ABO血型鉴定(生理盐水法).

ABO血型鉴定（生理盐水法）

1. 原理

根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB 型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A 试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。

2. 标本采集

2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。

2.2 标本要求：

2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。

2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有

冻疮，则主张采耳垂血。

3. 标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4℃-8℃

保存不超过48小时。

4. 标本运输：室温运输

5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定

6. 试剂

6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂

6.2 试剂生产厂家：长春博德生物技术有限责任公司上海血液生物医药有限责任公司

6.3 试剂组成

试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。

试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。

试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓

度的红细胞悬液。

红细胞悬液的配制

悬液浓度（％）压积红细胞（滴）盐水（滴）

2 5 10 20 1

1

1

1

2ml（40）

0.8ml（16）

0.4ml（8）

0.2ml（4）

为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。

7. 操作步骤

7.1 玻片法

7.1.1 取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用肥皂水刷洗后晾干，用蜡

笔划出小格，并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片（或瓷盘）上A、B处。分别取等体积待检血样（5％-10％红细胞悬液或全血）于抗A试剂和抗B试剂。

7.1.2 另取洁净玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A

细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

7.1.3 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻

片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。

7.2 试管法

7.2.1 取洁净小试管（内径10mm×60mm）2支，分别标上A、B字样，

用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5％红细胞悬液各1滴，混合。

7.2.2 另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B和

O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％红细胞悬液1滴，混合。

7.2.3 摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻

摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

8. 结果判断

8.1 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、

B亚型、类B或cisAB的发现。

8.2 凝集强度判断标准：

4＋＝红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3＋＝红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2＋＝红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1＋＝肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。

±=镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。

MF＝混合凝集外观是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。

－表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

8.3 按下表报告受检者红细胞ABO血型

ABO血型正反定型结果

分型血清＋受检者红细胞受检者受检者血清＋试剂红细胞

抗－A ＋

—

—

＋抗－B

—

＋

—

＋

抗－A＋

B

＋

＋

—

＋

血型

A

B

O

AB

A细胞

—

＋

＋

—

B细胞

＋

—

＋

—

O细胞

—

—

—

—

9. 临床意义：输血、器官移植与亲子鉴定

10. 操作性能：快速简便、特异性强、灵敏度高、重复性好。

11 超出范围结果处理

11.1 红细胞自凝：冷凝集系增高是最为常见原因。应用37℃-40℃的

生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷集素。

11.2 正反定型结果不一致原因

11.2.1 分型血清效价太低、亲和力不强。如抗—A血清效价不高，可

将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。

11.2.2 红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例则不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。

11.2.3 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于

白血病或恶性肿瘤）以及B类或cisAB等。

11.2.4 受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。