实验室常用梅毒检测方法的评价

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收稿日期：２００８—０６—１０ 作者简介：孟德娣（１９７９一）．女，安徽省合肥市人．学士，助教．现从事临床检验技术教学和科研工作。
万方数据
第６期
孟德娣。等 实验室常用梅毒检测方法的评价
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４梅毒螺旋体ＥＬＩＳＡ试验（ＥＬＩＳＡ）
梅毒螺旋体ＥＬＩＳＡ试验是随着近年梅毒螺旋 体基因工程的研制成功而发展起来的一种血清学检 测方法，是利用重组梅毒螺旋体ＴＰ４７、ＴｍＰＡ抗原包 被微孔板和辣根过氧化物酶标记的ＴＰ４７、ＴｍＰＡ抗 原夹心法检测血清中的梅毒特异性抗体¨Ｊ，该试验 使用基因工程方法制备重组抗原代替以往使用的野 生型梅毒螺旋体抗原，易于纯化，极大提高了试验的 敏感性和特异性。目前，虽然梅毒ＥＬＩＳＡ试验的临 床应用依然存在争议¨。９１，但ＥＬＩＳＡ法具有诸多其 他检测方法不可比拟的优点，仍然得到广泛的使用。 ＥＬＩＳＡ试剂廉价，试验方法操作简便，敏感性、特异 性高，稳定性好，不受溶血和纤维蛋白影响，可自动 化进行，结果清晰，并可与全自动免疫分析系统结合 进行加样检测与分析，采用电脑软件处理、保存、传 输数据，使检测更客观准确，数据管理更规范化，是 目前梅毒血清学诊断试验的首选方法。需注意的是 ＥＬＩＳＡ法检测时，如果血清中梅毒抗体浓度过高。会 产生钩状效应¨…。对于大型采供血机构来说，进行 大量血液样本筛查．可利用ＥＬＩＳＡ和ＴＲＵＳＴ两种方 法的互补来提高梅毒的检出率和准确性，保证血液 质量，同时也可以最大限度地避免不必要的血液资 源浪费，以及消除假阳性给无偿献血者造成的精神 压力…】。
［中图分类号］ Ｒ ３７７＋．１
［文献标识码］ Ａ
［文章编号］
１００８—９２７６（２００８）０６—０６２２－０３
梅毒是一种经典的通过性和母婴传播的疾病， 其传染性强，感染后可以引起全身各组织、器官的损 害，危害较大。近年来，梅毒的发病率呈上升趋势。 在梅毒诊断中，由于抗体效价或方法特异性等原因 使诊断结果常出现偏差，因此，高效的梅毒实验室诊 断已成为大势所趋，对控制梅毒蔓延意义重大。临 床实验室合理、有效地选用检测方法，避免错诊、误 诊、漏诊是非常必要的。
５荧光密螺旋体抗体吸附试验（ＦＴＡ—ＡＳＳ）
ＦＴＡ—ＡＢＳ试验以完整形态的Ｎｉｃｈｏｌ梅毒螺旋 体作为抗原，空气中干燥，丙酮固定，加上经吸收剂 （用非致病性密螺旋体Ｒｅｉｔｅｒ株提取制备而成）处 理过的病人血清（去除非特异性蛋白，提高特异 性），再加入荧光素一异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记 的抗人免疫球蛋白，与血清梅毒螺旋体抗体结 合¨“。在荧光显微镜下，螺旋体均匀地发出中等或 高强度的苹果绿色荧光为阳性，均匀地发出弱苹果 绿色荧光为弱阳性，呈微弱黄色光或观察不到荧光 为阴性。ＦＴＡ—ＡＢＳ试验虽然操作过程复杂，但具 有高度特异性和敏感性，在第一期梅毒前几天即可 测出特异性抗体，是目前诊断梅毒的金标准。但是 它有一些局限性，是客观检测但难以标准化，在合并 抗人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染时ＦＴＡ—ＡＢＳ有假 阳性‘１３１。
筛手段，不能单独据其结果诊断梅毒感染，而应对患 者进行全面检查，密切随访，并采用其他试验进行 确定。
２ 甲苯胺红不加热试验（ＴＲＵＳＴ）
ＴＲＵＳＴ试验同样是检测梅毒患者血清中存在 着的反应素。ＴＲＵＳＴ试验采用ＶＤＲＬ抗原重悬于 特制的甲苯胺红溶液中，当待测血清中存在反应素 时，即与其发生凝集反应，出现肉眼可见的粉红色凝 块。ＴＲＵＳＴ法成本低廉、快速、直观，作为梅毒的初 筛试验，ＴＲＵＳＴ试验在一般的中小型及基层医院被 广泛使用。但ＴＲＵＳＴ法为人工操作、判读，易受到 室温及技术操作等因素影响，结果的判断方面主观 性较强，易出现漏判和错判，同时存在与ＲＰＲ同样 的特异性低、敏感度不高的缺点，尤其对早期和治疗 期梅毒可呈阴性反应，且其结果不易保存、查阅，故 只作为一项梅毒感染的筛选试验ｐ１。
参考文献：
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目前梅毒的检测多采用血清学试验，本文仅对 我国实验室常用的梅毒螺旋体检测方法回顾、总结 如下。
１快速血浆反应素试验（ＲＰＲ）
快速血浆反应素试验，是一种常用的梅毒血清 学筛选试验，检查的是人体内的反应素。该试验原 理是用未经处理的活性炭颗粒（直径３—５ ａｍ）吸附 ＶＤＲＬ抗原…（０．０３％心拟脂、０．２１％卵磷脂、０．９％ 胆固醇，用无水乙醇配制）。此颗粒如与待检血清 中反应素结合，便形成黑色凝集块，可肉眼观察结 果，也可将标本倍比稀释（１：２、１：４—１：３２）进行半 定量试验，对疗效和判断是否再感染有一定价值。 该试验操作简便、快速，可用肉眼判断结果，不需特 殊器材，易于推广，可广泛应用于普查、筛选。但是 反应素试验特异性不强。梅毒螺旋体破坏组织可使 机体产生反应素，而其他破坏机体的过程也可产生 反应素，所以患者ＲＰＲ试验阳性，不一定感染梅毒 螺旋体。人体某些生理或病理状态，如怀孕、病毒性 肝炎、上呼吸道感染、肺结核、肺炎、亚急性细菌性心 内膜炎、类风湿性关节炎、ＳＬＥ（系统性红斑狼疮）、 风湿性心脏病、干燥综合征、慢性肾炎和海洛因成瘾 等，ＲＰＲ都可以呈假阳性；同时，由于梅毒感染者下 疳出现最初几天内血清反应素抗体效价较低，ＲＰＲ 试验可能呈阴性结果口】。因此，ＲＰＲ一般只作为初
３梅毒螺旋体血凝试验（ＴＰＨＡ）
ＴＰＨＡ试验是一种检测梅毒螺旋体特异性抗体 的特异的、灵敏的被动血凝试验。试验血球为用梅 毒螺旋体特异性抗原包被经过醛化和鞣化的鸡红细 胞，对照血球为未用上述抗原包被的经过醛化和鞣 化的鸡红细胞，如果是阳性标本，当和致敏的鸡红细 胞混合后，抗体和抗原的结合会引起致敏血球的凝 集，在血凝板底部形成凝集块，如为阴性标本，则血 细胞在孔底形成致密的沉淀。ＴＰＨＡ检测目标物为 梅毒特异性抗体，是目前公认的梅毒诊断试验，主要 用于筛检阳性标本的确诊Ｈ１。但ＴＰＨＡ试剂价格较 高，操作较繁琐费时，不利临床快速诊断，同时因该 特异性抗体存在时间过长，患者即便经过正规抗梅 毒治疗，仍可出现阳性结果，甚至可终生检出阳性． 故该法对梅毒治疗效果无判定价值¨－。
［１５】Ｂｕｒｓｔａｉｎ ＪＭ．Ｇｒｉｍｐｒｅｌ Ｅ，Ｌｕｋｅｈａｒｔ ＳＡ，ｃｔ ａ１．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｎｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ】．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｖ．１９９１．２９：６２—６９．
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ｒｅｉｎｓ Ａｒｅ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ａｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｌｎｄｉｅａ·ｔｏｔ８ Ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ Ｂｙ Ｔｒｅｐｏ－
万方数据
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河南职工医学院学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｎａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｆｏｒ Ｓｔａｆｆ ａｎｄ Ｗｏｒｋｅｒｓ
Ｖ０１．２０ Ｎｏ．６ Ｄｅｃ．２００８
ｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｐｒｊ－Ｔｐｒｉ，Ｔｐｒｇ， ａｎｄ Ｔｐｄ Ｌｏｃｉ Ｉｎ Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ Ｐａｌｌｉｄｕｍ Ｓｔｒａｉｎｓ Ｎｉｃｈｏｌｓ ａｎｄ Ｓｅｅ８１— ４［Ｍ】；Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ；２００５． ［１３】Ｅ船，ｌｅｓｔｏｎｅ Ｓ１．ＴｕｒｎｅｒＡ Ｊ Ｌ．Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｓｙｐｈｉｌｉｓ［Ｊ】． Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ［Ｊ】．２０００，３（３）：１５８ —１６２． ［１４］Ｙｏｕｎｇ Ｈ，Ｍｏｙｅｓ Ａ．Ｓｅａｇａｒ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｖｅｌ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ—ａｎｔｉｇｅｎ ｅｎｚｙｍｅ ｉｍｍｕｎｅ－ｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ｓｅｍｌａｇｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｓｐｈｉｌｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９８，３６（４）：９１３—９１７．
除上述几种常用方法外，梅毒快速检测试纸条 也逐步在各实验室得到了认可和应用。快速检测试 纸条虽克服了检测时间长、试剂昂贵等缺陷，但国内 暂时未有详细报道其灵敏性和特异性效果，因此不 可用于确诊试验旧”２２。。
采用ＲＰＲ、ＴＲＵＳＴ进行初筛，初筛阳性者根据 具体情况和实验室条件采用ＥＬＩＳＡ、ＦＴＡ—ＡＢＳ、 ＴＰＨＡ、ＰＣＲ等方法进行确认试验是目前而言简便、 行之有效的诊断策略。随着科技的飞速发展，梅毒 螺旋体的诊断方法日新月异，可选用方法除以上外。 还有许多可借鉴的技术，如胶体金免疫层析法（ＧＩ— ＣＡ）、免疫印迹试验等。各种方法都有独特的优点 和缺点，检验人员应从具体情况出发，因地制宜，发 展和完善梅毒诊断方法，指导临床及时治疗梅毒患 者，对控制梅毒的蔓延有重要意义。