｏ．０５），三次滴鼻激发哮喘组还显著高于四次雾化２０ｍｉｎ激发组（Ｐ＜０．０５）（表２）。

哮喘组中以滴鼻激发组的标准差最小。

两次雾化２０ｍｉｎ激发组有１只小鼠ＥＯＳ％为１％，气图２正常组：正常肺泡、气管结构ＨＥ×４００图３三次滴鼻哮喘组：气管、血管周围炎症细胞浸润ＨＥ×４００表２不同激发方式哮喘组与正常组ＢＡＬＦ炎症细胞分类比较（ｚ±ｓ，％）注：ＢＡＬＦ：支气管肺泡灌洗液；Ｅ：嗜酸粒细胞；Ｍ：单核细胞；Ｎ：中性粒细胞；Ｌ：淋巴细胞；与正常组比较。

卵清蛋白诱导小鼠建立支气管哮喘模型

卵清蛋白诱导小鼠建立支气管哮喘模型张亚娟;王亚楠;丁亚骏;何璐云;刘鑫;康巧珍【摘要】目的:建立一种稳定的小鼠哮喘模型,以便用于支气管哮喘的研究及治疗.方法:清洁级,雌性BALB/c小鼠16只,随机分为模型组和对照组,模型组于第0天和第14天注射卵清蛋白(ovalbumin,OVA)氢氧化铝溶液致敏,第28～30天雾化吸入1％OVA溶液激发,对照组用生理盐水替代OVA溶液.结果:模型组在雾化过程中出现了较明显的头面部瘙痒,前肢缩抬,弓背,呼吸加深加快,安静少动等哮喘急性发作症状.支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒细胞数(eosinophils,EOS)和白细胞总数均明显增多.肺组织病理切片(HE染色后)可见小支气管和伴行血管周围都有较多的炎症细胞浸润,可以看到大量嗜酸性粒细胞,平滑肌增厚,杯状细胞增生,部分肺泡间隔融合并形成肺气肿.结论:用OVA致敏的方法可以成功地建立小鼠哮喘模型.【期刊名称】《河南医学研究》【年(卷),期】2012(021)003【总页数】3页(P268-270)【关键词】支气管哮喘;动物模型;卵清蛋白【作者】张亚娟;王亚楠;丁亚骏;何璐云;刘鑫;康巧珍【作者单位】郑州大学生物工程系河南郑州450001;郑州大学生物工程系河南郑州450001;郑州大学生物工程系河南郑州450001;郑州大学生物工程系河南郑州450001;郑州大学生物工程系河南郑州450001;郑州大学生物工程系河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】R-332支气管哮喘(bronchial asthma，简称哮喘)是一种慢性反复发作的、由多种细胞(尤其是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T细胞)和细胞因子参与的气道变态反应性疾病［1］，在抗原刺激时会引起支气管平滑肌收缩、腺体分泌增多和黏膜血管扩张，最终导致支气管管腔狭窄、呼吸困难，严重时导致死亡。

目前哮喘的发病率和死亡率逐年增长，尚无根治的办法，严重困扰着人类的健康。

建立小鼠哮喘模型两种不同方法的比较

壁及其周围大量炎性细胞浸润，而且ＯＶＡ／ＲＳＶ组小鼠肺组织病理损害较ＯＶＡ组明显加重。增强呼气间歇（Ｐｅｎｈ）值ＯＶＡ／ＲＳＶ组小鼠较ＯＶＡ组小鼠明显升高（Ｐ＜０．０５），其支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞计数、单核细胞、淋巴细胞及嗜酸性粒细胞计数显著高于ＯＶＡ组（Ｐ＜０．０５）。结论拟人类哮喘发病机制的建模方法。
ｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ３ｇｒｏｕｐｓ：ｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ＯＶＡｇｒｏｕｐａｎｄＯＶＡ／ＲＳＶｇｒｏｕｐ．Ｗｉｔｈｏｖａｌｂｕｍｉｎａｎｄｈｙｄｒｏｘｉｄｅｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓｅｎｓｉ — ｔｉｚｅｄ，ＯＶＡｍｏｕｓｅａｓｔｈｍａｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄＯＶＡ／ＲＳＶｇｒｏｕｐｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｂｙｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｔｏｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｏｖａｌｂｕｍｉｎａｎｄｒｅ —
ａｆｔｅｒｔｈｅｌａｓｔｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，ｔｈｅｌｕｎｇｆｕｎｃｔｉｏｎｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｔｈｅｃｅｌｌｓｏｒｔｉｎｇａｎｄｃｏｕｎｔｉｎｇｉｎｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｌｕｉｆｄｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄ．ＴｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙＨＥｓｔａｉｎｉｎｇ．ＲｅｓｕｌｔｓＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｓｈａｖｅ

哮喘小鼠气道重建模型的建立及布地奈德、孟鲁司特的干预作用

；捞夕；Ｚ劳２００３描磺圭磅究垒举垃论文哮喘小鼠气遒重建模型的建立及毒地奈德、孟鲁斯特的予该传用浙江大学医学院２０００级硕士生导辫内科学（呼吸系病）王绍斌浇孥洛教筏审文摘要ｆ磅党背景簿镳缒基本特薤凳漫性炎症帮气遂熹爱寝瞧（ＡＨＲ）。

哮骧反复蓑作时莓凌的怠慢性炎瘢过程可引起气道不可逆结构性改变。

当出现气道上皮下基底膜网状结构（ＲＢＭ）增簿鞠纾维纯（ｓｕｂｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍｆｉｂｒｏｓｉｓ）及乎潺飘联缮厚、擞警增生扩张等改变对，棼秀气道重建。

遮就是临床上慢性持续性哮喘气流阻勰存在不可逆性成分的重要原因。

气道重建形成的后果是对黪功链弱影响及嬲重哮喘发佟，影响疾病蛉转妇，ｇｌ匙哮喘致延率的增期。

气遂重建兹，ｋ个藏要临床特征目前尚不十分清楚，如其开始的时间和速度，以及什么程度时这种重建能被抗炎药物或通过避免过敏原接触达到最大限度的逆转。

靶囱气道重建的治疗麴物的研制，将可§§产生新的抗哮喘药。

猩新药物问世前，早期应用或联合应用抗炎药物有效抗嶷预防气道重建的发生，将显樽更有研究领域的重要研究鼹的因此，动物模型成为该病理改变的小鼠哮喘模麓。

动态观察气道鼙重建之过程。

联合应用激素与孟鲁司特干减，观察箕对气道耋建预虢及治疗作用。

ｆ研究假设致敬枣鼠经过反复雾纯啜入ＯＶＡ激发，可出瑰气道壁、蓉赢貘浮度持续瞧蹭、抓滠映在病理上为胶原、弹性蛋白沉积，平滑肌增生、肥大。

上皮杯状细胞增生、粘液商分泌≤气遭鬟建），这辨菠交默晕蘩帮己撼瑷，邋抗蘸激发辩阚延长，澎送瞧增热。

警赣虚臻ＩＣＳ、ＬＴＲＡ等药物至少可部分预防上述过程的发生。

联合成用两种药物将更好地抑制气道炎症及气递重建。

Ｖ研党劳法选择雄性Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，年龄６－８周，体重１８＊２２９，以鹏卵蛋白（ＯＶＡ）作为抗瓢进舒致敏靼反复多次激发，每批实验均粥时设立对照缀（鄯以生理盐水代替ＯＶＡ俘为撬原）。

在激发的不制时段（２ｗ，４ｗ，６ｗ，８ｗ，１２ｗ）分别测定ＢＡＬＦ、外周血和骨髓中炎瘢细胞反应；测定上述波体上溃渡ＩＬ．５、ｌＮＦ叫浓发；并进行组织病理学检查。

不同浓度OVA溶液对小鼠OVA致敏性支气管哮喘模型的影响

不同浓度OVA溶液对小鼠OVA致敏性支气管哮喘模型的影响作者：杨素明张帷政周旸哲肖圣舟刘欣佳来源：《环球市场》2019年第02期摘要：目的使用滴鼻的激发方式选择不同浓度卵清蛋白（OVA）对小鼠OVA致敏性支气管哮喘模型的影响。

方法雌性昆明小鼠24只随机分为4组，分别为空白对照组、实验A组（生理盐水）、实验B组（50μg/mlOVA溶液）、实验C组（100μg/ml OVA溶液）;制备OVA致敏性支气管哮喘模型;模型制备的第21天到第27天用滴鼻法让实验组吸入不同的药物，对照组正常喂养。

第28天显微观察肺泡灌洗液，进行炎症细胞分类细胞计数;制备肺组织病理切片，观察支气管的炎症改变。

结果小鼠哮喘激发后结果显示，OVA溶液能够激发OVA 致敏性支气管哮喘。

炎症细胞分类计数结果显示，实验B组及C组的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞数目显著高于对照组;实验B组各类炎症细胞数目最高。

切片结果显示，实验组小鼠肺组织皆有炎症细胞侵润，实验B组及C组有肺泡壁结构损伤，且实验B组侵润及损伤最明显。

结论OVA溶液能够激发OVA致敏性支气管哮喘，剂量为50μg/ml时效果最佳。

关键词：卵清蛋白;滴鼻;支气管哮喘支气管哮喘（BA）简称哮喘，是由嗜酸性粒细胞（LOS）、肥大细胞（MC）、中性粒细胞（N）、T淋巴细胞等多种炎性细胞及其细胞因子参与的，以气道高反应性等为主要特征的慢性气道炎性反应[1]。

不同的激发方式和激发时间使建立小鼠哮喘模型的方法存在较大差异，本实验采用滴鼻法[2]，研讨不同浓度的激发溶液对小鼠哮喘激发的差异，为研究支气管哮喘动物模型提供依据。

一、材料与方法（一）实验动物及分组6～8周雌性昆明小鼠24只，中南大学实验动物中心提供，随机均数分配为空白对照组、实验A组（生理盐水）、实验B组（50vg/ml0VA溶液）、实验C组（100wg/mlOVA溶液）。

（二）实验试剂及仪器氢氧化铝[Al（OH）3]凝胶，OVA购自美国Sigma公司;日本OLYMPUS公司BX51T-32P01型显微镜，德国Slee公司MEV型号冰冻切片机。

卵清白蛋白诱导小鼠建立哮喘模型的研究现状

㊃综述㊃D O I :10.3760/c m a .j .i s s n .1673-436X.2016.07.016作者单位:100142北京,中国人民解放军空军总医院儿科通信作者:王文革,E m a i l :1264516006@q q.c o m 卵清白蛋白诱导小鼠建立哮喘模型的研究现状王明磊王文革ʌ摘要ɔ 哮喘动物模型是研究哮喘发病机制及防治方法的主要工具之一,在哮喘动物模型的建立过程中,卵清白蛋白(o v a l b u m i n ,O V A )诱导小鼠建立哮喘模型的方法最为常见㊂本文回顾了近十年来的国㊁内外文献,对用该方法建立的哮喘模型的分类,建模过程中小鼠种属㊁性别及饲养环境的选择,模型制备过程中致敏㊁激发等主要环节的处理方式,以及哮喘模型的评价方法等问题作一综述㊂ʌ关键词ɔ 哮喘;小鼠模型;卵清白蛋白R e s e a r c h s t a t u s o n p r e pa r a t i o no f o v a lb u m i n -i n d uc e dm o u s em ode lw i t hb r o n c h i a l a s t h m a W a n g M i n g l e i ,W a n g W e n g e .D e p a r t m e a t of P a e d i a t r i c s ,t h eA i rF o r c eG e n e r a lH o s p i t a l ,P L A,B e i j i ng 100142,Chi n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :W a n g W e n g e ,E m a i l :1264516006@q q.c o m ʌA b s t r a c t ɔ T h e o v a l b u m i n (O V A )-i n d u c e da s t h m am o u s em o d e l i s ab a s c i a l t o o l t ou n d e r s t a n d t h e a e t i o l o g i c a l a g e n t a n d p r e v e n t i v e t r e a t m e n t o f a s t h m a .Ab r i e f r e v i e wo n t h e c l a s s i f i c a t i o na n da p p l i c a t i o n o fO V A -i n d u c e dm o u s em o d e l ,a n d t h em a i n c u r r e n tm e a n s d u r i n g i t i sm a d e i n t h i s p a pe r .ʌK e y wo r d s ɔ A s t h m a ;M o u s em o d e l ;O v a l b u m i n 支气管哮喘(简称哮喘)诊治困难的根本原因在于哮喘发病机制复杂,哮喘动物模型是研究哮喘发病机制的必要工具㊂目前,用于建立哮喘模型的动物一般有小鼠㊁大鼠和豚鼠三种㊂小鼠因其免疫遗传背景清楚,建立模型比较稳定,实验成本相对较低的特点,成为近年来哮喘动物模型建立过程中较多被选用的动物,广泛应用于变应性哮喘㊁感染性哮喘㊁压力性哮喘㊁运动性哮喘㊁职业性哮喘及心理应激性哮喘等多方面的研究中㊂用于制备哮喘动物模型的致敏原主要有卵清白蛋白(o v a l b u m i n ,O V A )㊁病毒㊁尘螨㊁真菌㊁花粉㊁职业性致敏原及蟑螂变应原等,O V A 是以上致敏原中最为经典的一种㊂以哮喘㊁O V A 和小鼠模型为搜索词检索P u b m e d ,共得文献1341篇,本文就近十年来采用该方法建立哮喘模型的研究及应用状况作一综述㊂1 O V A 诱导小鼠建立的哮喘模型的分类哮喘模型可分为变态反应性哮喘模型㊁气道重塑模型㊁生物因素诱导的哮喘模型㊁物理因素诱导的哮喘模型㊁运动型哮喘模型㊁变态反应炎性产物诱导的哮喘模型㊁转基因和基因敲除模型等㊂采用O V A 作为致敏原时,常用来制备以下三种哮喘模型㊂1.1 变态反应性炎症哮喘模型变态反应性炎症哮喘模型是一种与人类哮喘迟发性变态反应过程相类似的模型,以气道炎症和气道高反应性(a i r w a y h y p e rr e s po n s i v e n e s s ,A H R )为主要特点㊂该模型致敏与激发两个阶段的持续时间都相对较短,一般在5~14d 不等,常用来研究气道的嗜酸粒细胞性炎症㊁哮喘相关的化学介质和细胞因子分泌的变化和A H R 等㊂其优点是建模周期较短,可在一定程度上模拟哮喘早期的炎症反应及相关细胞因子的消长变化,不足之处是缺乏上皮下纤维化㊁平滑肌增生等慢性炎症和气道壁结构的改变[1]㊂有研究显示,该模型小鼠肺组织中气管和血管周围的炎症反应在停止雾化激发10d 后有消退的现象[2]㊂1.2 气道重塑模型临床上,哮喘的反复发作容易导致上皮下纤维化㊁平滑肌增生㊁胶原蛋白沉积为特征的气道上皮和气道壁重塑性改变[3]㊂上皮下纤维化与肺功能下降及哮喘的严重程度有关,胶原蛋白的沉积则可能是A H R 持续性存在的主要原因之一㊂T e m e l k o v s k i 等[4]用O V A 腹腔注射致敏小鼠,3周后以2.5%的O V A 每周3次激发小鼠哮喘发作,持续8周,率先成功建立了小鼠气道重塑模型㊂S t u mm 等[5]用O V A 联合氢氧化铝致敏B A L B /c 小鼠(第0㊁7天),随后分别于第12㊁15㊁19㊁22㊁26㊁29天用O V A 雾化激发哮喘,于实验第16天时在B A L F 及肺组织中观察到急性炎症性反应,于第30天检测到胶原沉积等慢性哮喘模型特点㊂气道重塑模型与人类慢性持续性哮喘的特征更为接近,扩宽了小鼠哮喘模型的应用范围㊂1.3 重症哮喘模型喘息症状严重㊁发作频繁,吸入大量糖皮质激素不能缓解,同时合并有气道炎性细胞浸润㊁气道反应性升高㊁肺功能下降和气道重塑的哮喘称为重度哮㊃755㊃国际呼吸杂志2016年4月第36卷第7期 I n t JR e s p i r ,A pr i l 2016,V o l .36,N o .7喘[6]㊂国内蒋雄斌用O V A于实验第1天和第14天两次腹腔注射致敏小鼠,第15天起以1%O V A雾化激发哮喘发作,每次激发20m i n,隔天1次,连续5周,第21㊁35㊁49天加以R S V鼻腔滴入,成功复制出了重症哮喘模型[7]㊂重症哮喘模型可用来研究对临床常规治疗不敏感的重症哮喘的发病机制,为寻求重症哮喘的治疗靶点提供可用的研究平台㊂2小鼠种属、性别及饲养环境的选择2.1小鼠种属的选择近年来,建模时选用的小鼠品系主要有B A L B/c㊁C57B L/6㊁A/J及129s v等,其中B A L B/c 和C57B L/6的应用更为常见,不同品系的小鼠在哮喘气道反应性及细胞免疫等方面有其各自不同的特点㊂B A L B/c 小鼠因其较易产生针对O V A的气道炎症性反应及A H R,因而成为近年来应用最为广泛的小鼠品系[8],C57B L/6小鼠则对尘螨及豚草抗原的刺激表现出较强的反应性㊂有学者比较了B A L B/c和C57B L/6用卡介苗(B C G)致敏,结核分枝杆菌激发建立的哮喘模型,发现B A L B/c小鼠能产生更强烈的T h1型及T h17型免疫应答[9]㊂2.2小鼠性别的选择雌性和雄性小鼠在建模过程中都有应用㊂H a y a s h i等[10]较早报道了性别在迟发型气道反应(l a t e a i r w a y i n f l a mm a t i o n,L A I)中的作用,他们在研究中发现雌性B A L B/c小鼠的L A I及脾细胞I L-4m R N A的表达水平都要强于雄性小鼠,这可能与雄性小鼠T h2型应答反应下调有关,睾酮可能参与了下调的过程㊂M e l q e r t等[11]在研究中发现雌性小鼠能产生更多的嗜酸粒细胞㊁C D4+T 细胞㊁B细胞及更高水平的I L-4㊁I L-3㊁I F N-γ和特异性的I g E㊂2.3饲养环境的选择在相同致敏㊁激发条件下,清洁级小鼠较普通级小鼠的嗜酸粒细胞性炎症更为明显㊂这可能与普通级动物㊁普通级饲养环境下,小鼠与抗原接触的机会增加而使小鼠对致敏原的敏感性下降有关[12]㊂小鼠进入试验阶段前应至少适应性隔离观察1周,饲养时给予过滤㊁消毒的水和食物[13]㊂饲养房温度通常控制在恒温25ħ左右,相对湿度60%,12h光暗循环㊂为避免鸡蛋中O V A 对实验结果造成影响,可选用无鸡蛋饲料饲养㊂3小鼠哮喘模型的制备过程曾有学者用1%的O V A溶液对小鼠进行雾化,每天20m i n,持续10d,成功建立起了A H R哮喘模型[14],近年来,小鼠哮喘模型的制备过程一般分规律性致敏及系统性激发两个步骤进行,现对这两个过程进行分述㊂3.1 O V A致敏的途径和剂量治疗致敏小鼠时,一般有腹腔注射㊁皮下注射㊁雾化吸入㊁鼻内给药及气管内给药几种方式,近年来以腹腔注射较为常见[15-17]㊂哮喘模型炎性反应的程度及A H R与致敏原的剂量有关㊂致敏阶段, O V A的用量在10~1000μg不等,以10~100μg多见㊂有研究者分别用0μg㊁10μg㊁100μg㊁1000μg的O V A 联合氢氧化铝致敏B A L B/c小鼠,50m g/m lO V A溶液雾化激发,发现低剂量组能产生更高浓度的特异性I g E抗体并高表达I L-4㊁I L-5等T h2型细胞因子,高剂量组则产生较高浓度的I g G2a抗体,高表达I F N-γ㊁I L-12等T h1型细胞因子(B A L F中)㊂该研究同时发现,A H R仅在10u g 组出现[18]㊂C h e n等[19]的研究也证实,低剂的O V A能产生更高水平的特异性I g E和I g G1,且致敏5次产生的I g E㊁I g G1水平显著高于2次致敏㊂不同剂量的O V A可能是通过诱导产生不同类型的细胞因子,进而影响哮喘模型的表型[20]㊂3.2致敏联合佐剂的选择 O V A与佐剂联合应用可以节约抗体用量,增加抗体产量,同时减少免疫耐受的发生[21],联合致敏的次数以2~3次多见㊂目前,铝佐剂和灭活百日咳杆菌的应用较为广泛,而以氢氧化铝和硫酸铝钾为代表的铝佐剂,因其价格便宜㊁效果稳定成为致敏时常用的经典佐剂㊂O V A联合氢氧化铝佐剂产生的过敏性炎症和A H R表现出非肥大细胞依赖性,单独应用O V A制作的模型则表现出明显的肥大细胞依赖性[22]㊂0.5m g/m lO V A(溶于P B S)与10%十二水硫酸铝钾等体积混合,室温孵育60m i n,10N N a OH调p H至6.5, 750r/m i n离心5m i n,重悬于蒸馏水中,致敏时每只小鼠腹腔注射0.2m l抗原液(内含O V A100μg),随后用O V A气管内给药激发哮喘,可制作出具有炎症反应性及A H R的哮喘模型[23]㊂蔡萃等[15]用氢氧化铝凝胶做佐剂,成功制备了嗜酸粒细胞性哮喘模型㊂可见,O V A联合十二水合硫酸铝钾或氢氧化铝均能成功制作哮喘模型,但有研究提示,硫酸铝钾佐剂组哮喘小鼠B L A F中的白细胞数及嗜酸粒细胞计数要高于氢氧化铝佐剂组,且哮喘小鼠气道和血管周围的炎症反应更为明显,这可能与硫酸铝钾能溶于水,乳化效果好有关[2]㊂3.3哮喘模型的激发方式经由雾化㊁滴鼻或气管内给药的方式,可成功激发小鼠哮喘发作,以建立起稳定的模型㊂激发液多由O V A溶于生理盐水或P B S制成㊂近期,也有学者单独应用I L-25激发经O V A致敏过的小鼠,成功建立了具有气道重塑性改变的哮喘模型[24]㊂雾化激发小鼠哮喘发作时,所用O V A的浓度多在1%~5%的范围内,滴鼻激发可选用2g/L的O V A生理盐水溶液[25]㊂对于滴鼻及雾化两种激发方式,在诱导哮喘发作时孰优孰劣的争议一直存在,雾化激发操作简单㊁小鼠死亡率低,但药液的作用效果与所用雾化器及容纳小鼠的雾化容器有较大关系,不如滴鼻作用直接㊂滴鼻激发易受操作者人为因素及操作技术的影响,且激发效果与麻醉程度㊁滴鼻速度关系很大,较雾化更容易引起小鼠的死亡,因此在慢性哮喘模型的制备过程中,长期应用滴鼻的方式激发小鼠哮喘发作具有一定的风险性㊂有研究显示,多次雾化较1次滴鼻更能引起气道炎性反应[12],但也有学者在研究中发现3次滴鼻激发的嗜酸粒细胞百分数和气道反应性较雾化高[25]㊂还有学者指出,由于滴鼻激发时O V A易局限于个别气道,故气道的局部炎症反应重,整体炎症反应轻,且5次雾化较3次滴鼻更能诱导小鼠哮喘发作[2]㊂以上这些结果的差异可能与激发液中O V A浓度的不同㊁激发频率的不同及研究者操作手法的不同等因素有关㊂与㊃855㊃国际呼吸杂志2016年4月第36卷第7期I n t JR e s p i r,A p r i l2016,V o l.36,N o.7雾化激发相比,气管内给药较易表现出上皮细胞㊁杯状细胞增生和轻度上皮组织纤维化的特点[26]㊂3.4雾化激发设备的选择选用雾化激发的方式激发小鼠哮喘发作时,选用的设备通常有超声雾化器和空气压缩泵两种㊂空气压缩泵产生的雾化颗粒直径多在2~6μm之间,颗粒均匀,与超声雾化相比更容易进入并沉积到人类的肺泡及终末细支气管中㊂同时,采用空气压缩泵进行雾化时药物的残留量少㊁利用率高㊁雾力大,对药物的破坏也较超声雾化少,且可以避免温度升高对蛋白类药液的影响(超声雾化器压电晶体产生的热能可能会引起药物温度的上升)[27]㊂以此来看,在小鼠哮喘模型的制备过程中,用空气压缩泵激发哮喘发作似乎更有利于药物有效的被小鼠吸入㊂然而小鼠与人类在遗传及病理生理上都存在着一定的差异性,对于哮喘小鼠来说,用空气压缩泵雾化激发是否同样具有以上优势尚不明确㊂雾化时容纳小鼠的容器可选用透明的玻璃或塑料容器,目前,尚无报道说明雾化容器的大小㊁材质㊁单位容积内的雾化药量以及单位体积内的小鼠个数对激发效果是否有影响㊂目前已有专门用于小鼠的雾化吸入装置,但价格偏高㊂4哮喘模型的评价如何评价哮喘模型的建立成功与否,是能否运用已制备的小鼠模型进行哮喘研究的原则性问题,目前常用的评价方法主要包括以下几种:⑴小鼠的行为学改变:与正常对照组相比,模型组小鼠在哮喘发作时多出现打喷嚏㊁弓背抓鼻㊁呼吸频率加快㊁张口呼吸等表现,并可有口唇㊁爪等部位紫绀及体质量生长曲线放缓等现象的发生㊂⑵小鼠气道反应性测定:分为有创性和无创性两种方法,有创性气道反应性测定主要通过气管插管以及机械通气来完成,操作复杂且小鼠死亡率高,近年来已不常用㊂无创组用体积描记测定增强呼气间歇法(e n h a n c e d p a u s e, P e n h)是根据哮喘时呼气相时间延长的特点来定量反映气流受限程度的一种方法[28],可同时检测多只小鼠,操作简单㊁节省时间,有研究曾用该方法检测了B A L B/c雌性小鼠的A H R,发现其与经典的有创检测方法有一定的相关性[29]㊂⑶小鼠B A L F中的炎症细胞及嗜酸粒细胞计数:哮喘模型成功建立后,可在B A L F中检测到炎性细胞的增多及嗜酸粒细胞比例的增加㊂⑷病理学改变:病理学检测是评价模型成功与否的可靠性指标,可用H E染色观察肺组织中炎性细胞及嗜酸粒细胞浸润情况,过碘酸雪夫染色观察气道黏液产生, M a s s o n三色染色观察胶原沉积㊂可用各种免疫组织化学㊁原位杂交㊁逆转录聚合酶链反应技术,检测肺组织中各种炎症相关细胞及细胞因子的水平㊂电子显微镜可用来观察气道壁的结构性改变㊂⑸其他评价方法:如酶联免疫吸附试验测定哮喘小鼠B A L F中I L-4㊁I L-10㊁I F N-γ等哮喘相关细胞因子的含量及比值变化㊁测定血清总I g E和抗原特异性I g E等㊂5总结O V A诱导小鼠建立哮喘模型的方法虽然已经广泛应用于哮喘研究工作中,但通过回顾文献不难发现,在哮喘模型的制备过程中,从小鼠种属㊁性别㊁饲养环境的选择,到致敏㊁激发哮喘的方式方法,从实验流程的整体设计,到实验操作中的具体细节,都存在着很大程度的不同,这势必会对建模成功率,模型的稳定性及实验的可重复性造成一定的影响㊂同时,目前评价模型是否建立成功的检测指标差异较大,很多研究仅凭小鼠的行为学改变或肺组织炎症反应的发生,即认为哮喘模型已成功建立,这显然不够科学㊂因此,如何建立起一套相对标准化的评价体系,以便于对哮喘模型进行更为科学有效的评价,也是接下来需要解决的关键问题之一㊂总之,根据研究目的合理选择哮喘模型类型,优化建模方法,并逐步建立起更为科学合理的模型评价体系,必将有利于我们制作出与人类哮喘发病过程及病理状态更为接近的小鼠哮喘模型,从而使O V A诱导小鼠建立哮喘模型这一经典方法更好的应用于哮喘研究工作当中㊂参考文献[1]朱艳芬,宋泽庆.小鼠支气管哮喘模型的研究现状[J].国际呼吸杂志,2009,29(7):438-442.D O I:10.3760/c m a.j.i s s n.1673-436X.2009.07.015.[2]钟文清,谭建新.不同佐剂和激发方式对哮喘小鼠肺部炎性反应的影响[J].重庆医学,2013,4(36):4433-4435.D O I:10.3969/j.i s s n.1671-8348.2013.36.027.[3] N a k a g a w aT,H o s h i n oM.A i r w a y r e m o d e l i n g i na s t h m a[J].C l i nR e v i e w sA l l e r g y&I mm u n o l o g y,2004,27(1):1-2.[4] T e m e l k o v s k i 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哮喘动物模型的制作及注意事项

2.枸橼酸诱发豚鼠咳嗽实验
取体重200-260 g豚鼠，雌雄各半，置于500 mL的观察室内，以恒定压力喷入17.5%的枸橼酸，喷雾1 min，观察并记录豚鼠在5 min之内的咳嗽潜伏期和咳嗽次数，将咳嗽潜伏期≤10 s或≥120 s，以及5 min内咳嗽次数≤10次或者≥50次的豚鼠全部剔除。预选合格的豚鼠经体重随机分层分组，即模型组、咳必清组、各剂量给药组，每组6只。各组连续灌胃给药7天，每天一次，模型组豚鼠灌以等体积生理盐水。末次给药后1 h，按上述筛选条件引咳豚鼠，观察并记录各豚鼠咳嗽潜伏期及5 min内咳嗽次数，并与模型组比较。
3.氨水诱发小鼠咳嗽实验
18-22 g ICR小鼠，雌雄各半，按体重随机分层分组，即模型组、咳必清组、各剂量给药组。各组连续灌胃给药7天，每天一次，模型组小鼠灌以等体积生理盐水。末次给药后1 h，将小鼠置于一倒置的容积为500 mL，内置一棉球的烧杯中，在向棉球上滴加0.4 mL浓氨水时开始计时，观察并记录小鼠咳嗽潜伏期和3min内咳嗽次数，并与模型组比较。
4.大鼠急性咽炎模型
清洁级SD大鼠，雌雄各半，用喉头喷雾器于大鼠咽部喷体积分数15％氨水，每次喷 3 揿，相当于6μl 15%氨水停留在大鼠咽部。每天上、下午各 1 次，连续 3 d，造成急性咽炎模型；每日观察记录各组动物外观状态，并观察动物咽部情况，包括黏膜形态、色泽等。
c小鼠于第0天和第14天分别腹腔注射0.1mL/只OVA液(0.2 mg/mL)和DBP溶液（0.5 mg/kg），第21~23天连续3天以0.5%的OVA溶液雾化激发，每天于上午下午固定时间雾化2次，每次20min。雾化过程中观察小鼠一般行为变化，后一次雾化结束后24小时，小鼠摘眼球取血，取支气管肺泡灌洗液( Bronchial Alveolar Lavage, BALF )及肺组织。

制作简易实验动物雾化箱建立小鼠哮喘模型研究

第37卷第5期2020年10月实验动物科学LABORATORY ANIMAL SCIENCEVol.37 No.5October 2020《研究简报i制作简易实验动物雾化箱建立小鼠哮喘模型研究田丹许虎峰(首都医科大学附属北京友谊医院科研实验中心北京市临床医学研究所移植耐受与器官保护北京市重点实验室王松灵院士口腔与全身健康免疫研究实验室北京100050)摘要：目的应用简单易操作的方法将家用型医疗雾化吸入装置改造为实验动物雾化箱，为实验动物呼吸道疾病的研究提供便利。

方法利用家用型雾化器和动物实验室常见的独立通气鼠笼组合改造为实验动物雾化箱。

应用自制实验动物雾化箱和鸡卵清白蛋白建立小鼠过敏性哮喘模型。

结果实验动物雾化箱能同时为1~20只小鼠实验快速稳定地产出雾化吸人气体，利用该雾化箱成功建立起小鼠过敏性哮喘模型。

结论我们利用该实验动物雾化箱建立小鼠过敏性哮喘模型并观察到明显的肺组织炎症表现。

该方法为简便和低成本地进行实验动物雾化实验提供具有操作性的指导。

关键词：雾化箱；动物模型；哮喘；小鼠中图分类号：Q95-337 文献标识码：A文章编号：1006-6179(2020)05-0071-03D O I；10. 3969/j.issn. 1006-6179. 2020. 05. 013哮喘在全世界的发病率正在逐步上升，目前已经成为全球人类健康的巨大威胁m。

雾化吸人给药是临床治疗呼吸道相关疾病的重要治疗手段，也是实验室进行呼吸道相关疾病研究的重要实验方法12]。

目前越来越多的医疗厂商开发出小巧高效的药物雾化吸人仪器用于各种呼吸道患者的居家给药。

相对家用型雾化器，用于动物研究的特制雾化箱可选型号少、价格偏高且便携性偏低。

因此，应用简单易操作的方法将家用型医疗雾化吸人装置改造为实验动物雾化箱将为呼吸道疾病的顺利研究提供便利。

本研究将利用家用雾化器和动物实验室常见的独立通气鼠笼改造为实验动物用雾化箱，并进行小鼠过敏性哮喘造模。

哮喘动物模型的制作及注意事项

哮喘动物模型的制作及注意事项哮喘是一种常见的慢性炎症性疾病，可以影响人类和动物。

为了深入了解哮喘的病理机制和寻找新的治疗方法，研究人员经常使用动物模型来模拟哮喘病理过程。

下面介绍一种常用的哮喘动物模型制作方法，并提供一些注意事项。

1.哮喘动物模型制作方法：（1）选择合适的动物：大多数实验室使用小鼠作为哮喘模型的动物，因为小鼠更容易操作，并且基因解析的种类较多。

（2）感染准备：将小鼠分成两组，一组为实验组，一组为对照组。

在实验组中，使用合适的方法感染小鼠，如使用孵化的混浊液鼻腔喷射感染，或者使用刺激性药物吸入。

（3）模型监测：在感染后的不同时间点，对小鼠进行病理学分析，如病理性炎症指标的测定，呼吸道超声检测等。

（4）治疗方法：可以使用不同的治疗方法来治疗实验组的小鼠，如药物治疗或其他新的治疗方法。

然后对治疗效果进行评估。

2.注意事项：（1）伦理问题：在进行动物模型研究时，需要遵循动物实验的伦理原则，确保动物的福利和保护动物权益。

确保合适的实验动物数量，提供适当的饲养环境和食物，并定期检查它们的身体状况。

（2）模型选择：选择合适的动物模型对哮喘研究非常关键，因为不同的动物可能对特定的刺激物或治疗方法有不同的反应。

确保选择的动物模型能够准确地模拟人类哮喘的病理过程，并具有相似的症状和结果。

（3）技术和方法选择：在制作哮喘动物模型时需要使用适当的技术和方法，如感染方法、病理学分析方法等，以确保实验结果的准确性和可靠性。

可以参考相关文献和专家的建议，以获得最佳的实验条件和结果。

（4）数据分析和解释：在进行哮喘动物模型实验后，需要对实验结果进行数据分析和解释。

统计学方法和模型评估技术可以用来分析数据，确保实验结果的可靠性和科学性。

同时，对实验结果进行合理的解释，明确实验结果对哮喘病理机制和治疗方法的贡献。

总之，制作哮喘动物模型是研究哮喘病理机制和治疗方法的重要工具。

在制作哮喘动物模型时，需要注意伦理问题，选择合适的动物模型和技术方法，并合理地分析和解释实验结果。

哮喘小鼠模型实验技术原理

哮喘小鼠模型实验技术原理哮喘小鼠模型构建：1. 明矾致敏佐剂10%明矾溶液（溶于双蒸水）2ml与500mg/mlOVA（溶于PBS）2ml等量混合后，用NAOH调PH值为6.5.室温孵育60min，离心5min，去掉上清液，重溶于2mlBPS。

致敏时每只老鼠腹腔注射200ul，其中含2mg明矾和100ugOVA2. 致敏：小鼠分别于第0、14天是腹腔注射明矾致敏佐剂0.2ml，对照组注射相同剂量的PBS溶液，正常饮食饲养。

3. 激发：雾化吸入，第21天时小鼠放入有机玻璃箱，5%OVA雾化吸入，每天30min。

末次致敏后24h内检测。

以小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹腔痉挛等阳性反应作为造模成功的标准。

对照组采用PBS雾化吸入，其他操作均相同。

4. 末次激发24h麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置24h后于4℃3000r离心10min提取血清，放入-80℃冰箱冻存。

取左肺组织于4%多聚甲醛溶液中固定用于病理染色；右肺组织液氮冷冻，-80℃保存用于分生标本。

哮喘小鼠模型特点：哮喘模型组小鼠在激发开始后出现打喷嚏、点头呼吸、呼吸急促、啸鸣音、腹肌收缩、烦躁等典型哮喘发作症状，并且后期观察中发现饮食减少、毛色无光泽、行动迟缓及体重逐渐下降。

肺组织切片可进行HE染色、MBP染色、刚果红染色及EOS浸润等观察小鼠肺部炎症情况。

主要测量其中的白细胞和嗜酸性粒细胞的数量。

比较医学：三种方法构建哮喘小鼠模型分别是HDM、OVA、TDI。

HDM、OVA所诱导的哮喘小鼠BALF中细胞组分主要以嗜酸性粒细胞为主。

三组哮喘小鼠在接受不同浓度的雾化后气道阻力明显增高，与浓度呈正相关，而HDM和OVA诱导的哮喘小鼠气道阻力较TDI更高。

不同造模方式建立的哮喘小鼠模型在气道反应性、气道炎症和病理特点各有不同，HDM和OVA哮喘小鼠具有典型的嗜酸性粒细胞哮喘表现，而TDI 哮喘小鼠表现为混合细胞性哮喘动物模型。

《TREM-1基因在OVA致敏哮喘小鼠发病中的作用机制研究》

《TREM-1基因在OVA致敏哮喘小鼠发病中的作用机制研究》一、引言哮喘是一种以气道高反应性为特征的慢性呼吸道疾病，其发病机制复杂且与环境、遗传等多种因素密切相关。

近年来，越来越多的研究表明，触发受体表达增强剂（TREM-1）基因在哮喘的发病过程中起着重要作用。

本文旨在探讨TREM-1基因在OVA （卵清蛋白）致敏哮喘小鼠模型中的作用机制，以期为哮喘的预防和治疗提供新的思路。

二、材料与方法1. 实验动物与分组选用SPF级BALB/c小鼠，随机分为正常对照组、OVA致敏组和TREM-1基因敲除组。

2. OVA致敏模型建立通过腹腔注射、雾化吸入等方式对小鼠进行OVA致敏，建立哮喘模型。

3. 实验方法采用PCR、免疫组化、流式细胞术等技术，检测各组小鼠TREM-1基因的表达情况，分析其在哮喘发病过程中的作用机制。

三、实验结果1. TREM-1基因在哮喘小鼠中的表达情况与正常对照组相比，OVA致敏组小鼠TREM-1基因的表达显著增加，而TREM-1基因敲除组小鼠的TREM-1基因表达降低。

2. TREM-1基因对哮喘小鼠气道炎症的影响TREM-1基因的高表达与气道炎症的严重程度呈正相关。

在OVA致敏组中，气道炎症反应明显增强，而TREM-1基因敲除组小鼠的气道炎症反应相对较轻。

3. TREM-1基因对哮喘小鼠免疫细胞的影响TREM-1基因的高表达可促进免疫细胞的活化与募集，包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等。

这些免疫细胞在哮喘发病过程中起着重要作用。

四、讨论本研究发现，TREM-1基因在OVA致敏哮喘小鼠中高表达，且与气道炎症的严重程度呈正相关。

TREM-1基因的异常表达可能通过影响免疫细胞的活化与募集，进一步加剧气道炎症反应。

此外，TREM-1基因的异常表达还可能影响其他信号通路的传导，从而在哮喘的发病过程中发挥重要作用。

因此，针对TREM-1基因的干预可能成为治疗哮喘的新策略。

五、结论本研究表明，TREM-1基因在OVA致敏哮喘小鼠中发挥重要作用，其高表达与气道炎症的严重程度密切相关。