体外放射分析技术

放射免疫分析（RIA）
原理:利用放射性核素标记抗原和非标记待测 抗原竞争性结合其相应的特异性抗体。
反应条件
标记抗原与非标记抗原具有相同的免疫活 性；
特异抗体与标记抗原是恒量； Ag+＊Ag﹥Ab
公式：Ag+Ab +
＊Ag
Ag•Ab+Ag
＊Ag •Ab+ ＊ Ag
如果在不同试管中分别加入已知系列浓度 的标准抗原(Ag)在同样条件参与反应，获 得各标准浓度管的*Ag·Ab量，并以已知标 准抗原的浓度为横坐标，以*Ag·Ab复合物 的结合率为纵坐标，可绘制出剂量反应曲 线，即为标准曲线或竞争性抑制曲线 。
体外放射分析技术
是指在体外实验条件下，以特异性结合反 应为共同的生物学基础，以结合反应动力 学为规律为共同的方法学基础，并以放射 测量技术为共同的定量手段，对生物活性 物质进行超微量定量分析的总称。具有灵 敏度高、特异行强、精密度密度好、应用 面广、方法简便等突出优点，是核医学中 重要技术之一。
结 合 率 0.8
0.6 0.4
0.2百度文库
10 20
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标准曲线浓度
特点：
竞争性结合分析 采用标记抗原 结合部分放射性活度与待测抗原浓度呈负
相关
主要试剂
一、抗体： 关键试剂，它直接关系到分 析系统的质量和成败。评价抗体质量的指 标有：
（1）特异性：指抗体不受交叉反应物质影响 的程度。通常由交叉反应率的大小来定量评价。 交叉反应率越少，抗体的特异性越好。
公式
Ag + *Ab
Ag·*Ab + *Ab
以已知含量的抗原参与结合反应制作一条 标准曲线 ，通过该标准曲线可以刻度待测 抗原的含量，这条标准曲线反映剂量与标 记抗体抗原复合物结合率为正相关关系， 即复合物的结合率随着待测抗原的含量增 加而增加。
免疫放射分析特点
非竞争性结合分析 结合部分放射性活度与待测抗原浓度呈正
（2）亲合力：在放射免疫分析中，亲合力是 指抗体与抗原间的结合强度。
（3）滴度：反映该种特异性抗体在血清中的 含量，以滴度大的抗血清为好。
二、抗原
最常用的标记核素是125I，其半衰期适中（约60天），既易 于商品化与贮存，又有利于废物的处理；125I只发射低能的 γ射线（28keV和35keV），容易测量 ；
免疫活性相同； 标记后不改变抗原生物活性； 比活度、放射化学纯度高。
三、标准品
质：与待测物有相同的生物特性； 量：其浓度必须准确。
分离方法
分离抗原抗体复合物（大分子）与游离抗 原（小分子）。
免疫放射分析（IRMA）
原理：将放射性核素标记在抗体上，然后 以过量的标记抗体与待测抗原结合，将标 记的抗体抗原复合物（Ag·*Ab）与未结合 的标记抗体分离，通过放射测量可求得待 测抗原的含量。免疫放射分析标记的是过 量抗体，反应系统是非竞争性的全量结合 反应 。
受体放射分析（RBA）
是目前研究受体亲和力和受体数量最基本、最 主要的方法。它是应用放射性核素标记配体与 特异的受体结合，测定受体的亲和力和数量， 也可用作研究受体亚型的方法。
受体放射分析具有灵敏度高，特异性强，专一 性好等特点 。
非放射标记免疫分析
化学发光免疫分析 时间分辨荧光免疫分析
相关 反应达到平衡较快 误差几率小
两种分析方法的比较
标记物在RIA中核素标记抗原，在IRMA中核素标记抗体。 反应速率反应速度与反应物的浓度呈正比，IRMA不存在竞
争性结合复杂的反应，所以反应速度较RIA快。 反应模式RIA为竞争抑制，测得放射性的量与受检抗原呈反
比。IRMA为非竞争结合，剂量反应曲线为正相关的直线关 系。 分析误差RIA中加入的抗体和标记抗原都是定量的，加样误 差可严重影响测定结果。IRMA中标记和固相抗体在反应中 都是过量的，只有受检标本的加样误差才会影响分析结果。 因此，IRMA的批内和批间变异均比较小。