药物分析 第5章 药物的含量测定

A Ig
1 ECL T
紫外-可见分光光度法

物质吸收紫外和可见光区的电磁波产生的吸收光谱 进 行定性和定量分析的方法 基本原理：朗伯─比耳定律

1 A Ig ECL T
A为吸收度； T为透光率； L为液层厚度，单位为cm ； E为吸收系数，常用的是百分吸收系数()，其物理意义为当溶液浓度为1 ％(g/ml)，液层厚度为1cm时的吸收度值； C为100ml溶液中所含被测物质的量g（按干燥品或无水物计算）

仪器的基本结构
光源 单色器 吸收池 检测器 数据记录处理
光源：200～400nm为紫外光区（氘灯）、400～850nm为可见 光区 （钨灯）

仪器的校正和检定
（1）波长的准确度 （2）吸收度的准确度 （3）杂散光的检查
4.吸光度的测定
《中国药典》2010版对吸光度的测定做了以 下要求：
（1）溶剂：
（5）务必注意经常保持硅胶的干燥，目的是保护光学元件和光电放大器 系统不致受潮损坏而影响仪器的正常工作。
（6）仪器经过搬动请及时检查并纠正波长精度，并应经常校准波长精度。
第3节 色谱分析法
色谱法的分离过程：是被分离组分在互不相溶的两相间
分配平衡的过程，由于混合物中各组分的分配系数不同，
或被吸附剂吸附能力的不同，则被流动相携带移动的速度
色谱柱的维护
1.最好使用预柱保护分析柱； 2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围； 3.避免流动相组成及极性的剧烈变化； 4.样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤，流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气； 5.每次做完分析，要进行冲洗：分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质，建 议用90％甲醇冲洗30～60min； 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，要先用10％甲醇冲洗1小时 左右，再梯度走到90％甲醇冲洗30～60min（若用多元泵）。 若长时间不用该色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存； 6.若流动相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用， 不能再做其它物质分析用； 7.普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析； 8.压力升高是需要更换预柱的信号。
也不同，达到分离的目的。
液相色谱法：以液体为流动相
气相色谱法：以气体为流动相
一、高效液相色谱法
高效液相色谱法：采用高压输液泵将规定的流动相泵
入装有填充剂的色谱柱将待测组分进行分离测定的色谱方
法。
化学键合相色谱：最广泛的
将固定相的官能团键合在载体上，形成的固定相 ，一般属于
分配色谱法，不易流失
（一）基本概念：
的过程。
校正因子（F）：表示滴定液准确浓度与标示浓
度的比值。其范围应在1.05～0.95之间，超出该范 围应加入适当的溶质或溶剂予以调整，并重新标 定。
标定注意事项 ：
a.操作中所用的天平、滴定管、容量瓶和移液管均应校正合格的。 b.标定工作应在室温（10℃～30℃）下进行，并记录标定时的温度。 c.根据滴定液的消耗量选用适宜的滴定管，盛装滴定液前，先用少量滴 定液淋洗三次，盛装滴定液后，应用小烧杯盖住管口。 d.标定中的空白试验，是指在不加供试品或以等量溶剂代替供试液的情 况下，按同法滴定所得的结果。 e.标定工作应由初标者和复标者在相同条件下各做3份平行试验，3份平 行试验结果的相对标准偏差（RSD）不得大于0.1%；初标者的平均值 和复标者的平均值的相对标准偏差（RSD）也不得大于0.1%；最后结 果按初、复标二者的平均值计算，取4位有效数字。 f.配制后的滴定液按药典规定的贮藏条件储存，并在瓶外贴上标签，注 明滴定液名称、标示浓度、真实浓度或F值、配制和标定日期、标定 时的温度、配制者、标定者、复标者等。 g.当滴定液标定时间过长（一般不超过3个月）、或标定与使用时的温度 超过10℃时，应加温度补偿值或重新进行标定，。 h.当滴定液出现浑浊或其他异常情况时，不得使用。倒出剩余的滴定液 不得再倒回原瓶，避免污染。
求出其含量。
由于显色时影响显色深浅的因素很多，应取供试品与对照品或 标准品平行操作。
d.计算分光光度法
原理：在两个不同的波长处测定吸光度，以两波 长处吸光度的差值作为定量的依据来测定含量的 方法。 应用本注意事项
（1）空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先
1.色谱图：信号---时间曲线 2.基线：无样品时，用流动相冲洗检测出的流出曲线，一般平行于时间 轴 3.噪声：基线信号的波动 4.漂移：基线随时间的变化 5.色谱峰： 6.拖尾因子：衡量色谱峰的对称性， 应为0.95-1.05 7.峰宽： 8.半峰宽 9.标准偏差 10.峰面积 11.保留时间 12.理论塔板数（柱效）：表示色谱柱的分离效率
沉淀滴定法：以沉淀反应为基础，多以硝酸银为
滴定液，也称银量法。按所用指示剂的不同分为 铬酸钾指示剂法 铁铵矾指示剂法 吸附指示剂法
非水滴定法：在非水溶剂（有机溶剂与不含水的
无机溶剂）中进行滴定分析的方法。 非水碱量法：是以冰醋酸为溶剂，高氯酸为滴定液， 甲紫微指示剂，测定弱碱性药物及其盐类 非水酸量法：是在碱性溶液中，以甲醇钠为滴定液， 麝香草酚蓝为指示剂，二甲基甲酰胺等为溶剂， 滴定弱酸性药物
（2）空白试验校正： （3）测定波长的检查 （4）供试品溶液的浓度： 应考虑使吸光度在0.3～0.7范围内
（5）狭缝宽度的选择
5.应用
（1）鉴别和检查：比较吸收光谱的特征参数、吸光度比 值、吸收光谱的一致性 （2）含量测定：
a.对照品比较法：
A样 C对 稀释倍数 含量% 100% M样 A对 V
⑴滴定：将滴定液从滴定管滴加到被测物质溶液中 的过程 ⑵化学计量点 ：滴加的标准溶液与待测物质按照一 定的化学反应式定量反应完全之点 ⑶滴定终点 ：在滴定过程中，指示剂正好发生颜色 变化的转变点。 ⑷指示剂：能够指示终点变化的试剂。
⑸滴定误差：滴定终点与化学计量点不一定恰好符 合，它们之间存在着很小的差别，由此引起测定 结果的误差称为滴定误差。 （6）标准溶液 已知准确浓度的溶液（mol/L）
2.检测器
常用紫外检测器 其次有二极管阵列检测器(DAD) 荧光检测器 示差折光检测器 蒸发光散射检侧器
电化学检测器和质谱检测器等
（五） 系统适用性试验
定义：指用规定的对照品对色谱系统进行试验， 应符合要求。 包括理论板数 分离度 重复性 拖尾因子等
酸碱滴定：在水溶液中以酸碱中和反应来测定物质含量的
方法
配位（络合）滴定法：以形成稳定配合物的配位反应为
基础的滴定分析法。 用于金属离子的测定 采用金属指示剂（如铬黑T），如EDTA（乙二胺四醋酸二钠）
氧化还原滴定法：
碘量法：如碘滴定液、硫代硫酸钠滴定液、淀粉指示剂 铈量法：以硫酸铈[Ce（S04）2]作为滴定液 、邻二氮菲作指 示剂 亚硝酸钠滴定法： 溴量法 ：Na2S2O3滴定液 、Br2滴定液
b.吸收系数法 ：
A C V 稀释倍数 V 稀释倍数 1% E L 100 100 1cm 100% M 样品 M 样品
含量%=
c.比色法：供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区
虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显 色后，测定吸光度以计算其含量的方法 应用比色法时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至 同一体积，显色后，以相应试剂为空白，在各品种规定的波长处 测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲 线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并
2.反相色谱法
流动相极性大于固定相
一般用非极性物质作固定相，极性溶剂(如水、甲醇、己腈等)作流动相，主要用 于分离非极性或弱极性化合物，极性大的组分先流出，极性小的组分后流出。
（三）固定相和流动相
1.固定相
常用化学键合相，分极性和非极性键合相，如
十八烷基硅烷键合硅胶（C18或ODS）和辛基硅烷键合 硅胶（C8）为最常用的非极性键合相，用于反相色谱法；
量分析法、光谱分析法和色谱分析法3种类型。
化学分析法
重量分析 容量分析
含量测定
仪器分析法
紫外 高效液相色谱法 气相色谱法
效价测定（生物学法）
第1节容量分析法（滴定法）
1.滴定分析：是将一种已知准确浓度的标准溶液滴
加到被溶液中，直到化学反应完全为止，根据标 准溶液的浓度和体积求得被测组份含量的一种方 法。 在进行滴定分析时： 一方面要会配制滴定剂溶液并能准确 测定其浓度 另一方面要准确测量滴定过程中所 消耗滴定剂的体积
2.滴定液的配制和标定
基准物质：能用来直接配制标准溶液的化学试剂
滴定度：每毫升标准溶液相当于被测物质的质量
（g或mg），以符号T表示
直接法（不需标定）
间接法（标定）：先将其配制成近似于所需浓度
的溶液，然后利用基准物质或另一种标准溶液 来确定其准确浓度。
标定：用基准物质或标准溶液准确测定滴定液浓度
氨基和氰基硅烷键合相为常用的极性键合相，用于正相 色谱法。
2.流动相
有机溶剂+水混合
一般为色谱纯试剂，经0.45um的微孔滤膜过滤，需脱气处理
（四）仪器的基本结构
日本岛津液相色谱仪
1.色谱柱
柱管-不锈钢，填充硅胶 和化学键合固定相
内径4.6mm
长15cm、20cm和25cm的 三种，
如安捷伦色谱柱、迪马 色谱柱、迪马钻石柱 等。
V F T 100 % W 1000
3.滴定的分类
按反应方式分类：
直接滴定法：滴定液与被测物质直接反应
V F T 含量%= 100 % W 1000 间接滴定法：包括剩余滴定和置换滴定
(V0 V ) F T 100 % 含量%= W 1000
按反应类型分：
过滤，并弃去初滤液。 （2）测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对 照，采用1cm的石英吸收池。