实验五 细胞的传代培养
细胞的传代实验报告
一、实验目的1. 了解细胞传代培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握细胞传代培养的基本技术，包括细胞消化、计数、接种和观察等。
3. 观察细胞在不同代数的生长情况，分析细胞传代过程中的变化。
二、实验原理细胞传代培养是指在原代培养的基础上，将细胞从培养瓶中取出，通过消化、计数、接种等步骤，将细胞转移到新的培养瓶中继续培养。
细胞传代培养的目的是为了获得足够数量的细胞，满足后续实验的需求。
细胞传代培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养是指从组织或细胞中直接获取细胞进行培养；传代培养是指将原代培养的细胞进行消化、计数、接种等操作，转移到新的培养瓶中继续培养。
三、实验材料1. 培养基：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、胰蛋白酶。
2. 培养器具：细胞培养瓶、培养皿、移液器、吸管、无菌操作台、显微镜等。
3. 试剂：生理盐水、75%乙醇、碘伏、双氧水、氯化钠等。
四、实验步骤1. 原代培养（1）取适量组织或细胞，用生理盐水清洗，然后用剪刀剪碎。
（2）将剪碎的组织或细胞放入培养皿中，加入适量胰蛋白酶，37℃消化5-10分钟。
（3）消化结束后，用吸管轻轻吹打培养皿，使细胞分散。
（4）将细胞悬液转移到细胞培养瓶中，加入适量DMEM培养基，37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. 传代培养（1）待细胞生长至80%-90%融合时，用胰蛋白酶消化细胞。
（2）消化结束后，用吸管轻轻吹打细胞，使细胞分散。
（3）将细胞悬液转移到计数板中，用生理盐水洗涤计数板，计数细胞数量。
（4）根据计数结果，调整细胞悬液浓度，将细胞接种到新的细胞培养瓶中。
（5）将细胞培养瓶放入培养箱中，继续培养。
3. 观察细胞生长情况（1）每天观察细胞生长情况，记录细胞形态、生长速度等。
（2）通过显微镜观察细胞在不同代数的生长情况，分析细胞传代过程中的变化。
五、实验结果与分析1. 细胞传代培养成功，细胞生长情况良好，细胞形态正常，生长速度较快。
2. 随着细胞传代次数的增加，细胞生长速度逐渐减慢，细胞形态逐渐发生变化，部分细胞出现老化现象。
细胞传代培养实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞传代培养的基本操作流程。
2. 熟悉细胞传代培养过程中的注意事项。
3. 了解细胞传代培养在生物科学研究中的应用。
二、实验原理细胞传代培养是指将已经生长到一定阶段的细胞，通过特定的方法进行分离、洗涤、消化、计数和稀释等步骤，将细胞转移到新的培养容器中继续培养的过程。
细胞传代培养是维持细胞生长、扩大细胞数量和保持细胞特性的重要手段。
三、实验材料1. 细胞：HeLa细胞2. 培养基：DMEM/F12培养基（含10%胎牛血清）3. 试剂：0.25%胰蛋白酶、10%FBS、PBS缓冲液、酒精4. 仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、移液枪、培养瓶/皿、吸管等四、实验步骤1. 准备阶段（1）将HeLa细胞从培养瓶中取出，用PBS缓冲液轻轻洗涤一次，去除残留的培养基。
（2）准备胰蛋白酶工作液，将其置于37℃水浴中预热。
（3）准备含有10%FBS的培养基，将其置于37℃水浴中预热。
2. 分离细胞（1）用移液枪吸取适量胰蛋白酶工作液，滴加到细胞培养皿中的细胞层上。
（2）将培养皿置于37℃、5%CO2的培养箱中消化2-3分钟。
（3）倒置显微镜下观察细胞，当大部分细胞变圆且亮时，加入等体积含有10%FBS的培养基终止消化。
（4）用移液枪轻轻吹打细胞，使其成为细胞悬液。
3. 计数（1）取适量细胞悬液，使用细胞计数仪或显微镜配合琼脂滴定法计数。
（2）根据计数结果，调整细胞密度至所需的浓度，一般为每毫升105-106个细胞。
4. 传代（1）向含有预热的培养基的离心管中加入细胞悬液，并轻轻混匀。
（2）离心管离心，在1500 rpm速度下离心3-5分钟，以沉淀细胞。
（3）弃去上清液，保留沉淀的细胞。
（4）加入适量的新鲜培养基，将细胞重新悬浮。
（5）将细胞悬液转移到新的培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
五、实验结果1. 成功完成细胞传代培养，观察到细胞在新的培养瓶中继续生长。
2. 细胞生长状态良好，细胞密度符合预期。
细胞的原代培养和传代培养
实验五细胞的原代培养和传代培养1. 实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程。
2. 实验指导细胞培养(cell culture)是从机体中将细胞取出后，在模拟生物体内生理条件下使其在体外生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命活动过程的方法。
进行细胞生物学、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。
近年来，广泛应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成为一种重要的生物学技术。
细胞培养一般可分为原代培养和传代培养。
所谓原代培养，是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养，也叫初代培养。
原代培养离体时间短，遗传性状和体内细胞相似，适于做细胞形态、功能和分化等研究。
一般动物和人的所有组织都可以用于培养，但幼体组织和细胞(如胚胎组织、幼仔的脏器等)更容易进行原代培养。
传代培养则是为了使体外培养的原代细胞或细胞株在体外持续生长、繁殖。
细胞持续生长繁殖就必须传代，并由此获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞。
培养的贴壁细胞形成单层汇合后，由于密度过大、生存空间不足而引起营养枯竭。
将培养的细胞分散，从容器中取出，以1：2或1：3以上的比例转移到另外的容器中继续进行培养，即为传代培养。
要使细胞在离体情况下生长繁殖，培养条件必须尽可能接近体内，除营养物质外，温度、PH值、生长因子等也至关重要。
此外，还应避免细菌及其他微生物的污染，重金属离子及有毒化学物质及放射线的影响。
贴壁细胞通过质膜表面的粘着蛋白贴附于培养瓶表面。
加入消化液可使粘着蛋白部分水解，从而使培养的细胞游离。
但消化时间不可过长，否则可能导致细胞解体死亡。
常用的消化液为胰蛋白酶和EDTA。
二者可分别使用，也可共同使用。
钙离子是二者的抑制剂，故实验中消化结束时，加入含有钙离子的全培养液，即可终止消化。
细胞的一代是指细胞从接种到分离再培养的一段时间，与细胞世代或倍增不同，在一代中细胞倍增3～6次。
细胞传代后一般经过三个阶段：游离期、指数生长期和停止期。
传代细胞培养实验报告单
实验名称：传代细胞培养实验实验日期：2023年4月10日实验者：张三一、实验目的1. 掌握哺乳动物细胞原代培养与传代培养的基本操作过程。
2. 熟悉细胞传代过程中所需的无菌操作技术。
3. 了解细胞传代对细胞生物学研究的重要性。
二、实验原理细胞培养是一种在人工条件下模拟体内生理环境，使细胞生长、繁殖或传代的技术。
细胞培养技术可以让我们直接观察活细胞，避免体内实验的复杂因素，为生物学研究提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象。
细胞培养分为原代培养和传代培养。
原代培养是指从生物体中取出组织或细胞进行首次培养，而传代培养则是在原代培养基础上，将细胞从一个容器转移到另一个容器中扩大培养。
传代培养的累积次数即为细胞的代数。
三、实验材料1. 培养基：DMEM培养基（含10%胎牛血清、1%青链霉素双抗）2. 细胞：小鼠成纤维细胞3. 工具：超净台、移液器、吸管、培养皿、离心机、显微镜、无菌操作箱、消毒剂等四、实验步骤1. 培养基配制：按照说明书配制DMEM培养基，加入胎牛血清和青链霉素双抗。
2. 细胞复苏：将冻存细胞从-80℃冰箱取出，放入37℃水浴中解冻，轻轻摇匀后移入离心管，1000 rpm离心5分钟，弃上清，加入适量DMEM培养基重悬细胞。
3. 细胞接种：将重悬细胞接种于培养皿中，放入培养箱中培养，保持细胞密度在80%-90%。
4. 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，进行细胞传代。
具体操作如下：a. 吸除旧培养基，用PBS缓冲液清洗细胞2-3次。
b. 加入适量胰蛋白酶，37℃水浴消化细胞，显微镜下观察细胞变圆、收缩，待大部分细胞脱离培养皿底面时，立即终止消化。
c. 加入适量DMEM培养基终止消化，用吸管轻轻吹打细胞，使其分散均匀。
d. 将细胞接种于新的培养皿中，放入培养箱中继续培养。
5. 细胞观察：在显微镜下观察细胞生长状态，记录细胞形态、生长速度等指标。
五、实验结果1. 细胞在培养皿中生长良好，细胞形态正常，呈梭形。
细胞传代培养的原理及操作步骤细胞冻存细胞复苏
细胞传代培养的原理及操作步骤细胞冻存细胞复苏1.准备培养器具和试剂：清洁并消毒培养器具，准备好所需的培养基、培养皿、细胞传代液等。
2.涂覆培养皿：将培养皿内涂覆一层适宜的基质（如凝胶、基质蛋白等）使细胞黏附在培养皿表面。
3.移植细胞：将细胞传代液中的细胞取出，经过适当的处理（如洗涤），将其转移到新的培养皿中。
可选择不同的分离方法，如以胰酶来切割细胞聚集物或以细胞转染剂来解离细胞。
4.培养细胞：将新的培养皿放入恒温培养箱中，提供适宜的培养基和环境条件（如温度、湿度、CO2浓度等），使细胞可以继续增殖和生长。
5.观察细胞生长：每天观察细胞的形态、数量和健康状况，记录细胞的生长曲线和其他相关信息。
6.传代细胞：当细胞生长到达一定程度（一般为80-90%的密度）时，可将细胞传代到新的培养皿中。
首先将细胞培养液抽吸并丢弃，并用适当的缓冲液（如PBS）洗涤细胞数次，以去除细胞培养液中的残留物。
接着加入胰酶等酶消化液，使细胞分离，并加入培养基将细胞转入新的培养皿中。
7.重复培养：重复以上步骤，使细胞不断地进行传代培养。
细胞冻存及复苏：细胞冻存是将细胞在低温条件下保存，以便长期保持细胞的活力和功能。
细胞冻存可避免细胞在传代培养中的漂变和突变，并保持细胞库的物种多样性。
而细胞复苏则是指将冻存的细胞重新从冷冻状态回复到活跃状态，以供进一步的研究或应用。
细胞冻存及复苏的步骤如下：1.准备培养器具和试剂：清洁并消毒培养器具，准备好所需的培养基和冻存液。
2.预培养：将要冻存的细胞在新鲜的培养基中进行预培养，以使细胞处于最佳的生长状态。
3.细胞冻存液配制：根据细胞的特性和需要，配制适宜的冻存液。
一般来说，冻存液中含有维持细胞生存的缓冲剂、保护剂（如DMSO）、营养物质和蛋白质（如血清）等。
4.细胞冻存：将细胞培养液去掉，并用PBS洗涤细胞数次，以去除细胞培养液中的残留物。
然后加入适量的冻存液，使细胞和冻存液混合均匀。
最后将混合物分装到试管或冷冻管中，并迅速放入低温处。
细胞传代的实验报告
一、实验目的1. 理解细胞传代培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握细胞传代培养的方法，提高细胞培养的纯度和活力。
3. 分析细胞传代过程中可能遇到的问题及解决方法。
二、实验原理细胞传代培养是指将培养的细胞从原代培养瓶中取出，通过胰蛋白酶消化分散成单个细胞，再将其转移到新的培养瓶中进行培养的过程。
细胞传代培养的目的是为了获得更多的细胞，并保持细胞的生长活力和纯度。
细胞传代培养的基本原理是利用细胞增殖的特性，将原代培养的细胞分散成单个细胞，再进行培养。
细胞传代培养过程中，需要注意以下几点：1. 细胞传代频率：细胞传代频率过高会导致细胞生长活力下降，过低则可能引起污染。
2. 胰蛋白酶浓度：胰蛋白酶浓度过高会损伤细胞，过低则难以将细胞分散成单个细胞。
3. 细胞密度：细胞密度过高会导致细胞之间竞争营养物质，过低则会影响细胞生长速度。
三、实验材料1. 细胞：原代培养的细胞（如人胚胎肾细胞、小鼠成纤维细胞等）。
2. 培养基：DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶。
3. 仪器：无菌操作台、超净工作台、培养箱、显微镜、移液器、培养瓶等。
四、实验步骤1. 将原代培养的细胞从培养瓶中取出，用移液器加入适量的胰蛋白酶，置于37℃水浴锅中消化。
2. 观察细胞消化情况，待细胞完全分散成单个细胞时，立即加入等量的胎牛血清终止消化。
3. 将细胞悬液转移至新的培养瓶中，加入适量的培养基，混匀。
4. 将培养瓶置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
5. 每隔一定时间（如3-5天）观察细胞生长情况，待细胞长满培养瓶底时，重复上述步骤进行细胞传代。
6. 观察细胞生长活力和纯度，分析细胞传代过程中可能遇到的问题及解决方法。
五、实验结果与分析1. 细胞生长活力：通过观察细胞在培养瓶中的生长情况，可以判断细胞传代培养的成功与否。
细胞生长活力高的细胞在培养瓶中生长迅速，细胞形态正常。
2. 细胞纯度：通过观察细胞在显微镜下的形态，可以判断细胞纯度。
纯度高的细胞形态一致，无杂质。
传代_实验报告
一、实验目的1. 了解细胞传代培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握细胞传代培养的实验技巧，为后续实验提供细胞来源。
3. 培养学生的实验操作能力和严谨的科学态度。
二、实验原理细胞传代培养是指在细胞培养过程中，将生长到一定阶段的细胞分散后，转移到新的培养容器中进行增殖培养。
传代培养的目的是为了获得大量的、生长状态良好的细胞，以便进行后续实验。
细胞传代培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养是指直接从生物体中获取组织细胞进行培养；传代培养是指将原代培养的细胞进行分散后，转移到新的培养容器中进行增殖培养。
三、实验材料1. 培养基：DMEM培养基（含10%胎牛血清）2. 细胞：原代细胞（如人胚肾细胞）3. 培养皿：25cm2培养皿4. 移液器：移液枪、移液管5. 离心机6. CO2培养箱7. 灭菌器械：酒精灯、高压灭菌锅、无菌操作台等四、实验步骤1. 准备培养基：将DMEM培养基加入10%胎牛血清，混合均匀后分装于培养皿中，置于CO2培养箱中预热。
2. 细胞传代：将原代细胞培养至80%左右融合时，取出培养皿，用无菌移液枪吸取培养基，弃去。
3. 加入新鲜培养基：用无菌移液枪吸取新鲜培养基，加入培养皿中。
4. 分散细胞：用无菌移液枪吸取培养基，轻轻吹打培养皿中的细胞，使其分散。
5. 转移细胞：将分散后的细胞用无菌移液枪吸取，转移到新的培养皿中。
6. 放回CO2培养箱中培养：将新的培养皿放回CO2培养箱中，继续培养。
7. 观察细胞生长状态：每天观察细胞生长状态，记录细胞形态、生长速度等。
五、实验结果与分析1. 细胞形态：传代后的细胞形态与原代细胞相似，呈多边形，细胞质丰富，细胞核清晰。
2. 细胞生长速度：传代后的细胞生长速度与原代细胞相似，生长状态良好。
3. 细胞传代次数：根据实验结果，细胞传代次数可达10代以上。
六、实验结论1. 成功掌握了细胞传代培养的基本原理和操作步骤。
2. 传代后的细胞形态、生长速度与原代细胞相似，生长状态良好。
细胞复苏传代实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞复苏和传代的基本操作流程。
2. 了解细胞生长周期及细胞传代的意义。
3. 观察细胞在不同培养条件下的生长状态。
二、实验原理细胞复苏是指将冻存的细胞恢复到正常生长状态的过程。
细胞传代是指将培养的细胞从一个容器转移到另一个容器中，以增加细胞数量。
细胞复苏和传代是细胞培养过程中的重要环节，对于细胞生长、实验研究具有重要意义。
三、实验材料1. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、双抗、PBS、75%酒精。
2. 仪器：水浴锅、台式离心机、细胞计数仪、CO2培养箱、倒置显微镜、移液枪、移液管、细胞培养瓶。
四、实验步骤1. 细胞复苏（1）将冻存的细胞取出，放入37℃水浴锅中，边振荡边使其解冻，直至细胞悬液呈半透明状。
（2）用移液枪将细胞悬液转移至离心管中，离心5min，800rpm。
（3）弃去上清液，加入适量DMEM培养基，轻轻吹打使细胞重悬。
（4）将细胞悬液转移至培养瓶中，放入CO2培养箱中培养。
2. 细胞传代（1）待细胞贴壁生长至80%左右，用吸管轻轻吹打，使细胞脱离培养瓶壁。
（2）将细胞悬液转移至离心管中，离心5min，800rpm。
（3）弃去上清液，加入适量DMEM培养基，轻轻吹打使细胞重悬。
（4）将细胞悬液按1:2的比例转移至新的培养瓶中，放入CO2培养箱中培养。
3. 细胞观察（1）每隔24小时观察细胞生长状态，记录细胞数量、形态等。
（2）用倒置显微镜观察细胞形态，拍摄细胞照片。
五、实验结果与分析1. 细胞复苏后，细胞形态正常，生长状态良好。
2. 细胞传代过程中，细胞数量逐渐增加，生长状态稳定。
3. 观察细胞形态，细胞呈典型的上皮细胞形态，细胞质均匀，细胞核清晰。
4. 通过细胞计数仪对细胞进行计数，计算细胞生长倍数。
六、实验结论1. 本实验成功复苏和传代了细胞，为后续实验研究提供了细胞来源。
2. 通过细胞复苏和传代，可以增加细胞数量，满足实验需求。
3. 观察细胞生长状态，细胞生长稳定，为后续实验研究提供了有力保障。
细胞学实验报告5_Hela细胞的传代和HE染色
细胞学实验报告五Hela细胞的传代和HE染色生96 华以超2009030049同组姓名：赵宇实验日期：2010.11.11-13一、实验原理：苏木精(hematoxylin)：为从苏木中提取。
苏木精本身不是染料，不能直接染色，必须经氧化才能染色。
可以在空气中自然氧化，但需时很长，所以一般都是加氧化剂（如碘酸钠）氧化。
同时，被染材料又须经媒染剂作用后才有着色能力，所以在配制苏木精染液时，都加有媒染剂。
苏木精液主要着染细胞核。
有数种不同配方的苏木精液。
伊红(eosin)，又分几种，如伊红Y、伊红B等。
对细胞质、肌纤维、胶原纤维具有着色性。
一般用0.5%伊红/70%乙醇液或1%伊红水溶液。
由于苏木精着染细胞核，伊红着染细胞质，所以这种方法称为双重对比染色法。
二、实验步骤：1．传代培养（操作环境：超净台）⑴镜检，观察并记录细胞状态；⑵吸弃培养基，加入1mL PBS 溶液洗去残余培养基，重复进行一次（吸管口不可以接触培养瓶口，加液时不要直接冲击细胞层）；⑶向培养皿内滴加200uL 胰酶－EDTA 消化液，37ºC 消化约1-2 min；⑷观察细胞开始脱离器壁时，加入500uL 含10％血清的DMEM培养基终止消化，反复吹吸（吹吸时不要产生气泡），冲洗细胞层（洗到每个角落），以充分悬浮细胞；⑸分盘，并补充培养基至1.5ml，进行传代培养用于以后的实验。
缓慢、柔和的摇晃培养盘，使得每盘细胞分散尽可能均匀；37ºC、5％CO2培养；2．HE染色⑴镜检，观察并记录细胞状态，选取生长相对稀疏的一盘准备HE 染色；⑵吸弃旧的培养液，用PBS（1mL）漂洗2 次；⑶用Carnoy 固定液固定15min；⑷吸弃固定液，用蒸馏水漂洗一次；⑸加入苏木精染液（1mL，可重复使用）染色十数分钟（随时镜检，以确定染色时间）；⑹用流动的自来水洗去浮色；⑺加入0.5%的盐酸酒精溶液分色数秒（至细胞质近无色）；⑻再用流动的自来水水洗；⑼ 加入适量 0.5%的氨水返蓝处理（数十秒）（作用于苏木精染剂）；⑽ 用流动的自来水洗一次，观察细胞染色效果；如效果较好，以蒸馏水漂洗；⑾ 加入伊红溶液染色数秒后立即弃去；⑿ 用蒸馏水洗涤 1‐2 次；⒀ 观察（细胞核呈紫色、细胞质呈粉红色，层次感分明）并照相记录。
细胞传代培养实验报告
细胞传代培养实验报告一、实验目的。
本实验旨在探究细胞传代培养的方法和技巧，以及观察细胞在不同代数下的生长情况和形态变化，为细胞生物学研究提供实验数据和参考。
二、实验材料和方法。
1. 实验材料，培养皿、培养基、细胞传代培养液、显微镜等。
2. 实验方法：a. 将细胞传代培养液均匀涂抹在培养皿上；b. 将待传代的细胞悬浮液加入培养皿中；c. 放入培养箱内，控制好温度和湿度；d. 每隔一定时间观察细胞的生长情况和形态变化。
三、实验结果。
经过连续传代培养，我们观察到细胞在不同代数下的生长情况和形态变化。
随着传代次数的增加，细胞的数量逐渐增多，细胞形态也发生了一定的变化。
初代细胞呈现出较大的细胞体积和规则的形态，而随着传代次数的增加，细胞体积逐渐减小，形态也变得不规则起来。
四、实验分析。
细胞传代培养是细胞生物学研究中常用的实验方法之一，通过连续传代培养可以观察到细胞的生长情况和形态变化，为细胞的生物学特性和行为提供了重要的数据。
在实际应用中，细胞传代培养也被广泛应用于细胞培养、细胞生长动力学研究、细胞毒性试验等领域。
五、实验结论。
通过本次实验，我们成功地进行了细胞传代培养实验，并观察到了细胞在不同代数下的生长情况和形态变化。
细胞传代培养是一项重要的实验方法，对于细胞生物学研究具有重要的意义。
六、实验总结。
细胞传代培养是细胞生物学研究中的重要实验方法，通过本次实验，我们对细胞传代培养的方法和技巧有了更深入的了解，也为今后的细胞生物学研究提供了重要的实验数据和参考。
七、参考文献。
1. Alberts B, Johnson A, Lewis J, et al. Molecular Biology of the Cell. 4th edition. New York: Garland Science; 2002.2. Freshney R. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique. 5th edition. New York: Wiley-Liss; 2005.以上为本次实验的全部内容，感谢各位老师和同学的关注和支持。
细胞传代培养实验报告
细胞传代培养实验报告一、实验目的：1.了解细胞传代培养的基本原理；2.学习细胞传代培养技术的操作方法；3.掌握细胞传代培养实验的基本步骤和注意事项；4.获得细胞传代培养实验的经验和技能。
二、实验原理：细胞传代培养是指从初始培养物中取出一部分细胞并重新分散、传代到新的培养基中。
通过连续传代，细胞数量可以维持并增加，同时可以获得较为纯净的细胞系，以满足细胞实验的需要。
传代细胞时，需要注意细胞的密度，培养基的补充和细胞培养的条件等。
三、实验材料与方法：1.材料：-细胞培养物-培养基-无菌离心管、培养皿、吸管、移液器等实验器材2.方法：-准备工作：消毒实验器材和台面，准备培养基和培养物；-取出细胞培养物，离心采样管；-收集细胞，用无菌移液器将细胞转移到新的培养基中；-细胞传代，将细胞分散在新的培养基中；-转移细胞至新的培养皿中；-增加培养基，继续培养细胞；-观察细胞生长情况，记录数据。
四、实验结果与分析：1.细胞的形态：观察细胞的外形和颜色，是否有异常；2.细胞的数量：通过显微镜或细胞计数板计算细胞的数量；3.细胞的增长速度：根据前几代的细胞数量和时间，计算细胞的增长速率；4.观察细胞的附着情况和细胞分裂情况；5.记录实验结果。
五、实验结论：通过本次实验，我们成功进行了细胞的传代培养实验。
观察细胞的外形和数量变化，我们可以得出以下结论：1.细胞在新的培养基中可以继续生长和繁殖，实现了细胞传代培养的目标；2.细胞数量随着传代次数的增加而增加，细胞的增长速率相对稳定；3.细胞形态正常，没有明显的异常；4.在培养的过程中，细胞附着情况较好，细胞分裂正常。
六、实验心得：通过本次实验，我学到了细胞传代培养的基本原理和操作技巧。
我了解了细胞的培养条件和细胞的要求，掌握了细胞传代培养的步骤和注意事项。
在实验中，我注意保持实验器材的无菌，尽量减少细菌的污染。
同时，我也学会了如何观察细胞的形态和数量变化，以及如何记录实验结果。
细胞培养vero实验报告
Vero细胞传代培养实验报告一、实验原理体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。
培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。
细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。
在一代中，细胞培增3～6次。
细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。
细胞接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力最好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。
二、器材和液体的准备①.细胞培养器材：培养箱、超净工作台、倒置显微镜、25m培养瓶、5ml移液管、1ml枪头；②. 细胞培养溶液：配制好的PBS液、DMEM培养液（10%血清）、胰酶溶液。
（均已过滤灭菌， 37℃预热）③．其他器材及灭菌用品：计时器、无菌手套、75%酒精、镊子、棉球、废液缸。
三、实验操作①．将长成单层的Vero细胞从二氧化碳培养箱中取出，在超净工作台中吸出瓶内的培养液，加入3~5ml的PBS溶液洗涤一次后吸出，加入1ml胰酶溶液，左右晃动培养瓶使胰酶溶液平铺在细胞表面。
放入37℃，5%二氧化碳培养箱中放置3分钟。
②.在倒置显微镜下观察被消化的细胞，如果细胞变园，相互之间不再连接成片，这时应立即在超净台中将消化液吸出，加入2ml新鲜培养液，反复吹打，制成细胞悬液。
③．将细胞悬液吸出1ml废弃后，将培养瓶中培养液添加至5ml左右，盖好瓶塞，送回37℃，5%二氧化碳培养箱中，继续进行培养。
④. 记录细胞生长情况。
四、无菌操作的注意事项①．在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。
为此，在操作前要认真地洗手并用75％乙醇消毒。
将要放入超净工作台的器材均需放入前喷洒75%酒精灭菌。
操作前30分钟起动超净台紫外灭菌后打开吹风，酒精棉球擦拭超净工作台面。
细胞传代实习报告
一、实习目的通过本次细胞传代实习，了解细胞传代的基本原理和方法，掌握细胞传代的操作技能，提高实验操作的规范性，为后续实验研究奠定基础。
二、实习时间2023年X月X日三、实习地点实验室四、实习内容1. 实验原理细胞传代是指将细胞从原代培养瓶中取出，接种到新的培养瓶中继续培养的过程。
通过传代，可以使细胞数量增加，保证实验所需的细胞数量。
细胞传代过程中，需要遵循无菌操作原则，防止污染。
2. 实验步骤（1）准备实验材料：无菌操作台、细胞培养瓶、吸管、移液器、细胞培养基、消毒酒精、无菌水、移液器吸头等。
（2）无菌操作：穿戴无菌操作服、帽子、口罩，在无菌操作台进行实验。
（3）接种细胞：将细胞从原代培养瓶中取出，用无菌吸管将细胞悬液转移到新的培养瓶中。
（4）调整细胞浓度：根据实验需要，用移液器调整细胞浓度。
（5）培养细胞：将细胞培养瓶放入细胞培养箱中，培养一定时间。
（6）观察细胞生长情况：定期观察细胞生长情况，记录细胞形态、数量等。
（7）传代：当细胞生长至一定密度时，进行细胞传代。
3. 实验结果通过本次实验，成功完成了细胞传代操作，细胞生长良好，形态正常。
五、实习总结1. 本次细胞传代实习使我掌握了细胞传代的基本原理和方法，提高了实验操作的规范性。
2. 在实验过程中，我深刻体会到无菌操作的重要性，遵守无菌操作原则，防止污染。
3. 通过本次实验，我对细胞培养技术有了更深入的了解，为后续实验研究奠定了基础。
4. 在实验过程中，我遇到了一些问题，如细胞浓度调整不准确等，通过查阅资料和请教老师，解决了这些问题。
5. 在今后的实验中，我将继续努力，提高实验技能，为科研工作做出贡献。
细胞传代消化实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞传代培养的基本原理和操作步骤。
2. 熟悉细胞消化液的使用方法及注意事项。
3. 观察细胞在消化、传代过程中的形态变化。
二、实验原理细胞传代培养是指将培养至一定代数的细胞从原培养瓶中取出，通过消化、分散、接种等步骤，将细胞转移到新的培养瓶中继续培养。
消化液的作用是将细胞从培养瓶壁上分离下来，使细胞分散成单个细胞，便于接种。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 原代培养细胞- 0.25%胰蛋白酶溶液- 10%胎牛血清- 细胞培养液- 离心管- 培养瓶- 培养箱- 显微镜2. 仪器：- 消化酶配液器- 离心机- 吸管- 移液器四、实验步骤1. 准备工作：- 将细胞培养瓶置于培养箱中，调整培养箱温度至37℃。
- 检查细胞生长情况，确保细胞生长良好。
2. 消化细胞：- 将0.25%胰蛋白酶溶液加入细胞培养瓶中，加入量约为原培养液的1/10。
- 将培养瓶置于培养箱中，消化10-15分钟。
3. 分散细胞：- 将消化后的细胞悬液用吸管轻轻吹打，使细胞分散成单个细胞。
- 将细胞悬液转移至离心管中，离心（1000 rpm，5分钟）。
4. 弃去上清液，加入适量细胞培养液，重悬细胞。
- 用移液器将细胞悬液均匀接种至新的培养瓶中。
- 加入适量的10%胎牛血清和细胞培养液，混匀。
5. 将新培养瓶置于培养箱中，继续培养。
6. 观察细胞形态变化：- 在显微镜下观察细胞生长情况，记录细胞形态变化。
五、实验结果与分析1. 细胞消化后，可见细胞从培养瓶壁上脱落，分散成单个细胞。
2. 细胞接种至新培养瓶后，细胞生长状况良好，形态正常。
3. 在传代过程中，细胞生长速度逐渐加快，细胞密度逐渐增加。
六、实验总结本次实验成功完成了细胞传代培养，掌握了细胞消化、分散、接种等基本操作步骤。
实验结果表明，细胞传代培养是一种有效的细胞培养方法，可以保证细胞生长的连续性和稳定性。
在实验过程中，应注意以下几点：1. 消化酶的浓度和消化时间要适宜，避免细胞过度消化或消化不足。
细胞复苏,传代与冻存
一、目的：掌握将冻存良好的细胞复苏、培养的基本原理与方法。
二、原理：细胞冷冻与复苏是细胞培养的常规工作，可以解决细胞因为连续继代造成的退变或转化。
细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。
复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。
三、步骤：（一）材料准备：1. 仪器：净化工作台、离心机、恒温水浴箱、冰箱（4℃、-20℃、-80℃）、倒置显微镜、培养箱、微量加样器。
2. 耗材：枪头、培养皿、15ml离心管、酒精灯、废液缸。
3. 试剂：培养基、血清、双抗（青霉素、链霉素）。
4. 其他物品：记号笔、记号笔、橡胶手套、口罩、100%和75%酒精。
（二）细胞复苏步骤：1.从液氮或-80℃冰箱容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2.从37℃水浴中取出冻存管，于超净台中打开盖子，用枪头吸出细胞悬液，加到15ml离心管中（离心管中已预先加入了3ml细胞完全培养基），轻弹混匀。
3.离心，1 000 rpm，5 min。
4.弃去上清液，轻轻敲打重悬细胞，加入含10%FBS的细胞培养基，轻弹重悬细胞，调整细胞密度，接种培养皿，37℃培养箱静置培养。
5.次日更换一次培养液，继续培养。
四、注意事项：1．拿出冻存的细胞后，尽快置于37℃水浴中融化，整个复苏过程要快；2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤；3．细胞轻弹混匀，勿反复多次吹打。
一、目的：学习细胞传代培养的原理及一般方法，熟悉传代培养的操作步骤以及进一步掌握无菌操作技术。
二、原理：体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。
培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2 或l:3 以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。
细胞培养的操作流程
实验题目：细胞传代实验材料：细胞培养箱，安全柜，手套，酒精灯，吸管，移液管（5ml，10ml），50mL离心管，培养瓶（25cm2），移液枪，离心机，计时器，真空泵，抽滤瓶，水浴锅，记号笔，冰箱实验原理：细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。
同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。
实验步骤：以Hela细胞为例说明具体实验操作步骤一．实验前准备工作：进细胞室先换拖鞋，带上手套75%的酒精进行表面消毒；检查酒精灯有无95%酒精，电枪有无电；将实验过程中用到的实验器材（包括培养瓶、50mL离心管、移液管）放于安全柜里，实验前安全柜开紫外照15~20min；将细胞培养液放于37℃水浴中预热；抽滤瓶与真空泵相连，废弃缸套袋。
二．.准备实验：先关闭紫外等30min后再进行实验；75%酒精喷于纸上，将超净工作台仔细擦试干净；点燃酒精灯，小心的将细胞从孵箱中拿出。
1．吸除旧的DMEM培养液：拿出吸管（要拿吸管的上端），插入与抽滤瓶相连的橡胶管中，在酒精灯外焰灼烧灭菌，细胞培养瓶倾斜将吸管插入瓶底部一角，吸出旧的DMEM培养液，将用后的吸管弃于废弃缸里。
注意：一定要吸除干净，否则消化时间过长，细胞损伤过大。
2．消化：拿出5mL移液管，插入电枪中，酒精灯过火灼烧，吸取2mL 0.25%胰酶加入培养瓶中，混匀，放于37℃孵箱中消化5-6min。
取下用后的移液管。
3．中和：从孵箱中拿出培养瓶，显微镜下观察细胞是否被完全消化下来，5mL灭菌后移液管加入3mLDMEM培养液终止消化。
反复吹打混匀；吸出中和液转移到50mL离心管中。
4．离心收集细胞：配平后离心200×g，3min。
将新的DMEM培养液加入新培养瓶中，2mL／瓶（培养瓶底面积为25cm2）。
5．重悬细胞：离心后吸出中和液，（先吸出表面泡沫，一定注意不要吸出细胞）。
细胞传代实验报告
细胞传代实验报告细胞传代实验报告细胞传代是一种重要的实验方法，用于研究细胞的生长和分化过程，以及细胞的遗传特性。
本实验旨在观察和分析细胞在不同代数中的生长情况，并探讨细胞传代对细胞特性的影响。
材料与方法：1. 细胞培养基：含有适当营养物质和生长因子的培养基。
2. 细胞培养器具：培养皿、离心管、显微镜等。
3. 细胞系：选择一种已知的细胞系，例如人类肺癌细胞系A549。
实验步骤：1. 细胞接种：将A549细胞接种于含有培养基的培养皿中，维持适当的温度和湿度条件。
2. 细胞培养：每隔一定时间，观察细胞的生长情况，记录细胞数量和形态的变化。
3. 细胞分裂：当细胞达到一定密度时，进行细胞分裂。
将细胞用离心管收集，进行离心分离，得到细胞沉淀。
4. 细胞传代：将细胞沉淀重新接种于新的培养皿中，继续培养和观察。
结果与讨论：在本实验中，我们观察到A549细胞在不同代数中的生长情况。
在初始接种后的第一代，细胞数量呈指数增长，细胞形态较为均匀。
随着细胞的不断传代，我们发现细胞生长速度逐渐减慢，并且细胞形态出现了变异。
这种现象可能与细胞的老化和突变有关。
细胞在不断传代的过程中，可能会遭受DNA损伤、染色体异常等因素的影响，导致细胞功能的改变和突变的发生。
这也解释了为什么细胞在不断传代后会出现生长速度减慢和形态变异的现象。
此外，细胞传代还可能导致细胞的克隆选择。
在细胞传代过程中，可能会出现某些细胞亚群的优势增长，导致细胞群体的异质性增加。
这对于研究细胞特性和细胞功能的变化具有重要意义。
细胞传代实验的结果提示我们在进行细胞研究时需要考虑细胞传代的影响。
细胞传代不仅影响细胞的生长和形态，还可能改变细胞的遗传特性和功能。
因此，在进行细胞传代实验时，我们需要严格控制实验条件，避免潜在的干扰因素对实验结果的影响。
总结：通过本实验，我们观察到了细胞在不同代数中的生长情况，并探讨了细胞传代对细胞特性的影响。
细胞传代不仅会导致细胞的生长速度减慢和形态变异，还可能改变细胞的遗传特性和功能。
细胞传代培养实验报告
细胞传代培养一.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。
二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂1、细胞：293细胞株2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1~2ml 0.25％胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量（剩余的细胞拿来做细胞计数），加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100ml10xPBS+纯水溶解到1L，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
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实验5 细胞的传代培养
一、实验目的
熟练掌握动物细胞的传代培养法。
二、实验原理
哺乳动物细胞的传代培养是几乎所有细胞生物学实验的基础。
当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长,这一过程就叫传代。
传代培养可获得大量细胞供实验所需。
三、仪器、材料与试剂
1仪器
CO2培养箱，倒置显微镜，超净台
2材料
培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75%酒精棉球，酒精灯，细胞。
3试剂
完全培养基（RPMLl640或DMEM），0.25%胰蛋白酶，D-Hanks液。
四、实验步骤
1.入无菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒双手。
2.倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。
将培养用液置37℃下预热。
3.超净台台面应整洁，用75%酒精溶液擦净。
4.打开超净台的紫外灯照射台面20min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气。
5.点燃酒精灯,取出无菌试管，刻度吸管；安上橡皮头；插在无菌试管内。
6.打开细胞培养瓶，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。
7.倒掉培养细胞的旧培养基。
酌情可用2-3mL Hanks液洗去残留的旧培养基，或用少量胰酶涮洗一下。
8.加入胰酶消化液，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。
注意勿使细胞提早脱落入消化液。
9.加入少量的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基（7-10mL/大瓶，3-5mL/小瓶）制成细胞悬液，分装到新培养瓶中。
盖上瓶盖，适度拧紧后再稍回转，以利于CO2气体的进入，将培养瓶放回CO2培养箱。
10.对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。
可将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。
五、注意事项
1.传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。
所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。
每次最好只进行一种细胞的操作。
培养用液应严格分开。
2.每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
3.如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等。
六、实验报告
1.试述传代培养的步骤和注意事项，并指出哪些是关键步骤？
2.细胞传代培养的目的是什么？。