病理学进展复习资料 (4)

绪论1.简述现代病理学方法有哪几类？请例举两种你熟悉的现代病理学方法，简述其原理、优势和不足。

形态、细胞表型、基因型、随访检验(1)细胞的表型一：免疫组织化学检查:原理：根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。

基本原理：形成“抗原－抗体复合物”。

可用于临床诊断和鉴别诊断，肿瘤的分型，肿瘤起源的判断，靶向药物的筛选，肿瘤生物学行为的判断病原体的检测等。

优势：相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有特异性强，定性灵敏度高、定位较直接准确的优点，是定位检测分析首选方法。

尤其对于有些因子的转位研究十分有用。

不足：操作比较复杂，对技术要求较高。

(2)细胞的基因型变化：肿瘤染色体不平衡分析：CGH FISH，肿瘤等位基因不平衡分析，肿瘤DNA 不稳定性分析，肿瘤的单克隆性分析。

二．FISH基因定位（FISHmapping）原理：基因定位时，不但需要确定某段靶序列在染色体上的位置，尚需确定两个或两个以上靶序列在线性DNA 分子的排列次序和距离，才能绘出基因图。

一般用同位素杂交：先确定每一靶序列在中期染色体上的位置，然后根据它们到端粒的距离确定出线形排列次序。

而用FISH 方法，两种或两种以上的探针能同时与中期染色体杂交，只要根据两种颜色杂交位点的相互位置，就能直接确定次序。

但中期染色体是线形DNA 分子经过折叠和包装后形成的，若两个靶序列相距很近，例如间距小于1Mbp，受包装过程的影响，它们在线形DNA 分子上的排列与在中期染色体上的排列不一定相同，甚至可能完全相反。

学者们发现，靶序列之间在间期核的平均相对距离与它们在线形DNA 分子上的距离呈正相关。

利用间期核FISH 分析不但能排除染色体包装的影响，还能提高测距的分辨率。

优点：可帮助基因定位与基因制图，FISH 已经极大地加速了人类基因定位和基因制图的进程。

可帮助基因诊断，更加精确、直观、明了。

FISH 为研究基因的扩增和缺失提供了新的方法，能将基因扩增和染色体重复分开。

不足：虽FISH 基因定位已简化基因定位的步骤，提高了效率，但仍然成本较高，暂时不适合普及使用。

四．原位分子杂交原理：是应用特定标记的已知核酸探针与组织或细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，形成杂交体，杂交后的信号可以在光镜或电镜下进行观察。

优势：由于核酸分子杂交的特异性强、敏感性高、定位精确、定量可能，因此该技术已广泛应用于生物学、医学等各个领域的研究之中。

不足：限制于存在适合核酸分子杂交的组织中，且由于成本问题，不适合大规模临床推广。

(3)形态学着手点三．电子显微镜技术原理：是以电子束为照明源，通过电子流对生物样品的透射以及电磁透镜的多级放大后的荧光屏上成像的大型精密仪器。

可见到细胞内的细胞器、细胞骨架或大分子水平的变化，细胞内的病毒颗粒等。

优点：可比较直观的看到某些组织的具体形态，进而比较直观且充分说明病变的情况。

可很好的帮助病理诊断以及研究。

缺点：切片的处理繁琐，切片的制作要求高，切片观察也比较费力。

且电镜观察局限于局部，较难对病变的整体进行判断，存在局限之处。

(4)随访检验2.例举你所感兴趣的现代病理学前沿领域的动态:领域、现状、问题所在、现有的解决办法、可能的解决方案。

乳腺癌相关3. 现代癌症研究中的重要人物科学上有哪些贡献?Weinberg 发现了第一个癌的抑制基因RB。

V ogelsteinB 等人从分子水平上建立了解释导致肠癌发生的模型。

V ogelstein 和Lengauer 合作发表肠癌细胞中染色体得到和失去的显著性提高，并提出染色体的不稳定早于原癌细胞与抑癌细胞突变之前。

第一个病毒癌基因的发现：Duesberg PH 是发现者之一。

经过紧20 年的反潮流研究，几乎被踢出美国NIH 的Duesberg 于90 年代末和他的学生们提出了癌变的非整倍体假说。

Reid 识别出人体子宫颈癌和肠癌的周期性的非整倍体模式。

美国麻省理工学院怀特黑德研究所的A．Weinberg 提出：“5、6个不同的调节系统必须依次受到干扰后，才能使正常细胞生长成为癌症。

”——Weinberg 是标准模式的创立者之一。

乳腺病理进展——张伟1.乳腺癌目前常用的组织学分级系统？如何分级？改良Scarff-Bloom-Richardson分级系统依据：腺管形成（明确的中央腺腔形成）的比例、细胞的多形性（1 级: 大小一致，<1.5(正常乳腺上皮)，核仁不明显2 级: 轻-中度多形，1.5-2 倍(正常乳腺上皮)，小核仁3 级:>2 倍(正常乳腺上皮)，泡状核，核仁明显）和核分裂象计数（增殖最活跃区计数）乳腺浸润性癌的危险评估体系中，低级别是低度危险指标，中级别和高级别是中度危险指标。

1）腺管形成①明显腺管（>75%）1 分②中度分化腺管(10%-75%) 2 分③细胞呈实性片块或条索状生长（腺管<10%) 3 分。

2）细胞多形性①细胞核大小、形状及染色质一致为1 分。

②细胞核中度不规则为2 分。

③细胞核明显多形性为3 分。

3）核分裂相(×400) ①0-9／10HPF 1 分②10～19／10HPF 2 分③>20／10HPF 3 分各标准的3 项指标所确定的分数相加，3～5 分为I 级(分化好)，6～7 分为Ⅱ级(中等分化)，8～9 分为Ⅲ级(分化差)。

2.乳腺癌相关分子标志有哪几类？与乳腺癌生物学行为的关系？•异常表达的生物活性物质，反映肿瘤生长、浸润、转移及发生发展等方面的恶性生物学行为原癌基因和抑癌基因：Her-1，Her-2,c-myc,ras,p53,muc1增殖与凋亡相关标志：Ki67,p27,bcl2,CyclinD1激素受体：ER,PR特异性蛋白：Telomerase,MG等Her-2基因/Erb2：编码酪氨酸激酶活性的Her-2，参与调控细胞生长、增殖和分化；Her-2 状态是除淋巴结转移外对乳腺癌预后最有价值的标记。

也可以作为靶向药物的预测指标。

激素受体：正常乳腺有ER（雌激素）受体、PR（孕激素）受体，癌变时ER、PR 全部或部分消失，表明肿瘤受内分泌调节，可内分泌治疗。

受体阳性肿瘤普遍好于受体阴性肿瘤。

端粒酶（telomerase）：正常组织阴性，乳腺癌中高表达。

表达与淋巴结阳性和Ki-67的表达呈正相关前列腺特异抗原PSA：预后良好的指标乳腺珠蛋白MG：MG mRNA 为判断乳腺癌淋巴结微转移、骨髓微转移和外周血乳腺癌细胞的新标记物。

3.什么是乳腺癌的分子分型？基本的分型有哪些？•将大规模基因表达谱作为特征性的“分子标签”。

以肿瘤分子表达差异为基础的乳腺癌分子分型的提出对于解决肿瘤的异质性、分期的合理性、预后判断的准确性及个体化治疗提供重要依据。

五型:管腔A型（Luminal A）：ER（+）HER-2（—）Ki-67低表达管腔B型（Luminal B）：ER（+）HER-2（—）或过表达Ki-67高表达Her2 过表达型：ER（+）HER-2 过表达基底细胞样型(Basal-like)：ER（—）HER-2（—）CK5/6+&/or EGFR+正常乳腺样型(normal breast-like) ：ER（—）HER-2（—）CK5/6&—/or EGFR——（名解？）4.乳腺微浸润癌？•浸润灶的最大径≤1mm,可以是单灶或多灶多见于高级别导管原位癌如果为多灶性，则以直径最大灶计算，而不累加占所有乳腺癌<1%5三阴性乳腺癌？ER、PR和Her-2均为阴性表达；乳腺癌中占10-17%；好发于40岁以下妇女；预后极差，5年生存率<15%病理学特征：导管癌，高组织学分级；易发生局部复发和远处转移；预后与肿瘤大小和淋巴结状况无关；与基底样乳腺癌极相似内分泌和抗Her-2 治疗无效，化疗是唯一选择补充：（ER 状态决定是否要接受内分泌治疗目前诊断金标准：IHC免疫组化）AS—马丽琴一、名解（是什么，有什么作用）：胆囊收缩素（CCK）：一种典型的脑肠肽, 存在于消化系统、中枢及外周神经系统, 具有明确的抗内毒素休克、抗炎及抗氧化作用，参与调节机体多种生理功能及病理过程超氧化物歧化酶（SOD）：是催化超氧化物离子O2-的歧化反应的酶，是需氧生物体内唯一以氧自由基为底物的酶，能够清楚体内的氧自由基，让机体免于自由基的损伤，对机体抗氧化的有保护作用。

二、简答题：AS定义：指动脉内膜有脂质沉积，伴有内膜纤维组织增生、组织坏死及钙化等，形成粥样斑块，导致管壁硬化。

1.动脉粥样硬化（AS）发生的可能机制，举例说明（1）脂质渗入学说--氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）是引起动脉粥样硬化的主要因素。

（2）平滑肌突变学说（3）炎症学说（4）内皮损伤学说（5）单核巨噬细胞作用学说（6）自身免疫学说最新：自身免疫性AS与血栓形成有关，抗B2-GPI（葡萄糖6磷酸异构酶）抗体识别oxLDL-B2-GPI复合体形成IC复合物被巨噬细胞摄取—泡沫细胞【过程】LDL通过内皮细胞（通透性增加）渗入内皮下间隙，单核细胞迁入内膜转化为巨噬细胞；ox-LDL与巨噬细胞表面的清道夫受体结合而被摄取，形成巨噬细胞源性泡沫细胞；动脉中膜的SMC经内弹力膜窗孔迁入内膜，吞噬脂质形成肌源性泡沫细胞；SMC增生迁移，合成细胞外基质，形成纤维帽；ox-LDL使泡沫细胞坏死崩解，形成糜粥样坏死物，粥样斑块形成。

2.胆囊收缩素（CCK）有哪些作用脑肠肽（1）促进胆囊收缩；（2）促进胰酶分泌，并可协同促胰液素促进胰液HCO3-分泌；（3）松弛oddi 括约肌，降低食管的括约压力，缓解胃排空，增强小肠和结肠运动；（4）参与调解机体的多种生理功能及病理过程，与摄食、饱感和镇痛有密切关系。

（受体作用）比如有抗失血性休克的作用，同时还可能有抗动脉粥样硬化（AS）的作用，并且参与机体的免疫调节（上调巨噬细胞B7.2，降低LPS诱导的B7.1），具有抗炎、抗氧化作用（对抗LPS诱导的IOS等）。

CCK-8的心血管功能调节（双向调节血压）和细胞保护作用（脾脏在应激时候对CCK清除减少）小分子八肽胆囊收缩素（CCK-8）的心血管功能调节及细胞保护作用正成为研究的新热点。

CCK-8具有抗氧化作用, 可部分抑制内毒素主要成分脂多糖（LPS）诱导的血管平滑肌细胞SOD,NOS表达。

CCK在生理状态下（正常对照组冠状动脉壁）不表达或极少量表达，而动脉粥样硬化组CCK表达阳性。