抗肿瘤肝微粒体代谢种属比较研究报告
(仅供参考)药物在肝微粒体酶的体外代谢研究
P450酶
• 肝微粒体酶中最主要的是细胞色素P450(Cytochrome P450)氧化酶， 简称P450酶，酶蛋白中所含血红素与一氧化碳（CO）的结合体P450CO在450 nm处有特征性强吸收峰而得名。它存在于肝细胞内质网中， 是一个酶系统。可催化数百种药物的氧化过程。
P450酶氧化药物的过程谢源自大家或由还原辅酶Ⅰ供给，NADH-细胞色素b5还原酶传递，激活分子氧成 两个离子氧。 • 氧化：一个离子氧使药物氧化，另一个与氢结合成水。同时，P450Fe2+失去一个电子，而氧化再生成P450- Fe3+ 。因此可被反复利用用而 起催化作用。
药物与P450酶的关系
• 酶的底物（substrates ）：由P450酶代谢 • 酶的抑制剂（inhibitors）：药酶活性减弱，使其他药物或
抑制率 %
90.00 80.00 70.00 60.00 50.00 40.00 30.00 20.00 10.00
0.00
CYP1A2 CYP2A6 CYP2C9 CYP2C19 CYP2D6 CYP2E1 CYP3A4 表型
代谢产物的鉴定
• 采用代谢稳定性一致的孵育体系，通过加一定浓度的药物孵育一定时 间，没有加药物的孵育体系作为空白对照进液质分析，分析鉴定代谢 产物。
不同种属的代谢稳定性实验
• 采用跟前面代谢稳定性一致的代谢体系，一致的实验过程，分别加不
同种属的肝微粒体酶孵育，通过不同种属中药物剩余量的百分比的对
数与反应时间做曲线，求斜率，计算不同种属的代谢半衰期和清除率，
比较不同动物种属的肝微粒体的代谢性质和人肝微粒体代谢性质的接
近程度，最终为后期的体内药代动力学评价动物选择提供参考。
结果计算
补骨脂酚的体外肝微粒体代谢及代谢减毒作用的种属比较
补骨脂酚的体外肝微粒体代谢及代谢减毒作用的种属比较焦士勇;艾常虹;李艾芳;李桦;王旗【摘要】目的研究补骨脂酚在人、比格犬和大鼠肝微粒体的体外代谢动力学及种属差异,评价不同种属肝微粒体对补骨脂酚人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)的减毒作用.方法应用MTT法检测HK-2细胞的存活率来评价补骨脂酚对HK-2细胞的毒性作用以及不同种属肝微粒体对其毒性的影响.应用HPLC法分析补骨脂酚在3个种属肝微粒体孵育液中的剩余浓度,研究其在肝微粒体中的代谢稳定性和代谢动力学.结果在3个种属肝微粒体分别作用下,补骨脂酚的HK-2细胞毒性明显降低.补骨脂酚在人肝微粒体中的代谢最慢,在大鼠肝微粒体中的代谢最快,人、犬和大鼠的代谢动力学参数Km、Vmax、T12)和CLint分别为:(81.66±3.41),(89.35±4.32)和(31.89±2.60)μmol·L-1;(0.47±0.01),(0.57±0.01)和(1.88±0.09) μmol·L-1·min-1;(44.14±1.13),(53.31±0.29)和(6.79±0.39)min;(39.38±1.04),(65.16±0.35)和(365.92±20.01)ml·min-1·kg-1.结论肝微粒体降低补骨脂酚的HK-2细胞毒性,这一减毒作用与补骨脂酚经肝微粒体酶的代谢相关.补骨脂酚的体外肝代谢动力学性质存在着一定的种属差异;犬肝微粒体对高浓度补骨脂酚所致的HK-2细胞毒性的降低作用要弱于人和大鼠肝微粒体.%Aim To investigate the inter-species differences of bakuchiol metabolism in human, beagle dog and rat liver microsomes by comparing enzyme kinetic parameters, and to evaluate metabolic detoxification of bakuchiol by liver microsomes from three species.Methods The cytotoxicity of bakuchiol was investigated using human kidney-2( HK-2 ),in presence or absence of liver mirosomes. The cell viabilities were examined by MTT assay. The residual concentrations of bakuchiol in microsomal incubates were determined by a HPLC method toinvestigate its metabolic stability and enzyme kinetics. Results The cytotoxicity of bakuchiol was significantly attenuated in the presence of the liver microspores of all three species. The metabolic elimination of bakuchiol by human liver microsomes was the slowest among the three species,while it was rapidest in rat liver. The Km, Vmax, T1/2 and CLint of bakuchiol obtained from human, dog and rat liver microsomes were( 81.66 ± 3.41 ),( 89.35 ± 4. 32 ) and ( 31.89 ±2.60 ) μmol · L-1 ,( 0.47 ±0. 014 ),( 0.57±0. 011 ) and ( 1.88 ±0. 087 ) μmol · L-1 · min-1,( 44. 14 ±1.13 ),( 53.31 ±0.29 ) and ( 6.79 ±0. 39 )min,( 39.38 ± 1.04 ), ( 65.16 ± 0.35 ) and ( 365.92 ± 20.01 ) ml · min- 1 . kg-1, respectively. Conclusions The cytotoxicity of bakuchiol on HK-2 cells was attenuated by the liver microsomes from each of the three species,respectively. The detoxification was associated with the biotransformation of bakuchiol by enzymes in liver microsomes. The inter-species differences were observed in hepatic metabolic characteristics of bakuchiol. A relative weaker effect of beagle dog liver microsomes on HK-2 cytotoxicity of bakuchiol at the high concentration level was also noted in comparison to that of human and rat.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2011(027)002【总页数】5页(P216-220)【关键词】补骨脂酚;HK-2细胞;细胞毒性;肝微粒体;代谢;种属差异;HPLC【作者】焦士勇;艾常虹;李艾芳;李桦;王旗【作者单位】北京大学公共卫生学院毒理学系,北京,100191;军事医学科学院毒物药物研究所,北京,100850;北京大学公共卫生学院毒理学系,北京,100191;军事医学科学院毒物药物研究所,北京,100850;北京大学公共卫生学院毒理学系,北京,100191【正文语种】中文【中图分类】R-332;R282.71;R322.47;R969.1中药补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，具有温肾助阳，纳气平喘，温脾止泻的功效［1］。
实验六.肝微粒体的制备及细胞色素P-450含量测定
院系：理学院专业：农药学学号：0931******* 姓名：王熠肝微粒体的制备及细胞色素P-450含量测定1 实验目的本实验通过超速离心法制备肝微粒体，利用Bradford法，学习并掌握了细胞色素P-450含量的测定。
2 实验原理研究体外药物代谢常用的方法是制备肝微粒体或线粒体后部分，将肝组织制备成20％匀浆，按1g肝组织加0.25mol/L蔗糖溶液或pH7.4 Tris-HCl缓冲液3mL ，磨成匀浆，用低温高速离心制备线粒体后上清液和超速离心法制备微粒体（内质网部分）-差速离心法。
细胞色素P-450是微粒体混合功能氧化酶中最主要的功能成分，其含量的高低基本可以反映混合功能氧化酶的活力大小。
细胞色素P-450是一种血红蛋白，当铁蛋白的铁离子被还原并与一氧化碳形成复合物时出现一种特异吸收峰，在波长450nm处呈现最大吸收峰，在490nm处为最低吸收。
根据两者的差值和吸收系数，可定量细胞色素P-450含量。
3 实验材料3.1实验动物大鼠：健康，体重200～250g，禁食过夜（24h）3.2实验器材与试剂器材：低温高速离心机、洁净工作台、匀浆器、注射器、手术剪、低温冰箱、液氮罐等试剂：1.17% KCl 溶液Tris-HCl缓冲液： Tris 6.05 g ；蔗糖 68.4 g；水 500 ml；浓盐酸调 pH 7.4；补水至 1000 ml4.实验方法4.1动物处理与匀浆制备断头处死，放尽血液，迅速剖开胸、腹腔，取出肝脏，用冰冷1.17% KCl 溶液洗净血污，并用滤纸吸干表面水分。
肝脏称重，置烧杯中剪碎，按每克肝脏3ml的比例加入0.25mol/L蔗糖溶液或pH7.4 Tris-HCl缓冲液，匀浆，将匀浆倒入离心管中，用缓冲液洗涤匀浆管，使最后的缓冲液体积加至约20％（W/V）的匀浆。
4.2制备线粒体后上清液将肝匀浆置低温高速离心，以沉淀未破碎的细胞、细胞碎片、核及线粒体，上清液即为线粒体后上清液。
药物代谢中的肝细胞色素P450
药物代谢中的肝细胞⾊素P450D evelop m en t i n the I mm unomagnetic PreparationXu M in J iang L iliZ hej iang H osp ita l of T rad itiona l Ch inese M ed icine,H ang z hou 310006Abstract I mm unom agnetic p reparati on is one of the novel targeting p reparati ons,w h ich is developed since1990’s.T he article deals w ith i m m unom agnetic m icro spheres and i m m unom agnetic beads,including their p reparati on,effective p rinci p le and app licati ons.Key words T argeting p reparati on I mm unom agnetic m icro sphere I mm unom agnetic bead(收稿:1998207220,修回:1998210207)药物代谢中的肝细胞⾊素P450骆⽂⾹ 张银娣(南京医科⼤学临床药理研究所 南京 210029)摘 要 肝细胞⾊素P450参与许多外源性物质(包括药物)的⽣物转化。
本⽂从肝细胞⾊素P450在体内的分布及命名,被诱导和抑制的机制,对映体代谢的选择性与代谢差异遗传多态性以及国内外关于P450的研究⽅法等⽅⾯介绍了该领域研究的新进展。
关键词 细胞⾊素P450 药物代谢 ⽴体选择性 遗传多态性许多外源性脂溶性的⾮营养物质在体内需经过⽣物转化过程,肝脏是⼈体进⾏⽣物转化I相反应的主要场所。
参与⽣物转化的酶类是由⼀个庞⼤的基因家族编码调控的依赖细胞⾊素P450的混合功能氧化酶系统,其中主要成分是细胞⾊素P450。
代谢稳定性研究中肝微粒体与肝细胞的差异
代谢稳定性作为化合物重要的ADME性质，其影响着化合物在机体内的清除率、半衰期和口服生物利用度。
由此，代谢稳定性研究常作为早期化合物筛选的重要环节，其对于优势化合物的筛选、指导结构修饰、预测体内清除率、构建IVIVC和预估剂量等具有重要意义。
目前常用于代谢稳定性研究的高通量方法主要包括肝微粒体、肝细胞和肝S9，其中肝微粒体代谢稳定性（LMS）和肝细胞代谢稳定性（HMS）最为常见。
而化合物在LMS和HMS中结果存在差异的现象时有发生，那么针对这种情况，我们难免会产生一些疑问，导致差异存在的内在因素是什么？找到差异的原因是否可以对化合物结构改造有利？选择哪个数据作为评价化合物的标准值？该采用哪个数据去预测人体清除率？下文将带着这些疑问进行阐述。
1 肝微粒体与肝细胞的差别要想弄清楚化合物LMS和HMS的差异，首先我们必须要了解肝微粒体和肝细胞本身。
肝脏组织匀浆后高速离心上清液即为S9，再经超高速离心后底部沉淀重悬即为微粒体，肝微粒体酶主要源于肝细胞内质网，包含CYP、水解酶和UGT。
由肝微粒体的制备过程可知肝微粒体失去了细胞完整结构，药物可直接暴露于代谢酶中。
另外肝细胞胞质中还存在部分肝微粒体缺失的代谢酶，如醛氧化酶（AO）、黄嘌呤氧化酶（XO）、谷胱甘肽-S-转移酶（GST）等，下表附有各类药物代谢酶在肝细胞中的定位。
此外，由于肝细胞完整的细胞结构，其细胞膜表面表达有各类药物相关转运体蛋白，如OATP1B1、OATP1B3、OATP2B1、BCRP、BSEP等摄入或外排转运体，下图附有肝细胞中转运体表达情况。
(摘至《Donglu Zhang,Sekhar Surapaneni - ADME-Enabling Technologies inDrug Design and Development》一书)（参考Membrane transporters in drug development一文）2 LMS和HMS结果存在差异的原因此处将LMS和HMS的差异的原因分为机制性的原因和经验性的原因。
第二次理论课 特殊毒性试验
4 ℃，9000g，离心10min
（3）S9混合液： 平衡盐系统，其中含S9 5～30％（v/v）
试验方法
（标准平皿掺入法）：
顶层琼脂＋测试菌株、 受试物、S9混合液 底层琼脂培养基平皿 固化 （点试法）： 37 ℃，培养48h 菌落计数
结果评价：
Rt/Rc≥2，并有量效关系，判为阳性；
滤纸片周围长出一圈密集的回变菌落。
阴性（－） 可疑（±） 弱阳性（＋） 中度阳性（＋＋） 强阳性（＋＋＋）
•注意：遇阳性或可疑阳性时，可选啮齿动物显性致死试验或精原细胞染色体畸变试验
正常染色体
畸变染色体
3.啮齿类动物体内微核试验
微核 （Micronucleus）：染色单体或染色体的无着丝点断片，或
因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞 质中。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的 胞质内，因比主核小，故称为微核。
药物特殊毒性研究
内容：
遗传毒性 致癌作用 生殖和发育毒性 药物依赖性
致癌试验
致癌试验的目的
是考察药物在动物体内的潜在致癌作用，从而评价和预测其可能对人 造成的危害。
任何体外实验、动物毒性试验和人体应用中出现的潜在致癌性因素均可提示 是否需要进行致癌试验。
由于致癌试验耗费大量时间和动物资源，只有当确实需要通过动物长期给药研 究评价人体中药物暴露所致的潜在致癌性时，才应进行致癌试验。
不适用受试物
用于晚期全身肿瘤的抗肿瘤药物，通常不需要进行致癌试验。 对于替代治疗的内源性物质（浓度在生理水平），尤其是 当同类产品（如动物胰岛素、垂体来源的生长激素和降钙素） 已有临床使用经验时，通常不需要进行致癌试验 系统暴露量非常小的局部用药不需要以经口给药途径来评价 其对内脏器官的潜在致癌作用，若有潜在光致癌性担忧， 可能需要进行皮肤给药致癌试验。 除非有明显的全身暴露或相关担忧，经眼给予的药物通常 不需要进行致癌试验 有致癌潜在，但是短期接触或非经常使用药物（麻醉/放射） 经化学合成、从动物或人体组织中提取纯化或生物技术方法 （如重组DNA技术）生产的内源性肽类或蛋白质及其类似物， 可能需要特殊考虑。
体外肝代谢系统
体外肝代谢系统【摘要】肝药酶在药物代谢中具有十分重要的作用。
对肝药酶的研究方法中，以动物肝脏或肝细胞为基础，构建体外肝代谢系统是体外代谢研究中最重要的环节之一。
对体外肝代谢的研究，主要是利用肝微粒体、基因重组CYP450酶系、肝细胞培养、肝组织切片及离体肝灌流系统等方法。
本文综述近年国内外所应用的不同体外肝代谢系统，并对各体外代谢研究方法进行比较，指出根据各系统的特性、不同的实验要求和目的，选择适当的研究方法的重要性。
【关键词】细胞色素P450酶；肝微粒体；肝细胞培养；肝组织切片；离体肝灌流药物代谢一般是指药物的生物转化。
药物经生物转化后，可引起药物的药理活性或∕和毒理活性的改变。
因此，研究药物的生物转化，明确其代谢过程，对新药开发、新剂型设计及制定合理的临床用药方案等方面都具有重要的指导意义。
肝脏是药物生物转化的重要器官，含有参与药物代谢重要的酶系组成，主要有CYP1、CYP2、CYP3三大家族［1］。
本文所介绍的各种体外代谢系统均含有一种或多种CYP450酶的同工酶，为研究药物体外代谢提供了研究的对象和基础。
动物肝体外代谢研究可以较好地排除体内因素干扰，直接观察酶对底物代谢的选择性，为整体试验提供可靠的科学依据。
以肝脏为基础的体外代谢系统主要包括肝微粒体、基因重组CYP450酶系、肝细胞、肝组织切片及离体肝灌流。
1肝微粒体肝微粒体的制备多数采用差速离心法［2］，通过高速离心使微粒体与其他成分分离，操作简单，无需其他试剂辅助。
但较耗时，设备要求高，使该法的普及和深入研究受到一定的限制。
针对这些情况，可采用试剂辅助分离的方法［3］，在离心前额外加入一定比例的PEG6000或CaCl2，促进微粒体沉降。
此法对设备要求降低，并缩短了实验周期。
肝微粒体的制备过程均应在4℃下进行。
正确、合理地选择缓冲液，能起到良好介质的作用，按比例加入后进行肝组织的破碎和匀浆，才可有效分离肝微粒体和避免细胞器受损。
肝微粒体的主要应用测定CYP450酶活性测定原理是在特定酶催化下，底物在辅助因子以及适合的温度、时间作用下反应，借助仪器测定生成的特定产物量。
药物在肝微粒体酶的体外代谢研究
供依据？（即体外人和动物代谢特征研究, In vitro metabolism profiling in animals and humans）
药物相互作用实验过程
• 采用与代谢稳定性一致孵育体系，冰浴上加入1 µL的一系列浓度的待 测化合物（1、10、100、1000、10000 µM）和1 µL的各特异性探针 底物（空白对照样品不加待测化合物，只加等量溶剂），在37 ℃水 浴中预热5 min，然后冰浴上加入5 µL的肝微粒体酶，轻轻混匀，根据 不同的探针底物在37 ℃水浴中孵育10~30 min，加入有机溶剂混匀终 止反应，每个浓度组设3个平行样品。其中待测化合物浓度为0.01、 0.1、1、10、100 µM。反应结束后，采用LC-MS/MS方法测定各特异 性底物对应的代谢产物的生成量，考察不同浓度的药物对各个特异性 探针底物代谢速率的影响。
不同种属的代谢稳定性实验
• 采用跟前面代谢稳定性一致的代谢体系，一致的实验过程，分别加不
同种属的肝微粒体酶孵育，通过不同种属中药物剩余量的百分比的对
数与反应时间做曲线，求斜率，计算不同种属的代谢半衰期和清除率，
比较不同动物种属的肝微粒体的代谢性质和人肝微粒体代谢性质的接
近程度，最终为后期的体内药代动力学评价动物选择提供参考。
常见P450抑制剂和诱导剂
代谢稳定性评价
• 代谢稳定性考察的是化合物被代谢的难易程度和体外清除率的大小， 常用体外代谢半衰期（T1/2）和固有清除率（CLint）表示。一般通过定 量测定目标化合物在酶孵育体系中的清除情况来计算。
代谢重编程 表观遗传 肿瘤干细胞 纳米递送
代谢重编程表观遗传肿瘤干细胞纳米递送代谢重编程、表观遗传、肿瘤干细胞和纳米递送是当前生物医学研究中备受关注的四个重要概念。
它们在癌症治疗和疾病防控方面具有重要的应用潜力。
本文将深入探讨这些概念，分析其原理和应用，并总结其中的关系和前景。
一、代谢重编程代谢重编程是指细胞内代谢途径的改变，这种改变可以通过改变代谢途径中特定酶的表达水平来实现。
代谢重编程通常发生在细胞增殖和分化的过程中，也是肿瘤细胞生长和转移的一个重要特征。
通过对代谢途径的调节，可以改变细胞的能量代谢和物质合成过程，进而影响肿瘤细胞的生长和转移。
在代谢重编程中，一种重要的概念是“战胜克隆选择”。
这指的是一种通过调节代谢途径来提高肿瘤细胞的适应性和生存能力的策略。
通过增加特定代谢途径的产物或抑制特定代谢酶的活性，可以使肿瘤细胞从中获益，从而增强其生长和转移能力。
二、表观遗传表观遗传是指在基因组DNA序列不变的情况下，通过染色质结构、DNA甲基化和组蛋白修饰等方式来调节基因表达的现象。
表观遗传在生物发育、细胞分化和疾病发生中起着重要的调控作用。
肿瘤的发生和发展与表观遗传紧密相关。
在肿瘤中，DNA甲基化和组蛋白修饰不正常，导致基因沉默和启动子区域的失活。
表观遗传的异常可以导致细胞增殖和转移相关基因的异常表达，从而促进肿瘤的发生和发展。
三、肿瘤干细胞肿瘤干细胞是一小部分在肿瘤中具有自我更新能力和分化潜能的细胞群体。
它们被认为是肿瘤起始细胞，并在肿瘤的发生、发展和复发中起着关键的作用。
肿瘤干细胞具有自我更新和多向分化的能力。
它们可以通过自我更新产生更多的肿瘤干细胞，同时也可以分化为不同类型的肿瘤细胞。
肿瘤干细胞的存在和功能特点使得肿瘤对传统治疗方法具有一定的抵抗性和复发倾向。
四、纳米递送纳米递送是一种应用纳米技术将药物或其他活性物质精确地传递到特定的细胞或组织中的方法。
纳米颗粒作为药物载体，可以通过改变粒径、形状、表面性质和释放方式来实现药物的精确控制释放。
雷公藤甲素在人和大鼠肝微粒体代谢消除和酶动力学的比较研究
雷公藤甲素在人和大鼠肝微粒体代谢消除和酶动力学的比较研究吴桐;阳海鹰;原梅;车津晶;李桦【摘要】目的研究中药活性成分雷公藤甲素(triptolide,TP)在人和大鼠肝微粒体的代谢消除性质和酶促动力学特征,比较种属间差异,为深入研究代谢与肝毒性的关系提供科学依据.方法应用前期验证的LC-MS/MS方法,定量检测孵育体系中的雷公藤甲素,考察其在人和大鼠肝微粒体的代谢稳定性和酶促动力学;研究雷公藤甲素在人源重组CYP3A4、大鼠源重组CYP3A1和3A2同工酶孵育体系中的酶促动力学,计算并比较酶动力学参数.结果雷公藤甲素在人肝微粒体的代谢消除明显慢于大鼠,消除半衰期T12分别为(154±9.4)、(19.9±0.09)min(P<0.01).雷公藤甲素在人和大鼠肝微粒体的表观酶动力学参数Km分别为(11.2±3.45)、(18.4±3.29)μmol·L-1,Vmax分别为(139±12.6)、(2194±176.7)pmol·min-1·mg-1;在CYP3A4、3A1、3A2的Km分别为(15.5±1.80)、(5.89±0.96)、(9.55±3.13)μmol·L-1,Vmax分别为(11.1±0.91)、(62.8±16.17)、(51.6±10.19)pmol·min-1·pmol-1,差异具有显著性.结论雷公藤甲素的肝微粒体代谢消除和酶促动力学存在明显的种属差异,其与人和大鼠CYP3A亚型的亲和力和反应速率差异是代谢消除种属差异的原因之一.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2018(034)010【总页数】6页(P1414-1419)【关键词】雷公藤甲素;肝微粒体;细胞色素P4503A酶;代谢消除;酶动力学;种属差异【作者】吴桐;阳海鹰;原梅;车津晶;李桦【作者单位】军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物和毒理学国家重点实验室,北京 100850;军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物和毒理学国家重点实验室,北京 100850;军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物和毒理学国家重点实验室,北京 100850;军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物和毒理学国家重点实验室,北京 100850;军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物和毒理学国家重点实验室,北京 100850【正文语种】中文【中图分类】R-332;R284.1;R322.47;R345.99;R969.1;R977.3雷公藤甲素(triptolide,TP)是中药雷公藤的主要活性成分，属于环氧化二萜内酯类化合物，具有免疫抑制、抗炎、抗癌、抗生育、神经保护等药理作用[1-2]，临床用于治疗红斑狼疮、银屑病等免疫性疾病[3]。
肿瘤细胞氨基酸代谢的研究进展
肿瘤细胞氨基酸代谢的研究进展
钟旺佶;褚明亮;刘杰民
【期刊名称】《中国当代医药》
【年(卷),期】2024(31)6
【摘要】能量代谢重编程是肿瘤细胞最显著的特征之一,其赋予了肿瘤细胞快速增殖的能力,主要体现在“三大营养物质”,即葡萄糖、氨基酸及脂肪酸的代谢异常。
其中,氨基酸作为细胞内部仅次于葡萄糖的营养和能量来源,是蛋白质合成的底物。
丰富的氨基酸供应为肿瘤的快速增殖提供了持续的动力。
氨基酸异常代谢过程中的部分关键物质影响着肿瘤细胞的发生发展,参与了癌基因激活、免疫逃逸和相关蛋白表达等多个方面,在临床中也被作为肿瘤诊断和治疗的标志物之一,而肿瘤细胞对不同氨基酸的依赖偏重各有不同,在特定氨基酸缺乏的肿瘤中尤为明显。
因此,特定氨基酸缺失或对肿瘤的发生、发展和治疗、预后具有重要影响。
本文围绕近年氨基酸代谢重编程在肿瘤发生发展中的进展作一综述,以期为抗癌的后续科学研究及肿瘤临床诊断、治疗与预后提供新思路。
【总页数】4页(P189-192)
【作者】钟旺佶;褚明亮;刘杰民
【作者单位】贵州中医药大学研究生院;贵州中医药大学第一附属医院检验科;贵州省人民医院消化内镜科
【正文语种】中文
【中图分类】R730.2
【相关文献】
1.中国科技大学利用核磁共振等技术手段揭示肿瘤细胞氨基酸代谢异常新机制
2.Raji肿瘤细胞的氨基酸代谢
3.氨基酸及其转运体对肿瘤细胞和T细胞作用的研究进展
4.氨基酸代谢重编程在肿瘤细胞及肿瘤相关巨噬细胞极化中的作用研究进展
5.干预肿瘤代谢的新策略:氨基酸代谢的调控途径及其药物研究进展
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替吉奥胶囊(S-1)在中国癌症患者体内的药代动力学和生物等效性
动力学和生物等效性研究。结 果 替加氟的 Cm ax分别为 ( 1887 0 为 ( 11 5 5 3) 和 ( 11 6 g
- 1
受 试者口 服受试 制剂和参 比制剂 后 , 血浆中 491 0) 和 ( 1876 0 522 0) ng mL- 1 ; t1 /2 分别 9 6) 和 ( 19 8 10 0) 45 1) ng 176 2) 107 3) 和 44 3) 和 ( 119 7
邹卉瑜 , 陈笑艳 , 张逸凡 , 2 1, 2 刘 可 , 钟大放
1, 2
2
2
摘要 : 目的
研究替吉奥胶 囊 ( S - 1, 抗肿瘤 药 ) 在中国 癌症患 者体 内的药 代动 21 名癌 症患者 随机交 叉单 剂量口 服替
力学特性并评价其生物等效 性。 方法
吉奥胶囊 ( 受试制剂 ) 和爱斯万 ( 参比制剂 ) 各 50 m g后 , 采 用液相色谱 - 串联质 谱法测定血浆中替加氟、 5- 氟尿嘧啶、 吉美嘧啶 和奥替拉西的浓度 , 并进行药代
of C m ax for CDHP w ere ( 304 6 107 3) and ( 297 2 AUC0- t w ere ( 1458 0 1094 0) and ( 1410 0
- 1 - 1
103 6) ng mL , t1 /2 w ere ( 4 1 h mL
- 1
-1
1 8) and ( 4 0
A bstract : Ob jective
To stu dy the phar m acok in et ics and b io equ iv alence
药物在肝微粒体酶的体外代谢研究
药物在肝微粒体酶的体外代谢研究引言：药物代谢研究对于药物的临床应用非常重要。
在人体内，肝脏是主要的药物代谢器官之一、药物在肝脏中被代谢为水溶性化合物，以便能够更容易地从体内排出。
肝脏代谢中的一个重要组成部分是微粒体酶。
微粒体是肝细胞中一种重要的细胞器，包括内质网、高尔基体和溶酶体。
微粒体酶主要负责药物的氧化、还原和水解等反应。
其中，细胞色素P450（CYP）家族是最为重要的微粒体酶之一、CYP酶参与药物的氧化代谢，并且在药物代谢中起着重要的催化作用。
药物在体外代谢研究中，常常使用肝微粒体酶来模拟体内药物代谢。
这种模型既可以用于研究药物被微粒体酶代谢的速率，也可以用于揭示药物代谢途径和代谢产物。
方法：在体外代谢研究中，一种常用的方法是测定药物在肝微粒体中的代谢速率。
这可以通过测定产物的形成速率或底物消失速率来实现。
通常情况下，选择一定浓度范围的药物，在一定时间内与肝微粒体共同反应。
反应结束后，使用高效液相色谱仪（HPLC）等分析方法，分离和鉴定代谢产物。
结果和讨论：通过肝微粒体的体外代谢研究，可以获得药物的代谢速率常数（Clint）和代谢产物的种类及药物代谢途径。
Clint反映了药物在体内被微粒体酶代谢的速度。
它是药物浓度的函数，浓度越高，代谢速率越快。
药物的代谢速率常数可以用于预测其在体内的代谢消除速度，以及调整药物给药剂量和间隔时间。
此外，体外代谢研究还能揭示药物的代谢途径和代谢产物。
其中，药物代谢途径主要包括氧化、还原和水解等反应。
这些代谢反应产生了多种代谢产物。
以肝微粒体代谢为例，其中一个重要的酶家族是CYP酶。
不同的CYP酶参与不同的药物代谢反应，并生成特定的代谢产物。
通过分析药物代谢产物的种类和结构，可以了解药物在体内的代谢途径。
结论：药物在肝微粒体酶的体外代谢研究是了解药物代谢的重要手段之一、通过体外代谢研究，我们可以获得药物的代谢速率常数和代谢产物，从而预测其在体内的代谢消除速度和调整药物给药剂量和间隔时间。
抗肿瘤新药临床前安全性评价
ＨＢＶ的原因之一是低水平ＨＢＶ的携带者，通常抗一ＨＢｃ比抗一ＨＢｓ血清学转变早，ＨＢｓＡｇ出现之前，抗一ＨＢｃＩｇＭ即为（＋），因此认为抗一ＨＢｃ和ＮＡＴ筛检是提供最高水平的安全，当然必须把ＡＬＴ和ＨＢｓＡｇ检测综合起来。
我国属于乙肝流行区，献血员队伍中抗ＨＢｃ（＋）估计较高。
丹麦Ｃｈｒｉ。
ｔ。
ｎ建议可以考虑，郎对新献血员实行问卷调查，对疑有危险行为者进行抗一ＨＢｃ补充检查，这样既增加安全性，也不致造成献血员大量流失。
建议筛检中发现阳性结果，应该给献血员发通知。
增加透明度既可使其知情，针对病情好好医治．又可以防止其流动扰乱献血。
对阳性结果的献血员除发出通知书外，还应该建立延缓献血的全国性或区域性电子档案（ｄｏｎｏｒｓｄｅｆｅｒａｌａｒｃｈｉｖｅｓ），以防止永久性禁止献血员捐血。
（参考文献略）抗肿瘤新药临床前安全性评价刘宗潮，朱孝峰，周军民，李志铭（中山大学肿瘤防治中心）药物是人们用来防治疾病，延长寿命，提高生活质量的有力武器，因此，药物必须具备安全、有效、两者缺一不可。
然而，任何药物都具有两重性，就拿抗肿瘤药物来说，它一方面可以杀灭肿瘤细胞，使患者的生理、生化机能恢复正常，另一方面也可危及机体，产生不良反应，甚至严重的毒副作用。
判断一个抗肿瘤药物能否用于临床的原则是药物对患者机体所产生的有利作用应超过或大大超过其有害效应。
走进美国ＦＤＡ，人们便会看见“Ｓａｆｅｔｙ，Ｓａｆｅｔｙ，Ｓａｆｅｔｙ”三个大字。
ＦＤＡ把食品和药品安全性看得头等重要。
我们相信这也是我国所有药品审评工作者和药物研发人员的共识。
药物安全性评价的最终目的是确保临床用药的安全。
既然抗肿瘤药物几乎都有毒副作用，因此，对一个新的抗肿瘤药物进行临床前的安全性评价就显得十分重要。
本文结合我们在抗肿瘤新药研发工作中的体会浅谈抗肿瘤新药ｌ临床前安全性评价的基本要求，并提出一些抗肿瘤药物毒理学研究中需要讨论的问题。
通过交流和讨论，探索规律，获得真知，推动抗肿瘤药物研究的进展。
阿替美唑不同种属体外代谢产物鉴定比较及代谢通路研究
阿替美唑不同种属体外代谢产物鉴定比较及代谢通路研究李正;高尤;杨春苗;仇晓燕;张天宏;张文鹏;苏瑞斌;庄笑梅【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2018(0)12【摘要】目的应用Q-Exactive型四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC/LTQ-Orbitrap-MS)鉴定和比较阿替美唑在不同种属肝微粒体以及细胞色素P450(CYP)同工酶中的代谢产物,探讨阿替美唑代谢转化的种属差异及代谢通路,为新药研发和可能的药物相互作用研究提供科学数据.方法应用不同种属肝微粒体以及重组人源CYP同工酶体外温孵模型获得体外代谢产物.体外样品采用UPLC/LTQ-Orbitrap-MS分析,Phenomenex C18(100 mm×2.1 mm,5μm)柱分离,0.1％甲酸水溶液-乙腈流动相梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1,正离子模式检测.结果根据精确相对分子质量和二级碎片离子信息,初步鉴定了阿替美唑在不同种属肝微粒体孵育样品中产生3个氧化产物,包括末端乙基羟基化(M1)、苯环氧化(M2)和咪唑环氧化(M3)产物,产物谱无种属差异.CYP同工酶温孵法发现,M1由CYP2A6,2D6和3A4介导产生,M2由CYP2A6,2D6和2C19介导产生,M3由CYP2A6,2B6和3A4介导产生.结论阿替美唑体外CYP酶介导的代谢转化无种属差异,代谢通路广泛,不易发生基于CYP代谢酶介导的药物相互作用.【总页数】7页(P946-952)【作者】李正;高尤;杨春苗;仇晓燕;张天宏;张文鹏;苏瑞斌;庄笑梅【作者单位】军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物与毒理学国家重点实验室,北京 100850;军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物与毒理学国家重点实验室,北京 100850;军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物与毒理学国家重点实验室,北京 100850;海军青岛特勤疗养中心,山东青岛266071;军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物与毒理学国家重点实验室,北京 100850;军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物与毒理学国家重点实验室,北京 100850;军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物与毒理学国家重点实验室,北京 100850;军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所,抗毒药物与毒理学国家重点实验室,北京 100850【正文语种】中文【中图分类】R969.1【相关文献】1.LC-MS/MS 法研究 Cocktail 探针药物咖啡因、右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑及其代谢产物在大鼠血浆中的药代动力学 [J], 徐利云;候丛颂;杨志宏;孙晓波2.反相高效液相色谱法测定奥美拉唑及其代谢产物5′-羟基奥美拉唑和奥美拉唑砜的血药浓度 [J], 付良青;黄丰;吴德政;郭军华3.Liguzinediol在不同种属肝微粒体中代谢产物的比较研究 [J], 戴贞丽;文红梅;单晨啸;尤晓亲;董棒;孙学;李伟4.沉香样品中曲霉属真菌菌株HNWSW-20的分离鉴定及其次生代谢产物的研究[J], 邓加艾;戴好富;王宇光;陈惠琴;谭志琼;梅文莉5.不吸水链霉菌代谢产物抗真菌作用的研究（Ⅱ．）不吸水链霉菌代谢产物体内、体外抗真菌作用的观察 [J], 侯芳玉;刘长林;杨丽春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
药物的代谢_生物药剂学
药物代谢酶
肝微粒体药物代谢酶 非微粒体酶
肝微粒体药物代谢酶
哺乳动物肝微粒体中存在一类氧化反应 类型极为广泛的氧化酶系，称为肝微粒 体混合功能氧化酶系统或称单加氧酶 在药物代谢中P-450是最重要的酶系。 P-450是人们在肝脏微粒体中发现的一种 色素（P)它在还原状态下与CO结合，在 450nm处有明显的吸收，故得名。
肾小管分泌
指药物由血管一侧通过上皮细胞侧底膜 摄入细胞，再从细胞内通过刷状膜向官 腔一侧流出。 这一过程主动转运，逆浓度梯度，需载 体能量，有饱和与竞争抑制现象。
肾小管重吸收
大多药从肾小管远曲小管重吸收，脂溶 性药，非解离药吸收多。
影响药肾排泄因素
1. 2. 3. 4. 5.
普萘洛尔（心律不齐）
普萘洛尔口服代谢 成4-羟基普萘洛尔， 两者均有作用。 静注无代谢物。 口服药理作用是静 注2-5倍。
剂型的影响
人口服不同剂型水杨酸酰胺：尿中硫酸 酯量，溶液29.7％，混悬剂31.8％，颗粒 剂73.0。 由于颗粒剂吸收前要崩解、溶出，吸收 较慢，避免饱合。
给药剂量的影响（剂量大，代 谢酶饱合）
肠肝循环
唾液中排泄
向唾液转运依赖于脂溶性，pka和血浆蛋 白结合率等因素。唾液中脂溶性非离子 型药物的浓度和血浆中游离型药物浓度 大致相同。
乳汁分泌
影响药物从乳汁分泌的因素 1） 药物与血浆蛋白结合 2）药物的脂溶性 3）血浆与乳汁的pH值 4）药物的分子大小
汗液
无机物及小分子化合物
性别
雌性动物比雄性动物对药物的感受性更 强，因为雄性坳物的药物代谢适应性比 雌性高。 老龄性别差异不明显 新生雄性大鼠去势后，特有的固醇1， 6a-羟化酶等活性下降，性别差异消失。
氯丙嗪在不同种属肝微粒体中代谢差异研究
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氯丙嗪 !1XI$又 名 冬 眠 灵"是 一 种 吩 噻 嗪 类药物)=*"具有 安 神%镇 定 的 功 效"常 用 来 治 疗 精神类疾病)(*"其在兽医临床上应用广泛"一 方 面 可 以 降 低 动 物 的 死 亡 率"另 一 方 面 可 以 间 接 起到增加动物体质量的作用)"*&氯丙嗪的 过 量 使用容易引起白细胞减少和迟发性运动障碍 等"危害生物 健 康)(*& 氯 丙 嗪 容 易 在 生 物 体 内 代 谢"采 用 体 外 孵 育 肝 微 粒 体 的 方 法 进 行 代 谢 研究"既可模拟药物在体内的代谢过程)!*"又 可 避免体内复杂基质对结果产生影响)**"因 此"研 究肝微粒体体外孵育氯丙嗪的代谢对于指导临 床用药具有重要意义&
小分子代谢相关种属选择
小分子代谢相关种属选择
答：小分子药物的代谢相关种属选择通常基于药物代谢和药代动力学（DMPK）的考虑。
在选择合适的动物种属时，一般需要遵循以下几个关键步骤：
1. 确定药物的靶点和机制：首先，要明确小分子药物的靶点和机制，以便选择与人类生理环境最接近的动物种属。
2. 评估药物的代谢和药代动力学：在体外肝微粒体、肝细胞、肝S9、血浆等孵育体系中，比较不同种属间代谢稳定性及代谢物谱的差异，选择与人代谢行为最接近的一种啮齿类动物和一种非啮齿类动物。
3. 考虑动物的种属特性和生理特征：选择具有代表性且易于饲养的动物种属，以便进行后续的研究和实验。
最终选择的动物种属应该能够最大限度地反映药物的代谢和药代动力学特征，为药物研发提供准确的数据支持。
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抗肿瘤肝微粒体代谢种属比较研究报告目录1研究目的 (3)2 材料与方法 (3)2.1药品 (3)2.2样品及预处理方法 (3)2.3仪器和条件 (3)2.4数据分析 (4)3 结果 (4)3.1抗肿瘤对照品溶液的UPLC-UV/Q-TOF MS分析 (4)3.2UPLC-UV/Q-TOF MS法鉴定肝微粒体孵育液中的抗肿瘤相关代谢产物 (4)3.2.1 M0（[M+H]+，m/z 809.265） (5)3.2.2 M1（[M+H]+，m/z 212.101） (5)3.2.3 M2（[M+H]+，m/z 364.129） (5)3.2.4 M3（[M+H]+，m/z 380.125） (5)3.2.5 M4（[M+H]+，m/z 464.147） (6)3.2.6 M5（[M+H]+，m/z 480.142） (6)3.2.7 M6（[M+H]+，m/z 709.210） (6)3.2.8 M7（[M+H]+，m/z 825.259） (6)4 结论 (7)附图 (8)附表 (23)1研究目的本研究比较抗肿瘤在人、猴、犬、大鼠和小鼠五个种属肝微粒体中代谢过程的差异，为临床前药动学和安全性评价研究动物种属的选择提供参考。
2 材料与方法2.1 药品抗肿瘤储备液由美迪西普亚医药科技（上海）有限公司提供。
2.2 样品及预处理方法肝微粒体样品由美迪西普亚医药科技（上海）有限公司提供。
取肝微粒体双样本样品各60 μL合并，获得人、猴、犬、大鼠和小鼠肝微粒体的0 min和60 min样品。
加入360 μL乙腈沉淀蛋白，离心10 min（4000 rpm）。
全取上清液于40 o C空气下吹干，残留物用120 μL乙腈/水（1:9, v/v）溶解，涡流混合。
取 2.0 μL进行UPLC-UV/Q-TOF MS分析。
2.3仪器和条件仪器美国Waters公司Synapt G2-Si型四极杆-飞行时间串联质谱仪（Q-TOF MS），配有电喷雾电离源（ESI源）和Acquity UPLC H-CLASS液相色谱系统。
色谱条件色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3 C18 column（2.1 ×100 mm I.D.，1.7 µm粒径），美国Waters公司；柱温为45ºC；流速为0.4 mL/min；紫外检测波长200 –600 nm，流动相梯度见下表。
质谱条件离子源为电喷雾电离源（ESI），正离子扫描方式检测，去溶剂气（氮气）流速为750 L/h，去溶剂气温度为350 o C，源温度为120 o C，毛细管电压为3.0 kV。
低能量扫描时传输碰撞能量为2 eV，阱碰撞能量为2 eV；高能量扫描时传输碰撞能量为12 –18 eV，阱碰撞能量为18 –32 eV。
扫描范围为m/z 50 –1200。
选取400 ng/mL的亮氨酸-脑啡肽（m/z 556.2771）作为质荷比校正外标物，流速为6 µL/min。
2.4 数据分析采用Waters公司的Masslynx V4.1软件进行数据采集，采用Waters公司的Masslynx V4.1中的子软件MetaboLynx XS进行数据分析。
3 结果3.1 抗肿瘤对照品溶液的UPLC-UV/Q-TOF MS分析首先对抗肿瘤对照品溶液进行UPLC-UV/Q-TOF MS分析，推测质谱裂解规律，为其他代谢产物结构推测奠定基础。
在本研究选取的色谱条件下，抗肿瘤的色谱保留时间为7.74 min（图1A和1B），一级全扫描质谱图中（图1C），获得m/z 809.265的准分子离子（[M + H]+）。
在高碰撞能量下，产生m/z 112.048、272.046、387.069、524.093、661.117和735.192的碎片离子。
为了便于描述，将抗肿瘤结构中的两个羧酸酯键分别命名为酯键A和酯键B。
推测的抗肿瘤的质谱裂解途径如图2所示。
本试验将根据这些质谱断裂特点，鉴定抗肿瘤在肝微粒体中的代谢产物（图3和4）。
代谢物按照分子量和保留时间依次命名。
3.2 UPLC-UV/Q-TOF MS法鉴定肝微粒体孵育液中的抗肿瘤相关代谢产物与孵育0 min的肝微粒体比较，在孵育60 min肝微粒体样品中主要发现8种相关离子，其质荷比分别为m/z 809.265、212.101、364.129、380.125、464.147、480.142、709.210和825.259，分别命名为M0、M1、M2、M3、M4、M5、M6和M7。
其中M3检测到两个色谱峰，根据保留时间分别命名为M3-1和M3-2；M7检测到三个色谱峰，根据保留时间分别命名为M7-1、M7-2和M7-3。
在人肝微粒体孵育体系中检测到所有代谢物M0、M1、M2、M3、M4、M5、M6和M7（图3A）。
在猴肝微粒体孵育体系中检测到M1、M2、M3-1、M4、M5和M7-2（图3B）。
在犬肝微粒体孵育体系中检测到M0、M1、M2、M3-1、M4、M5、M6和M7-2（图3C）。
在大鼠肝微粒体孵育体系中检测到代谢物M1、M2、M3-1和M4（图3D）。
在小鼠肝微粒体孵育体系中检测到代谢产物M1、M2、M3-1、M4和M5（图3E）。
这些离子的精确质量信息以及可能元素组成见表1。
为了确定这些相关离子对应的结构，对这些离子进行产物离子全扫描质谱分析。
3.2.1 M0（[M+H]+，m/z 809.265）在人和犬肝微粒体中能检测到M0，以人肝微粒体样品为例对M0的鉴定加以说明。
从人肝微粒体MDF色谱图中选择性检测m/z 809.265，在保留时间t R为7.75 min 出现一个色谱峰（图5-1），命名为M0。
M0与抗肿瘤对照品溶液的色谱保留时间以及质谱行为相同，确定M0是未被代谢的原形药物抗肿瘤。
3.2.2 M1（[M+H]+，m/z 212.101）在人、猴、犬、大鼠和小鼠肝微粒体中均能检测到M1，以人肝微粒体样品为例对M1的鉴定加以说明。
从人肝微粒体MDF色谱图中选择性检测m/z212.101，在保留时间t R为5.37 min出现一个色谱峰（图5-2），命名为M1。
根据精确质量，推测M1的分子式为C9H13N3O3，比原形减少C23H27N3O11F4。
在高碰撞能量下，M1产生与原形相同的碎片离子m/z112.051。
碎片离子m/z156.041为末端丁基断裂后产生，因而推测M1为原形N-去烷基化的代谢产物。
3.2.3 M2（[M+H]+，m/z 364.129）在人、猴、犬、大鼠和小鼠肝微粒体中均能检测到M2，以人肝微粒体样品为例对M2的鉴定加以说明。
从人肝微粒体MDF色谱图中选择性检测m/z364.129，在保留时间t R为5.86 min出现一个色谱峰（图5-3），命名为M2。
根据精确质量，推测M2的分子式为C14H19F2N3O6，比原形减少C18H21N3O8F2。
在高碰撞能量下，M2产生与原形相同的碎片离子m/z112.051。
碎片离子m/z308.069为末端丁基断裂后产生。
因而推测M2为原形酯键A水解的代谢产物。
3.2.4 M3（[M+H]+，m/z 380.125）从人肝微粒体MDF色谱图中选择性检测m/z380.125，在保留时间t R为4.38和4.62 min各出现一个色谱峰（图5-4），分别命名为M3-1和M3-2。
在人、猴、犬、大鼠和小鼠肝微粒体中能检测到M3-1，而M3-2仅在人肝微粒中检测到。
以人肝微粒体样品为例对M3的鉴定加以说明。
根据精确质量，推测M3的分子式为C14H19F2N3O7，比原形减少C18H21N3O7F2。
在高碰撞能量下，M3-1和M3-2产生相似的碎片离子。
碎片离子m/z 156.041和308.069与M2的碎片离子相同。
碎片离子m/z 228.098比M2的碎片离子m/z 212.104增加了16 Da，因而推测M3为M2羟基化的代谢物。
3.2.5 M4（[M+H]+，m/z 464.147）在人、猴、犬、大鼠和小鼠肝微粒体中均能检测到M4。
从人肝微粒体MDF色谱图中选择性检测m/z 464.147，在保留时间t R为6.37 min出现一个色谱峰（图5-5），命名为M4。
根据精确质量，推测M4的分子式为C18H23F2N3O9，比原形减少C14H17N3O5F2。
在高碰撞能量下，M4产生原形相同的碎片离子m/z112.051。
碎片离子m/z 156.041和212.103与M2的碎片离子相同。
因而推测M4为原形酯键B水解的代谢产物。
3.2.6 M5（[M+H]+，m/z 480.142）在人、猴、犬和小鼠肝微粒体中均能检测到M5。
以人肝微粒体样品为例对M5的鉴定加以说明。
从人肝微粒体MDF色谱图中选择性检测m/z480.142，在保留时间t R 为4.99 min出现一个色谱峰（图5-6），命名为M5。
根据精确质量，推测M5的分子式为C18H23F2N3O10，比原形减少C14H17N3O4F2。
在高碰撞能量下，M5产生与原形相同的碎片离子m/z272.046。
碎片离子m/z 390.075比M4的碎片离子m/z364.096增加了16 Da。
因而推测M5为M4羟基化的代谢产物。
3.2.7 M6（[M+H]+，m/z 709.210）仅在人和犬肝微粒中能检测到M6。
以人肝微粒体样品为例对M6的鉴定加以说明。
从人肝微粒体MDF色谱图中选择性检测m/z 709.210，在保留时间t R为6.00 min 出现一个色谱峰（图5-7），分别命名为M6。
根据精确质量，推测M6的分子式为C27H32F4N6O12，比原形减少C5H8O2。
在高碰撞能量下，M6产生与原形相同的碎片离子m/z 112.050、272.048、387.071和524.093，因而推测M6为原形酰胺水解的代谢产物。
3.2.8 M7（[M+H]+，m/z 825.259）从人肝微粒体MDF色谱图中选择性检测m/z 825.259，在保留时间t R为6.63、6.69和6.88 min各出现一个色谱峰（图5-8），分别命名为M7-1、M7-2和M7-3。
M7-1和M7-3仅在人肝微粒中能检测到，而M7-2可在人、猴和犬肝微粒中被检测到。
根据精确质量，推测M7的分子式为C32H40F4N6O15，比原形增加一个O。
在高碰撞能量下，M7-1~M7-3生成相似的二级图谱，均产生与原形相同的碎片离子m/z 272.047、387.081、524.095、661.118和735.189。
碎片离子m/z 751.176比原形的碎片离子m/z 735.189增加16 Da，因而推测M7-1~M7-3均为原形羟基化的代谢产物。
4 结论抗肿瘤在人肝微粒体中孵化60 min后，仅检测到少量原形药物，共检测到10种代谢产物。