病理学进展复习资料 (4)

绪论

1.简述现代病理学方法有哪几类？请例举两种你熟悉的现代病理学方法，简述其原理、优势和不足。

形态、细胞表型、基因型、随访检验

(1)细胞的表型

一：免疫组织化学检查:

原理：根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。基本原理：形成“抗原－抗体复合物”。

可用于临床诊断和鉴别诊断，肿瘤的分型，肿瘤起源的判断，靶向药物的筛选，肿瘤生物学行为的判断病原体的检测等。

优势：相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有特异性强，定性灵敏度高、定位较直接准确的优点，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。

不足：操作比较复杂，对技术要求较高。

(2)细胞的基因型变化：

肿瘤染色体不平衡分析：CGH FISH，肿瘤等位基因不平衡分析，肿瘤DNA 不稳定性分析，肿瘤的单克隆性分析。

二．FISH基因定位（FISHmapping）

原理：基因定位时，不但需要确定某段靶序列在染色体上的位置，尚需确定两个或两个以上靶序列在线性DNA 分子的排列次序和距离，才能绘出基因图。一般用同位素杂交：先确定每一靶序列在中期染色体上的位置，然后根据它们到端粒的距离确定出线形排列次序。而用FISH 方法，两种或两种以上的探针能同时与中期染色体杂交，只要根据两种颜色杂交位点的相互位置，就能直接确定次序。但中期染色体是线形DNA 分子经过折叠和包装后形成的，若两个靶序列相距很近，例如间距小于1Mbp，受包装过程的影响，它们在线形DNA 分子上的排列与在中期染色体上的排列不一定相同，甚至可能完全相反。学者们发现，靶序列之间在间期核的平均相对距离与它们在线形DNA 分子上的距离呈正相关。利用间期核FISH 分析不但能排除染色体包装的影响，还能提高测距的分辨率。

优点：可帮助基因定位与基因制图，FISH 已经极大地加速了人类基因定位和基因制图的进程。可帮助基因诊断，更加精确、直观、明了。FISH 为研究基因的扩增和缺失提供了新的方法，能将基因扩增和染色体重复分开。

不足：虽FISH 基因定位已简化基因定位的步骤，提高了效率，但仍然成本较高，暂时不适合普及使用。

四．原位分子杂交

原理：是应用特定标记的已知核酸探针与组织或细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，形成杂交体，杂交后的信号可以在光镜或电镜下进行观察。

优势：由于核酸分子杂交的特异性强、敏感性高、定位精确、定量可能，因此该技术已广泛应用于生物学、医学等各个领域的研究之中。

不足：限制于存在适合核酸分子杂交的组织中，且由于成本问题，不适合大规模临床推广。

(3)形态学着手点

三．电子显微镜技术

原理：是以电子束为照明源，通过电子流对生物样品的透射以及电磁透镜的多级放大后的荧

光屏上成像的大型精密仪器。可见到细胞内的细胞器、细胞骨架或大分子水平的变化，细胞内的病毒颗粒等。

优点：可比较直观的看到某些组织的具体形态，进而比较直观且充分说明病变的情况。可很好的帮助病理诊断以及研究。

缺点：切片的处理繁琐，切片的制作要求高，切片观察也比较费力。且电镜观察局限于局部，较难对病变的整体进行判断，存在局限之处。

(4)随访检验

2.例举你所感兴趣的现代病理学前沿领域的动态:领域、现状、问题所在、现有的解决办法、可能的解决方案。

乳腺癌相关

3. 现代癌症研究中的重要人物科学上有哪些贡献?

Weinberg 发现了第一个癌的抑制基因RB。

V ogelsteinB 等人从分子水平上建立了解释导致肠癌发生的模型。

V ogelstein 和Lengauer 合作发表肠癌细胞中染色体得到和失去的显著性提高，并提出染色体的不稳定早于原癌细胞与抑癌细胞突变之前。

第一个病毒癌基因的发现：Duesberg PH 是发现者之一。经过紧20 年的反潮流研究，几乎被踢出美国NIH 的Duesberg 于90 年代末和他的学生们提出了癌变的非整倍体假说。Reid 识别出人体子宫颈癌和肠癌的周期性的非整倍体模式。

美国麻省理工学院怀特黑德研究所的A．Weinberg 提出：“5、6个不同的调节系统必须依次

受到干扰后，才能使正常细胞生长成为癌症。”——Weinberg 是标准模式的创立者之一。

乳腺病理进展——张伟

1.乳腺癌目前常用的组织学分级系统？如何分级？

改良Scarff-Bloom-Richardson分级系统

依据：腺管形成（明确的中央腺腔形成）的比例、细胞的多形性（1 级: 大小一致，<1.5(正常乳腺上皮)，核仁不明显2 级: 轻-中度多形，1.5-2 倍(正常乳腺上皮)，小核仁3 级:

>2 倍(正常乳腺上皮)，泡状核，核仁明显）和核分裂象计数（增殖最活跃区计数）

乳腺浸润性癌的危险评估体系中，低级别是低度危险指标，中级别和高级别是中度危险指标。1）腺管形成①明显腺管（>75%）1 分②中度分化腺管(10%-75%) 2 分③细胞呈实性片块

或条索状生长（腺管<10%) 3 分。

2）细胞多形性①细胞核大小、形状及染色质一致为1 分。②细胞核中度不规则为2 分。

③细胞核明显多形性为3 分。

3）核分裂相(×400) ①0-9／10HPF 1 分②10～19／10HPF 2 分③>20／10HPF 3 分

各标准的3 项指标所确定的分数相加，3～5 分为I 级(分化好)，6～7 分为Ⅱ级(中等分化)，8～9 分为Ⅲ级(分化差)。

2.乳腺癌相关分子标志有哪几类？与乳腺癌生物学行为的关系？

•异常表达的生物活性物质，反映肿瘤生长、浸润、转移及发生发展等方面的恶性生物学行为

原癌基因和抑癌基因：Her-1，Her-2,c-myc,ras,p53,muc1