光度测定法

光度测定法

无色液体的纯度可用光度测定法测定。使用时，先要清洗滤纸、吸收瓶、样品瓶及比色杯。称取一定量的样品，用玻璃棒搅拌使之溶解。加入规定量的稀硫酸或蒸馏水，放置一段时间后，观察到有明显蓝色的溶液生成时，则表明样品中不含水分。然后再逐滴加入碘化钾溶液，即出现棕黄色沉淀。最后将沉淀通过石蕊试纸检验，确定为滤液。

1光度测定法测定乙醇含量实验目的要求：熟悉波长在390nm左右的紫外可见光对有机物质的穿透性，并掌握该波段的测定方法及测定结果的计算。仪器药品及试剂:碘液、空气、水、甲醇等必需品及常用消毒防腐剂。

仪器药品准备完毕后，开始测定实验。由于乙醇具有吸水性，测定前应向容量瓶中加入甲醇，使其含量为19。 5% (w/v)。由于甲醇也是一种极性化合物，故加入甲醇的体积以稍超过容量瓶刻度线1cm 为宜。操作步骤和结果：操作步骤：称取100mL(准确至0。 1g)供试品于具塞锥形瓶中，加入1ml碘液，盖上表面皿，加入6mL(4m1)水，摇匀。此时水层呈微蓝色，并有絮状物产生。冷却，加入3mL甲醇，充分振摇，继续静置2min，至沉淀完全。用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 2光度测定法测定蛋白质含量实验目的要求：熟悉用紫外可见光谱法测定蛋白质含量的原理、方法及各种条件下所需的波长范围;熟练掌握仪器操作，并能得出正确的数据。仪器药品及试剂：仪器有一台波长范围在340nm-360nm的可见分光光度计，具有

仪器温度补偿功能的电子天平，以及一台分光度计专用玻璃管。

分析步骤和结果：仪器按照要求调节到所需波长，以空气为参比，用水冲洗滤纸、比色皿及透射比色皿各3次，用去离子水冲洗3次。接通电源预热20min后，打开光源，将盛有蛋白质标准溶液的透射比色皿放入比色杯中，透射比色皿与光源成45°角，打开灯源，然后调整光路使光线通过分光光度计的分光板后进入比色杯，用分光光度计自带的样品架将待测蛋白质样品加入比色杯中，插上电源。用电子天平准确称取经稀释的标准蛋白质溶液，加入比色杯中，然后移入比色杯中，读出透射比色杯与入射比色杯的比值。