木瓜酶活性的提高对蛋白质水解效果
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根据标准曲线， 分析不同添加剂 的作用机理
绘制酪氨酸标准曲线：
a.取9支试管，编号，按下表格加入试剂。
单位：(ml)
试剂
012345678
500ug/ 0
ml酪氨酸溶
液
蒸馏水
1
碳酸钠溶 5 液
酚试剂
1
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8
0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 55555555 11111111
5 CuSO4
6 ZnSO4
8 ZnSO4 EDTA二钠
7 CuSO4 EDTA二钠
2
3
无添加剂 Na2S03
4 EDTA二钠
结论：
在55℃水浴条件下，木瓜酶与足量底物反应10min，得到 的酪氨酸用酚试剂测定其含量。根据OD值计算可知：
Na2SO3和EDTA二钠可以提高木瓜酶活性，分别提高 78.7%和24.8%
Cu2+和Zn2+的引入会降低木瓜酶的活性，分别减小 41.1%和49.6%
在纯木瓜酶的反应中可得知： EDTA二钠可与金属离子螯合，降低金属对酶活的影响。 但是加入顺序不同效果就不一样。 先Cu2+后EDTA二钠，Cu2+使酶变性； 先EDTA二钠后Zn2+，有效保护酶活性。
Na2CO3
8 ZnSO4 EDTA 二钠
++++ ++++ +
++Hale Waihona Puke Baidu+
0
1
2345
678
0
1
2
3
4
5
6
7
8
现象
(浅蓝--灰蓝 --深黑蓝)
OD值
++ 0.314
+ 0.067
++++ 1.378
++++ +
2.462
++++ +
1.720
+++ 0.812
+++ 0.694
+++ 0.754
++ 0.562
b.振荡、置于30℃恒温水中显色15min
c.用分光光度计在A680nm处测定680nm的光吸收值
d.以酪氨酸含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制酪蛋白的标准曲线, 根据散点写出回归线性方程。
吸光值
3.5 3
2.5 2
1.5 1
0.5 0 0
酪氨酸标准曲线
y = 0.0076x + 0.0505 R2 = 0.9981
K2HPO4
K2CO3
KCl
谢谢
题目：木瓜酶活性的提高 对蛋白质水解效果
成员：2008级生物工程 王佳宁 2008级生物工程 漆亚乔 2008级生物技术 李芮
实验目的：
以未成熟的青果木瓜浆汁为原料，提 取木瓜酶（木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白
酶A、木瓜凝乳蛋白酶B及木瓜肽酶）。通
过利用适量的激活剂，提高木瓜酶的活
性，得到更好的蛋白质水解能力。寻找最 适激活剂，在生产、应用中尽量避免加入
3 2 吸光值 1 0
新鲜木瓜酶活性测定
0号 2号 3号 4号 1 5号 6号 7号 8号 不同试管
0号 无酶液有蛋白
2号 正常反应
3号 添加亚硫酸钠
4号 添加EDTA二钠
5号 添加硫酸铜
6号 添加硫酸锌
7号 添加硫酸铜和EDTA二钠 8号 添加硫酸锌和EDTA二钠
1 无蛋白 有酶
0 有蛋白 无酶
抑制剂。
方法：
收集新鲜木瓜乳汁，处理后得到木瓜 酶液。向酶液中加入不同添加剂（激活剂 或抑制剂），与酪蛋白底物反应相同时间， 通过测定反应后酪氨酸的含量，说明不同 添加剂对木瓜酶催化反应的影响。
实验步骤：
取青木瓜浆汁 制成浊液
过滤 取滤液透析
制成酶液
在不同添加剂环 境下测定酶活
绘制酪氨酸 标准曲线
50 100 150 200 250 300 350 400 450 酪氨酸浓度（μg/ml）
不同添加剂环境下酶活力的测定：
试剂
0
1
2
3
4
5
6
7
8
蒸馏水 3
7
2
1
1
1
1
木瓜酶液
1
1
1
1
1
1
1
1
Na2S03
1
EDTA二钠
1
1
1
CuSO4
1
1
ZnSO4 酪蛋白 5
1
1
5
5
5
5
5
5
5
55℃水浴反应10分钟后，用2ml 10%三氯乙酸沉淀蛋白质
过滤，取滤液2ml
碳酸钠 7
7
7
7
7
7
7
7
7
酚试剂 1
1
1
1
1
1
1
1
1
用分光光度计在A680nm处测定光吸收值。
现象 (白色沉 淀)
0 有蛋白 无酶
+++++ +
1 无蛋 白有 酶
+++
2 无添 加剂
++
3 Na2S03
+
45 EDTA CuSO4 二钠
+ ++++ +
6 ZnSO4
7 CuSO4 EDTA二钠
绘制酪氨酸标准曲线：
a.取9支试管，编号，按下表格加入试剂。
单位：(ml)
试剂
012345678
500ug/ 0
ml酪氨酸溶
液
蒸馏水
1
碳酸钠溶 5 液
酚试剂
1
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8
0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 55555555 11111111
5 CuSO4
6 ZnSO4
8 ZnSO4 EDTA二钠
7 CuSO4 EDTA二钠
2
3
无添加剂 Na2S03
4 EDTA二钠
结论：
在55℃水浴条件下，木瓜酶与足量底物反应10min，得到 的酪氨酸用酚试剂测定其含量。根据OD值计算可知：
Na2SO3和EDTA二钠可以提高木瓜酶活性，分别提高 78.7%和24.8%
Cu2+和Zn2+的引入会降低木瓜酶的活性，分别减小 41.1%和49.6%
在纯木瓜酶的反应中可得知： EDTA二钠可与金属离子螯合，降低金属对酶活的影响。 但是加入顺序不同效果就不一样。 先Cu2+后EDTA二钠，Cu2+使酶变性； 先EDTA二钠后Zn2+，有效保护酶活性。
Na2CO3
8 ZnSO4 EDTA 二钠
++++ ++++ +
++Hale Waihona Puke Baidu+
0
1
2345
678
0
1
2
3
4
5
6
7
8
现象
(浅蓝--灰蓝 --深黑蓝)
OD值
++ 0.314
+ 0.067
++++ 1.378
++++ +
2.462
++++ +
1.720
+++ 0.812
+++ 0.694
+++ 0.754
++ 0.562
b.振荡、置于30℃恒温水中显色15min
c.用分光光度计在A680nm处测定680nm的光吸收值
d.以酪氨酸含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制酪蛋白的标准曲线, 根据散点写出回归线性方程。
吸光值
3.5 3
2.5 2
1.5 1
0.5 0 0
酪氨酸标准曲线
y = 0.0076x + 0.0505 R2 = 0.9981
K2HPO4
K2CO3
KCl
谢谢
题目：木瓜酶活性的提高 对蛋白质水解效果
成员：2008级生物工程 王佳宁 2008级生物工程 漆亚乔 2008级生物技术 李芮
实验目的：
以未成熟的青果木瓜浆汁为原料，提 取木瓜酶（木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白
酶A、木瓜凝乳蛋白酶B及木瓜肽酶）。通
过利用适量的激活剂，提高木瓜酶的活
性，得到更好的蛋白质水解能力。寻找最 适激活剂，在生产、应用中尽量避免加入
3 2 吸光值 1 0
新鲜木瓜酶活性测定
0号 2号 3号 4号 1 5号 6号 7号 8号 不同试管
0号 无酶液有蛋白
2号 正常反应
3号 添加亚硫酸钠
4号 添加EDTA二钠
5号 添加硫酸铜
6号 添加硫酸锌
7号 添加硫酸铜和EDTA二钠 8号 添加硫酸锌和EDTA二钠
1 无蛋白 有酶
0 有蛋白 无酶
抑制剂。
方法：
收集新鲜木瓜乳汁，处理后得到木瓜 酶液。向酶液中加入不同添加剂（激活剂 或抑制剂），与酪蛋白底物反应相同时间， 通过测定反应后酪氨酸的含量，说明不同 添加剂对木瓜酶催化反应的影响。
实验步骤：
取青木瓜浆汁 制成浊液
过滤 取滤液透析
制成酶液
在不同添加剂环 境下测定酶活
绘制酪氨酸 标准曲线
50 100 150 200 250 300 350 400 450 酪氨酸浓度（μg/ml）
不同添加剂环境下酶活力的测定：
试剂
0
1
2
3
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6
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蒸馏水 3
7
2
1
1
1
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木瓜酶液
1
1
1
1
1
1
1
1
Na2S03
1
EDTA二钠
1
1
1
CuSO4
1
1
ZnSO4 酪蛋白 5
1
1
5
5
5
5
5
5
5
55℃水浴反应10分钟后，用2ml 10%三氯乙酸沉淀蛋白质
过滤，取滤液2ml
碳酸钠 7
7
7
7
7
7
7
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7
酚试剂 1
1
1
1
1
1
1
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1
用分光光度计在A680nm处测定光吸收值。
现象 (白色沉 淀)
0 有蛋白 无酶
+++++ +
1 无蛋 白有 酶
+++
2 无添 加剂
++
3 Na2S03
+
45 EDTA CuSO4 二钠
+ ++++ +
6 ZnSO4
7 CuSO4 EDTA二钠