核酸检测实验室建立与应用PPT演示幻灯片
合集下载
临床PCR实验室的设计及管理体系的建立PPT课件
阳性室内质控物来源：
浓度及批号：
扩增位置：
阴性室内质控物来源：
批号：
扩增位置：
所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置：
1
9
17
25
2
10
18
26
3
11
19
27
4
12
20
28
5
13
21
29
6
14
22
30
7
15
23
31
8
16
24
32
核酸提取及加样过程：按XXX（列出编号）SOP进行。
仪器设备使用： 生物安全柜： 正常 不正常 恒温仪温度校准： ℃
实验结果：见所附扩增仪打印结果 实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面及仪器设备。 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。
操作者：
第61页/共66页
分析你已做的
第62页/共66页
技术验收审核的其它内容
第63页/共66页
另外两个存在较多问题的档案记录
毫升；
按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯
毫升；
按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制
毫升；
其他：
仪器设备使用：
离心机： 正常 不正常
振荡器： 正常 不正常
实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，
并进行紫外照射30分钟以上。
第57页/共66页
临床PCR检验流程记录表
检验日期
检验项目：
扩增仪中保存文件名：
使用说明： 1．本记录表须严格遵循试剂准备区标本制备区扩增区（产物分析区）单一流向移动，严禁逆向 移动。 2．各项工作执行后，在相应叙述前的“”内打“”。 3．本记录表最后与相应的标本接收记录等归档保存于扩增区的专用文件柜内，以备查找。
核酸检测技术PPT课件
28
多重PCR（multiplex PCR）
Multiplex PCR: How
• Same as regular PCR • Care in primer design
– Much greater chance of primer-dimers – Much greater chance of artifacts – Annealing temperatures must be close
……
26
2.1 多重PCR（multiplex PCR）
多重PCR（multiplex PCR）:What
• PCR using several primer pairs SIMULTANEOUSLY
• Typically generates a product band for each primer pair
21
PCR的扩增？
22
The first cycle
The second cycle
How does PCR work
23
The third cycle
The fourth cycle
24
How does PCR work
2. PCR的类型
25
1. 多重PCR（multiplex PCR） 2. 巢式PCR（nested PCR） 3. 定量PCR（quantitative PCR） 4. 不对称PCR（asymmetric PCR） 5. 反向PCR（inverse PCR） 6. 逆转录PCR（reverse transcription PCR） 7. Overlap PCR
平台期
平台期
基线期
Cycle（循环数）
39
多重PCR（multiplex PCR）
Multiplex PCR: How
• Same as regular PCR • Care in primer design
– Much greater chance of primer-dimers – Much greater chance of artifacts – Annealing temperatures must be close
……
26
2.1 多重PCR（multiplex PCR）
多重PCR（multiplex PCR）:What
• PCR using several primer pairs SIMULTANEOUSLY
• Typically generates a product band for each primer pair
21
PCR的扩增？
22
The first cycle
The second cycle
How does PCR work
23
The third cycle
The fourth cycle
24
How does PCR work
2. PCR的类型
25
1. 多重PCR（multiplex PCR） 2. 巢式PCR（nested PCR） 3. 定量PCR（quantitative PCR） 4. 不对称PCR（asymmetric PCR） 5. 反向PCR（inverse PCR） 6. 逆转录PCR（reverse transcription PCR） 7. Overlap PCR
平台期
平台期
基线期
Cycle（循环数）
39
新冠核酸检测实验室质量控制和生物安全培训课件ppt
）
4
二、实验室质量控制
实验室要求
质量控制
（一）实验室要求
1、实验室基本要求：
➢符合《病原微生物实验室生物安全管理条例 ➢具备经过卫生健康行政部门审核备案的生物安全二级及 以上实验室条件 ➢ 具备基因扩增检验实验室条件。
（一）实验室要求—合理分区
原则上设4个区域，各区域在物理空间上必须是完全相互独立，无论是在空间 上还是在使用中，应当始终处于完全分隔状态，不能有空气的直接相通。
保持实验室空间密闭，避免污染物扩散。 立即使用润湿有0.55%含氯消毒剂的毛巾覆盖污染区。 必要时（如大量溢撒时）可用过氧乙酸加热熏蒸实验室，剂量为
2g/m³，熏蒸过夜； 或20g/L 过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾，用量8ml/m³，作用
1~2 小时； 或用高锰酸钾-甲醛熏蒸：高锰酸钾8g/m³，放入耐热耐腐蚀容器
吸取标本
标本的灭活（适用时） 核酸提取及其加入至扩增
提取核酸
反应管（板）等
核酸加样
生物安全:
• 人员防护按照生物安全三 级 实验室防护水平
• 在生物安全二级实验室开展， 双人操作
• 吸取样本在安全柜内操作 • 核酸加样在安全柜内操作 • 离开安全柜更换手套
实验结束后处理： • 消毒实验台
面 和仪器表 面 • 更换手套 • 医疗废物即清
（二）质量控制
6、结果报告
✓ 隔离点隔离人员第14天解除隔离前，双试剂检测，省新冠病毒核酸检测 信息系统录入两条检测记录
（二）质量控制
6、结果报告
（二）质量控制
6、结果报告
三. 实验室生物安全
实验室检测 安全管理
实验室医疗 废物管理
实验室污染 处理
实验室生物安全
4
二、实验室质量控制
实验室要求
质量控制
（一）实验室要求
1、实验室基本要求：
➢符合《病原微生物实验室生物安全管理条例 ➢具备经过卫生健康行政部门审核备案的生物安全二级及 以上实验室条件 ➢ 具备基因扩增检验实验室条件。
（一）实验室要求—合理分区
原则上设4个区域，各区域在物理空间上必须是完全相互独立，无论是在空间 上还是在使用中，应当始终处于完全分隔状态，不能有空气的直接相通。
保持实验室空间密闭，避免污染物扩散。 立即使用润湿有0.55%含氯消毒剂的毛巾覆盖污染区。 必要时（如大量溢撒时）可用过氧乙酸加热熏蒸实验室，剂量为
2g/m³，熏蒸过夜； 或20g/L 过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾，用量8ml/m³，作用
1~2 小时； 或用高锰酸钾-甲醛熏蒸：高锰酸钾8g/m³，放入耐热耐腐蚀容器
吸取标本
标本的灭活（适用时） 核酸提取及其加入至扩增
提取核酸
反应管（板）等
核酸加样
生物安全:
• 人员防护按照生物安全三 级 实验室防护水平
• 在生物安全二级实验室开展， 双人操作
• 吸取样本在安全柜内操作 • 核酸加样在安全柜内操作 • 离开安全柜更换手套
实验结束后处理： • 消毒实验台
面 和仪器表 面 • 更换手套 • 医疗废物即清
（二）质量控制
6、结果报告
✓ 隔离点隔离人员第14天解除隔离前，双试剂检测，省新冠病毒核酸检测 信息系统录入两条检测记录
（二）质量控制
6、结果报告
（二）质量控制
6、结果报告
三. 实验室生物安全
实验室检测 安全管理
实验室医疗 废物管理
实验室污染 处理
实验室生物安全
核酸检测ppt课件
经过治疗后的HBsAg转阴，ELISA方法 检测阴性的献血者。
精选ppt
3
NAT与ELISA互补
病毒变异 免疫静默期 实验操作失误 病毒感染的窗口期
精选ppt
4
病毒检测窗口期
项目 HBsAg 抗-HCV 抗-HIV
ELISA窗口期 项目 NAT窗口期
56
HBV 25
72
HCV 59
22
《全国艾滋病检测技术规范》用于核酸定性检 测时，采集的抗凝全血应在48h内分离PBMC和 血浆，否则应在2448h内分离血浆和血细胞。
精选ppt
31
试剂的稳定性
试剂的灵敏度 试剂内标的最佳标准 试剂与全自动工作站的磨合
精选ppt
32
完善实验室管理
• 技术要求更高 • 操做要求更专业 • 质量控制更严格
核酸检测在血液筛查中的应用
深圳市血液中心
精选ppt
1
血液筛查是否需要进行核酸检测
精选ppt
2
无偿献血的新动态
“定期无偿献血者是低危的献血者” ，但是“以体检为目的定期无偿献血 者是高危献血者”而且这部分人群的 献血队伍正在扩大。这部分人群窗口 期的机率高于其他人群。因为在他们 中间高危的传播行为经常发生。
HCV、HIV窗口期浓度高，因此对灵敏度要求较低。
美国FDA要求，HCV、HIV5000IU/ml能在pooling方案中被 检出
HBV的窗口期标本在30-300IU/ml之间，因此对灵敏 度要求高
低于灵敏度也有检出的可能，这与取样几率有关
精选ppt
9
血液筛查常用的NAT技术
精选ppt
10
容性强的设备、试剂销路好) 试剂成本 质量成本
精选ppt
3
NAT与ELISA互补
病毒变异 免疫静默期 实验操作失误 病毒感染的窗口期
精选ppt
4
病毒检测窗口期
项目 HBsAg 抗-HCV 抗-HIV
ELISA窗口期 项目 NAT窗口期
56
HBV 25
72
HCV 59
22
《全国艾滋病检测技术规范》用于核酸定性检 测时，采集的抗凝全血应在48h内分离PBMC和 血浆，否则应在2448h内分离血浆和血细胞。
精选ppt
31
试剂的稳定性
试剂的灵敏度 试剂内标的最佳标准 试剂与全自动工作站的磨合
精选ppt
32
完善实验室管理
• 技术要求更高 • 操做要求更专业 • 质量控制更严格
核酸检测在血液筛查中的应用
深圳市血液中心
精选ppt
1
血液筛查是否需要进行核酸检测
精选ppt
2
无偿献血的新动态
“定期无偿献血者是低危的献血者” ，但是“以体检为目的定期无偿献血 者是高危献血者”而且这部分人群的 献血队伍正在扩大。这部分人群窗口 期的机率高于其他人群。因为在他们 中间高危的传播行为经常发生。
HCV、HIV窗口期浓度高，因此对灵敏度要求较低。
美国FDA要求，HCV、HIV5000IU/ml能在pooling方案中被 检出
HBV的窗口期标本在30-300IU/ml之间，因此对灵敏 度要求高
低于灵敏度也有检出的可能，这与取样几率有关
精选ppt
9
血液筛查常用的NAT技术
精选ppt
10
容性强的设备、试剂销路好) 试剂成本 质量成本
核酸检测采样点设置及加强采样质量管理PPT学习培训课件
鼻咽拭子采样
采样人员手执拭子贴鼻孔进入， 沿下鼻道的底部向后缓缓深入，由于 鼻道呈弧形，不可用力过猛，以免发 生外伤出血。待拭子顶端到达鼻咽腔 后壁时，轻轻旋转一周（如遇反射性 咳嗽,应停留片刻），然后缓缓取出拭 子，将拭子头浸入含2~3ml病毒保存液 的管中。
采样人员个人防护
1
个人防护包括，正确穿脱个人防护装备（包括:医 用防护口罩、乳胶手套、防护面屏或护目镜、隔 离衣或防护服、工作帽），规范进行手卫生。
确保采样人员符合资质
各地要严格核酸采样人员的资质管理，在现有医务人员基础上，将民营 医院、零售药店、学校医务室以及企事业单位中具有卫生相关专业技术职业 资格的人员纳入采样人员队伍，经卫生健康行政部门组织规范培训并考核合 格后，方可从事核酸采样工作。采样人员的调配使用尽量不挤占正常医疗资 源，以保障人民群众看病就医需求。
规范开展核酸采样培训
一
各地卫生健康行政部门要按照《医疗机构新型冠状病毒核 酸检测工作手册（试行第二版）》和《新冠病毒核酸采样 培训方案》（见附件），规范做好核酸采样的组织、培训 、考核等相关工作。
二
通过制作培训视频、组织实操培训等，使采样人员熟练掌 握口咽拭子、鼻咽拭子等常用采集方法，正确穿脱使用个 人防护用品,落实各项感染控制措施。不得通过视频培训 取代实操知核酸采样点的查询途径，便于群众及时获得相关信息， 就近就便采样。通过电子地图、公共服务小程序、客户端等方式，向社会公布 核酸采样点信息，包括采样点地址、工作时间等，并及时更新维护；有条件的 地区，鼓励实时显示各采样点的排队等候状况。要合理安排采样服务时间，适 应不同人群的需求，灵活错时提供采样服务。对上班上学人员，可在早晨、傍 晚等时间安排集中采样，社区居民等其他人员可在工作时间采样。
新冠病毒《核酸检测》培训ppt
市场状况
试剂质量控制方法
编码子系统可读取配置好的录像计划，根据计划实现前端模拟视频的编码、并进行存储操作。编码子系统的主要完成的功能如下：响应控制指令：编码子系统响应配置客户端发出的远程配置指令，对编 码格式、质量等参数进行保存。
感谢聆听
市场状况
现状和趋势
在发现入侵者之后可以自动预警，并通知带 PTZ 的摄像机自动锁定目标进行跟踪监控，形成视频跟踪和摄像机区域联防。这样，保安人员就可以随时掌握着入侵者的行踪，并在事发之前进行预防和控制， 把损失降到最低。
市场状况
实时荧光PCR检测的难点
当然，在特殊场景下还需要特殊功能进行匹配，比如：超低照度、宽动态等等。2、适应复杂环境——与硬盘录像机、交换机所处环境不同，摄像机一般都置于风吹日晒的环境下，天气变化都会影响摄像 机的工作。
核酸提取 探针点膜
PCR 扩增 交联
杂交
显色
结果判读
怎样进行核酸检测？
PCR
对于电梯轿厢，采用电梯专用飞碟摄像机。而对于光照强度不足的楼梯及地下室等位置，采用低照度的枪机。5.1.4 传输子系统设计5.1.4.1.传输方式的类型传输线路是指将前端设备的信号传输至中心控制 设备的各类线路，这部分的造价虽小，但关系到整个电视监控系统的图像质量和使用效果，因此要选择经济、合理的传输方式。
怎样进行核酸检测？
直流输入电源外置，采用双路 1+1 冗余-48V 电源输出。在本设计中，视频综合平台主要提供解码、大屏拼接、显示控制的功能。
怎样进行核酸检测？
传统的大屏幕系统一般由编码器、矩阵、大屏控制器构成，组成比较复杂，每个环节都有可能存在不稳定因素，而且环节越多导致了排查错误约困难，而我司的视频综合平台将编码、矩阵以及大屏控制 器整合在一起，在满足功能需求的基础上操作简便、维护简单、管理简捷。
【专家讲座】核酸检测实验室建立与应用PPT课件
6
5
7
1
2/8
25
0/5
0
2019/9/30
20
应用SAS9.0软件PARnaOlyBsiIsTo分f Pa析ram结eter果Estimates
ChiParameter
ChiSq
DF Estimate
Standard 95% Confidence
Error
Limits
Square Pr >
Intercept 0.0028 log10(Dose) 1 0.0011
2019/9/30
12
标准操作规程(SOP)的编写
核酸标本离心交接操作规程 核酸标本提取及汇集操作规程(科华) 核酸标本扩增检测操作规程（科华） 核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON） 核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件） 核酸标本检测复检操作规程 生物安全柜标准操作规程 可移动紫外线灯标准操作规程 低温高速离心机标准操作规程 ABI 7300型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程
内标的作用 –质控整个反应。 –提示假阴性检测结果。 –监控反应的外部条件 –内标浓度要合适 –保持适度的内标失控.(<0.2%)
2019/9/30
18
核酸试剂灵敏度评估
概率单位回归分析 (PROBIT） 用于描述剂量-反应或不同因素间的剂量-
反应比较，反应结果应该是以二分类形式 表达的。 概率单位的回归方程为：
PROBIT Pi=A+BXi
2019/9/30
19
用国际标准品稀释成不同浓度评估血液HBV 核酸筛查方法，结果如下。请计算95%的检 出限量及可信范围CI
序号 浓度 （IU/ml） 阳性数/重复数 概率
核酸检测实施学习培训PPT课件
4
全员核酸人员组成框架
健康高于财富
Health is more valuable than wealth
乡镇街道调度员、社区调度员、社区信息 登记员、社区采样点负责人、采样人员、 消杀人员、物资保障调度员、采样转运调 度人员、标本转运人员（驾驶员、转运人 员）、县级标本转运调度人员（县级指挥 部转运专班）、检测机构联系单位、医废 转运联系人员。
运人员按照转运路线将医疗废弃物转运至属地医疗废弃物
暂存点，登记医疗废弃物类别、数量，待第三方机构转运
后终处置。
15
健康高于财富
Health is more valuable than wealth
16
7
启动全员核酸组织准备
健康高于财富
Health is more valuable than wealth
乡镇、社区调度员：及时通知各专班工作人员按时到位，社区
组织人员做好采样前现场的准备工作。前期开展的人口底数及
特殊人群，提前对无智能机人员打印健康码。
现场准备：三区两通道，等候区（临时隔离点）、信息登记区 、采样区（缓冲区、半污染区、污染区、清洁区、临时医疗废 弃物暂存区），现场使用警戒线分区隔断。
健康高于财富
Health is more valuable than wealth
消杀人员：采样点医疗弃废物垃圾收集不得超过袋子的2/3
，打包前对袋内袋外消毒（1000mg/L含氯消毒剂）后鹅颈
结打包，再装入第2个清洁医疗废弃物垃圾袋内，鹅颈结打
包（该消毒工作不得在采样区完成，必须远离采样台）。
核酸采样员收集采样区医疗废弃物转运至现场医疗废弃物
个人防护要求：N95口罩、一次性医用工作帽、隔离衣或防 水围、无粉医用橡胶手套。
核酸扩增检测实验室设计及工作流-PPT精品文档
仪器上完成的全自动核酸检测分析仪，标本制 备区、扩增区和产物分析区可合并。
无“基因”或“核酸”概念的重要性
Evaluation only. ted with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2 Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
理想的核酸扩增实验室设计A
产物分析区 扩增区 标本制备区 试剂准备区
Evaluation only. 空气流向 空气流向 空气流向 ted with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2 空气流向 Copyright 2019-2019 Aspose 缓冲间 Pty Ltd. 缓冲间 缓冲间
l
因地制宜
l
方便工作
A
扩增区 门
标本制备区
门 产物分析区
门 试剂准备区
Evaluation only. ted with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2 门 门 Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
外走廊
血液标本的接收
l
通常的工作流程：标本采集
编号 保存或检测 Evaluation only.
血清分离
tedl with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2 应在四个测定区域之外的地方或区域内接 收 Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
试剂准备区
其他实验室
其实验室
其他实验室
空气流向
其他实验室
无“基因”或“核酸”概念的重要性
Evaluation only. ted with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2 Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
理想的核酸扩增实验室设计A
产物分析区 扩增区 标本制备区 试剂准备区
Evaluation only. 空气流向 空气流向 空气流向 ted with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2 空气流向 Copyright 2019-2019 Aspose 缓冲间 Pty Ltd. 缓冲间 缓冲间
l
因地制宜
l
方便工作
A
扩增区 门
标本制备区
门 产物分析区
门 试剂准备区
Evaluation only. ted with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2 门 门 Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
外走廊
血液标本的接收
l
通常的工作流程：标本采集
编号 保存或检测 Evaluation only.
血清分离
tedl with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2 应在四个测定区域之外的地方或区域内接 收 Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
试剂准备区
其他实验室
其实验室
其他实验室
空气流向
其他实验室
核酸检测PPT
接触患者血液、体液、分泌物或排泄物,戴双层乳胶手套;手套被污染时,及时更换外层乳胶手套。
配置及防护要求四
每采一个人应当进行严格手消毒或更换手套。
标本保存
标本应尽快检测。能在24小时内检测的标本可置于4C保存; 24小时内无法检测的标本则应置于-70C或以下保存(如无70它保存条件,则 于-20C冰箱暂存)。应当设立专库或专柜单独保存标本。标本检测前及运送期间避免反复冻融。
应建立可疑标本和阳 性标本复检流程
核酸提取 核酸扩增
在生物安全柜内对 标本进行灭
标本前处理
结果分析及报告
第三部分 可能变量人员标本仪器
可能变量人员标本仪器
新型冠状病毒核酸检测工作要点
分析前
标本正确采集; 合适的运输条件; 适当的保存温度
分析中
性能验证/确认、室 内质控、
室间质评。
分析后
报告审核、 发放、
标本采集操作流程以及注意事项,确保做好标
3
-本信息记录,确保标本质量符合要求、确保标 4
-本及相关信息可追溯。
5
关键的技术本身是常量
新型冠状病毒核酸检测工作要点
检 测 人 员
专业 资质
应具备相关专业大专以上学历或具有中 级及以上专业技术职务任职资格。
工作 经验
同时具有2年以上的实验室工作经历和基 因检验相关培训合格证书。
新型冠状病毒核酸检测工作要点
内容一
医疗机构应当在卫生健康 行政部门门统筹下,做好 标本采集、核酸检测、检 测报告的信息对接工作。
内容二
建立统一的信息采集扫码 程序，信息应至少包括姓 名、性别、年龄、身份证 号、联系电话。
内容三
做到标本采集的个人信息 与医疗机构信息系统顺利 对接,各医疗机构间应做 到信息互通、互采、互认。
PCR实验室建立及预防污染ppt课件
污染原因
(二) PCR试剂的污染:主要是由于在PCR 试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双 蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.
污染原因
(三) PCR扩增产物污染: 这是PCR反应中 最主要最常见的污染问题，因为PCR产物 拷贝量 大，远远高于PCR检测数个拷贝的 极限，所以极微量的PCR产物污染，就可 造成假阳就可形成假阳性。
扩增反应混合物配制和扩增区
• • • • 核酸扩增仪 微量加样器（覆盖1-1000ul） 可移动紫外灯（近工作台面） 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处 理的离心管和加样器吸头（带滤心） • 专用工作服和工作鞋 • 专用办公用品
扩增产物分析区
视检验方法不同而定。基本仪器设备如下： 1、 微量加样器（覆盖1-1000ul） 2、 可移动紫外灯（近工作台面） 3、 消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、 加样器吸头（带滤心） 4、 专用工作服和工作鞋 5、 专用办公用品
污染原因
还有一种容易忽视，最可能造成PCR 产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液 体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比 较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及 污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而 污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷 贝，因而由 其造成的污染是一个值得特别 重视的问题.
防止污染的方法
(四) 防止操作人员污染，使用一次性手套、吸头、小离心管应 一次性使用。
(五) 设立适当的阳性对照和阴性对照，阳性对照以能出现扩增 条带的最低量的标准病原体核酸为宜，并注意交叉污染的可能 性，每次反应都应有一管不加模板的试剂对照及相应不含有被 扩增核酸的样品作阴性对照。
(六) 选择质量好的Eppendorf管，以避免样本外溢及外来核酸 的进入，打开离心管前应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至 管底部。开管动作要轻，以防管内液体溅出。
核酸实验室检测培训课件
核酸实验室检测培训课件核酸实验室检测培训课件核酸实验室检测是一项重要的检测技术，广泛应用于医学、生物科学、食品安全等领域。
为了保证检测结果的准确性和可靠性，培训课件在核酸实验室检测中起着至关重要的作用。
本文将探讨核酸实验室检测培训课件的设计要点、内容组成和培训效果评估等方面。
一、设计要点核酸实验室检测培训课件的设计要点包括内容的结构化、信息的呈现方式和多样化的教学手段。
首先，课件的内容应该按照逻辑顺序进行组织，从基础知识到实验操作技巧，再到实验结果的分析与解读。
其次，信息的呈现方式应简洁明了，避免过多的文字叙述，可以借助图表、图片和动画等多媒体元素来加强学习效果。
最后，培训课件可以采用多样化的教学手段，如案例分析、互动问答和小组讨论等，以激发学员的学习兴趣和参与度。
二、内容组成核酸实验室检测培训课件的内容组成包括基础知识、实验操作技巧和实验结果的分析与解读。
在基础知识部分，可以介绍核酸的结构、功能和检测原理等内容，帮助学员建立起对核酸实验室检测的基本认识。
在实验操作技巧部分，可以详细介绍核酸提取、扩增和测序等实验步骤，包括实验所需材料、仪器设备的使用方法和实验操作的注意事项等。
在实验结果的分析与解读部分，可以通过实际案例，引导学员学会对实验结果进行科学的分析和判断，提高他们的实验技能和数据处理能力。
三、培训效果评估核酸实验室检测培训课件的效果评估可以通过考试、实验操作和实际应用等多种方式进行。
首先，可以设置一定难度的考试题目，测试学员对核酸实验室检测知识的掌握程度。
其次，可以进行实验操作的实践评估，通过观察学员的实验操作技巧和实验结果的准确性来评估其实验能力。
最后，可以进行实际应用的评估，让学员参与到真实的核酸实验室检测工作中，评估他们在实际应用中的表现和能力。
在核酸实验室检测培训中，培训课件起到了重要的指导作用。
通过合理的设计和内容组成，培训课件可以帮助学员系统地学习核酸实验室检测的理论知识和实验操作技巧，并提高他们的实验能力和数据处理能力。
核酸检测实验室生物安全要求(新冠病毒核酸检测专题培训课件)
一次性防护服、医用防护口罩（N95）、护目镜/面屏、一次性帽子、 双层手套、鞋/靴套、
一级生物安全防护
医用外科口罩、乳胶手套、工作服，可戴医用防护帽
标本 运送人员
口罩气密性测试
PPCAR实R验T室 T检H测R安E全E
医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册
基本要求
• 标本灭活及检测应当在生物安全二级实验室进行 • 同时采用生物安全三级实验室的个人防护 • 制定实验室生物安全体系文件（包括管理手册、程序文件、作业指导书、记录）
压力排风系统
风机
生物安全柜 摆放位置
气流的完整性容易受人员走动、窗 户的开关、门的开启和关闭、空调 运行等因素的影响。为避免上述因 素的干扰，生物安全柜应放在远离 人员活动、物品流动以及可能会扰 乱气流的地方。在安全柜的后面、 左右两侧面各留30 cm的空间，以利 于安全柜的维护。上端应留30～35 cnl空间，以便准确测量空气通过排 风过滤器的速度及排风过滤器的更 换。
核酸提取和检测 安全要求
在生物安全柜内操作
实验结束后安全要求
实验室空气消毒
紫外消毒30分钟或紫 外消毒机照射消毒1小 时。必要时可采用核 酸清除剂等试剂清除
实验室残留核酸。
工作台面消毒
每天实验后，使用0.2% 含氯消毒剂或75%酒精 进行台面、地面消毒
生物安全柜消毒
医疗废物垃圾袋包扎 后用0.2%含有效氯或 75%酒精喷洒外表面。 试管架、实验台面、 移液器等用75%酒精擦 拭。关闭生物安全柜， 紫外灯消毒30分钟。
手部 防护
足部 防护
防护 面屏
手消毒
呼吸
医用垃
防护
圾袋
13
14
l 呼吸道防护是核心！ Ø 穿戴时要先戴口罩再戴帽子，才能保证最后脱口罩。注意摘除口罩的场 所是否安全！
一级生物安全防护
医用外科口罩、乳胶手套、工作服，可戴医用防护帽
标本 运送人员
口罩气密性测试
PPCAR实R验T室 T检H测R安E全E
医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册
基本要求
• 标本灭活及检测应当在生物安全二级实验室进行 • 同时采用生物安全三级实验室的个人防护 • 制定实验室生物安全体系文件（包括管理手册、程序文件、作业指导书、记录）
压力排风系统
风机
生物安全柜 摆放位置
气流的完整性容易受人员走动、窗 户的开关、门的开启和关闭、空调 运行等因素的影响。为避免上述因 素的干扰，生物安全柜应放在远离 人员活动、物品流动以及可能会扰 乱气流的地方。在安全柜的后面、 左右两侧面各留30 cm的空间，以利 于安全柜的维护。上端应留30～35 cnl空间，以便准确测量空气通过排 风过滤器的速度及排风过滤器的更 换。
核酸提取和检测 安全要求
在生物安全柜内操作
实验结束后安全要求
实验室空气消毒
紫外消毒30分钟或紫 外消毒机照射消毒1小 时。必要时可采用核 酸清除剂等试剂清除
实验室残留核酸。
工作台面消毒
每天实验后，使用0.2% 含氯消毒剂或75%酒精 进行台面、地面消毒
生物安全柜消毒
医疗废物垃圾袋包扎 后用0.2%含有效氯或 75%酒精喷洒外表面。 试管架、实验台面、 移液器等用75%酒精擦 拭。关闭生物安全柜， 紫外灯消毒30分钟。
手部 防护
足部 防护
防护 面屏
手消毒
呼吸
医用垃
防护
圾袋
13
14
l 呼吸道防护是核心！ Ø 穿戴时要先戴口罩再戴帽子，才能保证最后脱口罩。注意摘除口罩的场 所是否安全！
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
6
5
7
1
2/8
25
0/5
0
27.04.2020
20
应用SAS9.0软件PROBIT分析结果
Analysis of Parameter Estimates Standard 95% Confidence Chi-
Parameter DF Estimate Error Limits Square Pr > ChiSq Intercept 1 -4.6852 1.5659 -7.7542 -1.6161 8.95 0.0028 log10(Dose) 1 4.8000 1.4699 1.9190 7.6810 10.66 0.0011
27.04.2020
27.04.2020
13
核酸实验室防污染措施
主要的污染源
扩增产物 标本之间产生的气溶胶 操作人员
手 衣服
27.04.2020
14
核酸实验室防污染措施
要有独立的空气处理系统. 各区始终处于完全分隔的状态，不能有空气的
直接相通 实验室保持合理的通风 对各区内的设备、物料进行标示，专区专用；
核酸检测实验室建立与应用
卫生部临检中心深圳市血液中心血 液病毒核酸检测联合实验室 叶贤林
核酸扩增检测实验室的建立
人员 场地 检测方法选择 实施方案
依据：卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》
（卫医发[2002]10号）
27.04.2020
2
核酸实验室人员要求
资质:经过临检中心PCR培训班培训并取 得上岗证；通过血站核酸实验室岗前培 训考试合格。
内标的作用 –质控整个反应。 –提示假阴性检测结果。 –监控反应的外部条件 –内标浓度要合适 –保持适度的内标失控.(<0.2%)
27.04.2020
18
核酸试剂灵敏度评估
概率单位回归分析 (PROBIT） 用于描述剂量-反应或不同因素间的剂量-
反应比较，反应结果应该是以二分类形式 表达的。 概率单位的回归方程为：
培训:①无”核酸”的概念形成, ②防污 染的概念③良好工作习惯的培养. ④报告 的正确发放.
后备人员的培养.
27.04.2020
3
样本离心交接区
试剂准备区
核
酸
实
标制备区
验
场
地 扩增区及扩增产物分析区
报告发放区
27.04.2020
4
方法选择: TMA与PCR
TMA
扩增原理 模拟自然 DNA 转录成 mRNA 的过程
每个循环可以生成100-1000个复制物， 在15-30分钟内可增加10亿倍复制物
以2n扩增，2～3 h就能将待 扩目的基因扩增放大10亿倍
27.04.2020
5
TMA的优点
自动化程度高 灵敏度高
扩增效率高：10n
缺点
不能绝对定量
27.04.2020
6
PCR的优点
缺点
易于自动化 灵敏度高 扩增效率高
27.04.2020
12
标准操作规程(SOP)的编写
核酸标本离心交接操作规程 核酸标本提取及汇集操作规程(科华) 核酸标本扩增检测操作规程（科华） 核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON） 核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件） 核酸标本检测复检操作规程 生物安全柜标准操作规程 可移动紫外线灯标准操作规程 低温高速离心机标准操作规程 ABI 7300型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程
27.04.2020
16
核酸实验室污染后措施
实验室污染后，如何处理？
通风 次氯酸钠溶液（扩增区不宜使用） HCL溶液（吸头） 紫外线（固定、移动） 酒精喷洒（空气）
应设计有备用实验室 : 如开设独立的报 告发放区作为备用
27.04.2020
17
血筛核酸检测的内标的作用
中心理念：监测全程的实验过程包含病毒核 酸提取、反转录及扩增过程的效率。
合格标本发布结果
27.04.2020
待查标本复检
合格标本
不合格标本
单人份拆分 反应性标本
淘汰 不合格标本
9
检测流程(2):常规筛查合格单人份标本检测流程
27.04.2020
10
检测流程(3):平行检测流程
常
规
检
样测
本
清
点 交
核 酸 单
接份
检
测
不合格标本 合格标本
阴性标本
反应性标本
27.04.2020
阳性或可疑 结果淘汰
合格标本发布结果
单项目反应性 无反应性
阳性或可疑 结果淘汰
11
标准操作规程(SOP)的编写
核酸实验室设置与管理规范 核酸实验室标本检测流程 核酸实验室岗位职责 核酸实验室关键试剂管理规范 核酸实验室仪器设备管理规范 核酸实验室检测标本管理规范 核酸实验室室间质量评价规范 核酸实验室记录管理制度 核酸实验室生物防护规范 核酸反应性献血者追踪规程 核酸实验室检测应急措施
靶目标 酶
RNA MMLV逆转录酶及T7 RNA聚合酶
PCR 模拟自然 DNA复制的过程
DNA DNA聚合酶
反应体系
两种酶，两条引物，dNTP, NTP
一种酶，一对引物，dNTP
温度条件
扩增仪器 扩增产物
恒温（41.5℃ ） 水浴箱或者加热块
RNA
循环导热 （变性，退火，延伸）
热循环仪
DNA
扩增速度
PROBIT Pi=A+BXi
27.04.2020
19
用国际标准品稀释成不同浓度评估血液HBV 核酸筛查方法，结果如下。请计算95%的检 出限量及可信范围CI
序号 浓度 （IU/ml） 阳性数/重复数 概率
1
500
3/3
100
2
100
6/6
100
3
50
8/8
100
4
30
7/8
87.5
5
10
4/8
50
其他物品不得混用（例如：笔、纸张） 空气：试剂准备区→标本制备区→扩增区→产
物分析区 试剂阳性对照储存在标本制备区 使用带滤芯的吸头
27.04.2020
15
核酸实验室防污染措施
使用外排式的生物安全柜 自配试剂应分装成小规格，未用完的试剂应废
弃 使用次氯酸钠溶液消毒（台面、地面） 使用1mol/L的HCL溶液（吸头） 使用紫外线照射（空气和台面） 使用无水乙醇溶液（空气喷雾）
汇集拆分过程繁琐
拆分可减低非反应性比率
27.04.2020
7
核酸试剂质控
试剂的确认 试剂运输过程的控制(温度\条件\时限) 灵敏度的要求 内标的要求
试剂涵盖的基因型
27.04.2020
8
检测流程(1):常规筛查合格汇集标本检测流程
标本清点、离心 常规检测
合格标本 标本交接、电脑锁定
8 人份汇集 核酸提取 扩增检测 阴性标本