微生物的分离和纯培养ppt课件
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实验二微生物的分离纯化_图文_图文
④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干 燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活 时间长，是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低 温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
实验二微生物的分离纯化_图文_图文.ppt
内容提要
• 分离 • 纯化 • 形态观察
（1）接种
• 半固体培养基：穿刺接种 • 液体培养基接种 • 普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜
面划线接种 • 浅盘固体接种
划线接种注意要点
• 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触, 以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
（4）菌种保藏
• 最常见的保藏方法：斜面 • 细菌的保藏：甘油保藏 • 真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏
菌种保藏的方法
菌 种 保 藏 方 法
连续在培养基上（内）移种
生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种
固体斜面
湿法 半固体琼脂柱
真菌分离
• 利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落 分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是 利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此 限制真菌的迁涉生长。
• 一般采用PDA培养基 • 改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分
离。 • 有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分
离培养时应加以考虑。
（2）纯化
2、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l 、2天。
3、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应 调节到与试样的生态系统参数值相近。
微生物的分离和纯培养课件
37℃ 培养
目的菌优势 非目的菌
选择培养基平板 （含牛奶或酪蛋 白唯一C、N源）
目的菌落 菌落周围有透明 蛋白水解圈
例一：分离筛选蛋白酶产生细菌
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
例一：分离 筛选蛋白酶 产生细菌
含牛奶选择培养基目的菌生长平板
营养选择因子：牛奶或酪蛋白 只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌 长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶
三、单细胞（单孢子）分离
采用显微分离法从混杂群体中直接分离单 个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养， 称为单细胞（单孢子）分离法。
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❖ 营养琼脂平板上不能形成菌落 ❖ 分离难度与细胞或个体的大小成反比 个体较小的微生物需采用显微操作仪 较大的微生物可使用毛细管提取
1、利用选择培养基进行直接分离 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
选择培养基
只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
1、利用选择培养基进行直接分离 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
土壤 选择培养基 单细胞 直接分离
❖ 用固体培养基分离、培养
微
❖ 用液体培养基分离、培养
生 物
❖ 单孢子分离
分
❖ 选择培养分离
离 方
❖ 二元培养物分离、培养
法
❖ 无菌技术
微生物的保藏技术
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微生物纯种分离
《微生物纯培养技术》课件
纯培养技术可用于病原微生物的分离、鉴 定和药物敏感性试验，为临床诊断和治疗 提供依据。
微生物纯培养技术
02
的基本原理
微生物的分离与纯化
微生物的分离
通过选择合适的培养基和培养条件， 将混合的微生物群体分离成单一的微 生物个体。
微生物的纯化
通过反复划线、稀释接种等方法，获 得纯培养的微生物，即同一菌种或纯 种微生物的培养。
微生物的培养基
培养基的组成
培养基是由水、碳源、氮源、无机盐 等组成，根据不同微生物的需求，培 养基的成分和比例会有所不同。
培养基的制备
根据配方和操作步骤，将各种成分混 合在一起，经过灭菌处理后，制成适 合微生物生长的培养基。
微生物的培养条件
温度
不同微生物对温度的需求不同，适宜的 温度可以促进微生物的生长和代谢。
生理生化特性分析
测定微生物的生理生化特性，如氧化酶试验 、糖发酵试验等。
应用前景探讨
探讨微生物纯培养技术在生产、科研等领域 的应用前景和潜在价值。
微生物纯培养技术04Fra bibliotek的应用实例
在医学领域的应用
抗生素生产
01
微生物纯培养技术用于分离和培养具有抗生素产生能力的菌株
，为医学领域提供大量抗生素。
疾病诊断
《微生物纯培养技术》 ppt课件
目 录
• 微生物纯培养技术概述 • 微生物纯培养技术的基本原理 • 微生物纯培养技术的实验操作 • 微生物纯培养技术的应用实例 • 微生物纯培养技术的挑战与展望
微生物纯培养技术
01
概述
微生物纯培养技术的定义
01
微生物纯培养技术是指通过一定 的物理、化学手段，将自然界中 混杂的微生物群体分离出来，获 得纯种微生物的技术。
高二生物微生物的分离和纯培养(PPT)4-3
菌落特征
• 大小、形状（圆形，假根状，不规则状） • 表面特征（光滑，皱缩，颗粒状，龟裂状，同心圆状） • 隆起形状（扩展，台状，凹面，凸面，乳头状） • 边缘情况（整齐，波状，裂叶状，锯齿状） • 表面光泽（无光泽，金属光泽，闪光） • 质地（油脂状，膜状，粘脆） • 颜色、透明度
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。
2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。
3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
用镁或铝还原B?O?得到粗硼。将粗硼分别用盐酸、氢氧化钠和氟化氢处理，可得纯度为 ～ %的棕色无定形硼。 [] 、最纯的单质硼用氢还原法制得：使氢和 三溴化硼的混合气体经过钽丝，电热到K，三溴化硼在高温下被氢还原，生成的硼在钽丝上成片状或针状结构。 、由镁粉或铝粉加热还原氧化硼而得。 [4] 主要用途编辑 构成生 硼元素是； 海外游学加盟 海外游学加盟 ；核糖核酸形成的必需品，而核糖核酸是生命的重要基础构件。 夏威夷大学宇航局天体生物学研究所的博士后研究员詹姆斯-斯蒂芬森称：“硼对于地球上生命的起源可能很重要，因为它可以使核酸稳定，核酸是核糖核酸 的重要成分。在早期生命中，核糖核酸被认为是脱氧核糖核酸的信息前体。” [] 工业用途 硼是一种用途广泛的化工原料矿物，主要用于生产硼砂、硼酸和 硼的各种化合物以及元素硼，是冶金、建材、机械、电器、化工、轻毛、核工业、医药、农业等部门的重要原料。时下，硼的用途超过种，其中玻璃工业、 陶瓷工业、洗涤剂和农用化肥是硼的主要用途，约占全球硼消费量的/4。中国硼矿资源虽然丰富，但是硼矿产品不能满足国内经济建设需求，7年国内硼砂产 量约为4万吨，进口硼矿产品4.7万吨，大量依赖进口，因此充分了解世界硼矿产品市场情况就显得相当重要。 单质硼用作良好的还原剂，氧化剂，溴化剂， 有机合成的掺合材料，高压高频电及等离子弧的绝缘体，雷达的传递窗等。 硼是微量合金元素，硼与塑料或铝合金结合，是有效的中子屏蔽材料；硼钢在反
微生物的分离和纯培养 PPT课件(共4个) 中图版
微生物的分离和纯培养
（实验11）
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。
2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。
3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
实验原理
• 自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起， 要研究某种微生物的特性，必须从混杂的微生 物类群中分离它，使该微生物处于纯培养状态 这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化。
•
27、我们无法选择自己的出身，可是我们的未来是自己去改变的。励志名言：比别人多一点执着，你就会创造奇迹
•
28、伟人之所以伟大，是因为他与别人共处逆境时，别人失去了信心，他却下决心实现自己的目标。
•
29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人也无法逆向而行，只能在急促而繁忙的进程中，偶尔转过头来，回望自己留下的蹒跚脚印。
•
17、一个人只要强烈地坚持不懈地追求，他就能达到目的。你在希望中享受到的乐趣，比将来实际享受的乐趣要大得多。
•
18、无论是对事还是对人，我们只需要做好自己的本分，不与过多人建立亲密的关系，也不要因为关系亲密便掏心掏肺，切莫交浅言深，应适可而止。
•
19、大家常说一句话，认真你就输了，可是不认真的话，这辈子你就废了，自己的人生都不认真面对的话，那谁要认真对待你。
•
15、所有的辉煌和伟大，一定伴随着挫折和跌倒；所有的风光背后，一定都是一串串揉和着泪水和汗水的脚印。
• 1 土壤样品 • 2 培养基 （1）牛肉膏蛋白胨培养基 （2）高氏1号培养基 （பைடு நூலகம்）马铃薯培养基（PDA培养基）
实验方法与步骤
• 1.平板的制作： 将已灭菌的培养基融化，冷却到40-50℃， 倒平板。
（实验11）
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。
2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。
3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
实验原理
• 自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起， 要研究某种微生物的特性，必须从混杂的微生 物类群中分离它，使该微生物处于纯培养状态 这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化。
•
27、我们无法选择自己的出身，可是我们的未来是自己去改变的。励志名言：比别人多一点执着，你就会创造奇迹
•
28、伟人之所以伟大，是因为他与别人共处逆境时，别人失去了信心，他却下决心实现自己的目标。
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29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人也无法逆向而行，只能在急促而繁忙的进程中，偶尔转过头来，回望自己留下的蹒跚脚印。
•
17、一个人只要强烈地坚持不懈地追求，他就能达到目的。你在希望中享受到的乐趣，比将来实际享受的乐趣要大得多。
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18、无论是对事还是对人，我们只需要做好自己的本分，不与过多人建立亲密的关系，也不要因为关系亲密便掏心掏肺，切莫交浅言深，应适可而止。
•
19、大家常说一句话，认真你就输了，可是不认真的话，这辈子你就废了，自己的人生都不认真面对的话，那谁要认真对待你。
•
15、所有的辉煌和伟大，一定伴随着挫折和跌倒；所有的风光背后，一定都是一串串揉和着泪水和汗水的脚印。
• 1 土壤样品 • 2 培养基 （1）牛肉膏蛋白胨培养基 （2）高氏1号培养基 （பைடு நூலகம்）马铃薯培养基（PDA培养基）
实验方法与步骤
• 1.平板的制作： 将已灭菌的培养基融化，冷却到40-50℃， 倒平板。
微生物的分离和纯培养ppt(共4个)精品课件
平均菌落数×稀释倍数 微生物的细胞个数（个/g）＝ 土壤克数
微生物分离基本方法及原则
分离微生物时一般是根据该微生物对营养， pH，氧气，温度等要求的不同，供给它们合 适的条件或加入某种抑制剂，形成只利于该菌 种生长，不利于其他菌种生长的环境，从而淘 汰不需要的菌种。
(1)分离细菌：取10-7、10-8两个稀释度各0.2ml加入 培养皿中，涂布牛肉膏蛋白胨平板，37℃倒置培 养，24小时。 (2) (2) 分离霉菌：取10-5、10-6两个稀释度各0.2ml，涂 布土豆平板（倒平板前在土豆培养基中加入80% 的乳酸5滴），28℃倒置培养，3～4天。 (3) 分离放线菌：取10-5、10-6两个稀释度各0.2ml， （制备菌悬液时，应先加入10%酚10滴）涂布淀 粉平板，28℃倒置培养，7～10天。
大肠杆菌菌落
伊红美蓝培养基
曲霉
酵母菌落
霉菌菌落 青霉
放线菌菌落
A：诺尔斯氏链霉菌 B：皮疽诺卡氏菌 C：酒红指孢囊菌 D：游动放线菌 E：小单胞菌 F：马杜拉放线菌
产抗菌素的放线菌
A：卡特利链霉菌 B：弗氏链霉菌 C：吸水链霉菌金泪亚种 D：卡那霉素链霉菌 E：除虫链霉菌 F：生磺酸链霉菌
实验材料
微生物的分离和纯培养
（实验11）
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。 2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。 3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
实验原理
• 自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起， 要研究某种微生物的特性，必须从混杂的微生 物类群中分离它，使该微生物处于纯培养状态 这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化。
微生物的分离、培养和菌种保藏 PPT课件
實驗程式7
（微生物的分離—平板塗抹法）
實驗程式8
（微生物的分離—平板劃線法）
每組取無菌培養皿2付，在皿底貼上標籤，注明事項。取已熔化 的牛肉膏蛋白腖培養基，倒入平皿，製成平板。
凝固後，用接種環取相應的 菌液一環（10－5或10－6）在平板上 劃線（教師作示範）。 1.連續劃線法：將挑取有樣品的接種環在平板培養基表面作連續 劃線（圖－5）。完畢後，倒置於28～300C溫室培養。 2.分區劃線法：用接種環以無菌操作挑取土壤稀釋液1環，先在 培養基的一邊作第一次平行劃線3—4條，再轉動培養皿約600C 角，並將接種環上剩餘物燒掉，待冷卻後通過第一次劃線部分作 第二次劃線會，同法依次作第三次和第四次劃線（見圖－5）。 劃線完畢，蓋上皿蓋，倒置於28～300C溫室培養。
液體接種法：包括從斜面菌種接入培養液，或從液體菌 種接入液體培養液，兩種情況都可以用接種環接種。但 在培養量比較大的情況下，液體接種宜採用移液管接種， 同時要求無菌操作。
穿刺接種法：用接種針經火焰滅菌後，沾取少量菌種， 垂直地穿入試管固體培養基中心至底部，然後沿著原接 種線將針拔出，要做到手穩、動作輕巧迅速，最後塞上 棉塞。再將接種針上殘留的菌體在火焰上燒掉。
2. 用無菌的脫脂牛奶將新鮮斜面菌種製成牛奶菌種懸液，無菌 操作裝入安瓿管中（裝量不超過其體積的1/3)。 3. 預凍：將分裝好的安瓿管在－25～－400C之間的乾冰酒精 中進行預凍，1h後即可抽氣進行真空乾燥。 4.真空乾燥：預凍後放入真空乾燥箱中，開啟真空泵進行乾燥。 5.封管前將安瓿管裝入多歧管上，開啟真空泵，當真空度達到 0.01mm汞柱後用火焰熔封。 6.做好的安瓿管放入冰箱中保藏。
實驗程式17
（微生物培養中的氧氣條件－厭氧培養）
第二章--微生物的纯培养和显微技术
第二节 显微镜和显微技术
一、显微镜的种类及其原理 二、显微观察样品的制备 三、显微镜下的微生物
几个基本概念：
一、显微镜的种类及原理
1.普通光学显微镜（复式显微镜）
机械装置: 镜座、支架、载物台、调焦螺旋等 光学系统: 物镜、目镜、聚光镜等
使用油镜时加镜油的目的: (1)增加照明亮度 (2)增加显微镜的分辨率
细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线 照射后可激发荧光；另有一些物质本身虽 不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗 体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧 光显微镜就是对这类物质进行定性和定量 研究的工具之一
105
荧 光 显 微 镜 观 察
5、 透射电子显微镜（transmission electron microscope, TEM)
原理：用一束电子作为它的能源，电子的波长很短，能够 检测极细微的物体，如病毒和分子。
应用：通过细胞超薄切片，观察细胞内部的详细结构如细 胞膜、细胞核等。（可放大几万倍）
6、 扫描电子显微镜（scanning electron microscope, SEM)
原理：类似于电视或电传真照片。即利用电子“探针”，在 样品表面进行“扫描”，激发样品表面放出二次电子，二次电子由 探测器收集，并转变为光信号。
光学显微镜
光学理论依据
德国理学家Ernst Abbe，在19世纪70年代建立的 在Abbe的公式中，两物体之间的最小可分辨距 离被称为最小距离（d）
最小距离=0.5/nsin= 0.5/NA
分辨率（R) ∝ 1/d
分辨率(最小可分辨距离)=0.5λ∕ n sinθ = λ∕2NA
波长与分辨率
高压蒸汽灭菌锅
2、接种操作
接种工具： 白金or镍铬合金接种针/环
微生物的分离纯化和培养技术124页PPT
查氏培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋 白胨培养基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。
2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中， 在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水 的试管中，以此类推，制成不同稀释度。
3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然 后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的 试管中吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。
微生物的分离、纯化及培养技术
分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得 只含某一种或某一株微生物的过程。
为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落 并不一定保证是一种菌。
常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法
吉林大学生物基础实验教学中心
一. 目的要求 二. 实验原理 三. 微生物培养技术 四. 结果观察
（4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。 （5）将试管口在火焰上微烧一周。 （6）参照图（7-1） （7）将接种环抽出，灼烧管口。 （8）塞上棉塞。 （9）将接种环经火焰灼烧灭菌。
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将已接种的斜面、半固体和液体 培养基放置培养箱中培养将生长好的 菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保 存。
接种
吉林大学生物基础实验教学中心
培养
吉林大学生物基础实验教学中心
微生物的纯化培养
吉林大学生物基础实验教学中心
吉林大学生物基础实验教学中心
平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实 验日期。 2、划线方法
稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
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2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中， 在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水 的试管中，以此类推，制成不同稀释度。
3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然 后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的 试管中吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。
微生物的分离、纯化及培养技术
分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得 只含某一种或某一株微生物的过程。
为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落 并不一定保证是一种菌。
常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法
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一. 目的要求 二. 实验原理 三. 微生物培养技术 四. 结果观察
（4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。 （5）将试管口在火焰上微烧一周。 （6）参照图（7-1） （7）将接种环抽出，灼烧管口。 （8）塞上棉塞。 （9）将接种环经火焰灼烧灭菌。
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将已接种的斜面、半固体和液体 培养基放置培养箱中培养将生长好的 菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保 存。
接种
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培养
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微生物的纯化培养
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平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实 验日期。 2、划线方法
稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
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高二生物微生物的分离和纯培养(PPT)5-3
不规则状） • 表面特征（光滑，皱缩，颗粒状，龟裂状，同心圆状） • 隆起形状（扩展，台状，凹面，凸面，乳头状） • 边缘情况（整齐，波状，裂叶状，锯齿状） • 表面光泽（无光泽，金属光泽，闪光） • 质地（油脂状，膜状，粘脆） • 颜色、透明度
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。
2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。
3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
词。便利群众的：～措施｜～商店。 【便溺】①动排泄大小便：不许随地～。②名屎和尿：这种动物的～有种特殊的气味。 【便盆】（～儿）名供大小便用 的盆。 【便桥】名临时架设的简便的桥。 【便人】名顺便受委托办事的人：托～给他带去一本词典。 【便士】名英国等国的辅助货币。［英］ 【便所】 〈方〉名厕所。 【便条】（～儿）名写上； 书法培训加盟 书法培训加盟 ；简单事项的纸条；非正式的书信或通知。 【便桶】名供大小便 用的桶。 【便携式】形属性词。（形体）便于携带的：～计算机｜～罐装燃料。 【便鞋】名轻便的鞋，一般指布鞋。 【便血】∥动粪便中带血或只排出血液 而没有粪便。 【便宴】名比较简便的宴席（区别于正式宴会）：家庭～｜设～招待。 【便衣】ī名①平常人的服装（区别于军警制服）。②（～儿）身着便 衣执行任务的军人、警察等。 【便宜】形方便合适；便利：院子前后都有门，出入很～。 【便宜行事】经过特许，不必请示，根据实际情况或临时变化就斟 酌处理。也说便宜从事。 【便于】动比较容易（做某事）：～计算｜～携带。 【便中】名方便的时候或顺便的机会：你家里托人带来棉鞋两双，请你～进城 来取。 【便装】名便服?：身着～。 【遍】（徧）①动普遍；全面：～身｜满山～野｜走～各地。②量一个动作从开始到结束的整个过程为一遍：问了 三～｜从头到尾看一～。 【遍布】动分布到所有的地方；散布到每个地方：通信网～全国。 【遍地】①动遍布各处：黄花～。②副到处；处处：牧场上～是 牛羊。 【遍地开花】比喻好事情到处出现或普遍发展：电力工业已经出现～的新局面。 【遍及】动普遍地达到：影响～海外。 【遍体鳞伤】满身都是伤痕， 形容伤势重。 【遍野】动遍布原野，形容很多：牛羊～｜～碧绿的庄稼。 【缏】（緶）缏子。 【缏子】?名草帽缏。 【艑】〈书〉船。 【辨】动辨别；分 辨：～明｜明～是非｜～不清方向。 【辨白】同“辩白”。 【辨别】动根据不同事物的特点，在认识上加以区别：～真假｜～方向。 【辨明】动辨别清 楚：～方位｜～是非。 【辨认】动根据特点辨别，做出判断，以便找出或认定某一对象：～笔迹｜照片已模糊不清，无法～。 【辨识】动辨认；识别：～足 迹｜烟雨蒙蒙，远处景物～不清。 【辨析】ī动辨别分析：词义～｜～容易写错的字形。 【辨正】动辨明是非，改正错误。也作辩正。 【辨证】同“辩证”?。 【辨证】动辨别症候：～求因｜～论治。也作辨症。 【辨证论治】中医指根据病人的发病原因、症状、脉象等，结合中医理论，全面分析，
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。
2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。
3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
词。便利群众的：～措施｜～商店。 【便溺】①动排泄大小便：不许随地～。②名屎和尿：这种动物的～有种特殊的气味。 【便盆】（～儿）名供大小便用 的盆。 【便桥】名临时架设的简便的桥。 【便人】名顺便受委托办事的人：托～给他带去一本词典。 【便士】名英国等国的辅助货币。［英］ 【便所】 〈方〉名厕所。 【便条】（～儿）名写上； 书法培训加盟 书法培训加盟 ；简单事项的纸条；非正式的书信或通知。 【便桶】名供大小便 用的桶。 【便携式】形属性词。（形体）便于携带的：～计算机｜～罐装燃料。 【便鞋】名轻便的鞋，一般指布鞋。 【便血】∥动粪便中带血或只排出血液 而没有粪便。 【便宴】名比较简便的宴席（区别于正式宴会）：家庭～｜设～招待。 【便衣】ī名①平常人的服装（区别于军警制服）。②（～儿）身着便 衣执行任务的军人、警察等。 【便宜】形方便合适；便利：院子前后都有门，出入很～。 【便宜行事】经过特许，不必请示，根据实际情况或临时变化就斟 酌处理。也说便宜从事。 【便于】动比较容易（做某事）：～计算｜～携带。 【便中】名方便的时候或顺便的机会：你家里托人带来棉鞋两双，请你～进城 来取。 【便装】名便服?：身着～。 【遍】（徧）①动普遍；全面：～身｜满山～野｜走～各地。②量一个动作从开始到结束的整个过程为一遍：问了 三～｜从头到尾看一～。 【遍布】动分布到所有的地方；散布到每个地方：通信网～全国。 【遍地】①动遍布各处：黄花～。②副到处；处处：牧场上～是 牛羊。 【遍地开花】比喻好事情到处出现或普遍发展：电力工业已经出现～的新局面。 【遍及】动普遍地达到：影响～海外。 【遍体鳞伤】满身都是伤痕， 形容伤势重。 【遍野】动遍布原野，形容很多：牛羊～｜～碧绿的庄稼。 【缏】（緶）缏子。 【缏子】?名草帽缏。 【艑】〈书〉船。 【辨】动辨别；分 辨：～明｜明～是非｜～不清方向。 【辨白】同“辩白”。 【辨别】动根据不同事物的特点，在认识上加以区别：～真假｜～方向。 【辨明】动辨别清 楚：～方位｜～是非。 【辨认】动根据特点辨别，做出判断，以便找出或认定某一对象：～笔迹｜照片已模糊不清，无法～。 【辨识】动辨认；识别：～足 迹｜烟雨蒙蒙，远处景物～不清。 【辨析】ī动辨别分析：词义～｜～容易写错的字形。 【辨正】动辨明是非，改正错误。也作辩正。 【辨证】同“辩证”?。 【辨证】动辨别症候：～求因｜～论治。也作辨症。 【辨证论治】中医指根据病人的发病原因、症状、脉象等，结合中医理论，全面分析，
第三周微生物分离纯化接种与培养技术PPT课件
液体培养基分离纯培养 同一稀释度做多个平行管，95%表现为不生长 。
第3页/共17页
二、微生物纯培养技术
稀释平板分离法使用过程中的几个问题 1) 梯度稀释度的确定： 需分离微生物在样品中的数量 2) 选择菌落接种的依据： a、菌落特征； b、菌体的特征 3) 微生物纯培养的标准： 菌落特征一致性 4) 操作要点： 无菌操作
基中是不能含有N源，这种培养基就比较适于能利用空气中N2的微生物。另一种方 法是在培养基中加入某种化学物质，以抑制人们所不需要的微生物的生长繁殖。分
离土壤中真菌，往往在分离真菌的马丁培养基中加入适当的孟加拉红，链霉素和金
霉素等化学药品，目的在于抑制细菌生长，这样更有利于获得其纯培养。
• tupian
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（二）划线分离纯化
• 1、用已溶化至50oC阿斯毕培养基倒入平板。 • 2、用接种环挑取上述菌落少许，在冷凝平板上进行划线分离，而后置28oC培养4
天。 • 划线方法如图：
2 1
3 4
第13页/共17页
（三）纯化、镜检，得到纯种培养
• 1、平板上出现单菌落，按无菌操作移入阿斯毕培养基斜面试管中，28oC培养4 天。
选择培养分离
1、利用选择培养基进行直接分离。 2、富集培养（多次培养后再分离）
二元培养物：培养物中/共17页
•
为了获得某种微生物的纯培养，可采用下列两种方法：一种是提供有利于该微
生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。如要从土壤中分离自生固氮菌，则其培养
第10页/共17页
三、材料与仪器
•1、培养基：阿斯毕无氮 培养基。 •2、菜园土。 •3、灭菌培养皿、镊子、 剪刀、接种针、酒精灯
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二、微生物纯培养技术
稀释平板分离法使用过程中的几个问题 1) 梯度稀释度的确定： 需分离微生物在样品中的数量 2) 选择菌落接种的依据： a、菌落特征； b、菌体的特征 3) 微生物纯培养的标准： 菌落特征一致性 4) 操作要点： 无菌操作
基中是不能含有N源，这种培养基就比较适于能利用空气中N2的微生物。另一种方 法是在培养基中加入某种化学物质，以抑制人们所不需要的微生物的生长繁殖。分
离土壤中真菌，往往在分离真菌的马丁培养基中加入适当的孟加拉红，链霉素和金
霉素等化学药品，目的在于抑制细菌生长，这样更有利于获得其纯培养。
• tupian
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（二）划线分离纯化
• 1、用已溶化至50oC阿斯毕培养基倒入平板。 • 2、用接种环挑取上述菌落少许，在冷凝平板上进行划线分离，而后置28oC培养4
天。 • 划线方法如图：
2 1
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（三）纯化、镜检，得到纯种培养
• 1、平板上出现单菌落，按无菌操作移入阿斯毕培养基斜面试管中，28oC培养4 天。
选择培养分离
1、利用选择培养基进行直接分离。 2、富集培养（多次培养后再分离）
二元培养物：培养物中/共17页
•
为了获得某种微生物的纯培养，可采用下列两种方法：一种是提供有利于该微
生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。如要从土壤中分离自生固氮菌，则其培养
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三、材料与仪器
•1、培养基：阿斯毕无氮 培养基。 •2、菜园土。 •3、灭菌培养皿、镊子、 剪刀、接种针、酒精灯
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选择培养基
只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
精选ppt
25
1、利用选择培养基进行直接分离
土壤 选择培养基 单细胞 直接分离
37℃ 培养
目的菌优势 非目的菌
选择培养基平板 （含牛奶或酪蛋 白唯一C、N源）
目的菌落 菌落周围有透明 蛋白水解圈
例一：分离筛选蛋白酶产生细菌
精选ppt
精选ppt
22
Each colony was examined microscopically
精选ppt
23
四、选择培养分离
原理
❖ 创造适于目的微生物生长条件 ❖ 促使目的微生物快速生长呈优势菌 ❖ 抑制非目的微生物生长 ❖ 从混杂微生物中分离目的微生物
精选ppt
24
1、利用选择培养基进行直接分离
某种方法
培养
单菌落
多种混杂
平板
每个菌落为纯种（纯培养）
单菌落转接培养
纯种（纯培养）
精选ppt
10
（二）、纯种平板分离的不同方法
104/ml
103/ml
102/ml
101/ml
从土壤精中选p分pt 离纯微生物
11
1、涂布平板法（spread plate method)
涂布平板法
稀释倒平板法
精选ppt
12
2、稀释倒平板法（倾注平板法精选）pp（t pour plate method)
13
3、平板划线法（streak plate method）Βιβλιοθήκη 分区划线法（蛇形线法）操作图
第一区划线
灭菌接种环
第二区划线
灭菌接种环
第三区划线
灭菌接种环
精选ppt
14
分区划线法适用范围： 适用于浓度较大的样品
精选ppt
❖ 用液体培养基分离、纯培养
精选ppt
20
三、单细胞（单孢子）分离
采用显微分离法从混杂群体中直接分离单 个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养， 称为单细胞（单孢子）分离法。
精选ppt
21
❖ 营养琼脂平板上不能形成菌落 ❖ 分离难度与细胞或个体的大小成反比
个体较小的微生物需采用显微操作仪 较大的微生物可使用毛细管提取
精选ppt
6
一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养； 单个微生物只在固体培养基上形成菌落； 在液体培养基中不会形成菌落
精选ppt
7
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
精选ppt
8
一、用固体培养基（营养琼脂平板） 分离纯种
精选ppt
9
（一）、微生物纯种分离的原理和方法
微生物样品
分散成单个微生物
❖ 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅
❖ 121℃湿热灭菌30min
精选ppt
34
❖ B、培养基或溶液的灭菌
❖ 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅 ❖ 121℃湿热灭菌30min
精选ppt
35
C、血清或生长因子溶液灭菌
过滤除菌：细菌滤器
滤膜孔径小于细菌细胞的大小
精选ppt
36
上节课知识回顾
❖ 一、微生物分离纯化方法 ❖ 单孢子分离
26
例一：分离 筛选蛋白酶 产生细菌
含牛奶选择培养基目的菌生长平板
营养选择因子：牛奶或酪蛋白
只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌 长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶
精选ppt
27
例二：分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌
单细胞
65℃培养
淀粉水解透明圈 目的菌菌落
选择培养基平板 （淀粉为唯一C源）
第二章 微生物的纯培养和 显微技术
精选ppt
1
微生物的分离和纯培养 显微镜和显微技术
精选ppt
2
§1微生物的分离和纯培养
精选ppt
3
❖ 用固体培养基分离、培养 ❖ 用液体培养基分离、培养 ❖ 单孢子分离 ❖ 选择培养分离 ❖ 二元培养物分离、培养 ❖ 无菌技术 微生物的保藏技术
精选ppt
微 生 物 分 离 方 法
选择因子：营养选择因子淀粉
环境选精选p择pt 因子65℃高温
28
2、富集培养法
人为创造一些条件只让所需的微生物生长， 在这些条件下，所需要的微生物能有效地与 其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远 超过其他微生物。
富集培养是分离微生物菌种最强有力的技术之一
营养选择因子和生理条件选择因子可无穷尽组 合，可从自然界选择分离各类特异微生物
4
微生物纯种分离
❖ 将多种混杂微生物，经某种技术或方法 分离成纯种的过程
纯培养（pure culture）
❖ 在适宜条件下培养纯种获得的培养物 （群体）
精选ppt
5
菌落
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内 部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可 见的、有一定形态结构的子细胞群体，称 为菌落(colony)。
精选ppt
18
培养物在液体培养基中进行高度顺序稀释， 如果经稀释后的同一稀释度的大多数 （95%以上）试管中没有微生物生长，有 微生物生长的试管得到的培养物可能就是 纯培养物。
精选ppt
19
上节课知识回顾
❖ 微生物分离纯化方法 ❖ 用固体培养基分离、纯培养
❖ 稀释倒平板法 ❖ 涂布平板法 ❖ 平板划线法 ❖ 稀释摇管法
稀释倒平板法 涂布平板法 平板划线法 稀释摇管法 液体稀释法 单细胞分离法 选择培养分离
应用范围
即可定义,又可定量,用途广泛 用得最多 方法简便,多用于分离细菌 主要分离严格厌氧菌 适用于培养细胞较大的微生物 局限于高等专业化的科学研究 适用于分离某些生理类型较特殊 的微生物
精选ppt
32
六、无菌技术
15
连续划线法操作图
连续划线法适用范围：
适用于浓度较小的样品
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16
4、稀释摇管法（dilution shake culture method)
培养严格厌氧微生物
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17
二、用液体培养基分离纯化培养
个别细胞较大的细菌 原生动物、藻类
营养琼脂平板不能长菌落
如何分离纯培养？ 接种物液体培养基顺序稀释法分离
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29
例：从土壤中分离能产生ß－半乳糖苷酶的微生物
富集培养
选择培养基分离
精选ppt
目的菌验证
30
五、二元培养物
如果培养物中只含有两种微生物，而且是有意 识的保持两者之间的特定关系的培养物称为二 元培养物。
病毒和宿主细胞 纤毛虫、变形虫和粘细菌
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31
微生物纯培养分离方法的比较
方法
在分离、转接及培养纯培养物时防止其被 其他微生物污染的技术称为无菌技术。它是 微生物研究进行的关键。
➢用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物 ➢在转接、培养微生物时防止其他微生物的污染
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33
1、所用物品的灭菌技术
❖ A、玻璃或金属器皿灭菌
❖ 高温干热灭菌：干燥箱
❖ 160－170℃干热空气2h灭菌
只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
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25
1、利用选择培养基进行直接分离
土壤 选择培养基 单细胞 直接分离
37℃ 培养
目的菌优势 非目的菌
选择培养基平板 （含牛奶或酪蛋 白唯一C、N源）
目的菌落 菌落周围有透明 蛋白水解圈
例一：分离筛选蛋白酶产生细菌
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22
Each colony was examined microscopically
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23
四、选择培养分离
原理
❖ 创造适于目的微生物生长条件 ❖ 促使目的微生物快速生长呈优势菌 ❖ 抑制非目的微生物生长 ❖ 从混杂微生物中分离目的微生物
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24
1、利用选择培养基进行直接分离
某种方法
培养
单菌落
多种混杂
平板
每个菌落为纯种（纯培养）
单菌落转接培养
纯种（纯培养）
精选ppt
10
（二）、纯种平板分离的不同方法
104/ml
103/ml
102/ml
101/ml
从土壤精中选p分pt 离纯微生物
11
1、涂布平板法（spread plate method)
涂布平板法
稀释倒平板法
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12
2、稀释倒平板法（倾注平板法精选）pp（t pour plate method)
13
3、平板划线法（streak plate method）Βιβλιοθήκη 分区划线法（蛇形线法）操作图
第一区划线
灭菌接种环
第二区划线
灭菌接种环
第三区划线
灭菌接种环
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14
分区划线法适用范围： 适用于浓度较大的样品
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❖ 用液体培养基分离、纯培养
精选ppt
20
三、单细胞（单孢子）分离
采用显微分离法从混杂群体中直接分离单 个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养， 称为单细胞（单孢子）分离法。
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21
❖ 营养琼脂平板上不能形成菌落 ❖ 分离难度与细胞或个体的大小成反比
个体较小的微生物需采用显微操作仪 较大的微生物可使用毛细管提取
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6
一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养； 单个微生物只在固体培养基上形成菌落； 在液体培养基中不会形成菌落
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7
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
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8
一、用固体培养基（营养琼脂平板） 分离纯种
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9
（一）、微生物纯种分离的原理和方法
微生物样品
分散成单个微生物
❖ 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅
❖ 121℃湿热灭菌30min
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34
❖ B、培养基或溶液的灭菌
❖ 湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅 ❖ 121℃湿热灭菌30min
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35
C、血清或生长因子溶液灭菌
过滤除菌：细菌滤器
滤膜孔径小于细菌细胞的大小
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36
上节课知识回顾
❖ 一、微生物分离纯化方法 ❖ 单孢子分离
26
例一：分离 筛选蛋白酶 产生细菌
含牛奶选择培养基目的菌生长平板
营养选择因子：牛奶或酪蛋白
只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌 长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶
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27
例二：分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌
单细胞
65℃培养
淀粉水解透明圈 目的菌菌落
选择培养基平板 （淀粉为唯一C源）
第二章 微生物的纯培养和 显微技术
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1
微生物的分离和纯培养 显微镜和显微技术
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2
§1微生物的分离和纯培养
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3
❖ 用固体培养基分离、培养 ❖ 用液体培养基分离、培养 ❖ 单孢子分离 ❖ 选择培养分离 ❖ 二元培养物分离、培养 ❖ 无菌技术 微生物的保藏技术
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微 生 物 分 离 方 法
选择因子：营养选择因子淀粉
环境选精选p择pt 因子65℃高温
28
2、富集培养法
人为创造一些条件只让所需的微生物生长， 在这些条件下，所需要的微生物能有效地与 其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远 超过其他微生物。
富集培养是分离微生物菌种最强有力的技术之一
营养选择因子和生理条件选择因子可无穷尽组 合，可从自然界选择分离各类特异微生物
4
微生物纯种分离
❖ 将多种混杂微生物，经某种技术或方法 分离成纯种的过程
纯培养（pure culture）
❖ 在适宜条件下培养纯种获得的培养物 （群体）
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5
菌落
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内 部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可 见的、有一定形态结构的子细胞群体，称 为菌落(colony)。
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培养物在液体培养基中进行高度顺序稀释， 如果经稀释后的同一稀释度的大多数 （95%以上）试管中没有微生物生长，有 微生物生长的试管得到的培养物可能就是 纯培养物。
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19
上节课知识回顾
❖ 微生物分离纯化方法 ❖ 用固体培养基分离、纯培养
❖ 稀释倒平板法 ❖ 涂布平板法 ❖ 平板划线法 ❖ 稀释摇管法
稀释倒平板法 涂布平板法 平板划线法 稀释摇管法 液体稀释法 单细胞分离法 选择培养分离
应用范围
即可定义,又可定量,用途广泛 用得最多 方法简便,多用于分离细菌 主要分离严格厌氧菌 适用于培养细胞较大的微生物 局限于高等专业化的科学研究 适用于分离某些生理类型较特殊 的微生物
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32
六、无菌技术
15
连续划线法操作图
连续划线法适用范围：
适用于浓度较小的样品
精选ppt
16
4、稀释摇管法（dilution shake culture method)
培养严格厌氧微生物
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17
二、用液体培养基分离纯化培养
个别细胞较大的细菌 原生动物、藻类
营养琼脂平板不能长菌落
如何分离纯培养？ 接种物液体培养基顺序稀释法分离
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29
例：从土壤中分离能产生ß－半乳糖苷酶的微生物
富集培养
选择培养基分离
精选ppt
目的菌验证
30
五、二元培养物
如果培养物中只含有两种微生物，而且是有意 识的保持两者之间的特定关系的培养物称为二 元培养物。
病毒和宿主细胞 纤毛虫、变形虫和粘细菌
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31
微生物纯培养分离方法的比较
方法
在分离、转接及培养纯培养物时防止其被 其他微生物污染的技术称为无菌技术。它是 微生物研究进行的关键。
➢用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物 ➢在转接、培养微生物时防止其他微生物的污染
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33
1、所用物品的灭菌技术
❖ A、玻璃或金属器皿灭菌
❖ 高温干热灭菌：干燥箱
❖ 160－170℃干热空气2h灭菌