实验五 DMEM培养液的配制
配制合成培养液d me m时操作步骤
配制合成培养液d me m时操作步骤配制DMEM培养基过滤前和过滤后的NaHCO3，双抗体可以添加，也可以不加，最好能加入浆液过滤，在好的或，见细胞和血清浓度，不同，不同的细胞需要的同时，冻存细胞需要培养基血清含...配制DMEM培养基过滤前和过滤后的NaHCO3，双抗体可以添加，也可以不加，Z好能加入浆液过滤，在好的或，见细胞和血清浓度，不同，不同的细胞需要的同时，冻存细胞需要培养基血清含量较高，一般为20%-30%。
此外，包装后的培养基和血清过滤，除了被用于一瓶，其他存储在-20度，或一部分，如谷氨酰胺易降解。
配制DMEM培养基可以先用Z后的体积是2/3的水溶解配制，包装袋也需要清洗。
2G完全溶解的碳酸氢钠此外，加双抗后，定容至终体积。
过滤到零下20摄氏度保存。
添加血清的时候。
根据我的经验，配制DMEM培养基正常血清没有过滤，双抗体不需要过滤，可添加在前面（如果需要的话，除非双反）培养基的罕见的内容，否则就不需要在零下20摄氏度保存，培养两周跑出去不在4存储任何问题。
另外，我不同意与冷冻细胞明显高于血清，没有根据。
在ATCC细胞冻存的描述看，我很少使用血清，一般10%二甲基亚砜＋90%和冷冻液配方血清中是Z常用的。
冻存存活率极高的细胞。
（当然，冷冻也是非常重要的存储过程）配制DMEM培养基时血清不必要过滤，但我认为双反应进行过滤，毕竟，是不是很麻烦。
同时对细胞冷冻血清添加量存在着一定的问题，Z重要的是冷冻程序，如离心速度不太大，有二甲基亚砜的量不能超过10%，这是非常重要的。
配制DMEM培养基除了DMEM粉末直接加入，也应按照说明书添加碳酸氢钠适量，它是关于2G，pH值可能远大于你所需要的pH值，再加入适量HEPES，约2.38g，pH满意度，根据需要添加双抗，过滤，分装。
如果数量不多，储存超过20度，必要时添加血清，血清是不需要消毒。
DMEM培养基配制方法
DMEM培养基配制方法DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种常用的细胞培养基，广泛应用于细胞培养、病毒繁殖和实验室研究中。
DMEM培养基含有多种必需和非必需氨基酸、糖类、维生素和盐类成分，提供了生长细胞所需的营养和环境。
以下是DMEM培养基的配制方法。
配制DMEM培养基的主要成分包括基础培养基、补充物和pH调节剂。
基础培养基：1.准备适量的无菌去离子水，用于稀释和配制DMEM培养基。
补充物：1.氨基酸：将提供的无菌氨基酸液中的每种氨基酸均匀混合，制得氨基酸混合液。
如有需要，可以根据实验需求添加特定的氨基酸。
2.糖类：将葡萄糖溶液与无菌去离子水混合，配制成葡萄糖溶液。
3.维生素：将提供的无菌维生素溶液与去离子水混合，制得维生素溶液。
4.盐类：将提供的无菌盐溶液与去离子水混合，制得盐溶液。
pH调节剂：1. 英文名Tris（Tris(hydroxymethyl)aminomethane）：是一种常用的pH缓冲剂。
取适量的Tris溶液。
2. 英文名Sodium bicarbonate：是一种重要的pH调节剂，可提供细胞培养中所需的碱性环境。
取适量的Sodium bicarbonate溶液。
先准备好所需的试剂和仪器，并保证它们是无菌的。
配制过程如下：1.取适量的基础培养基（DMEM），移至无菌培养瓶中。
2.依次向DMEM基础培养基中加入补充物。
首先加入氨基酸混合液，根据提供的比例将其加入培养基中，充分混合。
然后加入葡萄糖溶液、维生素溶液和盐溶液，依次混合均匀。
3. 加入适量的Tris溶液，用于调节pH值。
根据实验需求和DMEM配方，逐渐加入Tris溶液，同时用pH计测量pH值，直到达到所需的pH范围（通常为7.2-7.4）。
4. 加入适量的无菌Sodium bicarbonate溶液，用于调节和维持培养基的碱性环境。
根据实验需求和DMEM配方，逐渐加入Sodium bicarbonate溶液，充分混合。
DMEM培养基配方
DMEM培养基配方DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）是一种常用的培养基，常用于细胞培养和病毒培养中。
该培养基是由Eagle在1961年发展而来的，并在之后被Dulbecco所改进，增加了可以用于细胞培养的组分。
DMEM培养基具有良好的细胞生长和维持能力，适用于多种细胞系的培养。
以下是DMEM培养基的标准配方：成分（每1升DMEM培养基）：-无菌去离子水1000mL- 葡萄糖（D-葡萄糖） 1000 mg- L-谷氨酰胺 584 mg-青霉素/链霉素100单元/mL-菌脂体抗生素混合物（氰胺苯胂和核黄素酮）10mL-青霉素/链霉素抗生性混合物10mL- 乳酸 660 mg- 杂酸钠 200 mg- 高氨基酸（L-谷氨酸，L-赖氨酸，L-Leu，L-异亮氨酸，L-Lys，L-Met，L-Phe，L-Thr，L-Trp，L-Arg，L-His，L-Ile，L-Val） 2 mL - L-胱氨酸 4 mg- 胖利钠 392 mg-维生素溶液（1X）10mL-必需氨基酸溶液10mL-非必需氨基酸10mL-小牛血清10%各组分的详细介绍如下：1.无菌去离子水：用于稀释和制备培养基，确保培养基的无菌。
4.青霉素/链霉素：抗菌药物，避免培养基中细菌的污染，浓度为100单元/mL。
5.菌脂体抗生素混合物：混合了氰胺苯胂和核黄素酮，提供对细菌和真菌的广谱抗生素覆盖。
6.青霉素/链霉素抗生素性混合物：对细菌的广谱抗生素覆盖。
7.乳酸：调节培养基的酸碱平衡，以维持适宜的细胞生长环境。
8.杂酸钠：提供缓冲剂，维持培养基的pH值稳定。
9.高氨基酸：添加了多种必需氨基酸，为细胞提供生长所需的氨基酸。
10.L-胱氨酸：提供了硫含量丰富的氨基酸，对细胞代谢和抗氧化有重要作用。
11. 填充无机盐 392 mg：提供一些无机盐，维持细胞代谢所需的电解质平衡。
12.维生素溶液（1X）：提供维生素，满足细胞生长过程中的营养需求。
DMEM培养基配方
序号
化合物名称
含量(mg/L)
序号
化合物名称
含量(mg/L)
1
无水氯化钙.2H2O
265.00
18
L-丝氨酸
42.00
2
硝酸铁.9H2O
0.10
19
L-苏氨酸
95.00
3
氯化钾
400.00
20
L-色氨酸
16.00
4
无水硫酸镁
97.67
21
L-酪氨酸
72.00
5
氯化钠
6400.00
22
含量(mg/L)
1
无水氯化钙
200.00
17
L-丝氨酸
42.00
2
硝酸铁.9H2O
0.10
18
L-苏氨酸
95.00
3
氯化钾
400.00
19
L-色氨酸
16.00
4
无水硫酸镁
97.67
20
L-酪氨酸钠盐
104.00
5
氯化钠
6400.00
21
L-缬氨酸
94.00
6
无水磷酸二氢钠
125.00
22
D-泛酸钙
4.00
29
盐酸硫胺
4.00
13
L-异亮氨酸
105.00
30
盐酸吡哆辛
4.00
14
L-亮氨酸
105.00
31
葡萄糖
1000.00
15
L-盐酸赖氨酸
146.00
32
丙酮酸钠
.00
33
酚红
17
L-苯丙氨酸
各种培养液的配方
各种培养液的配方不同的细胞类型和培养目的需要使用不同的培养液。
下面列举一些常见的细胞培养液配方及其用途。
1.DMEM培养液：DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种最常用的细胞培养基，适用于多种哺乳动物细胞的培养。
以下是DMEM培养液的配方：-1×DMEM：将DMEM粉末加入去离子水中，调整pH至7.2-7.4，用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%胎牛血清（FBS）：将FBS加入1×DMEM中，使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素：将1%抗生素/抗菌素（如青霉素/链霉素）加入1×DMEM中，使最终浓度为1%。
2.RPMI1640培养液：RPMI1640是一种适用于淋巴细胞和白血病细胞的培养基。
以下是RPMI1640培养液的配方：-1×RPMI1640：将RPMI1640粉末加入去离子水中，调整pH至7.2-7.4，用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%FBS：将FBS加入1×RPMI1640中，使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素：将1%抗生素/抗菌素加入1×RPMI1640中，使最终浓度为1%。
- 2-mercaptoethanol：将2-mercaptoethanol加入1×RPMI 1640中，使最终浓度为0.05mM。
3.MEM培养液：MEM（Minimum Essential Medium）是一种用于哺乳动物细胞培养的基础培养液。
以下是MEM培养液的配方：-1×MEM：将MEM粉末加入去离子水中，调整pH至7.2-7.4，用0.22μm过滤器过滤灭菌。
-10%FBS：将FBS加入1×MEM中，使最终浓度为10%。
-1%抗生素/抗菌素：将1%抗生素/抗菌素加入1×MEM中，使最终浓度为1%。
-1×非必需氨基酸：将非必需氨基酸（如谷氨酰胺、苏氨酸等）加入1×MEM中。
DMEM培养基配方
DMEM培养基配方DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种常用的细胞培养基，广泛用于体外细胞培养和研究。
下面是一种常见DMEM培养基的配方，以及其组成成分和原理解析。
1.DMEM基础培养基：-DMEM混合物：420mL-热灭菌的双蒸馏水：500mL2.补充物：-胎牛血清（FBS）：100mL-青霉素和链霉素：1mL-10%海马酸溶液：5mL配方的组成成分和原理解析：1.DMEM基础培养基：DMEM是Eagle培养基的一种改良版，其中包含了额外的氨基酸、维生素和无机盐。
DMEM是无血清培养基，不含胎牛血清，可减少实验结果受到外界因素的影响。
2.热灭菌的双蒸馏水：双蒸馏水是通过蒸馏过程去除水中的杂质和微生物，保证细胞培养过程中的无菌状态。
3.胎牛血清（FBS）：胎牛血清是培养细胞所必需的重要补充物，其中含有许多生长因子、激素和蛋白质，可以提供细胞所需的养分。
4.青霉素和链霉素：青霉素和链霉素是两种广谱抗生素，用于预防和控制细胞培养中的细菌污染。
5.10%海马酸溶液：海马酸（L-glutamine）是一种重要的氨基酸，对细胞的生长和分裂非常关键。
10%的海马酸溶液用于提供细胞所需的L-谷氨酰胺。
补充物中的FBS用于提供细胞所需的生长因子、激素和蛋白质。
青霉素和链霉素的加入可以预防细菌感染，确保细胞培养的纯度和健康度。
海马酸溶液则提供细胞所需的L-谷氨酰胺，促进细胞的生长和分裂。
总结：DMEM培养基是一种常用的细胞培养基，配方中包含基础培养基、水和补充物。
基础培养基提供细胞所需的基本成分，而补充物则提供细胞所需的生长因子、抗生素和氨基酸。
这种培养基的配方可以为细胞提供稳定的生存环境，促进细胞的生长和分裂。
常用细胞培养基配方及缓冲液
常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是一种含有适当营养物质和生长因子的液体或凝胶，用于维持细胞的生长与繁殖。
常用的细胞培养基配方和缓冲液如下：一、常用的细胞培养基配方：1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）-DMEM是最常用的细胞培养基之一，适用于多种种类的细胞培养。
-基本配方：-高糖DMEM：添加25mM葡萄糖-低糖DMEM：添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸DMEM：添加高浓度的氨基酸，以促进细胞生长和蛋白质合成。
2.RPMI1640-适用于淋巴细胞和一些肿瘤细胞的培养。
-基本配方：-高糖RPMI1640：添加25mM葡萄糖-低糖RPMI1640：添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸RPMI1640：添加高浓度的氨基酸。
3. MEM（Minimum Essential Medium）-MEM是最早用于细胞培养的培养基。
-基本配方：-高糖MEM：添加25mM葡萄糖-低糖MEM：添加5.5mM葡萄糖4. Ham's F-10-适用于肿瘤细胞和一些原代细胞的培养。
-基本配方：- 高糖Ham's F-10：添加25mM葡萄糖- 低糖Ham's F-10：添加5.5mM葡萄糖5.L-15-适用于多种种类的细胞培养。
-基本配方：- L-15培养基：必须在CO2-free环境下使用。
二、常用的缓冲液：1. 磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline，PBS）-0.1MPBS的配方：-8gNaCl-0.2gKCl-1.44gNa2HPO4-0.24gKH2PO4-1L去离子水-调pH至7.42.HEPES缓冲液-基本配方：-119mMNaCl-5mMKCl-0.8mMMgSO4-0.4mMKH2PO4-2.4mMNaHCO3-20mMHEPES（pH7.4）-0.6mMCaCl23. Tris缓冲液-基本配方：- 25mM Tris- 192mM glycine-10%甘油-0.1%SDS-pH8.34. Hanks平衡盐液 (HBSS)-基本配方：-8gNaCl-0.4gKCl-0.146gKH2PO4-0.2gMgSO4-0.06gMgCl2-0.35gNaHCO3-0.06gNa2HPO4-pH7.45. Tris-EDTA-基本配方：- 1M Tris-HCl，pH 8.0-0.5MEDTA，pH8.0以上是常用的细胞培养基配方和缓冲液的一些例子，不同细胞类型和实验要求可能需要不同的培养基和缓冲液。
DMEM培养基
DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，DMEM细胞培养基是在MEM培养基的基础上研制的。
与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500g/L）和低糖型(低于1000g/L)。
高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。
这种培养基的特点：（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等；（2）维生素含量为依格尔培养基的4倍；（3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸；（4）含有微量的铁离子。
该类培养基广泛应用于疫苗生产和各种初代病毒宿主细胞的细胞培养及单一细胞培养;如A9、3T6、BALB/3T3、COS-1、COS-3、COS-7、L6、WEHI-3b等细胞系的培养。
DMEM/F12培养基说明书产品代号：MD207-050一．【组成成分】成分mg/L 成分mg/L 成分mg/L无水氯化钙116.6 L-亮氨酸59.05 亚油酸0.042五水硫酸铜0.0013 L-赖氨酸盐酸盐91.25 硫辛酸0.105九水硝酸铁0.05 L-蛋氨酸17.24 酚红8.1七水硫酸亚铁0.417 L-苯丙氨酸35.48 1,4-丁二胺二盐酸盐0.081氯化钾311.8 L-丝氨酸26.25 丙酮酸钠55氯化镁28.64 L-苏氨酸53.45 维生素H 0.0035无水硫酸镁48.84 L-丙氨酸4.45 D-泛酸钙2.24氯化钠6999.5 L-天门冬酰胺7.5 氯化胆碱8.98无水磷酸二氢钠54.35 L-天门冬氨酸6.65 叶酸2.65磷酸氢二钠71.02 L-半胱氨酸盐酸盐17.56 i-肌醇12.6七水硫酸锌0.432 L-谷氨酸7.35 烟酰胺2.02L-精氨酸盐酸盐147.5 L-脯氨酸17.25 盐酸吡哆醛2L-胱氨酸盐酸盐31.29 L-色氨酸9.02 盐酸吡哆醇0.031L-谷氨酰胺365 L-酪氨酸38.4 核黄素0.219甘氨酸18.75 L-缬氨酸52.85 盐酸硫胺2.17L-组氨酸盐酸盐31.48 D-葡萄糖3151 胸苷0.365L-异亮氨酸54.47 次黄嘌呤2 维生素B12 0.68二．【产品指标】外观粉红色固体粉末溶解性完全溶解，溶液澄明。
完全培养基配制操作方法
完全培养基配制操作方法完全培养基（Complete medium）是一种为细胞培养提供所有必需营养物质的培养基。
完全培养基包括有机和无机物质、糖、氨基酸、维生素和激素等物质，可以满足细胞的生长和增殖的需求。
下面是一种常见的制备完全培养基的方法。
1. 准备实验室所需设备和试剂，包括称量器具、移液器、试剂瓶等。
2. 按照预先计算好的配方准备所需的试剂。
完全培养基的配方可以根据具体实验需要调整。
以下为一种常用的完全培养基配方：- DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）培养基- FBS（Fetal Bovine Serum）胎牛血清- L-谷氨酰胺粉末（或谷氨酸盐酸盐）- 青霉素和链霉素（或青霉素和链霉素抗生素混合物）3. 使用称量器具称量所需的DMEM粉末，并将其溶解于无菌蒸馏水中。
根据DMEM培养基的配方指导书，溶解适量的DMEM粉末可以得到一定浓度的DMEM培养基溶液。
4. 将配制好的DMEM培养基溶液过滤器通过0.22微米的滤膜过滤器以去除悬浮物和细菌，得到无菌的DMEM培养基液。
5. 加入适量的FBS胎牛血清到DMEM培养基中。
一般情况下，FBS浓度为10%。
加入FBS胎牛血清的目的是提供细胞生长所需的营养物质和生长因子。
6. 加入适量的L-谷氨酰胺粉末（或谷氨酸盐酸盐）到DMEM培养基中，以提供氨基酸供细胞使用。
L-谷氨酰胺是蛋白质合成的重要组成部分。
7. 加入适量的青霉素和链霉素（或青霉素和链霉素抗生素混合物）到DMEM培养基中，以预防细菌污染。
青霉素和链霉素是在无菌环境中操作时添加的，以防止培养物中细菌的生长。
8. 将配制好的完全培养基溶液分装到无菌的试剂瓶中，并进行无菌操作，以避免污染。
常用的分装方式是使用无菌移液器将培养基吸取到试剂瓶中。
9. 将完全培养基储存在低温干燥的地方，以延长其保存时间。
10. 在使用前，将完全培养基溶液加热到37摄氏度，使其达到体内温度。
DMEM高糖配方培养基
DME高糖配方/F12培养基说明书产品代号： MD207-050 一．【组成成分】成分 mg/L 成分 mg/L 成分 mg/L 无水氯化钙 116.6 L- 亮氨酸 59.05 亚油酸 0.042 五水硫酸铜 0.0013 L- 赖氨酸盐酸盐91.25 硫辛酸 0.105 九水硝酸铁 0.05 L- 蛋氨酸 17.24 酚红 8.1 七水硫酸亚铁0.417 L- 苯丙氨酸 35.48 1,4- 丁二胺二盐酸盐 0.081 氯化钾 311.8 L- 丝氨酸26.25 丙酮酸钠 55氯化镁 28.64 L- 苏氨酸 53.45 维生素 H 0.0035 无水硫酸镁 48.84 L- 丙氨酸4.45 D- 泛酸钙 2.24 氯化钠 6999.5 L- 天门冬酰胺 7.5 氯化胆碱 8.98 无水磷酸二氢钠 54.35 L- 天门冬氨酸 6.65 叶酸 2.65 磷酸氢二钠 71.02 L- 半胱氨酸盐酸盐 17.56 i- 肌醇 12.6 七水硫酸锌 0.432 L- 谷氨酸 7.35 烟酰胺 2.02L-精氨酸盐酸盐147.5 L-脯氨酸17.25盐酸吡哆醛2L-胱氨酸盐酸盐31.29 L-色氨酸9.02 盐酸吡哆醇0.031L-谷氨酰胺365 L-酪氨酸38.4核黄素0.219甘氨酸 18.75 L- 缬氨酸 52.85 盐酸硫胺 2.17L-组氨酸盐酸盐31.48 D-葡萄糖3151胸苷0.365L-异亮氨酸54.47次黄嘌呤2维生素B12 0.68产品指标】外观粉红色固体粉末溶解性完全溶解，溶液澄明。
pH值①加 NaHCO3 6.60- 7.20②不力卩 NaHCO3 5.50-6.10水分（% 屿.0渗透压（ mOsm/kgH2O①加 NaHCO3 27*302②不加 NaHCO3 23*263细菌内毒素（EU/ml）<10微生物检查（CFU/g <000细胞生长试验细胞形态与标准细胞形态相似细胞数量加10%小牛血清培养4天，细胞密度从104细胞/ml增加到105细胞 /ml 。
DMEM培养基制备SOP
DMEM培养基的配置1 实验目的➢配制DMEM培养基2 实验原理2.1 DMEM培养基的用途➢➢DMEM and Click’s media have an osmolarity that is more compatible with mouse serum than RPMI; in fact, RPMI was specifically designed for the culture of human cells.2.2 本实验室在培养小鼠来源细胞时选用DMEM培养基的理由➢2.3 培养基中各种组分的作用及添加依据2.3.1 Hepes（羟乙基哌碃乙硫磺酸）：25mM /L (/L)，不加碳酸氢钠时pH为，加碳酸氢钠时pH为。
单独配制时，配制为100X即/ml。
➢配制 /L (/mL) Hepes：12g的Hepes定容到20ml PBS中，过滤除菌，分装为1ml/管，－20°C保存。
Cell Biology建议为4°C保存。
➢HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加(不懂，何为抵消？邹强).在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中. 来自网络。
2.3.2 缓冲系统: 来自网络。
➢大多数细胞所需pH 在7.2 - 7.4.但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同.成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4).➢由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡.如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为/L.➢细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换.➢大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.➢碳酸氢钠：CO2浓度为5%时，培养液中碳酸氢钠浓度为/L；CO2浓度为10%时，培养液中碳酸氢钠浓度为/L（科学出版社.细胞实验指南P6）。
DMEM高糖配方培养基
DMEM高糖配方/F12培养基说明书产品代号：MD207-050一．【组成成分】成分mg/L 成分mg/L 成分mg/L无水氯化钙116.6 L-亮氨酸59.05 亚油酸0.042五水硫酸铜0.0013 L-赖氨酸盐酸盐91.25 硫辛酸0.105九水硝酸铁0.05 L-蛋氨酸17.24 酚红8.1七水硫酸亚铁0.417 L-苯丙氨酸35.48 1,4-丁二胺二盐酸盐0.081氯化钾311.8 L-丝氨酸26.25 丙酮酸钠55氯化镁28.64 L-苏氨酸53.45 维生素H 0.0035无水硫酸镁48.84 L-丙氨酸 4.45 D-泛酸钙 2.24氯化钠6999.5 L-天门冬酰胺7.5 氯化胆碱8.98无水磷酸二氢钠54.35 L-天门冬氨酸 6.65 叶酸 2.65磷酸氢二钠71.02 L-半胱氨酸盐酸盐17.56 i-肌醇12.6七水硫酸锌0.432 L-谷氨酸7.35 烟酰胺2.02L-精氨酸盐酸盐147.5 L-脯氨酸17.25 盐酸吡哆醛2L-胱氨酸盐酸盐31.29 L-色氨酸9.02 盐酸吡哆醇0.031L-谷氨酰胺365 L-酪氨酸38.4 核黄素0.219甘氨酸18.75 L-缬氨酸52.85 盐酸硫胺 2.17L-组氨酸盐酸盐31.48 D-葡萄糖3151 胸苷0.365L-异亮氨酸54.47 次黄嘌呤2 维生素B12 0.68二．【产品指标】外观粉红色固体粉末溶解性完全溶解，溶液澄明。
pH值①加NaHCO3 6.60～7.20②不加NaHCO3 5.50～6.10水分（%）≤5.0渗透压（mOsm/kgH2O）①加NaHCO3 274～302②不加NaHCO3 238～263细菌内毒素（EU/ml）≤10微生物检查（CFU/g）≤1000细胞生长试验细胞形态与标准细胞形态相似细胞数量加10％小牛血清培养4天，细胞密度从104细胞/ml增加到105细胞/ml。
三.【配制方法】⑴将一袋培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水将袋内残留培养基洗下，并入容器。
DMEM、F12培养基配置方法
DMEM/F12培养基（华越洋生物）DMEM/F12培养基说明书一．【组成成分】成分mg/L 成分mg/L 成分mg/L无水氯化钙116.6 L-亮氨酸59.05 亚油酸0.042五水硫酸铜0.0013 L-赖氨酸盐酸盐91.25 硫辛酸0.105九水硝酸铁0.05 L-蛋氨酸17.24 酚红8.1七水硫酸亚铁0.417 L-苯丙氨酸35.48 1,4-丁二胺二盐酸盐0.081 氯化钾311.8 L-丝氨酸26.25 丙酮酸钠55氯化镁28.64 L-苏氨酸53.45 维生素H 0.0035无水硫酸镁48.84 L-丙氨酸 4.45 D-泛酸钙 2.24 氯化钠6999.5 L-天门冬酰胺7.5 氯化胆碱8.98 无水磷酸二氢钠54.35 L-天门冬氨酸 6.65 叶酸 2.65磷酸氢二钠71.02 L-半胱氨酸盐酸盐17.56 i-肌醇12.6七水硫酸锌0.432 L-谷氨酸7.35 烟酰胺 2.02L-精氨酸盐酸盐147.5 L-脯氨酸17.25 盐酸吡哆醛2L-胱氨酸盐酸盐31.29 L-色氨酸9.02 盐酸吡哆醇0.031 L-谷氨酰胺365 L-酪氨酸38.4 核黄素0.219 甘氨酸18.75 L-缬氨酸52.85 盐酸硫胺 2.17 L-组氨酸盐酸盐31.48 D-葡萄糖3151 胸苷0.365L-异亮氨酸54.47 次黄嘌呤2 维生素B12 0.68 二．【产品指标】外观：粉红色固体粉末溶解性：完全溶解，溶液澄明。
pH值：①加NaHCO3 6.60～7.20②不加NaHCO3 5.50～6.10水分（%）：≤5.0渗透压（mOsm/kgH2O）：①加NaHCO3 274～302②不加NaHCO3 238～263细菌内毒素（EU/ml）：≤10微生物检查（CFU/g）：≤1000细胞生长试验细胞形态：与标准细胞形态相似细胞数量：加10％小牛血清培养4天，细胞密度从104细胞/ml增加到105细胞/ml。
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1瓶(1,000mL量) 3.7g 0.2g 1,000mL
【配制方法】
取清洗干净的500mL大烧杯一个，加入 新鲜制备的三蒸水约300mL，加热至15~ 30℃； 将DMEM干粉袋竖立轻弹，使袋中粉下 沉，剪开袋口，将干粉倒入500mL的大烧 杯中，用超纯水冲洗袋2~3次； 放入清洗干净的磁子，在磁力搅拌器充 分搅拌，以确保培养基干粉充分溶解；
实验五 1M HCl的配制 1M NaOH的配制
【实验材料】
250mL烧杯 玻璃棒 250mL盐水瓶 一次 性滤纸 去离子水 电子天平 药匙 5mL 移液器 5mL吸头 NaOH 浓HCl
【HCl的配制过程】
用5mL的移液器准确移取盐酸21mL， 加入到279mL超纯水中。
【NaOH的配制过程】
NaOH 10g 超纯水 250mL 边加边搅拌，溶解过程ank’s液是否有？ 是否已过滤除菌； 2、每组的EDTA需要高压灭菌； 3、需要配制新鲜的1M HCl和1M NaOH 溶液，以及7.4％的NaHCO3溶液； 4、需要重新灭菌5mL枪头； 5、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把， 小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把， 高压灭菌；
【课程安排】
6、每组准备培养皿两套，干烤灭菌； 7、需要重新配制双抗溶液。
【实验材料】
500mL大烧杯 玻璃棒 250mL/500mL盐水 瓶 酸度计 50mL小烧杯3个 孔径0.22μm 微孔滤膜 一次性滤器 一次性滤纸 去离 子水 灭活的小牛血清 DMEM干粉 青霉 素 链霉素 NaHCO3 超净工作台 磁力搅 拌器 电子天平 药匙
【配方】
DMEM干粉
NaHCO3 L-谷氨酰胺 超纯水
【配制方法】
根据配方要求，加入准确称取的NaHCO3 1.85g，L-谷氨酰胺0.1g，充分摇匀至完全 溶解； 加入已经制备好的双抗溶液，使青霉素 和链霉素的最终使用浓度达到100μg/mL； 加入培养基总体积约10％的已灭活的小 牛血清；
【配制方法】
用浓度为7.4％的NaHCO3溶液调整溶液 的pH值为7.2~7.4，加超纯水定容，并将 培养液转入盐水瓶； 用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的 盐水瓶，封口，4℃保存备用。