小麦谷蛋白亚基的快速提取分离及SDS-PAGE分析

万方数据
4 ,
陕西师范大学学报 （自然科学版）
第; <卷
上它们往往相互重叠， 而且 ! 带 "# $ % & 溶解性差， 电荷少， 提取分离比较困难， 因此低分子量麦谷蛋白 亚基的 提 取 分 离 和 纯 化 方 法 是 目 前 研 究 的 重 点’ $ .& . & $ / 0 % 1 方 法， % ( * + % ( * +等 , 提 出 两 步 ) ) ［ ］ 2 等 提出比较简单的一步 但 $ .& . & $ / 0 % 1 方法， 这些方法操作复杂， 步骤较多， 对大量样品的快速分 离鉴定分析比较困难’ 我们参照文献 ［ ， ］ 的方法 3 并加以改进， 用4 3 5 乙醇在室温、 6 3 5 异丙醇在 7 3 可以除去清蛋白、 球蛋白和醇溶 8下反复多次提取， 蛋白， 尤其消除了醇溶蛋白对 ! "# $ % & 的背景干 扰， 并且分别在9 3 5和, 3 5丙酮浓度下实现一步分 离 :"# ， 方法简单、 快速， 提取效 $ % &和 ! "# $ % & 率高’ 此方法也适合于大量制备小麦高、 低分子量麦 谷蛋白亚基’
成， 分子量较小， 主要决定小麦面粉面团的延展性+ 麦谷蛋白是由许多多肽链经分子间二硫键结合形成 的大聚合体， 在还原状态下， 根据在 = = $ > ? < @中 迁移率的不同， 麦谷蛋白亚基又分为高分子量麦谷
收稿日期： ! " " # $ " # $ % & 基金项目： 陕西省计划委员会基金资助项目 （ ［ ］ % ’ ’ ( ) ! !号）
小麦谷蛋白亚基的快速提取 分离及 ! " ! # $ % & ’ 分析
段淑娥， 赵文明
（西安交通大学 生命科学与技术学院，陕西 西安 ( ） % " " ) ’
摘
要： 用( 以二硫苏糖醇 （为还原剂， 在& " ,乙醇和& " ,异丙醇除去醇溶蛋白， . .） " , 异丙醇，
／ （ ） 缓冲液中提取总麦谷蛋白亚基， 加入丙酮至浓度为 ) 高分 " + " /0 1 2 3. 4 5 6 $ 7 8 2 7 为/ + " " , 时， 9 子量麦谷蛋白亚基 （7:; ） 沉淀析出； 继续加入丙酮至 / 析出低分子量麦谷蛋白亚基 $ < = " , 时， （3 ） 在# 结果表明， 该方 :; $ < = + + # ,浓缩胶和% " ,分离胶的不连续体系中进行 = = $ > ? < @ 电泳， 法可以有效地除去醇溶蛋白对麦谷蛋白亚基电泳分析的背景干扰， 7:; $ < =和 3 :; $ < =的提取、 分离一步完成， 操作简便， 时间短， 对大量小麦样品的 7:; 和 可以快速分离、 提纯 $ < = 3 :; $ < = 和鉴定+ 关键词： ； ；提取；分离； 7:; $ < = 3 :; $ < = = = $ > ? < @ 中图分类号： 文献标识码： = & % ! + # % % ?
陕西师范大学学报 （自然科学版） 第# !卷 第%期 Y 1 2 + # ! B 1 + % 年 月 （B ） ! " " ) # Q 1 D 4 H L 2 1 J = C L L H T 5B 1 4 0 L 2A H 5 S E 4 6 5 R L R D 4 L 2 = K 5 E H K E@ M 5 R 5 1 H : L 4 + ! " " ) N ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! 文章编号： （ ） % * ( ! $ ) ! ’ % ! " " ) " % $ " " ( ( $ " #
［ ］ % 蛋白 （ ） 两类 麦醇蛋白由单一的多肽链组 2 5 L M 5 H + I
蛋白 亚 基 （7:; 和低分子量麦谷蛋白亚基 $ < =）
［ ］ ! （ ） 大量研究表明， 小麦胚乳中 7:; 3 :; $ < = + $ < =和 3 :; $ < =的组成和含量对小麦面粉的加工品 ［ ］ # 质和面包的烘烤品质起着决定作用 +
( ) + , . ) / ) 0 + 1 2) 2 ,! " ! # $ % & ’) 2 ) 3 + 1 56 7 . ) 0 3 9 0 . 2 + 29 : 9 2 + 0 * * 4 8
， A ? B= C D $ E F 7 ? G; E H $ 0 5 H I （8 ， ， ， ， ） 1 2 2 E E 1 J3 5 J E= K 5 E H K E L H M. E K C H 1 2 1 O 5 P L HQ 5 L 1 R 1 H A H 5 S E 4 6 5 R O 5 P L H( % " " ) ’ = C L L H T 5 8 C 5 H L I I N I N ： ， % : 0 / ) ; 0 ? J R E 4M E 2 E R 5 H 2 5 L M 5 HU 5 R C( " ,E R C L H 1 2 L H M& " ,! $ 4 1 L H 1 2 R C ER 1 R L 2 2 D R E H 5 H6 D V D H 5 R 6 II 9 9 I ， ／ ， L 4 E E T R 4 L K R E M5 H& " ,! $ 4 1 L H 1 2 " + " /0 1 2 3. 4 5 6 $ 7 8 2V D J J K 1 H R L 5 H 5 H ,. .+; C E HL K E R 1 H E 9 9 I% （7:; ） ， K 1 H K E H R 4 L R 5 1 H 5 6 L M M E M R 1 ) " ,， C 5 C $ 0 1 2 E K D 2 L 4 $ U E 5 C R 2 D R E H 5 H 6 D V D H 5 R 6 $ < = L 4 E 4 E K 5 5 R L R E M I I I 9 9 L H M L K E R 1 H EK 1 H K E H R 4 L R 5 1 H5 6K 1 H R 5 H D EL M M E MR 1/ " ,， D 4 E M 2 1 U $ 0 1 2 E K D 2 L 4 $ U E 5 C RI 2 D R E H 5 H6 D V D H 5 R 6 9 I I （3 ） （ :; $ < = L 4 E9 4 E K 5 5 R L R E M + W H= = $ > ? < @E 2 E K R 4 1 C 1 4 E 6 5 6 # + # ,6 R L K X 5 H E 2 L H M% " ,4 E 6 1 2 S 5 H 9 9 II I ） E 2 6 6 R E 0，7:; $ < =L H M3 :; $ < =L 4 EI 2 5 L M 5 H $ J 4 E EV L K X 4 1 D H M + . C 5 60 E R C 1 MK L HM E 2 E R EI 2 5 L M 5 H I N I E J J E K R 5 S E L H M4 L 5 M6 E L 4 L R E7:; $ < =L H M3 :; $ < =V H E6 R E H M6 C 1 4 RR 5 0 E +. C E0 E R C 1 M5 6 9 9 N1 9L ， L 2 5 K L V 2 E R 1U C E L R 4 1 R E 5 H 6 E L 4 L R 5 1 HS L 4 5 E R 5 M E H R 5 J 5 K L R 5 1 HL H MS L 4 5 E R 1 M 5 J + 9 9 9 9 N N0 N ： ； ； ； ； < . 1 / , 7:; $ < = 3 :; $ < = E T R 4 L K R 5 1 H 6 E L 4 L R 5 1 H = = $ > ? < @ 9 46 小麦是世界上栽培最早的粮食作物之一， 而且 分布面积广+ 在全世界的粮食总产量中， 小麦位居第 一+ 小麦贮藏蛋白质主要为麦谷蛋白 （ ） 和麦醇 2 D R E H I
! 实验
! ’ ! 仪器与试剂 供试小麦品种由咸阳市农科所提供， 其中武农 、 陕; 、 小偃 < 、 中国春等 为 普 通 小 麦， 9 , 6 9 < , 9加 、 、 （ ） 、 （ ） 、 （ ） 等为超大穗小 4 2 ; 3 7=< 2 < 3 4 < 3 3 < 3 < 2 麦’ 使用仪器主要有： 美国 & > %"0; ? ; 3 型高速冷 冻离心机， （北京六一 . . @— < 9! 型垂直板电泳仪 仪器厂） ， — 超纯水器 （美国 " A B B A C " > ! ! > / D E 1公 司） ’ 提取用有机试剂乙醇、 异丙醇为常规试剂， 纯度 不低于分析纯； 电泳所用试剂均购自华美生物工程 公司， 实验用水由 " —C 超纯水器制备’ A B B A 提取液 0： 提取液 F ： 提 4 3 5乙醇； 6 3 5 异丙醇； 取液 G： ／ 6 3 5异丙醇， 5. H H， 3 ’ 3 ,I J B !H K A L $ : G B （) （ 临 用 前 现 配） ； 提 取 液 .： : 为, ’ 3）缓 冲 液 ／ （) ， : 为7 3 ’ 3 7 ;I J B !H K A L $ : G B ’ ,） 6 5 巯基乙醇， ， < 5& . & 3 5甘油’ ! " # $%& ’ ( )和 * %& ’ ( )的提取与分离 称取; 加 3 3I 3I ! 离心管中， M 小麦面粉于 9 于室温提取 ; ， 6I ! 提取液 0 制成悬浮液， 3I A N 其间不断摇动， ／ （3 8） ， 弃 9 33 3 3K I A N 离心 6I A N 上清液， 重复提取一次’ 上述残渣加6I ! 提取液 F 充分混匀后于7 ， ／ 3 8水浴提取 ; 3I A N 9 33 3 3K I A N 离心 6I （ ， 弃去上清液后再重复提取一次， A N 3 8） 并用 于得到的残渣中加入 4 ’ 6I ! 溶液 F 洗涤一次； （ 随 时 摇 动） ， ;I ! 提 取 液 G， 7 3 8提取; 3I A N ／ （3 8） ， 保留上清液’ 残渣 9 33 3 3 K I A N离心 6I A N 中再加入;I ／ ! 提取液 G 混匀， 9 33 3 3K I A N离心 6 万方数据