流式细胞仪结果分析报告模板
尿液流式分析报告
尿液流式分析报告1. 简介尿液流式分析是一种常见的临床检验手段，通过分析尿液中的物质成分，可以对人体的健康状况进行评估和诊断。
本文将介绍尿液流式分析的步骤和相关指标，以帮助读者更好地了解这一检验方法。
2. 样本采集首先，进行尿液流式分析需要采集尿液样本。
一般来说，早晨的第一次排尿是最理想的样本，因为这时的尿液浓度较高，可以更好地反映人体的代谢情况。
收集尿液时，应首先进行外阴清洁，然后将中段尿收集到干净的容器中。
3. 样本处理采集到尿液样本后，需要对样本进行处理，以便进行后续的流式分析。
处理步骤包括离心和过滤。
离心的目的是将尿液中的颗粒物沉淀到管底，方便后续的分析。
过滤则是通过滤纸或过滤器将尿液中的固体颗粒去除，以得到较纯净的液体样本。
4. 流式细胞仪分析接下来，将处理后的尿液样本放入流式细胞仪中进行分析。
流式细胞仪是一种高精度的仪器，可以对尿液中的细胞和颗粒进行计数和分类。
在流式细胞仪中，尿液样本经过细胞传感器后，会产生一系列的电信号。
根据这些信号，可以获得尿液中不同细胞类型的数量和特征信息。
5. 数据分析与解读流式细胞仪会生成大量的数据，需要进行进一步的分析和解读。
根据不同的指标和参考范围，可以评估尿液中各种细胞和颗粒的水平。
常见的指标包括白细胞计数、红细胞计数、上皮细胞计数等。
根据这些指标的异常情况，可以判断是否存在尿路感染、肾脏疾病等问题。
6. 结论通过尿液流式分析，可以获得关于人体健康状况的重要信息。
但需要注意的是，尿液流式分析结果仅作为辅助诊断的依据，还需要结合其他临床检验结果和医生的判断进行综合分析。
希望本文对读者对尿液流式分析有所了解，并对其在临床应用中的意义有一定的认识。
流式细胞仪结果分析报告模板
（三）三参数直方图
（四）流式细胞仪的多参数分析
多参数分析：当细胞标记了多色荧光，被激发光激发后，得到的荧 光信号和散射光信号可根据需要进行组合分析。
三、设门分析技术
Gate设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图的 细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样 本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况 。
计算机系统 分析结果
二、散射光的测定
细胞在液柱中与激光束相交时 向周围360°立体角方向散射的光线 信号，它的强弱与细胞的大小、形 状、胞内颗粒折射等有关，主要分
为前向散射光和侧向散射光。
流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多 种信号对细胞进行定量分析或纯化分选。 （一）单细胞悬液制备的质控 荧光染料与细胞成分的四种结合方式 FCM分析中有哪些数据显示方式，如何解读结果及其设门分析的意义？ 勤奋是学习的枝叶，当然很苦，智慧是学习的花朵，当然香郁。 由一维参数(散射光或荧光)与颗粒计数(COUNT)构成，反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。 而液相芯片则是用颜色来编码） FALS Sensor 流式细胞仪结果分析报告模板 与悬液中细胞的含量成正比。 HLA-B27可出现在58%～97%的强直性脊椎炎(As) 患者 数据显示方式 （单参数直方图 、双参数散点图 、二维等高图 、假三维等高图 、三参数散点图 ）
前向散射光（forward scatter, FS）：激光束照射细胞时，光以 相对轴较小角度(0.5°～10°)向前方散射的讯号用于检测细胞等 粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。
前向散射光示意图
Laser
FALS Sensor
细胞周期实验报告
细胞周期实验报告一、实验目的本实验旨在研究细胞周期的各个阶段，包括 G1 期、S 期、G2 期和M 期，以及细胞在不同阶段的生理和生化变化。
通过对细胞周期的深入了解，有助于我们更好地理解细胞生长、分裂和遗传物质传递的机制，为相关疾病的研究和治疗提供理论基础。
二、实验原理细胞周期是指细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的过程。
细胞周期的进程受到多种因素的调控，包括细胞内的一系列信号通路和蛋白质复合物。
常用的检测细胞周期的方法是利用流式细胞术，通过对细胞内DNA 含量的测定来区分不同的细胞周期阶段。
处于 G1 期的细胞具有二倍体的 DNA 含量，S 期细胞的 DNA 含量逐渐增加，G2 期和 M 期细胞具有四倍体的 DNA 含量。
三、实验材料与方法（一）实验材料1、细胞株：选用_____细胞株。
2、试剂：胰蛋白酶、PBS 缓冲液、70%乙醇、PI 染液、RNA 酶等。
3、仪器：流式细胞仪、离心机、显微镜等。
（二）实验方法1、细胞培养将细胞接种在培养皿中，在含10%血清的培养基中，置于37℃、5% CO2 的培养箱中培养，待细胞汇合度达到 80%左右时进行实验。
2、细胞收集用胰蛋白酶消化细胞，离心收集，用 PBS 缓冲液洗涤两次。
3、固定细胞将细胞沉淀重悬于 70%乙醇中，于－20℃固定过夜。
4、染色离心去除乙醇，用 PBS 缓冲液洗涤细胞，加入 PI 染液和 RNA 酶，避光孵育 30 分钟。
5、流式细胞术检测用流式细胞仪检测细胞的荧光强度，分析细胞周期各阶段的分布比例。
四、实验结果（一）细胞周期各阶段的比例通过流式细胞术分析，得到以下细胞周期各阶段的比例：G1 期：＿____%S 期：＿____%G2 期：＿____%M 期：＿____%（二）结果分析1、 G1 期比例较高，可能表示细胞处于静止或生长缓慢的状态。
2、 S 期比例适中，说明细胞正在进行 DNA 合成，细胞的增殖活动正常。
3、 G2 期和 M 期比例相对较低，可能与细胞的生长条件或细胞本身的特性有关。
流式细胞仪结果分析78页PPT
谢谢！
36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙
37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科
流式细胞仪结果分析
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯
xiexie! 38、我这个人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯
39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳
ห้องสมุดไป่ตู้
40、学而不思则罔，思而不学则殆。——孔子
流式细胞术实验报告
流式细胞术实验报告-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1流式细胞术实验目的掌握流式细胞仪的工作原理掌握用流式细胞仪测量细胞群体DNA含量分布的方法了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用实验原理流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。
在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。
通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。
细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。
利用PI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。
仪器、材料与试剂仪器：流式细胞仪、离心机。
材料：Hela细胞样品、试管、离心管、封口膜、微量移液器、Tip头、Eppendorf管。
试剂：70％乙醇（保存于4℃），RNase（-20℃保存），PI染液（避光保存于-20℃），PBS(pH 7.4，保存于4℃)实验步骤样品细胞由老师于课前收集并置于70%(预冷)乙醇中4℃下固定过夜。
2000rpm 15min收集固定细胞，PBS洗2次。
用100μL PBS重悬细胞并转至试管中轻轻吹打（防止细胞破碎）。
加PI染液50µL和RNase约2µL室温放置15min。
上机检测。
样品测定并使用ModFit LT软件分析结果。
实验结果与讨论:所测样品中各周期时相的百分比：G1期 68.48%G2/M期 16.63%S期 14.89%G2：G1= 1:1.77CV 12.16 提示结果可能不可靠或存在多倍体细胞。
流式细胞术是一种对悬液中细胞、微生物或细胞器等进行单个快速识别、分析和分离的技术。
用以分析细胞大小、细胞周期、DNA含量、细胞表面分子以及进行细胞分选等。
流式产品检验报告模板
流式产品检验报告模板1. 检验目的本次检验旨在对流式产品进行全面的检测与评估，以确保产品的质量和性能能够满足用户需求和预期。
2. 检验范围本次检验主要涵盖以下方面：- 产品外观检查- 产品功能测试- 产品性能评估- 用户体验评估- 安全性检测3. 检验方法3.1 产品外观检查通过对流式产品的外观进行仔细观察和检查，以确保产品外观没有明显的瑕疵和缺陷。
主要包括以下方面的检查：- 外观设计是否符合用户需求和期望- 外壳是否完整无损- 按键和接口的位置和布局是否合理- 设计是否符合人体工程学原理3.2 产品功能测试通过对流式产品的各项功能进行测试，以验证产品的功能与性能是否符合设计要求和用户需求。
主要包括以下功能测试：- 产品的开关机功能- 产品的输入输出接口测试- 产品的数据传输和处理能力测试- 产品的兼容性和可扩展性测试3.3 产品性能评估通过对流式产品的性能进行全面评估，以确保产品在各项性能指标上能够达到或超过用户需求和预期。
主要包括以下性能评估：- 产品的速度和响应时间测试- 电池续航能力测试- 网络连接和传输速度测试- 音视频播放和显示效果测试3.4 用户体验评估通过对真实用户的参与和反馈，以评估流式产品在用户使用过程中的体验和满意度。
主要包括以下用户体验评估：- 对产品的易用性和操作性进行评估- 对产品的界面和交互设计进行评估- 通过用户问卷和访谈收集用户反馈和建议3.5 安全性检测通过对流式产品的安全性进行检测和评估，以确保产品在使用过程中能够保障用户的安全和隐私。
主要包括以下安全性检测：- 对产品的数据存储和传输安全性进行测试- 对产品的隐私保护机制进行评估- 对产品的信息安全和防护能力进行评估4. 检验结果根据以上检验方法和评估标准，对流式产品的每个方面进行详细的评估和检测，得出相应的结果和结论。
5. 问题和建议在检验过程中，对于发现的问题和不足之处，在本部分进行记录，并结合用户反馈给出相应的改进和建议。
流式细胞术报告单解读
不表达 CD15,CD11b,CD16, CD10
II 早幼粒
III 中幼粒
IV 晚幼粒
CD45+CD117++CD13++CD33++ CD15++ CD45+CD13+CD33+ CD15++CD11b++
CD34, HLA-DR, CD11b,CD16
CD34, CD117, DR, CD16
病例分析
病例一
异常细胞
髓系？淋系？
淋巴细胞------4.2 T细胞占淋巴细胞44.9%，CD4:CD8=0.66， 未见明显异常；NK细胞占淋巴细胞3.9%，未见明显异常；成熟B细 胞占淋巴细胞40.7%，为多克隆B细胞,未见明显异常。
粒细胞--------22.7 相对比例未见明显减少。免疫表型提示粒 细胞发育成熟标记物表达紊乱。
Dichroic Filters
PMT
3
PMT
2
Bandpass Filters
PMT
1
Laser
流式数据表现形式
FS:细胞大小 SS:胞内颗粒性
流式血液肿瘤数据分析步骤
1 、寻找异常细胞 2、 定义异常细胞
--异常细胞是什么细胞？ --异常细胞的量有多少？ 3、结论
如何寻找异常细胞?
正常细胞群的分布
CD45, CD71
B淋巴细胞成熟过程
T淋巴细胞的成熟过程
其他血液系统肿瘤的特异性标志
毛细胞性白血病：CD19+，CD103+， CD11c/CD22双阳性高表达
CLL：CD19+/CD5+
流式细胞仪数据分析
1.1电源要求:220V (±10%)、50HZ（±10%）1.2环境温度:5-35℃1.3在相应湿度10-80%的环镜下工作2. 设备用途：细胞分析和分选功能2.1分析功能：2.1.1细胞周期测定，DNA含量分析，RNA测量与分析2.1.2细胞凋亡检测，2.1.3蛋白质总量测定，2.1.4生物活性的测定，2.1.5细胞內钙离子流动试验，Ca2+浓度测定，细胞内pH值测量，2.1.6细胞內Oxidative Burst代谢产物，细胞表面电荷检测。
2.1.7抗原特异性免疫细胞的检测、分选和细胞治疗技术2.1.8检测细胞因子，可溶性荧光蛋白等*2.2细胞分选流式一体化分选功能，采用捕获管技术，分选速度300个细胞/秒，分选纯度98%3. 技术规格：3.1主机系统*3.1.1流式细胞仪主机系统：含15mw 488nm氩离子蓝色激光器，635nm红色激光器，4个荧光探测器和2个散射光探测器*3.1.2光路: 双激光立体空间激发方式实现四色荧光分析：488nm激光器激发的三色荧光,635nm激光器激发第四色荧光.采用测向光路设计*3.1.3滤光片：488nm激光的荧光通道包括530/30nm、585/42nm、670nm LP；635nm激光的荧光通道：661nmLP*3.1.4可选用荧光：FITC, PE, PerCP,PI, PE-Cy5, PerCP-Cy5.5, PE-Cy，APC, Rhodamine, Cyanine等*3.1.5必须配流式一体化分选系统3.1.6光电倍增管:光谱检测范围300nm-1100nm 电压150V-990V3.1.7荧光检测灵敏度:<100MESF3.1.8全峰宽变异系数:CV<2%3.1.9样本获取速度:>10，000个细胞/秒3.1.10检测颗粒大小: 0.1um(min)-50um（max）3.1.11最少样本体积：100μl3.1.12流动室孔径：430um X 180um3.1.13自动抽吸系统: 换样时自动吸去管道内剩余样本，避免样本之间的相互干扰*3.1.14脉冲处理系统:能同时分析脉冲信号峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度,用脉冲宽度和面积区分双连体细胞（如假四倍体细胞）3.2 数据处理系统苹果MAC Pro 工作站3.2.1 CPU: 双核，主频2.8G3.2.2 内存：2G3.2.3 硬盘：容量300G3.2.5 光驱：DVD-ROM, CD-RW3.2.6 显示器：19英寸液晶显示器3.3 应用软件3.3.1全自动仪器校正软件3.3.2多功能流式应用软件3.3.3 DNA分析软件4．资料4.1有仪器全套电路图及中文操作手册4.2有中华人民共和国医疗器械注册证工作条件：1.1电源要求:220V (±10%)、50HZ（±10%）1.2环境温度:5-35℃1.3在相应湿度10-80%的环镜下工作2. 设备用途：细胞分析和分选功能2.1分析功能：2.1.1细胞周期测定，DNA含量分析，RNA测量与分析2.1.2细胞凋亡检测，2.1.3蛋白质总量测定，2.1.4生物活性的测定，2.1.5细胞內钙离子流动试验，Ca2+浓度测定，细胞内pH值测量，2.1.6细胞內Oxidative Burst代谢产物，细胞表面电荷检测。
流式细胞仪实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除流式细胞仪实验报告篇一：流式细胞术实验报告流式细胞术实验目的掌握流式细胞仪的工作原理掌握用流式细胞仪测量细胞群体DnA含量分布的方法了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用实验原理流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。
在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。
通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、Dn(:流式细胞仪实验报告)A、RnA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。
细胞内的DnA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如g0/g1期的DnA含量为2c，而g2期的DnA含量是4c。
利用pI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DnA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。
仪器、材料与试剂仪器：流式细胞仪、离心机。
材料：hela细胞样品、试管、离心管、封口膜、微量移液器、Tip头、eppendorf管。
试剂：70％乙醇（保存于4℃），Rnase（-20℃保存），pI染液（避光保存于-20℃），pbs(ph7.4，保存于4℃)实验步骤样品细胞由老师于课前收集并置于70%(预冷)乙醇中4℃下固定过夜。
2000rpm15min收集固定细胞，pbs洗2次。
用100μLpbs重悬细胞并转至试管中轻轻吹打（防止细胞破碎）。
加pI染液50μL和Rnase约2μL室温放置15min。
上机检测。
样品测定并使用modFitLT软件分析结果。
实验结果与讨论:所测样品中各周期时相的百分比：g1期68.48%g2/m期16.63%s期14.89%g2：g1=1:1.77cV12.16提示结果可能不可靠或存在多倍体细胞。
流式细胞术是一种对悬液中细胞、微生物或细胞器等进行单个快速识别、分析和分离的技术。
用以分析细胞大小、细胞周期、DnA含量、细胞表面分子以及进行细胞分选等。
这种技术具有以下特点1.测量速度快；2.可进行多参数测量；3.是一门综合性的高科技方法（Fcm综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术）；4.既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。
流式细胞激活实验报告
流式细胞激活实验报告流式细胞激活（fluorescence-activated cell sorting，FACS）是一种对细胞进行分离和分析的重要技术。
本实验旨在通过流式细胞激活的方法，将目标细胞单元从混合细胞中分离出来。
实验步骤：1. 细胞预处理：将细胞样本取出，将其离心沉淀，去除上清液。
然后用生理盐水或PBS缓冲液洗涤细胞，使其悬浮于缓冲液中，并使细胞浓度适当（通常为1x106/ml）。
2. 标记细胞：将细胞样本分成若干小部分，每部分分别加入荧光标记抗体，与目标蛋白结合形成复合物。
根据实验设计，可以选择不同的荧光标记抗体，或者改变抗体的标记颜色。
3. 流式细胞仪设置：将样本转移到流式细胞仪的样本池中。
根据实验需要，设置荧光探测器、激发激发光源波长和相关参数，以确保细胞标记能够被准确读取。
4. 细胞排序：根据实验设计，将样本注入流式细胞仪流动单元。
流式细胞仪根据设定的参数，将具有特定荧光标记的细胞单元区分出来，然后将它们单独分离，使其孤立在培养基中，以供后续实验研究使用。
5. 数据分析：将分离并排序的细胞收集，用显微镜观察细胞数量和质量。
根据实验目的，可以进行细胞分选后的进一步实验，如细胞培养、基因测序等。
实验结果：通过流式细胞激活技术，我们成功地将目标细胞单元从混合细胞中分离出来，并获得了纯化的细胞样本。
通过显微镜观察，我们发现分选后的细胞数量和质量较好，可以用于后续实验研究。
同时，我们发现在实验过程中，细胞预处理非常重要。
良好的预处理可以减少杂质对实验结果的影响，提高细胞分选的准确性和纯度。
此外，流式细胞仪的参数设置也很关键，不仅要确保荧光标记被正确读取，还要保证实验结果的可靠性。
总结：流式细胞激活是一种非常有用的实验技术，可广泛应用于生物医学研究、细胞生物学等领域。
本实验通过流式细胞激活的方法，成功地将目标细胞单元从混合细胞中分离出来，并获得了纯化的细胞样本。
为了获得更好的实验结果，我们需要在细胞预处理和流式细胞仪设置方面进行仔细调整。
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流式细胞仪可以做什么？
样本来源：各种细胞（如外周血，骨髓， 实体组织、悬浮或贴壁培养的细胞），微 生物，人工合成微球等。 检测大小：一般是0.5um～40um
流式细胞仪的组成
液流系统 光学系统 数据处理系统
分析型流式细胞仪
分选系统
分选型流式细胞仪
（1）液流
液流系统
流动室
流动室（Flow cell）是液流系统的核心部件，流动室是 由石英玻璃制成，单细胞悬液在流动室里被鞘液流包绕 通过流动室内一定孔径的孔，检测区在该孔的中心，细 胞在此与激光垂直相交。
中性粒细胞 单核细胞
此为血细胞分类 的基本原理，但不能 分析表面分子。
淋巴细胞
光散射测量最有效用途：从非均一群体中鉴别出某些亚群
三、荧光测量
• 荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发 后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。 • 每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色，通过波 长选择通透性滤片，可将不同波长的散射光和荧光信 号区分开，送入不同的光电倍增管。 • 选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的多 个不同特征。 • 线性放大器和对数放大器
红 色 荧 光 强 度
绿色荧光强度
双参数直方图点图
2. 二维等高图
• 由类似地图上的等高线组成，其本质也是双参数直方图。 • 等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即“等 高”。 • 曲线层次越高(越里面的线) 所代表的细胞数愈多。 • 等高线越密集则表示细胞数变化率越大。
二维等高图
不同检测物的乳胶微球混合后再加入待标本，在 悬液中与微粒进行特异性地结合，经激光照射后 不同待测特产生不同颜色，并可进行定量分析。 因检测速度极快，所以又有“液相芯片”之称 。
微小的乳胶微球分别染成上百 种不同的荧光色（固相芯片是 用探针在芯片上的坐标位置给
基因的特异性编码；而液相芯
片则是用颜色来编码）
第二节 数据的显示与分析
• 参数：FS,SS,FL • 数据显示方式 （单参数直方图 、双参数散点图 、二维 等高图 、假三维等高图 、三参数散点图 ） • 设门分析技术
一、 参数
FS：反映颗粒的大小 SS：反映颗粒的内部结构复杂程度 FL：反映颗粒被染上的荧光数量多少
二、数据显示方式
直分析方图
单参数直方图
（二）双参数直方图
• 双参数直方图：纵轴和横轴分别代表被测量细胞的两个测量参数， 根据这两个参数就可以确定细胞在图上的表达位置。
• 双参数信号通常采用对数信号，最常用的是点密图，在图中，每 个点代表一个细胞，点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光强 度的颗粒数量的多少。
1.双参数直方图点图
就可以由四个区域构 成，即
G=D1+D2+D3+D4。
D1 CD4+/CD3-
D2 CD4+/CD3+
D3 CD4- /CD3D4 CD4- /CD3+
第四节 流式细胞仪免疫分析的技术要求
• 样本制备
• 标记染色 • 液相芯片技术 • 质量控制
一、免疫检测样品制备
单细胞悬液
外周血淋巴细胞样品的制备
荧光染料与细胞成分的四种结合方式 结构亲和式 嵌入结合 共价键结合 荧光标记抗体特异性结合
免疫荧光标记方法 直标:干扰少,但需购买多种单抗 间标:步骤多,干扰多,不需标记多种抗体 组合标记
三、免疫胶乳颗粒技术的应用
• 免疫胶乳颗粒的应用即液相芯片技术是把微小的
乳胶微球分别染成上百种不同的荧光色，把针对
PEcy5
能量传递复合染料
常用的几类荧光染料
名称 异硫氰酸荧 光素 得州红 藻红蛋白 藻青蛋白 别藻青蛋白 能量传递复 合染料 染料 FITC Texas red PE PC APC PEcy5 激发 波长 488 568 488 488 633 488 红 670 红 670 易 不敏感 减少交叉，成本高 荧光颜 色 绿 525 红 615 橙 575 易 不敏感 具较多发光基团，消 光系数和量子产额高 溶解性 易 不易 对PH敏感 性 敏感 不敏感 特点 易溶于水，与抗体结 合不影响特异性 稳定，偶联后量子产 额低
光学系统
• 激光光源：气冷式氩离子激光器 • 分色反光镜：反射长/短波长，通过短/长波长 • 光束成形器：两十字交叉放置的透镜 • 透镜组：形成平行光，除去室内光 • 滤片：长通、短通、带通 • 光电倍增管：FS, SS（散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4 （荧光）
光学系统示意图
Flow Tip
Hale Waihona Puke 脉冲信号计算机系统 分析结果
二、散射光的测定 细胞在液柱中与激光束相交时 向周围360°立体角方向散射的光线 信号，它的强弱与细胞的大小、形 状、胞内颗粒折射等有关，主要分 为前向散射光和侧向散射光。
前向散射光（forward scatter, FS）：激光束照射细胞时，光 以相对轴较小角度(0.5°～10°)向前方散射的讯号用于检测细 胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。
• 单参数直方图 • 双参数直方图:点图 二维等高图 假三维等高图 • 三参数直方图 • 多参数分析
设门分析:REGION和GATE设置
（一）单参数直方图
由一维参数(散射光或荧光)与颗粒计数(COUNT)构成，反映
同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。
细 胞 相 对 数 量
信道 (channel )
3. 假三维等高图
（三）三参数直方图
（四）流式细胞仪的多参数分析
多参数分析：当细胞标记了多色荧光，被激发光激发后，得到的荧 光信号和散射光信号可根据需要进行组合分析。
三、设门分析技术
Gate设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图的
细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样
本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。
层流水力聚焦技术
光学系统
—Light scattering at FSC
represents the particle size and area
—Light
scattering at SSC depends on granularity and complexity of the particle
分离单个核细胞
培养细胞的样品制备
蛋白酶消化 机械吹打 洗涤 尼龙网过滤
使贴壁细胞脱落
新鲜实体组织单细胞悬液的制备
• 机械法 • 酶处理法 • 化学试剂处理法 • 表面活性剂处理法
单细胞悬液的保存
• 深低温保存法（一年） • 乙醇或甲醇保存法（2周） • 甲醛或多聚甲醛保存法（2月）
二、常用的荧光染料与标记染色
二、淋巴细胞功能分析
• 细胞介导细胞毒性试验(死细胞与活细胞比例) • 细胞内细胞因子测定
三、淋巴造血系统及白血病免疫分型
•对淋巴瘤和白血病进行多色免疫分型 •用于选择化疗方案、判断预后及检出微小 残留病变
四、肿瘤耐药基因分析
MDR(+)表示对化疗药物耐药
五、AIDS病检测中的应用
CD4+Th细胞、CD4+/CD8+比例
六、自身免疫病相关HLA抗原分析
HLA-B27可出现在58%～97%的强直 性脊椎炎(As) 患者
七、移植免疫中的应用
不充电 弃去
（二）分选的技术要求
• 分选速度：单位时间内分选的细胞数量。与悬液中
细胞的含量成正比。
• 分选纯度：分选出的目的细胞占所有收获细胞的百
分率。
• 分选收获率：实际收获的分选细胞与设定通过测量点
的分选细胞之间的比率。与纯度成反比。
• 分选得率：从一群体细胞悬液中分辨出目的细胞的
总量，再经分选后得到目的细胞的实际得率。与 分选速度成反比。
T淋巴细胞及其亚群分析
Th(CD3+CD4+CD8-T); Tc(CD3+CD4-CD8+T)
B淋巴细胞及其亚群分析
B1(CD19+CD5+):产生IgM型自身抗体, 参与免疫调节、与 自身免疫病的发生有关 B2(CD19+CD5-):受外来抗原刺激, 产生高亲和性特异性抗体
NK细胞分析
NK(CD3-CD16+CD56+)
荧光染料的特性 •激发波长(EXCITING) •发射波长(EMISSION)
荧光补偿
四、细胞分选原理
通过流式细胞仪进行细胞分选 主要是在对具有某种特征的细胞需 进一步培养和研究时进行的。
（一）分选基本原理
细胞悬液形成液流柱
压电晶体 产生机械振动
流动室振动 液流断裂成液滴
空白液滴
含细胞的液滴 充电 偏转落入收集器
• 全程质量控制：与待测标本一起标记和检测，结果达靶值，提示本次
实验结果可靠。
第四节
在免疫学检验中的应用
流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学 基础研究和逐步进入临床应用各方面，用流式 细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析，
可区别多种细胞的特性，为细胞免疫的研究增
加了有效的手段和帮助。
一、淋巴细胞及其亚群的分析
通过对标记不同荧光素分子的检测，实 现FCM对可溶性物质的定量分析
四、流式细胞免疫学技术的质量控制
（一）单细胞悬液制备的质控
• 适当的制备方式 • 处理红细胞 • 实体组织来源标本用机械法 • 温度25~37℃，pH7.0~7.2
（二）免疫荧光染色的质控
• 温度 • pH • 染料浓度 • 固定剂
能量传递复合染料
用化学法将两种不同激发波长的染料结合在一起，在488nm激 发光照射下，通过一个荧光染料被激发后产生的发射波长再激发另 一荧光染料产生荧光信号，从而检测到该特定荧光信号。