蛋白质与酶工程选择与解答

一、选择题

1．下列不属于Prion蛋白特点的是（C）

A.没有核酸

B.没有病毒形态

C.在120℃高温及2h高压下可灭活

D.病毒潜伏期长

2．蛋白质工程研究的核心内容是（A）

A.蛋白质结构分析

B.蛋白质结构预测

C.改造蛋白质

D.创造新蛋白质

3．蛋白质工程的最终目的是（C）

A.研究蛋白质的结构组成

B.创造新理论

C.生产具有新性能的蛋白质

D.研究蛋白质的氨基酸组成

4．蛋白质分子设计中“小改”是指（B）

A.对来源于不同蛋白的结构域进行拼接组装

B.对已知结构的蛋白质进行少数几个残基的替换

C.完全从头设计全新的蛋白质

D.对蛋白质中的一个肽段进行替换

5．可用于蛋白质功能分析的方法是（D）

A.X射线晶体衍射技术

B.圆二色谱法

C.显微技术

D.蛋白质芯片技术

6．以下那种方法，可以方便地在溶液中研究分子结构，并且是唯一可以使试样不经受任何破坏的结构分析方法？（B）

A. X射线晶体衍射技术

B.核磁共振技术

C.圆二色谱法

D.电镜三维重构法

7．以下不属于根据分子大小不同进行蛋白质纯化的方法的是（D）

A.超滤

B.透析

C.密度梯度离心

D.盐析

8．Western-Blotting是对（B）进行印迹分析的方法。

A.RNA

B.单向电泳后的蛋白质分子

C.DNA

D.双向电泳后的蛋白质分子

9．以下不属于酶的固定化方法中非化学结合法的是（A）

A.交联法

B.结晶法

C.吸附法

D.离子结合法

10.最常用的交联剂是（A）

A.戊二醛

B.聚乙二醇

C.异氰酸酯

D.双重氮联苯胺

11.世界上生产规模最大，应用最成功的固定化酶是（C）

A.氨基酰酶

B.天冬酰胺酶

C.葡萄糖异构酶

D.胆固醇氧化酶

12.抗体酶是（ A ）

A、具有催化活性的抗体分子

B、具有催化活性的RNA分子

C、催化抗体水解的酶

D、催化抗体生成的酶

13.以天然蛋白质或酶为母体，用化学或生物学方法引进适当的活性部位或催化基团，或改变其结构而形成一种新的人工酶是（C）

A.胶束酶

B.肽酶

C.半合成酶

D.抗体酶

14.制备游离酶可选用的酶反应器是（B）

A.填充床反应器

B.喷射式反应器

C.连续搅拌罐反应器

D.流化床反应器

15.金属离子置换修饰是将（ D）中的金属离子用另一种金属离子置。

A.酶液

B.反应介质

C.反应体系

D.酶分子

16.被称为“分子手术刀”和“分子针线”的酶分别是（A）

A.限制性内切酶、DNA连接酶

B.DNA解旋酶、DNA连接酶

C.DNA聚合酶、限制性内切酶

D.DNA解旋酶、DNA聚合酶

17.当前生产酶制剂所需的酶主要的来自（C）

A.动物组织和器官

B.植物组织和器官

C.微生物发酵

D.基因工程

18.溶菌酶的作用对象是（A）

A.革兰氏阳性菌

B.酵母

C.革兰氏阴性菌

D.霉菌

四、简答题

1.蛋白质分子设计分类及目的

（1）小改：可通过定位突变或化学修饰来实现，是指对已知结构的蛋白质进行少数几个残基的替换。

主要通过定点突变技术或盒式替换技术有目的改变几个氨基酸残基，借以研究和改善蛋白质的性质和功能

（2）中改：对来源于不同蛋白的结构域进行拼接组装，是指在蛋白质中替换1个肽段或者1个结构域。

蛋白质的立体结构可以看作由结构元件组装而成的。因此可以在不同的蛋白质之间成段地替换结构元件，期望能够转移相应功能。

（3）大改：完全从头设计全新的蛋白质

从氨基酸残基出发，即从一级序列出发，设计制造自然界中不存在的全新蛋白质，使之具有特定的空间结构和预期的功能。

2.光亲和标记的反应过程及一般原理

反应过程：（1）试剂与蛋白质活性部位在暗条件下发生特异性结合

（2）光照，试剂被光激活，产生1个高度活泼的功能基团，与活性部位的侧链基团发生反应

一般原理：光亲和标记试剂在暗条件下与蛋白质的活性部位发生专一性的共价结合，形成一个复合物，然后在光照的情况下试剂被激活，产生一

个活泼的反应官能团，官能团立即与附近活性部位的氨基酸残基的

侧链基团发生反应，从而形成一个共价的标记物。

3.简述XRD/NMR技术的原理、优缺点以及样品要求

XRD

原理：X射线衍射分析所依赖的基本原理是X射线衍射现象。X射线衍射现象

利用X射线的波长和晶体中原子的大小及原子间距同数量级的特性来分析晶体

结构。

优点：分辨率高，能精确确定生物大分子中各原子的坐标、键长、键角，给出

生物大分子的分子结构和构型，确定活性中心的位置和结构。

缺点：只能测定单晶，反映静态结构信息，无法测定溶液中的信息。

样品要求：单晶——具有高度均一性的物质

NMR

原理：处于某个静磁场中的自旋核系统受到相应频率的射频磁场作用时，共振

吸收某一特定频率辐射的物理过程。

优点：可以在水溶液或有机相中研究生物大分子结构，研究溶液条件的改变对

生物大分子三维结构的影响以及生物大分子内部动力学的特点。

缺点：分辨率不高。目前NMR只能用于测定小分子和中型蛋白质的结构。

样品要求：蛋白质可溶性、高稳定性

4.设计一种实验方法将四种分子大小不同，等电点分别为A4.8，B6.2，C9.5，D11.3的可溶性蛋白质分子进行分离纯化。

（1）将四种蛋白质进行溶解，将溶液pH调至7，则A与B蛋白带负电荷，C

与D蛋白带正电荷

（2）选用阳离子交换剂进行装柱，将配好的蛋白质溶液上样，先用缓冲液进行淋洗，则A与B蛋白先流出来收集淋洗液，而C与D蛋白则吸附于交换剂上。

（3）用高盐溶液进行梯度洗脱将C与D蛋白洗脱下来，收集洗脱液。

（4）将淋洗液及洗脱液分别进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳处理，既可以将两

种不同蛋白分子量的蛋白质分离，又可对所分离的蛋白质进行鉴定。

5.简述蛋白质免疫印迹鉴定法的原理及操作程序。

原理：经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价

键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。固相