教案：紫外可见分光光度计 法测定食品中苯甲酸钠的含量

紫外可见分光光度计法测定食品中苯甲酸钠的含

量

一、实验目的

1、了解和熟悉紫外-分光光度计的原理、结构和操作方法；

2、掌握紫外分光光度法测定苯甲酸的吸收光谱图；

3、掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。

二、实验原理

为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，其使用量一般在0.1%左右。

苯甲酸及苯甲酸钠具有芳香结构在近紫外光区具有较强的吸收。通过实验证实，苯甲酸在230nm处具有最大吸收。另一方面，它在水中具有适当的溶解度，所以，可将标样和样品处理成水溶液，采用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。

由于食品中苯甲酸用量很少，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此一般需要预先将苯甲酸与其它成分分离。从食品中分离防腐剂常用的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。本实验测定雪碧、可口可乐、醒目等饮料中苯甲酸（钠），样品不用处理，在230nm波长处测定标准溶液及样品溶液的吸光度，绘制标准曲线法，可求出样品中苯甲酸的含量。

3、仪器和试剂

仪器：紫外可见分光光度计 TU-1810（北京普析通用仪器有限公司），1.0cm石英比色皿，50ml容量瓶11个，吸量管5mL一支、1mL两支。

试剂：苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间；0.1mol/L NaOH溶液；市售饮料。

四、实验步骤

1、标准曲线的制作

苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸储备液5.00mL 于50mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。

苯甲酸钠系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于6个50mL容量

瓶中，各加入0.1mol/LNaOH溶液1.00mL蒸馏水稀释定容，摇匀。得到浓度分别为0.00 mg/L 、2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和

10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。

2、市售饮料的配制

准确移取市售饮料0.50ml于50mL容量瓶中，用超声脱气5min驱赶二氧化碳后，加入0.1mol/LNaOH溶液1.00mL，用蒸馏水稀释定容。3、紫外可见分光光度计的操作

（1）开机：打开计算机，打印机；打开主机开关，双击UVWin5紫外软件图标，仪器开始自检，自检后进入测量界面。

（2）光谱扫描

a、打开光谱扫描；

b、参数设置打开测量→参数设置窗口，设置光度方式abs，波长范围200—500nm，扫描速度（快），采样间隔（1.0），扫描方式；单次扫描点击“确定”；

c、参比池和空白池均放上空白溶液，点击“基线校正”；

注：在开始基线校正之前，确认样品或参比光束无任何障碍物，且样品室中没有样品。

d、参比池中加入空白溶液，样品池中加入苯甲酸钠标准液，点

击“开始”，测定紫外可见吸收光谱；

e、扫描完成后，标出最大吸收峰，确定最大吸收峰对应的波长；

f、图谱保存：在保存对话框顶部的保存位置中选择适当的路径，输入文件名，点击“保存”。

4、标准曲线法测定待测样品的浓度

（1）选择“定量分析”；

（2）参数设置打开测量→参数设置窗口，测量方式：单波长，设置合适的波长，如230nm，浓度单位：mg/L，点击“确定”；

（3）参比池和空白池均放上空白溶液，点击“校零”；

（4）标准曲线制作：点击“测量标准曲线”窗口，样品池中分别放入浓度为0.00 mg/L 、2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L 标准溶液，点击“开始”，输入标准溶液的浓度“确定”。得到标准曲线的方程和相关系数。

注：测量时由稀到浓，依次放入系列标准溶液。

（5）样品的测量：点击“未知样品”窗口，样品池中放入待测溶液，读出待测溶液的浓度和对应的吸光度值。

5、打印实验数据。

6、关机：依次关闭：UVWin5紫外软件、主机、计算机、仪器电源。

五、数据处理

1、苯甲酸钠紫外-可见吸收光谱的测定，并找出最大吸收峰波长。

2、苯甲酸钠标准曲线的测定，以及曲线方程、相关系数的测定。

3、样品中苯甲酸钠含量的测定。

注：报告数据处理处需将实验数据依依列出。

六、注意事项

1、试样和标准工作曲线的实验条件应完全一致。

2、不同牌号的饮料中苯甲酸钠含量不同，移取时样品量可酌情增

减。

3、比色皿中液体装入三分之二即可，外部要擦拭干净。

七、思考题

1、紫外可见分光光度计由哪些部件构成？各有什么作用？

2、本实验为什么要用石英比色皿？为什么不能用玻璃比色皿？

3、苯甲酸的紫外光谱中有哪些吸收峰？各自对应哪些吸收带？由哪些跃迁引起？