槐米中芦丁的提取、水解和鉴定
槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定张景清（⼴西科技⼤学⽣物与化学⼯程学院⼴西柳州545006）1.摘要:本实验以槐⽶为原料，采⽤碱提酸沉法从槐⽶中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体作⽅法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
该⽅法提取率⾼达26.3%，对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析，并与标准品做对⽐，结果表明提取的芦丁与标准品的纯度⼤致相等。
2.引⾔芦丁,亦称芸⾹苷,⼴泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐⽶和荞麦叶中含量最⾼,可作为⼤量提取芦丁的原料。
芦丁属于黄酮类化合物,在⼼脑⾎管疾病的治疗上起到了举⾜轻重的作⽤,具有VP样作⽤。
有助于保持⽑细⾎管正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作⽤。
其临床效果肯定,副作⽤少,同时也是⼀种植物原料药[1]。
黄酮类化合物的提取⽅法较多主要是依据其溶解性及酸性。
黄酮类化合物的提取⽅法⼀般有：①热⽔提取法②醇提法③碱提酸沉法④系统溶剂提取法本实验碱提酸沉法通过从槐⽶中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作⽅法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
3.实验原理槐⽶中含芦丁、槲⽪素、皂苷、⽩桦、酯醇等多种成分。
芦丁是其主要成分，含量为16%-25%。
芦丁属于黄酮类化合物，结构中含有多个酚羟基，呈酸性，苷元为槲⽪素，糖基为芸⾹糖。
芦丁为浅黄⾊细⼩针状结晶，95-97℃脱⽔，熔点314℃，可溶于沸⼄醇、⽆⽔⼄醇、⼄酸⼄酯、丙酮，不溶于⽯油醚和⽔。
芦丁可溶于碱液中，呈黄⾊酸化后⼜析出，故可采⽤碱提酸沉法得到芦丁产品。
然后利⽤在冷⽔中不溶，在热⽔中微溶的溶解度差精制，可获得纯度⾼的微细针状结晶，最后利⽤芦丁、槲⽪素、及糖的性质予以鉴定。
4.实验部分4.1实验药品槐⽶（市售），氧化钙AR（西陇化⼯股份有限公司），盐酸AR（西陇科学有限公司），四硼酸钠AR（⼴东省台⼭市化⼯⼚），甲醇AR（天津市⼤茂化学试剂⼚），三氯甲烷AR（成都市科隆化学品有限公司）,氯仿（分析纯，成都市科龙化⼯试剂⼚），⼄醇（分析纯）4.2实验仪器JJ200电⼦天平（常熟市双杰测试仪器⼚），SHZ-D（III）循环⽔式多⽤真空泵（河南爱博特科技发展有限公司），ZNLC-GS 130*60智能磁⼒搅拌器（河南爱博特科技发展有限公司），薄层⾊谱展开缸，紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）4.3实验步骤4.3.1芦丁的提取⽅法⼀：称取槐⽶10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于500ml烧杯中，加⼊250ml⽔，加热搅拌下添加⽯灰乳，保持PH=8-8.5。
槐米中芦丁的提取分离与鉴定.
定 性 反 应
盐酸-镁粉反应
黄酮母核
将样品溶液1ml，先滴加1－2滴浓盐酸再加入少许 镁粉振摇，1-2min内，观察颜色变化。（注意顺序） Molish反应
苷类
将样品溶液1ml，加入与样品等体积10%α -萘 酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加适量浓硫 酸（约2ml），至分层注意观察两界面产生的变 化。（不要摇动）
注意观察现象：未加热时，瓶内为混悬
液（芦丁不溶于冷水），加热后，混悬 液逐渐变为澄清液（芦丁易溶于热水）， 继续加热，有鲜黄色沉淀析出（槲皮素不 溶于水）
滤液处理： 取芦丁水解后的滤液15m1，加 氢氧化钡粉 中和至中性（搅拌下进行）滤去白色的硫酸 钡沉淀(漏斗滤纸），滤液在沸水浴上蒸干后， 加1－2 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。 （如果加 氢氧化钡加过量后可以加少量的硫 酸回调pH)
实验规则
5、保持室内整洁：学生进入实验室必须穿戴工作衣 帽。实验完毕应将本组实验台、实验架等整理洁净方 可离开。实验小组轮流值日，主要负责实验室内、走 廊地面、门窗的卫生整洁，以及废物缸的清倒工作， 将水、电门窗关好，经指导教师验收后再离开实验室。 6、写好实验报告：实验报告是考查学生分析总结实 验资料能力和写作能力的重要方面，亦是评定实验成 绩的主要依据
子项目三
水解芦丁得到槲皮素
思考问题
1、芦丁是？苷（ N- 苷 、O-苷、S-苷or C苷? 2、苷键的裂解可以用什么方法 ？最常用的方 法是？ 影响酸水解速度的因素有哪些？ 2、芦丁水解后的产物是什么？ 3、如何进行苷类酸水解操作，如何分离得到 苷元成分？
芦丁的提取分离与鉴定
子项目三
水解芦丁得到槲皮素
保持微 沸 20min 补充水分， 保证pH值
槐米中芦丁的提取分离与鉴定
2.实验方法
芦丁粗品
0.5g芦丁粗品
1g芦丁粗品
按1:200加水，煮沸溶 解，趁热抽滤 滤液
放置析晶
2%H2SO4 80ml，直火回 流，加热30min，抽滤
芦丁精品
沉淀
滤液（PC）
水洗至中性，95%EtOH重 结晶 滤液
槲皮素精品
芦丁的精制：取0.5g芦丁粗品，置500mL烧杯中，
按1:200加水，加热至沸，使之充分溶解。
趁热过滤，滤渣再加入300mL水，直火加热0.5h。
趁热过滤，合并两次滤液。
放置，析出沉淀，抽滤，干燥得淡黄色芦丁粗品。
二 芦丁的精制和水解
一 实验原理 1.芦丁的精制是根据芦丁在热水中溶解度大，冷水中溶解度小的性 质进行重结晶而获得芦丁粗品。
2.芦丁是黄酮苷类，可进行酸水解，苷键断裂生成苷元槲皮素，葡 萄糖和鼠李糖。
4.熔点测定：芦丁
熔点测定：槲皮素
THANKS
一，芦丁的提取
1.实验原理：芦丁在冷水中的溶解度为1:10000，在热水中的 溶解度为1：200，在冷乙醇中的溶解度为1:650.因此，采用 水煎法提取芦丁经济，效率高。
2.实验方法
槐米20g，研碎
药渣
滤液
300ml，煎煮0.5h，过滤 滤液
芦丁粗品
取20g槐米，研碎。
置于400mL沸水中，直火煎煮1h(需补充蒸发掉的水分)。
（2）因糖的极性差异造成Rf值，与对照品比较鉴定
（3）黄酮类的显色反应特异性较强，故可与聚酰胺产 生氢键缔合，常用于分离和鉴别。
1.糖的纸色谱（圆形滤纸）鉴定 取澄清的水解液20mL，加碳酸钡中和至中性，滤去生成的硫 酸钡沉淀，滤液浓缩至小体积1mL，供纸色谱点样用。
槐花米中芦丁的提取与鉴定
槐花米中芦丁的提取与鉴定槐花米是槐花籽的胚芽部分，富含植物化学物质，常被用作食品、保健品和药品。
芦丁是一种重要的植物黄酮类化合物，在槐花米中也存在着。
本文主要探讨了槐花米中芦丁的提取与鉴定方法。
一、提取方法1. 酸碱水解法将槐花米粉末用75%酒精浸泡后，用钝性气体保护，加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液，水解2小时。
水解完毕后，加入酸化剂使pH值调至5.5左右，然后提取2次，每次提取30分钟，使用乙醇使提取液达到所需的体积，完成提取过程。
2. 超声波辅助法将槐花米粉末用95%乙醇提取2次，每次提取60分钟。
取得的提取液储存在4℃条件下，超声波辅助溶解过程中，超声波功率设置为250W，处理时间为45分钟。
超声波辅助能够加速溶剂的渗透和分解，提高提取效率。
3. 超临界流体法将槐花米粉末与正己烷混合，注入超临界流体反应器中，流体选择二氧化碳，温度为90℃，压力为30Mpa。
在45分钟内处理样品，得到高品质的芦丁提取物。
二、鉴定方法1. 毛细管电泳法使用毛细管电泳法确定芦丁的含量和纯度。
在试验中，一般采用50 mM 磷酸盐缓冲液( pH=3.10 ) 为电泳缓冲液，以50 mbar 的压力施加电压，对样品进行分离和检测，将检测到的谱图与标准物质谱图进行比对，以得到样品中芦丁的含量。
2. 气相色谱法使用气相色谱法测定芦丁在槐花米中的含量。
首先，将提取物用氮气吹干至干燥，然后加入甲醇，溶解完毕后过滤。
过滤后再用甲醇调整成正常体积。
将样品注入色谱柱，沿着柱从注射口到检测器方向以一定的压力进行分离，通过检测器检测分离出来的物质。
将检测到的峰面积与已知含量的标准物质进行比较，以确定样品中芦丁的含量。
3. 紫外分光光度法使用紫外分光光度法确定芦丁的含量。
在试验中，将提取物稀释到一定浓度后，用紫外分光光度计检测其在不同波长下的吸光度值。
根据芦丁的特征峰，在290 nm处进行检测。
将检测到的吸光度值与标准物质进行比较，以确定样品中芦丁的含量。
中药化学 实验 槐米中芦丁的提取、分离、鉴定及槲皮素的制备
槲皮素的制备
精品芦丁(0.2g)
放入150ml圆底烧瓶中，加入2%稀硫酸50ml, 空气冷 凝直火加热（电炉上放石棉网）40分钟，放冷抽滤。
沉淀
滤液
水洗至中性抽滤、干燥。 取10ml，加氢氧化钡约1g,调PH7.5,过滤。
沉淀
滤液 水浴浓缩至1~2ml
浓缩液（备检查糖用）
4、芦丁、槲皮素的鉴定
（1）试管定性反应： ①HCI-Mg粉反应
行酸水解得到槲皮素
[实验流程]
1、提取
槐米（20g）
加水煎煮两次，趁热过滤合并煎煮液
药渣
煎煮液
放置4~5h，抽滤
沉淀
自然干燥
粗品芦丁
2、精制
粗品芦丁
加甲醇15~20ml，水浴加热（空气冷凝） 溶解， 至无黄色物，趁热过滤。
沉淀
滤液
放置，待结晶析出，抽滤至干。
沉淀
干燥
精品芦丁
注意：
1、甲醇量可以适当增加。 2、注意控制回流温度。 3、回流时间以芦丁完全溶解为准。
取样品的乙醇溶液1ml加少许镁粉，再加浓 HCI 1~2滴，观察颜色。 ②FeCl3反应
取样品的乙醇溶液1ml加1%的FeCl3乙醇溶 液2~3滴，观察颜色。 ③中性醋酸铅反应
取样品的乙醇溶液1ml加5%的中性醋酸铅溶 液1~2滴，观察现象。
④α-萘酚、浓H2SO4反应 取样品的乙醇溶液1ml加α-萘酚试液1~ 2滴
实验
槐米中芦丁的提取、分离、鉴定及槲皮素的制备
[实验目的]
1.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、 苷元的结构研究的一般方法；
2.熟悉根光谱的测定方法。
实验原理
➢提取原理：芦丁在冷热水中的溶解度差异； ➢纯化原理：芦丁在冷热甲醇中的溶解度差异 ➢制备原理：槲皮素为芦丁的苷元，因此可进
槐米中芦丁(芸香苷)的提取分离及检识
结晶
静置液减压抽滤在 60-70温度下烘干 得粗品芸香苷 置于300ml蒸馏水 煮沸至芸香苷全部溶解 趁热抽滤 滤液放冷析晶
天然产物化学
水解 取精制芸香苷1g 置250ml圆底烧瓶中 加2%H2SO4溶液80ml 加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶， 即为槲皮素。放冷抽滤 沉淀物用蒸馏水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素
天然产物化学
提取
碱溶酸沉法
芸香苷分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与 碱成盐而溶于碱液中加酸酸化后又可以沉淀 析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
天然产物化学
实验步骤
重复以上操作， 硼砂水150ml,时 间20min
加0.4%硼砂水200ml 加热微沸30min,用石 灰乳保持pH8-9
结晶
天然产物化学
天然产物化学
聚酰胺薄层色谱检识
点 样：（1）自制1%芸香苷乙醇溶液 （2）自制1%槲皮素乙醇溶液 对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液乙酯（3∶1∶0.5）
显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫 外灯下观察斑点颜色 （2）用氨水熏，记录斑点颜色和位置 结果：记录图谱，斑点颜色，计算芸香苷和槲皮素 Rf
天然产物化学
槐米中芦丁（芸香苷）的提取、分离和检识
天然产物化学
芦 丁
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含 有三分子的结晶水，熔点为174~178℃， 无水物188~190℃。 溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200； 冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。 微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、 氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
天然产物化学
化学检识
• 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样 品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管 中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色 变化。
槐米中芦丁的提取和精制实验报告
实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定（一）实验目的要求1.制备芦丁，供药用。
2.通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。
3.熟悉重结晶技巧。
4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
（二）实验的基本原理1.芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。
也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。
2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。
芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。
也可采用醇溶水沉法进行精制。
3. 芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。
（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。
(三) 实验内容1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。
2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。
3. 溶剂重结晶精制芦丁。
4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁(四) 实验药材仪器与试剂1. 实验药材槐米20g。
2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml烧杯，250ml 园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。
3. 试剂：硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。
（五）实验步骤1.提取（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加水200ml，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min，趁热过滤。
残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。
实验 槐米中芦丁的提取、分离与鉴别
实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别一、实验目的（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。
（2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。
二、实验原理芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。
溶解度情况如下：水：1:10000(冷)，1:200(热)甲醇：1:100(冷)，1:9(热)乙醇：1:300(冷)，1:30(热)吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。
再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。
利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。
三、实验内容（一）芦丁(芸香苷)的提取1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。
称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤饼用水洗3-4次），干燥后得粗品。
槐米中芦丁的提取
槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定一、实验目的1．掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。
2．掌握重结晶及过滤等基本操作。
3．学习芦丁及槲（hū）皮素的鉴定方法。
二、实验原理芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，槐米中含量高达12~16％，是提取芦丁的最佳原料。
芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。
近年来，芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。
芦丁属黄酮苷，其结构如下：芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C27H36O16· 3 H2O），熔点为177～178 ℃，无水物熔点为190~192 ℃，难溶于冷水，微溶于冷乙醇，可溶于热水和热乙醇中。
此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。
易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。
本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。
芦丁在不同溶剂中的溶液度：水CH3OH CH3CH2OH 吡啶冷0.0013 l.0 0.36 8.5热0.55 11.2 3.5 易溶芦丁的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。
槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。
槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C15H10O7·2 H2O），熔点313~314 ℃，无水物熔点为316 ℃。
可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。
在沸腾的无水乙醇中溶解度为4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。
可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。
槲皮素的结构式如下：槲皮素的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259nm，266nm，299nm ，359nm。
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定实验一预试；苷的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。
实验二产品的精制:重结晶；苷的水解。
实验三苷、苷元的定性鉴定；甙、甙元的TLC 鉴定；糖的纸层析鉴定。
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定（一）预试；苷的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。
（二）产品的精制：重结晶；苷的水解。
（三）苷、苷元的定性鉴定；甙、甙元的TLC鉴定；糖的纸层析鉴定。
教学目的：1 •掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法。
2 •掌握化学鉴别试验、苷水解、薄层层检查等手段在苷类结构鉴定上的作用。
已知重要成分及其性质1. 芦丁（芸香苷，rutin ）淡黄色针晶，水中结晶者含3分结晶水，C27H30O16 3H2O lOOmmHg和11O C 加热12小时后，变为无水物，无水物于25C变棕，115〜7C软化，214〜5C发泡分解，1g芦丁溶于约300ml冷水，200ml沸水，7ml沸甲醇，溶吡啶，甲酰胺和碱液，微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于氯仿，二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。
2. 槲皮素（Guereetin ）为芦丁的苷元，C15H10O7，MW302.23 ;含二分子结晶水为黄色针晶，（稀乙醇），5〜7C失水，314C解，1g溶于290ml无水乙醇、23ml沸乙醇，溶于冰醋般在碱水中溶解显黄色，几不溶于水R=一glu—rha 芦丁R= — 0H 槲皮素3. 皂苷（Saponin）粗品为白色粉末，mp 210C〜20C（dec）。
易溶于吡啶。
能溶于200倍的甲醇，酸水解得下列两种苷元及糖。
糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
（1）白桦酯醇（Betulin）无色针晶，mp215〜2C,能溶于醋酸，丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等；难溶于石油醚和水(2)槐花二醇(Sophoradiol)无色针晶, 醚、苯、丙酮、甲醇、难溶于水。
整套实验的过程：预试一一提取分离一一鉴定实验一预试；甙的碱提取，酸沉淀实验目的通过系统预试，了解检品中含有哪些类型的成分，可能含有哪些化学类型的成分，为进一步提取分离有效成分提供线索。
槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定
槐花米中芦丁的提取与鉴定背景知识芦丁（Rutin）又称芸香苷，普遍存在于植物界中，现已发觉含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。
溶解度：冷水中为1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。
芦丁具有维生素P样作用。
能维持血管的正常通透性，减低血管的脆性，缩短流血时刻，可作为高血压病的辅助医治剂。
亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。
一、实验目的通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作；熟悉芦丁、槲皮素的结构性质和检识方式。
二、实验要求独立完成实验，从槐花米中提掏出芦丁并进行鉴定。
三、实验原理芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此能够用碱溶酸沉的方式提取芦丁，又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。
四、实验材料和器皿【器皿】烧杯（500ml）2个，试管2个，布氏漏斗1个，玻璃棒1根，抽滤瓶1个，滴管，移液管（10ml）1根，洗耳球1个，滤纸，pH试纸，电热炉，真空抽滤机。
【材料】槐米花30 g，饱和石灰水，%硼砂水溶液，镁粉，pH试纸，浓盐酸，95%乙醇，10% α萘酚乙醇溶液，浓硫酸，蒸馏水。
槐米中芦丁的提取与鉴定实验报告
槐米中芦丁的提取与鉴定实验报告
讨论与建议
尽管本次实验取得了较为满意的成果，但仍存在一些不足之处。例如，在提取过程中，我 们采用的是乙醇作为溶剂，但乙醇的溶解度有限，可能会影响提取效率。未来可以考虑采 用其他溶剂或混合溶剂进行提取，以提高提取效率
槐米中芦丁的提取与鉴定实 验报告
汇报人：xxx
目录
CONTENTS
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PART 01 PART 02 PART 03 PART 04 PART 05 PART 06 PART 07
实验目的 实验原理 实验步骤 实验结果与数据分析 图表展示 实验结论 讨论与建议
槐米中芦丁的提取与鉴定实验报告
实验目的
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20XX 感谢聆听 批评指导 THANK YOU TO LISTEN TO CRITICISM GUIDANCE
此外，在鉴定实验中，我们采用了高效液相色谱仪进行分子量测定和可见紫外分光光 度计进行光谱分析，但这些方法并不能完全确定芦丁的结构。未来可以考虑采用更多 先进的仪器和方法，如核磁共振仪、质谱仪等，对芦丁的结构进行更深入的研究
最后，槐米作为一种常见的中药材，其药用价值受到了广泛关注。然而，仍有许多其他的 中药材和植物资源有待开发研究。未来可以进一步拓展中药材的化学成分研究和药理作用 研究，为中药材的现代化和国际化提供更多科学依据
槐米中芦丁的提取与鉴定实验报告
采用高效液相色谱仪进行芦丁的分子量测定；通过可 见紫外分光光度计进行光谱分析；利用核磁共振仪进 行结构鉴定
槐米中芦丁的提取与鉴定实验报告
槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备
槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备杨翊涵（2013级中药学一班）【摘要】本文整理总结了两次实验的操作过程与实验结果。
包括从槐米中提取芦丁、芦丁的分离和检识，以及槲皮素的制备和检识。
通过碱溶酸沉的方法提取芦丁，再利用稀酸水解生成槲皮素。
通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。
熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用。
通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法熟悉重结晶技巧。
了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
【关键词】芦丁、槲皮素、提取分离、检识鉴定、结构、性质。
1. 1 芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。
也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。
1.2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。
芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。
也可采用醇溶水沉法进行精制。
1.3. 芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。
（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。
1.4 实验原理芦丁浅黄色针状结晶，难溶于冷水，可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素黄色结晶，能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
实验四槐米中芦丁的提取分离及鉴定(三)
实验目的
熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和 薄层色谱或纸层析鉴定方法。
实验原理
利用吸附薄层色谱或纸色谱法的分离原理， 芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开， 显色，以达到鉴定芦丁的目的。 通过专属的化学显色反应，确定芦丁成分的 类型。
实验步骤
4. 糖的纸色谱检识：
取上述芦丁水解后的母液20ml，加入氢氧化钡细
粉（约2.6g）中和至pH7，滤除生成的硫酸钡沉 淀（可用滑石粉助滤）。滤液中水浴中浓缩至 1~2ml，供纸色谱点样用。 支持剂：新华层析滤纸（中速、20cmХ7cm） 样 品：水解浓缩液 对照品：a. 葡萄糖标准品水溶液；b. 鼠李糖标准 品水溶液 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5上层） 显 色：a. 喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，于105℃加 热10min，显棕色或棕红色斑点。记录图谱，并 计算Rf值。
3. 苷和苷元的薄层色谱鉴定
吸附剂 硅胶G（10～40u）-0.4%CMC水液制板，
105～110℃活化1小时 展开剂 氯仿-甲醇-甲酸（15：5：1） 供试品 实验产品1％芸香苷醇溶液及1％槲皮素 醇溶液 对照品 1％芸香苷醇溶液及1％槲皮素醇溶液 显色 a. 先在可见光下观察，然后在紫外光下观 察（365nm）b. 经氨气熏蒸后再观察；c. 喷三氯 化铝试剂前后观察颜色变化（365nm紫外灯下）。 记录图谱，并计算Rf值。
注意事项
及时记录实验数据，同时在实验过程中要注意紫
外线伤害。
பைடு நூலகம்
实验报告
按照实验报告要求认真填写，并认真完成下次实
验的预习《大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离 与鉴定（一）》。
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（一）一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
二、实验原理芦丁：浅黄色针状结晶，mp174℃-178℃。
溶解度：1：8000；热水1:200；冷乙醇1:300；热乙醇1:30；冷甲醇1:100；热甲醇1:10.槲皮素：黄色结晶，mp313℃-314℃（2分子结晶水），能溶解于冷乙醇（1:650），易溶于沸乙醇（1:60），可溶于甲醇、乙酸乙酯等；难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。
本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取：取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟（注意保持PH8-9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。
浓缩至1/2体积，滤液在60℃-70℃再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。
五、实验说明及注意事项1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。
在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。
槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。
PH应严格控制8-9，不得超过10,。
因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。
酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。
2、提取过程中加入硼砂作用：保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（二）一、实验目的1、掌握芦丁水解生成苷元的方法及二者之间的分离。
槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定
※实验三槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米（为植物Sophora japonica的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。
槐花米为豆科植物槐花的未开放花蕾。
味苦性凉，具清热、凉血、止血之功。
槐花的主要化学成分为芦丁，又名芸香甙，含量可达12-16%。
芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。
为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。
溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
芦丁具有维生素P样作用。
可降低毛细管前壁的脆性和调节渗透性，有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，临床上用作毛细管脆性引起的出血症，并常用作防治高血压病的辅助治疗剂。
现在国处也常用芦丁作食品及饮料的染色剂。
一、实验目的1．通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2．掌握芦丁的一种提取、精制方法及提制过程中防止甙水解的方法。
3. 掌握黄酮甙水解生成甙元的方法及二者之间的分离。
4．熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。
二、实验原理本实验主要是利用芸香苷中含有较多的酚羟基，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出芸香苷结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芸香苷对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、李糖，并能通过纸层析鉴定。
芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。
三、实验材料槐米、石灰乳、0.4％硼砂水溶液、2％的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、1％的氢氧化钠溶液、1％的三氯化铝乙醇溶液、1％的葡萄糖溶液、1％的鼠李糖溶液、1％芸香苷乙醇溶液、1％槲皮素乙醇溶液、95％乙醇、碳酸钡、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。
槐米中芦丁的提取和精制(2010)实验报告
实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定（一）实验目的要求1.制备芦丁，供药用。
2.通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。
3.熟悉重结晶技巧。
4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
（二）实验的基本原理1.芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。
也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。
2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。
芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。
也可采用醇溶水沉法进行精制。
3. 芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。
（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。
(三) 实验内容1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。
2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。
3. 溶剂重结晶精制芦丁。
4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁(四) 实验药材仪器与试剂1. 实验药材槐米20g。
2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml烧杯，250ml 园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。
3. 试剂：硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。
（五）实验步骤1.提取（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加水200ml，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min，趁热过滤。
残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。
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槐米中芦丁的提取、水解和鉴定
实验简介
槐米系豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾。
能凉血止血，清肝泻火。
药理实验证明芦丁有调节毛细血管渗透作用，
临床上可作为毛细血管脆弱引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。
其有效成分为芸香苷，又称芦丁(rutin)，含量可高达12～20％。
芦丁为槲皮素-3-O-芸香糖苷，淡黄色粉末或细针状结晶，含3分子结晶水（C 27H 30O 16•3H2O ），mp.177~178℃，无水物mp.188~190℃。
溶解度:冷水中的溶解度为1﹕10000，沸水中1﹕200，冷乙醇1﹕650，沸乙醇1﹕60，沸甲醇中1﹕7，可溶于丙酮、乙酸乙酯、吡啶及碱液中，不溶于三氯甲烷、乙醚、苯及石油醚。
芦丁水解后得槲皮素，槲皮素为黄色针状结晶（稀乙醇），含2分子结晶水（C 15H 10O 7•3H2O ），mp.313~314℃（分解），无水物mp.316℃。
溶解度:热乙醇中1﹕23,冷乙醇中1﹕300,可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶与冰醋酸等，不溶于水、三氯甲烷、乙醚、苯与石油醚等。
本实验应用碱溶解酸沉淀法，重结晶法，酸水解法，纸色谱法，紫外光谱分析法对槐米中芦丁进行提取、水解和鉴定。
O O HO OH O OH
OH
O O OH OH
OH
H 2C
O OH OH CH 3OH 3H 2O 芦丁 O HO OH OH OH 槲皮素
实验原理
1、提取精制的原理：
芦丁分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而溶于碱液中，加酸酸化后又可沉淀析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香
苷。
芦丁的精制可根据其在冷、热水（或冷、热乙醇）中溶解度相差悬殊的性质进行。
2、鉴定的原理：
利用纸色谱的吸附分配原理，将样品和对照品在同一条件下展开显色，判断芦丁和槲皮素的R
f
值，达到鉴定的目的。
利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断化合物羟基的位置。
色谱鉴定示意图 紫外吸收光谱特征
实验目的
掌握碱溶酸沉法、重结晶法提取精制黄酮类化合物的原理与操作；熟悉色谱鉴定黄酮类化合物的原理和方法；熟悉紫外－
可见光谱在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
实验仪器
提取操作示意图 紫外可见分光光度仪
大黄中大黄素的提取、分离和鉴定
实验简介
大黄系蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.，药用大黄Rheum officinale Baill 及唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim ．ex
Balf.的根和根茎。
具有泻热通便，凉血解毒，逐瘀通经的作用。
大黄的主要化学成分属于蒽醌类成分。
大黄中的游离蒽醌成分
游离蒽醌名称 结晶及mp （℃） O O OH OH R 1
R 2
大黄酸（rhein ） R 1=H R 2=COOH 大黄素 （emodin ） R 1=CH 3 R 2=OH 大黄酚（chrysophanol ） R 1=H R 2= CH 3 大黄素甲醚（physcion ） R 1= OCH 3 R 2= CH 3 芦荟大黄素（aloe-emodin ） R 1=H R 2=CH 2OH
黄色针晶（升华法），321～322
橙黄色针晶（乙醇），256～257
橙黄色片状结晶（苯），198
砖红色针晶，203～207
橙黄色针晶（甲苯），223～224
大黄素（Emodin）：橙黄色长针晶（丙酮中结晶为橙色，甲醇中结晶为黄色），mp256-257℃。
几不溶于水，对于下列溶剂的
溶介度分别为：四氯化碳0.01%，氯仿0.0718%，二硫化碳0.009%，乙醚0.14%，苯0.0415。
易溶于乙醇，可溶于氨水，碳酸钠和氢氧化钠水溶液。
本实验应用回流法、色谱法、高校液相色谱法，对大黄中的大黄素进行提取分离和鉴定。
实验原理
利用酸水解将蒽醌苷类水解成游离蒽醌类，再利用其具有亲脂性，用有机溶剂提取。
利用酸性不同，采用pH 梯度萃取法
分离游离蒽醌类。
根据极性不同采用硅胶柱色谱法分离大黄素。
高校液相色谱法按照《中国药典》2015版大黄含量测定项：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）为流动相，检测波长为254nm。
以对照品为对照进行成分鉴定。
实验目的
熟悉蒽醌类成分的提取分离方法；掌握pH 梯度提取法的原理和操作技术；掌握硅胶柱色谱法分离精制大黄素的原理和操
作技术；熟悉羟基蒽醌类化合物的高效液相测定方法。
实验仪器
回流提取装置 硅胶柱色谱法分离图
高效液相色谱仪。