麦冬总皂苷不同提取方法的比较研究

麦冬总皂苷不同提取方法的比较研究

车仁国,商秀梅,沈宏伟,付绍平,金凤燮,鱼红闪

*

(大连工业大学生物与食品学院,辽宁大连116034)

摘要 [目的]为工业提取麦冬总皂苷选出一种新的提取方法。[方法]以短葶山麦冬皂苷C 为标准品,利用等吸收双波长消去法、薄层层析法、高效液相色谱法进行含量分析,对生物酶法和常规醇提法提取的麦冬总皂苷进行比较研究。[结果]在2~15L g/ml 浓度范围内,麦冬皂苷浓度(C )与吸收差值(v A)成线性关系,其线性回归方程为:v A =-0.00551+6.53245C ,R =0.99921。3种方法的测定结果一致表明生物酶法提取的麦冬总皂苷浓度较常规醇提法的大。等吸收双波长消去法测得生物酶法提取的麦冬总皂苷得率为5.66%,而常规醇提法的仅为2.36%。生物酶法提取的短葶山麦冬皂苷C 的浓度为0.08134mg/ml,是常规醇提法(0.03906mg/ml)的2.08倍。[结论]采用生物酶法提取麦冬总皂苷可以提高提取得率。关键词 麦冬总皂苷;生物酶法;醇提法

中图分类号 S 567.23+2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008)07-02807-03

Co m parative Study on the D ifferent Metho ds of Ex tracting T o ta l Sa ponin from O phio pogo n japonicus C HE Ren -guo et al (College of Bi ology and Food Tech nology ,Dalian Polytechnic University,Dalian,Liaonin g 116034)Abstract [Objecti ve]The study ai med to select ou t a ne w method for the ind ustrial extraction of total sap oni n from O phiopogon j a ponicu s .[Method]With the saponin C from Li riope m uscari (Desne)Baily as standard ,the content an alysis was conducted by equal abs orption d ou ble wavelength spectropho -tometry,TLC an d HPLC and the total saponin extracted from O.j a ponicu s b y bi ological en zyme method was com pared with that b y conven tional alcohol extraction.[Result]In the concn.range of 2~15L g/ml,the O.ja ponicus saponin concn.(C )showed li near relationship with absorption difference va-l u e (v A )and their linear regression equ ation was v A =-0.00551+6.53245C ,R =0.99921.The determi nation results of the 3method s accordant -ly sho wed that the concn.of total sap onin extracted from O.ja pon ic us by biological enzyme method was bi gger than th at b y conven ti onal ethanol extrac -tion.The yield of total saponin extracted from O.ja ponicus by biological enzyme method and determin ed b y equal abs orption d ou ble wavelen gth spec -trop hotometry was 5.66%,an d th at by conven tional ethanol extraction was only 2.36%.The concn.of saponin C extracted from L.m usca ri by biological enzyme method was 0.08134m g/ml and 2.08tim es of that b y conven tional ethanol e xtracti on (0.03906mg/ml).[C onclu si on]Extractin g total saponin from O.ja ponicus by biological enz ym e method could enhance the extractin g yield .

Key w ords Total saponi n from O phiopogon ja pon ic us ;Biol ogical enzyme method ;Alcohol extraction

麦冬为百合科植物麦冬(Ophio po gon japonicus (L.f.)Ke r -Ga wl.)的干燥块根,具有较好的药用价值[1-4]

。目前,国内外对麦冬总皂苷提取方法的研究比较少,麦冬提取的常规方法为水提法及醇提法[5-6],但是由于麦冬植物中多糖成分较高的特点,使用常规方法其皂苷提取率低下,采用生物酶法水解去掉麦冬植物中的多糖类干扰物质,可以使麦冬总皂苷更容易被提取出来。笔者将生物酶法应用于麦冬总皂苷的提取,并和常规醇提法进行比较,旨在为工业化提取麦冬总皂苷选择一种新的提取方法。1 材料与方法

1.1 试验材料 麦冬,市售,浙江慈溪产;麦芽汁,大连华润啤酒有限公司提供;标准品短葶山麦冬皂苷C,由中国药科大学余伯阳教授提供;菌种Absidia sp.O8s [7]由大连工业大学生物与食品工程学院菌种保藏所(Bioche mistry a nd Foo d Eng-i nee ring Scho ol Culture Collec tion o f D alian Polyte chnic University)提供;薄层层析板,德国Merc k 公司产品。1.2 试验方法

1.2.1 麦冬皂苷含量的测定。¹标准曲线的制备[8]。精密称量标准品3.7mg 于50ml 量瓶中,甲醇定容。精密吸取0.3、0.5、1.0、1.5、2.0ml 标准溶液置于平底烧瓶中,蒸干。加入高氯酸(70.0%~72.0%)10ml,密塞,65e 水浴加热15min,冰水停止反应,1~4h 内于295、325nm 波长测定吸收值,高氯酸为空白。以浓度(C)为横坐标,吸收差值(v A )为

基金项目 国家自然科学基金资助项目(20476017);辽宁省高等学校优

秀人员支持计划资助项目(RC204205);辽宁省科学技术基金资助项目(20042132)。

作者简介 车仁国(1981-),男,辽宁沈阳人,硕士研究生,研究方向:天

然产物。*通讯作者。

收稿日期 2007-11-08

纵坐标,绘制标准曲线。线性范围2~15L g/ml,得回归方程。麦冬总皂苷被测组分按上述步骤,测定295、325n m 波长的吸收值,将吸收差值(v A )代入回归方程可以算得麦冬总皂苷

的浓度(C),进而得麦冬总皂苷的含量,计算式:麦冬总皂苷含量=麦冬总皂苷浓度@被测麦冬总皂苷体积。º样品溶液的测定。取2mg 麦冬总皂苷溶于25ml 量瓶中,用甲醇定容。取0.5ml 待测。

1.2.2 薄层层析检测。采用薄层层析法对生物酶法提取的麦冬总皂苷和常规醇提法提取的麦冬总皂苷粗品进行初步检测。点样量10L l 左右,展开剂为乙酸乙酯B 甲醇B 水=5B 8B 0.5。展开后吹干,在10%的H 2SO 4溶液显色检测麦冬总皂苷斑点分布情况。

1.2.3 高效液相色谱法(HPLC)检测。仪器为Wa te rs Allia nc e 2695-2966D AD,色谱柱为Hype rsil O DS2(4.6mm @150mm,5L m),检验波长218nm,流速1.0ml/min,进样量10L l,柱温35e 。流动相A 为乙腈,B 为水,梯度洗脱条件如表1。

表1 梯度洗脱条件

T a ble 1 The co nditio ns o f gra dient elution

时间Ti me min

流动相A Mobi le ph ase A

%流动相B Mob ile p hase B

%0307020505040

90

10

1.2.4 发酵方法与酶液的制备。500ml 三角瓶中加入80ml 5b 麦芽汁和20ml 上述麦冬粉末浸出液混匀作培养基,接菌,30e 恒温培养箱中摇床震荡培养4~6d 。用高速冷冻离心机在8000r/min 离心15min,收集上清液。将一定体积的上清液在磁力搅拌条件下加入硫酸铵粉末,使硫酸铵饱和度达

安徽农业科学,Journal of Anh ui Agri.Sci.2008,36(7):2807-2809 责任编辑 庆 责任校对 马君叶