细菌计数
实验六 细菌计数法
实验六细菌计数法菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
目录菌落总数介绍检验方法说明（一）样品的处理和稀释：（二）倾注培养（三）计数和报告菌落总数介绍菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
三种细菌计数方法的比较
三种细菌计数方法的比较细菌计数是微生物学中一项重要的实验技术，用于确定细菌菌群的数量。
在微生物学研究、医学和食品工业等领域中，细菌计数方法的准确性和可行性非常关键。
目前，常用的三种细菌计数方法包括直接计数法、密度计数法和滴定计数法。
本文将对这三种方法进行比较，包括原理、优缺点和适用范围。
直接计数法是通过显微镜观察，直接计算视野中的细菌数量来进行计数的方法。
该方法简单快捷，不需要进行培养过程。
其中，常用的直接计数方法有暗视野法、荧光显微镜法和流式细胞术。
这些方法可以直接观察到不同形态和大小的细菌，并且可以获得准确的结果。
此外，直接计数法还可以用于测定活菌和死菌的比例，对于评估细菌的生物活性非常有用。
然而，直接计数法对设备要求较高，需要专业的显微镜和技术操作，而且适用于底浓度的细菌样本。
与直接计数法相比，密度计数法是细菌计数中常用的一种方法。
该方法通过将细菌样本适当稀释至能观察到单个菌落形成的数量范围，并在琼脂培养基上培养并计数菌落的数量来确定细菌的数量。
密度计数法的优点是适用于各种样品类型，并且可以进行定量计数。
此外，该方法还可以通过调整稀释倍数来适应不同细菌的菌落形成能力。
但是，密度计数法需要进行培养过程，时间较长，并且无法区分活菌和死菌。
滴定计数法是通过逐渐稀释细菌悬液，将其滴定到琼脂培养基上，然后通过滴定液的颜色变化或者生长的细菌落的数量来确定细菌的数量。
与密度计数法类似，滴定计数法也需要进行培养过程。
但是，滴定计数法具有简单、快捷、经济的特点。
同时，滴定计数法可以通过改变滴定液浓度来适应不同样本中细菌的菌落形成能力，并且可以计算出细菌的最概然数。
然而，滴定计数法对于有颜色的样本适用性较差，因为颜色会干扰滴定液的颜色变化。
此外，滴定计数法无法区分活菌和死菌。
综上所述，三种细菌计数方法各自有其优点和局限性。
直接计数法可以获得准确的结果，适用于底浓度的细菌样本，但要求设备和技术较为专业。
密度计数法能够进行定量计数，适用于各种样品类型，但需要进行培养过程。
细菌计数方法实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌计数的基本原理和方法。
2. 了解不同细菌计数方法的优缺点。
3. 培养实验操作技能，提高实验数据处理和分析能力。
二、实验原理细菌计数是微生物学研究中的一项基本技能，常用的细菌计数方法有直接计数法、活菌计数法和间接计数法等。
本实验主要介绍平板菌落计数法（CFU法）和显微镜直接计数法。
1. 平板菌落计数法（CFU法）：将样品进行稀释，涂布在固体培养基上，培养一定时间后，根据培养皿上生长的菌落数来推算样品中的细菌数量。
2. 显微镜直接计数法：将样品进行稀释，用计数板或计数仪直接计数，根据计数室内的细菌数来推算样品中的细菌数量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌菌液、牛肉膏蛋白胨培养基、生理盐水、计数板、显微镜、移液器、培养箱等。
2. 实验仪器：培养皿、移液器、酒精灯、镊子、无菌操作台、培养箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 平板菌落计数法（CFU法）：（1）将牛肉膏蛋白胨培养基倒入培养皿，制成平板。
（2）用移液器吸取适量的大肠杆菌菌液，进行一系列的倍比稀释。
（3）用无菌镊子取适量稀释液，涂布在平板上。
（4）将平板倒置放入培养箱，培养一定时间。
（5）计算平板上生长的菌落数，根据稀释倍数计算样品中的细菌数量。
2. 显微镜直接计数法：（1）将牛肉膏蛋白胨培养基倒入计数板，制成涂片。
（2）用移液器吸取适量的大肠杆菌菌液，进行一系列的倍比稀释。
（3）用移液器吸取适量稀释液，滴加在计数板的计数室上。
（4）将计数板置于显微镜下，观察计数室内的细菌数。
（5）根据计数室内的细菌数和稀释倍数计算样品中的细菌数量。
五、实验结果与分析1. 平板菌落计数法（CFU法）：（1）稀释倍数：10^-4（2）菌落数：30（3）样品中的细菌数量：30 × 10^4 = 3 × 10^52. 显微镜直接计数法：（1）稀释倍数：10^-3（2）计数室内的细菌数：200（3）样品中的细菌数量：200 × 10^3 = 2 × 10^5实验结果表明，两种细菌计数方法得到的样品中的细菌数量基本一致，说明实验结果准确可靠。
几种常用的细菌计数方法
几种常用的细菌计数方法常用的细菌计数方法主要有显微镜计数法、平板计数法、膜过滤法和浑浊度法等。
下面将逐一介绍这些方法。
显微镜计数法是最基本的细菌计数方法之一、将细菌培养液取少量放在显微镜载玻片上，用显微镜观察并计数细菌个数。
这种方法需要操作技巧熟练，适用于较稀疏的细菌培养液，但不适用于高密度的细菌培养液，并且仅能得到一个粗略的细菌数量。
平板计数法是一种较为常用的细菌计数方法。
将稀释后的细菌培养液均匀涂在含有培养基的平板上，经过一段时间的培养后，可以通过数独落在平板上形成的菌落数量来估计初始细菌数量。
通常将膨胀菌落数乘以相应的稀释倍数从而得到细菌的数量。
平板计数法的优点是简单易行，适用于大量细菌的计数，但该方法只适用于能够在固体培养基上生长的细菌。
膜过滤法是一种通过滤除细菌并计数膜上细菌数量的方法。
将细菌培养液通过微孔膜过滤器，在膜上滤除细菌，然后将膜放在富含营养物的培养基上进行培养，形成菌落后进行计数。
与平板计数法相比，膜过滤法更适用于含有颗粒物的液体或空气中的细菌计数。
膜过滤法的优点是操作相对简单，适用于含有较多颗粒物或固体物质的液体的细菌计数，但该方法仅适用于能够通过过滤的培养液。
浑浊度法是一种通过测量培养液的浑浊度来估计细菌数量的方法。
利用光密度计或比色计测量细菌培养液的吸光度或浑浊度，并通过细菌密度与浑浊度之间的关系来计算细菌数量。
这种方法不需要进行涂片或过滤步骤，适用于细菌数量较多的情况。
然而，浑浊度法有一定的局限性，因为细菌的大小、形状和组成可能对浑浊度产生影响，而且需要事先建立浑浊度和细菌数量间的校准曲线。
除了以上介绍的方法，还有一些其他的细菌计数方法，如Flow cytometry（流式细胞仪）、Most probable number（最可能数）等，这些方法各有特点，可以根据实际需要选择合适的方法进行细菌计数。
细菌计数方法的选择应根据实验的目的、样品性质和操作条件等因素来确定。
测定细菌数量的方法
测定细菌数量的方法细菌是一种微生物，它们广泛存在于自然界中的各种环境中，包括土壤、水体、空气以及人和动物的体内。
测定细菌数量在许多领域中都具有重要的应用，例如医学诊断、食品安全、环境监测等。
本文将介绍几种常见的测定细菌数量的方法。
1.直接计数法直接计数法是最基本的测定细菌数量的方法之一、该方法利用显微镜观察细菌悬液中的细菌数量，并通过数学方法计算出相应的浓度。
直接计数法需要专业的显微镜和显微镜计数室，比较繁琐且耗时，但是结果较为准确。
2.厌氧培养法厌氧条件下的细菌繁殖速度较慢，通常需要较长时间才能形成可见的菌落。
利用厌氧培养法可以通过观察培养基上细菌形成的菌落数量来测定细菌数量。
该方法适用于对厌氧条件下的细菌进行测定。
3.过滤法过滤法是利用特定的滤膜或滤片来筛选细菌，并将细菌附着在滤膜上。
通过将滤膜放置在含有营养成分的培养基上，细菌可以在培养基上生长。
最后，可以通过观察滤膜上的菌落数量来测定细菌数量。
过滤法适用于水样、空气样以及其他液体样品。
4.光密度法光密度法是利用细菌悬液的浑浊程度来测定细菌数量的一种方法。
当细菌繁殖增多时，细菌悬液的浑浊度也会增加。
可以使用光密度计来测量细菌悬液的浑浊度，然后通过校正曲线来计算细菌数量。
5.蛋白质测定法细菌在生长过程中会合成蛋白质。
通过检测培养液中的蛋白质含量，可以间接测定细菌数量。
该方法适用于较大规模的细菌培养，可以通过常规的蛋白质测定方法来进行测定。
6.PCR方法PCR（聚合酶链反应）是一种利用DNA复制技术来测定细菌数量的方法。
通过选择特异性的引物和荧光探针，可以选择性扩增目标细菌的DNA 并进行测定。
PCR方法具有高度的灵敏性和特异性，适用于检测特定种类的细菌。
综上所述，测定细菌数量的方法有很多种，选择合适的方法取决于实际应用的要求、样品特性以及实验条件等因素。
不同的方法各有优缺点，研究人员需要根据具体情况选择适当的方法来进行细菌数量的测定。
细菌的计数法
CFUCFU (Colony-Forming Units)经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。
cfu:colonyformineunit,菌落形成单位，将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌落。
意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞！传统上就叫“个”。
但是，我们知道，一个菌落并不一定是一个细菌所生成，也可能是由一簇细菌（一个细菌团）所生成，这时候再叫“个”就不太准确啦，准确的叫法就是“菌落形成单位”，英文缩写“CFU”。
就像“公斤”和“千克”，只是叫法不同，数量上没有变化。
cfu代表“colony forming units”。
cfu/mL指的是每毫升样品中含有的细菌群落总数一显微镜直接计数法（一）目的要求1．明确血细胞计数板计数的原理。
2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
（二）基本原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。
后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
除了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，此法一般用于牛乳的细菌学检查。
显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操作简单。
但此法的缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。
目前已有一些方法可以克服这一缺点，如结合活菌染色微室培养（短时间）以及加细胞分裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的。
本实验以血球计数板为例进行显微镜直接计数。
另外两种计菌器的使用方法可参看各厂商的说明书。
细菌总数的测定方法
细菌总数的测定方法
测定细菌总数的方法通常包括以下几种：
1. 显微镜计数法：将待测样品制成适当浓度的悬浮液，然后使用显微镜观察计数。
这种方法常用于观察对显微镜可见的大型细菌。
2. 平板计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，然后在固体培养基上均匀涂布。
经过适当时间后，可数出单个菌落的数量，并根据稀释倍数计算出细菌总数。
3. 涂布计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，通过草屑涂布或涂布棒均匀涂布在固体培养基上。
经过适当时间后，可数出涂布上细菌的总数。
4. 易液化琼脂凝胶计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，与液化琼脂凝胶混合，然后倒入琼脂凝胶平板上固化。
经过适当时间后，可数出液化琼脂凝胶上细菌的总数。
5. 流式细胞仪计数法：将待测样品进行适当稀释后，通过流式细胞仪对样品中的细菌进行单个细胞的计数和分析。
这种方法快速、准确，适用于大批量的细菌计数。
需要注意的是，不同的方法适用于不同类型的细菌和样品，选择合适的方法对准
确测定细菌总数十分重要。
此外，测定细菌总数时需要注意消毒、防止交叉感染等实验操作安全。
细菌计数——精选推荐
细菌计数细菌计数试验⽅案1 菌种葡萄球菌菌株（分离奶⽜乳房炎奶样），由本实验室筛选保藏．2 培养基平板培养基：普通营养琼脂．液体培养基：普通⾁汤．3 仪器和器具分光光度计；摇床；试管；移液器；青霉素瓶．4 ⽅法4.1 接种：将菌接种于平板培养基上,37℃培养24 h后，在试管中加⼊10ml液体培养基选取平板培养单个菌落2－3个进⾏接种，接种后37℃、震摇培养．4.2 离⼼：将液体培养的细菌部分⽆菌分装离⼼管，3000rpm离⼼10分钟，弃上清，沉淀⽤⽣理盐⽔/PBS重悬，适当调整浓度，进⾏OD 值测定；另外⼀部分液体培养细菌进⾏活菌计数⽤。
4.3 菌体最适吸收波长测定：以⽣理盐⽔/PBS做对照调零，取适当稀释浓度菌液，对其进⾏Uv波长（300-900nm）扫描测定OD值(表1)，据此确定其最⼤光吸收波长并⽤于以后各步OD值的测定．表1 细菌不同波长扫描的光吸收值波长/nm 300 350 400 450 460 470 480 490 500 550 600 OD值4.4 菌体⽣长曲线测定：取盛有10mL普通⾁汤的试管13个，分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20、22、24h。
⽤移液器分别准确吸取20µL菌液加⼊已编号的13个试管中，于37℃下振荡培养。
然后分别按对应时间将试管取出，⽴即按上述步骤离⼼，进⾏OD值测定，同时进⾏作平板计数。
(表2)4.4.1 平板计数：将每⼀时间菌液再梯度稀释(根据菌种⽽定，⼀般⾄lO-4、lO-5、lO-6、lO-7)，分别吸取0．5mL涂平板(三个平⾏)，取平均数进⾏活菌的准确计数。
4.4.2 OD值测定：将⽣理盐⽔/PBS倾倒⼊⽐⾊杯中，选⽤最适吸收波长分光光度计上调节零点，作为空⽩对照，并对不同时间培养液从0h起依次进⾏测定，对浓度⼤的菌悬液⽤⽣理盐⽔/PBS适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。
尿检报告细菌数
尿检报告细菌数1. 引言尿检是一种常见的医学检查方法，用于评估人体的健康状况。
尿液中的细菌数可以提供有关泌尿系统是否受到感染的线索。
本文将介绍尿检报告中细菌数的意义，以及一些可能的原因和处理方法。
2. 细菌数的意义尿液中的细菌数通常以单位体积的细菌计数（CFU/mL）来表示。
正常情况下，健康人的尿液中细菌数很低，通常少于100,000 CFU/mL。
当细菌数超过这个范围时，可能表示尿路感染或其他疾病的存在。
3. 可能的原因尿液中细菌数增多的原因有很多，以下是一些常见的可能性：•尿路感染：尿路感染是最常见的原因，特别是女性更容易受到尿路感染的影响。
细菌可以通过尿道进入泌尿系统，导致感染。
•污染：在进行尿液采集和分析过程中，可能会发生样本污染，导致细菌数异常增多。
•其他疾病：一些其他疾病，如肾炎、膀胱炎等，也可能导致尿液中细菌数增多。
4. 处理方法一旦尿检报告显示尿液中细菌数超过正常范围，需要进一步的处理。
以下是一些可能的处理方法：•重复检测：由于尿液样本可能存在污染等因素，建议进行重复检测以确认结果的准确性。
•抗生素治疗：如果尿液中的细菌数超过正常范围，并且存在尿路感染等症状，医生可能会建议使用适当的抗生素治疗来消除感染。
•饮食调整：一些研究表明，饮食中的某些物质可能会影响尿液中细菌数。
在医生的建议下，可能需要适当调整饮食以促进细菌数的恢复正常。
•加强个人卫生：个人卫生是预防尿路感染的关键。
保持良好的卫生习惯，如定期清洗尿道口、避免过度清洗、保持适当的水分摄入等，可以降低感染的风险。
5. 结论尿液中的细菌数在尿检报告中起着重要的指导作用，帮助医生评估患者的健康状况。
通过分析细菌数异常增多的原因，并采取适当的处理方法，可以更好地控制尿路感染等疾病的发展，维护患者的健康。
以上是关于尿检报告中细菌数的一些基本信息和处理方法的介绍，希望对您有所帮助。
请记住，在面对尿液检测结果时，及时咨询医生以获得最准确的建议和治疗方案。
细菌计数方法
细菌计数1.计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
细菌总数的计算方法
细菌总数的计算方法一、直接计数法直接计数法是通过对细菌进行可见光显微镜观察，并使用计数室将细菌数量统计出来。
这种方法可以对样品中的所有细菌进行计数，包括活细菌和死细菌。
1.视觉法：这种方法利用显微镜对细菌进行观察和计数。
首先，将样品涂布在载玻片上，然后在显微镜下使用适当的目镜和物镜来观察细菌，使用计数室将细菌数量统计出来。
2.过滤法：这种方法适用于样品中细菌数量很大的情况。
首先，将样品经过滤器过滤，然后将过滤器放在培养基上进行培养，最后对培养基上细菌进行计数。
3.流式细胞仪法：这种方法适用于样品中的细菌数量很小的情况。
流式细胞仪会将细菌进行分散并单个通过激光束，然后通过光散射、荧光标记等方法对细菌进行计数和鉴定。
二、间接计数法间接计数法是通过测量细菌的生长特性来估计细菌总数。
这种方法可以很快得到结果，但只能对活细菌进行计数。
1.湿涂法：这种方法基于细菌在固体培养基上形成的菌落数来估计细菌数量。
首先，将样品通过稀释后涂布在固体培养基上，培养一段时间后，观察并计算形成的菌落数。
2.光密度法：这种方法利用测量细菌培养液中的光密度来估计细菌数量。
细菌培养液的光密度与细菌浓度呈正相关关系，可以通过分光光度计等仪器来测定光密度。
3.ATP酶法：这种方法基于细菌细胞内的ATP含量与细菌数量呈正相关关系。
通过检测样品中的ATP含量，可以估计细菌数量。
细菌总数的计算方法并不仅限于上述的几种，科学家们还在不断发展和改进计数方法。
但无论哪种方法，准确性都是一个重要考量因素。
因此，在进行细菌计数时，需要选择适当的方法，并结合标准曲线、稀释方法等进行校正和验证，以保证结果的准确性。
细菌计数方法
细菌计数1、计数器测定法:即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内,用显微镜观察计数。
由于计数室的容积就是一定的(O、1mm3),因而根据计数器刻度内的细菌数,可计算样品中的含菌数。
本法简便易行,可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数,也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理就是测定小孔中液体的电阻变化,小孔仅能通过一个细胞,当一个细胞通过这个小孔时,电阻明显增加,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确,但它只识别颗粒大小,而不能区分就是否为细菌。
因此,要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法,就是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液,作一系列的倍比稀释,然后将定量的稀释液进行平板培养,根据培养出的菌落数,可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高,就是一种检测污染活菌数的方法,也就是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意:①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数,过多或过少均不准确;②为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入O.001％2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC);③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验,就是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法就是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,所以,可用光电比色计测定菌液,用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样品,不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法与干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品,就是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
统计活菌数目常用方法
统计活菌数目常用方法
统计活菌数目常用方法有：
1. 流式细胞术：通过将细菌样本稀释，并利用流式细胞仪测量细菌在流速下通过细胞孔的数目，以估计活菌数目。
2. 表面计数：将细菌样本均匀涂布在培养基上，并进行恰当的培养条件。
然后使用显微镜观察并计数活菌的数目。
3. 过筛法：通过过滤细菌样本，使较大的细胞被滤去，只保留较小的活菌，然后将过滤膜培养，并进行活菌的计数。
4. 冷冻储存法：将细菌样本冷冻保存，并在适当的时间间隔内解冻一部分样本，并进行适当的培养条件下计数活菌的数目。
5. 颜色指示剂法：使用特定的染色剂或化学试剂，可与活菌进行反应并产生特定颜色的变化，然后通过测量颜色变化的强度或浓度来估计活菌的数目。
注意：以上方法仅为常见且常用的细菌活菌数目统计方法，实际操作中可能还会有其他方法和技术的应用。
实验10-细菌计数
实验10 细菌计数返回目录一、显微镜直接计数法【原理】显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌板)，于显微镜下直接计数细菌的一种简便、快速、直观的方法。
该法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，目前国内外常用的计菌板有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌板以及Hawksley计菌板等，血球计数板适用于菌体较大的酵母菌或霉菌孢子的计数，后两种计菌板适用于一般细菌的计数。
这几种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，盖玻片和载玻片之间的距离只有0.02mm，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜。
这里介绍血球计数板方法计数酵母菌数量。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽所构成的3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是一个大方格分为16个中方格(四角的四个大方格)，每个中方格又分25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格(中央的一个大方格)，而每个中方格又分成16个小方格，即计数区都由400个小方格组成(图1-3-12)。
图1-3-12 血细胞计数板构造计数区（一个大方格）边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。
盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为l/4000mm3。
使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每mL菌液(或每g样品)中微生物细胞的数量。
已知：1ml体积＝10mm×10mm×10mm＝1000mm3所以：1ml体积应含有小方格数为1000mm3／(1／4000mm3)＝4×106个小方格。
因此：每ml菌悬液中含有细胞数＝4×106×每个小格中细胞平均数×菌液稀释倍数。
细菌计数的方法
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入０.001%2，3，5一氯化三苯基四氮唑（TTC）；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
2．比浊法（必修3第71）
比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度（OD值）表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
疑难问题：复习资料“对细菌进行计数只能采用涂布分离法，而不能用划线分离法”，这句话认为是错误的。都知道划线分离法是不能用来计数的，因为只有划线的后期才有可能是单菌落，此话错在“细菌进行计数只能采用涂布分离法”，那么细菌的计数方法有哪些？
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测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法等。
1．计数板测定法（必修3第71）
即用血细胞计数板进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数板的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的（0.1mm3），因而根据计数板刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
细菌菌落计数实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细菌菌落计数的原理和方法。
2. 学会使用平板菌落计数法对细菌进行计数。
3. 了解不同细菌的生长特性和培养条件。
二、实验原理细菌菌落计数是微生物学中常用的实验方法，通过在固体培养基上培养细菌，观察并计数菌落，从而了解样品中细菌的数量。
实验原理基于以下步骤：1. 样品处理：将待测样品进行适当的稀释，以使菌落数量达到可计数的范围。
2. 接种：将稀释后的样品涂布在固体培养基上，使菌落分散生长。
3. 培养和观察：在一定条件下培养涂布后的培养基，观察菌落生长情况。
4. 计数：选择平均菌落数在30～300之间的平板进行计数，计算菌落数。
三、实验材料1. 样品：实验室自备的细菌样品。
2. 培养基：营养琼脂培养基、牛肉膏蛋白胨培养基等。
3. 仪器：无菌操作台、移液管、培养皿、酒精灯、恒温培养箱等。
4. 其他：无菌水、酒精、生理盐水、无菌棉签等。
四、实验方法1. 样品处理：将待测样品进行适当的稀释，以使菌落数量达到可计数的范围。
2. 接种：用无菌棉签将稀释后的样品涂布在固体培养基上，使菌落分散生长。
3. 培养和观察：将涂布后的培养基置于恒温培养箱中，在一定条件下培养。
4. 计数：观察菌落生长情况，选择平均菌落数在30～300之间的平板进行计数。
五、实验步骤1. 样品处理：取1mL待测样品，加入9mL无菌水中，进行10倍稀释。
2. 接种：用无菌棉签蘸取稀释后的样品，涂布在营养琼脂培养基上。
3. 培养和观察：将涂布后的培养基置于37℃恒温培养箱中，培养24小时。
4. 计数：观察菌落生长情况，选择平均菌落数在30～300之间的平板进行计数。
六、实验结果1. 样品1：菌落总数为100个。
2. 样品2：菌落总数为200个。
3. 样品3：菌落总数为150个。
七、实验分析1. 样品1的菌落总数较少，可能是因为样品中细菌数量较少或细菌生长条件不适宜。
2. 样品2的菌落总数较多，可能是因为样品中细菌数量较多或细菌生长条件适宜。
细菌总数测定方法
细菌总数测定方法
常用的细菌总数测定方法有以下几种：
1. 直接计数法：将待测细菌样品进行稀释，然后用显微镜直接计数在计数板或用计数室计数盘，最后通过计算平均细菌数来估计总数。
2. 涂布法：将待测细菌样品均匀涂布在琼脂平板上，然后在适宜的温度下培养一定时间后，以形成菌落个数来估计总数。
3. 膜过滤法：将待测细菌样品通过孔径合适的过滤膜，然后将膜放入适宜的培养基上进行培养，通过统计菌落数来推算总数。
4. 测定细菌生物学活性法：通过测定某些活性细菌所产生的酶活性或特定代谢产物的含量来推测总数。
这些方法各有优缺点，选择适当的方法需要根据实验需求、样品特点和实验条件进行综合考虑。
菌的计数方法总结
菌的计数方法总结引言菌的计数方法是微生物学中一项重要的技术，用于确定菌落的数量和浓度。
菌的计数可以帮助科学家了解菌群的变化、评估食品安全和制定防控措施。
本文将总结几种常用的菌的计数方法，包括直接计数法、间接计数法和分子生物学方法。
直接计数法直接计数法是一种直接测定细胞数的方法，可以通过显微镜观察细胞数，在细胞计数盘中简单且直观地对菌群进行计数。
直接计数法的常用技术包括：1. 线性计数法线性计数法是一种适用于稀释菌液的计数方法。
将菌液适当稀释后，用显微镜在细胞计数盘中计数，并根据稀释倍数计算原始菌液中的菌落数量。
线性计数法简单易行，适用于大量菌落和均匀分布的菌群计数。
2. 平板计数法平板计数法是一种用于较浓稠菌液的计数方法。
将菌液分别加入琼脂平板，使其均匀分布，培养一段时间后，在每个菌落上使用计数棒或显微镜进行计数。
根据菌落的分布情况和稀释倍数，可以计算出原始菌液中的菌落数量。
平板计数法适用于菌群相对浓集的情况。
间接计数法间接计数法是通过测定菌群其他特征间接推算出菌数的方法。
这些特征可以是生物化学特征、光学特性或流体力学特性。
常用的间接计数法包括：1. pH指示法pH指示法是一种利用菌群产生的酸碱度对菌数进行估计的方法。
菌群在培养基中生长代谢会产生酸或碱，进而改变培养基的酸碱度。
通过测定菌液的pH值，可以间接估计出菌数的多少。
pH指示法简单易行，但需要选取合适的指示剂和培养条件。
2. ATP测定法ATP测定法是一种利用生物体内三磷酸腺苷（ATP）含量来间接估计菌数的方法。
ATP是细胞内的能量储存物质，细菌数量与ATP含量成正比。
通过测定菌液中ATP的含量，可以推算出菌数的多少。
ATP测定法精确度高，但需要使用特殊的试剂和仪器。
分子生物学方法分子生物学方法是一种基于菌群DNA或RNA的技术，用于准确测定菌数和分类鉴定。
常用的分子生物学方法包括：1. PCR法PCR法（聚合酶链式反应）是一种通过扩增菌群DNA来检测和计数菌数的方法。
细菌计数器计数操作方法
细菌计数器计数操作方法细菌计数器是一种用于快速、准确地计数细菌数量的工具。
它的操作方法非常简单，通常包括以下几个步骤：1. 准备工作：首先，要确保细菌计数器处于良好的工作状态。
检查电池电量、屏幕显示、计数按钮等，确保全部正常运行。
如果有需要，可更换电池。
2. 校准设定：细菌计数器通常提供了一些可调节的参数，如分辨率、平滑度等。
在开始计数之前，根据实际需要对这些参数进行适当的调整和设定。
3. 准备细菌样品：使用无菌技术取得一个细菌样品。
可以是细菌培养物、感染组织等。
确保样品充分悬浮均匀，以避免细菌聚集或堆积导致计数不准确。
4. 取样：将取样枪或吸管放入样品中，吸取适量的液体样品。
取样过程中要注意避免气泡的产生，以免影响计数准确性。
5. 进行计数：将取得的样品液滴在细菌计数器的计数板上。
计数板上通常有一个网格，每个小格的面积已知。
使用计数器的放大镜功能将细菌放大到一个可以清晰观察的大小，并使用计数按钮进行逐个计数。
6. 记录：在计数过程中，使用计数器上的记录功能对每个计数事件进行记录。
这样可以方便后续的数据分析和结果统计。
7. 清洗和维护：计数完毕后，及时将计数板和取样枪进行清洗和消毒。
避免细菌残留和交叉污染。
同时，还要定期检查和维护计数器的各项功能，确保其正常工作。
细菌计数器的操作方法相对简单，但在实际使用中还需要注意以下几点：1. 样品处理：在进行细菌计数前，应该根据实际情况对样品进行适当的处理。
例如，对于固体样品，可以进行适当的研磨、稀释等操作，以便更好地观察和计数。
对于浓度较高的样品，可以适当稀释，以保证计数准确性。
2. 技术要求：使用细菌计数器时，应熟练掌握相关的技术要求。
比如，要能辨别出有效的细菌计数单位，避免重复计数或漏计，保证计数准确性。
此外，根据不同的细菌形态和颜色，可以调节计数器的对比度和亮度，以便更好地进行观察和计数。
3. 重复计数：为了保证计数结果的准确性，通常需要进行重复计数。
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细菌计数（counting of bacteria）
指测计酵母、细菌等的细胞数。
有总菌计数和活菌计数两种计数法。
后者是测计试样中的活细菌数。
二者都是先把试样稀释成适于测计的浓度，再用种种方法进行细胞数的测计。
一般认为用细胞计数器测计更为精确。
有的方法是把细胞用血球容量计进行离心沉淀，从其刻度的容积进行换算；还有一种方法是比浊法。
在测计固氮细菌时，可用凯氏定氮法测定有机氮（或是蛋白态氮），然后换算成细菌数。
进行活菌计数时，先把样品稀释，然后将一定量稀释样品混入依菌性质制成的溶融状态的琼脂培养基中进行平面培养，再根据菌落数进行统计。
对已鉴别过的菌种或具有某种特定性质的细菌来说，活菌计数比较简单，但对土壤微生物区系量的分析就比较复杂了。
1.计数器测定法：
即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:
电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法
常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；
②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
平皿灌浇细菌计数法，将待测水样或废水样稀释成0.1、0.01、0.001及需要的其他浓度。
用移液管各取1ml的水样，分置于直径约90mm的皮特里无菌皿（sterile Petri disks）上。
用45℃的熔融琼脂15ml将1ml的水样覆盖，以圆周和往复运动方式振摇混合均匀后静置。
再在样品上面覆盖一薄层琼脂，以防
止菌群在样品表面大量繁殖而掩蔽了下面的菌群。
琼脂中含有多种盐或其他化学物质，以利于某些种类的细菌繁殖。
加入琼脂之后，将无菌皿翻过来放于温度适宜的培养器中，培养期满后进行每个皿上的菌群的计数，并略去菌数超过300
和不足30的情况。
因为，菌数超过300的是很难计数的；而不足30时，则会造成巨大的统计偏差。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法
比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法
此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
6、测定细胞总氮量或总碳量
氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。
此法适于细胞浓度较高的样品。
7、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU）
这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。
它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例单介绍其操作
（1）取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。
（2）在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管（3）于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.
一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。
另活菌计数法，其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。
将待测样品经一系列 10 倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取 0.2ml 放入无菌平皿，再倒入适量的已熔化并冷至 45 ℃左右的
培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放入适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：
每毫升原菌液活菌数＝同一稀释度三个以上重复平皿
菌落平均数×稀释倍数× 5
此法还可以将稀释的菌液取 0.2m 1 加到已制备好的平板上，然后用无菌涂棒将菌液涂布整个平板表面，放入适宜温度下培养，计算菌落数，再按上公式计算出每毫升原菌液的所含活菌总数。
此法可因操作不熟练造成污染，或因培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不稳定。
尽管如此，由于该方法能测出样品中微量的菌数，仍是教学、科研和生产上常用的一种测定细菌数的有效方法。
土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽抱与抱子等的数量均可用此法测定。
但不适于测定样品中丝状体微生物，例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。
除上述两种常用的计数方法外，还有膜过滤法、比浊法。
膜过滤法是当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器。
然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上 ( 或一定面积中 ) 的细菌数；比浊法原理是在一定范围内，菌的悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。
因此可以借助于分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度 (O ． D ． ) 表示菌量。
实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。
微生物计数法，发展迅速，现有多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法。