艾滋病感染实验室检测
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④可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测； ⑤可对病毒基因进行基因分型，比血清分型更有价值； ⑥通过对病毒耐药基因的检测，可预测或发现病毒的耐药性； ⑦可用于先天性或围产期获得性病毒感染的诊断； ⑧灵敏度高（可达ng甚至fg水平，理论上能检出单个病毒基
因），特异性好、快速、简捷。
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
3）在HIV抗体未产生之前（窗口期）辅助诊断 急性原发感染；
4）HIV亚型分析；确定人群中HIV的变异； 5）监测临床抗病毒药物治疗效果； 6）检测病毒的耐药性突变。
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
（二）HIV病毒分离培养
将病人淋巴细胞与正常人的淋巴细胞共同培 养，适当周期培养后测定培养液HIV p24抗原 /RT，从而判断病人的淋巴细胞是否受到HIV感 染。
–其他相关检测方法:
– 免疫功能测定：CD4/CD8检测
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
（一）HIV核酸检测
1. HIV核酸定性检测：通常使用PCR或
RT-PCR技术，用于HIV感染的辅助诊断。
2. HIV核酸定量检测：使用RT-PCR, NASBA,
bDNA等技术，常用于监测HIV感染者的病程 进展和抗病毒治疗效果。
逆转录酶
PCR反应图解
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
bDNA信号扩增技术
主 要 包 括 分 枝 DNA 检 测 （ branched DNA assays） 和 杂 交 捕 获 检 测 （ hybrid capture assays）。
检测时病原模板并不扩增，而是通过 对检测信号的放大来实现对病毒核酸的检 测和定量。
2.毒株可用于抗病毒药物筛选，耐药性及其生物学特 性等研究。
3.用定量细胞培养法可测定细胞的半数感染单位 （TCID50）和半数抑制药物浓度（IC50）用于抗病 毒药物测定。或消毒杀菌药品的效果评价。
本法一般不用于常规诊断。
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（三）HIV p24抗原测定及适用范围：
定量NASBA技术：
是由一对引物引导的，连续均一的体外特异核苷酸 序列的等温扩增的酶促反应过程。 优点：操作十分简单，只需将制备好的模板直接加到 反应体系中，恒温41℃培育1.5～2小时，即可将模板 扩增109倍。
NASBA反应体系包括AMV反转录酶、RNA酶H、 T7RNA聚合酶、核糖核苷三磷酸、脱氧核糖核苷三磷 酸、两个特异的引物及适宜的缓冲液。
结果作为辅助诊断的依据。2次不同时间的样本核酸检测均为阳性提 示为HIV感染，均为阴性提示未感染。同时18个月时做抗体检测， 当18个月HIV抗体确证阳性方可诊断 HIV感染。
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核酸检测主要应用：
2）对18个月婴儿HIV抗体WB试验的不确定 （或可疑）结果进一步做辅助诊断；
细胞培养与血清学方法相比，专一性很强， 不会出现假阳性。但其敏感性不如血清学或 PCR。
必须在P3级生物安全实验室进行。
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HIV病毒分离培养的应用
1.能得到最原始的临床毒种，其重要意义在于确认对 WB不确定的可疑感染者及母婴传播、婴幼儿HIV感 染者。对法律纠纷或职业暴露明确毒主株亲缘关系。
是一种血清学夹心法EIA。 （1） HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。 （2）HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助诊断。 （3）第四代HIV抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反
应，但HIV-1抗体确认试验呈阴性者的辅助诊断。 （4）监测病程进展和抗病毒治疗效果。
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NASBA的反应分为两相：循环相和非循环相。
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NASBA图解
引物1
逆转录酶
liniar phase
RNA酶H
amplification phase
引物 2
逆转录酶 引物 2
T7 RNA多聚酶
逆转录酶
RNA酶 H 引物1
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HIV-1 P24抗原检测结果报告和解释：
（1）HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中 和试验确认，若阳性标本的OD值比中和反 应前减少50%以上，才确定为HIV P24抗原 结果阳性。
（2）HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的 辅助诊断依据，不能据此确诊。
（3）HIV-1P24抗原阴性结果只表示在本试 验中无反应，不能排除HIV感染。
–
1. 核酸检测（ cDNA测定-PCR、 RNA测定-病毒载量）
– 2. 病毒培养分离
– 3. P24抗原检测
–常用HIV抗体检测方法:
– 初筛：1.酶联免疫吸附法 ELISA：第三代、第四代
–
2.快速检测 RT：金标、硒标
–
3.简单法 PA: 明胶颗粒凝集
– 确证：免疫印迹法 WB:（Western Blot）、RIBA
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核酸检测特点：
① 能 够 用 于 常 规 不 能 培 养 和 分 离 的 病 毒 的 检 测 （ 如 HBV、 HCV、HIV等）；
②仅需少量标本或标本中仅含少量病毒也能检测；
③在病毒感染的急性期抗体尚未出现之前，病毒感染的诊断 主要依靠NAT，适用于早期诊断；
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bDNA HIV 核酸检测的反应原理
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
核酸检测主要应用：
1） 早期诊断围产期HIV感染的辅助诊断： 宫内感染（检测定义）： 新生儿出生48小时内，检测到病毒核
酸，或病毒培养阳性，则提示孕期（宫内）感染。 对围产期感染儿童在18月龄前的早期诊断，目前以2次核酸检测
艾滋病感染实验室检测
HIV相关检测目的
1.临床诊断 2.安全输血 3.流行病学调查、高危人群监测 4.自愿咨询检测VCT 5.抗病毒治疗后效果检测 6.抗病毒治疗耐药性检测 7.免疫功能测定
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HIV感染的实验室源自文库测方法
–常用HIV病原学检测方法:
因），特异性好、快速、简捷。
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3）在HIV抗体未产生之前（窗口期）辅助诊断 急性原发感染；
4）HIV亚型分析；确定人群中HIV的变异； 5）监测临床抗病毒药物治疗效果； 6）检测病毒的耐药性突变。
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（二）HIV病毒分离培养
将病人淋巴细胞与正常人的淋巴细胞共同培 养，适当周期培养后测定培养液HIV p24抗原 /RT，从而判断病人的淋巴细胞是否受到HIV感 染。
–其他相关检测方法:
– 免疫功能测定：CD4/CD8检测
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（一）HIV核酸检测
1. HIV核酸定性检测：通常使用PCR或
RT-PCR技术，用于HIV感染的辅助诊断。
2. HIV核酸定量检测：使用RT-PCR, NASBA,
bDNA等技术，常用于监测HIV感染者的病程 进展和抗病毒治疗效果。
逆转录酶
PCR反应图解
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
bDNA信号扩增技术
主 要 包 括 分 枝 DNA 检 测 （ branched DNA assays） 和 杂 交 捕 获 检 测 （ hybrid capture assays）。
检测时病原模板并不扩增，而是通过 对检测信号的放大来实现对病毒核酸的检 测和定量。
2.毒株可用于抗病毒药物筛选，耐药性及其生物学特 性等研究。
3.用定量细胞培养法可测定细胞的半数感染单位 （TCID50）和半数抑制药物浓度（IC50）用于抗病 毒药物测定。或消毒杀菌药品的效果评价。
本法一般不用于常规诊断。
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
（三）HIV p24抗原测定及适用范围：
定量NASBA技术：
是由一对引物引导的，连续均一的体外特异核苷酸 序列的等温扩增的酶促反应过程。 优点：操作十分简单，只需将制备好的模板直接加到 反应体系中，恒温41℃培育1.5～2小时，即可将模板 扩增109倍。
NASBA反应体系包括AMV反转录酶、RNA酶H、 T7RNA聚合酶、核糖核苷三磷酸、脱氧核糖核苷三磷 酸、两个特异的引物及适宜的缓冲液。
结果作为辅助诊断的依据。2次不同时间的样本核酸检测均为阳性提 示为HIV感染，均为阴性提示未感染。同时18个月时做抗体检测， 当18个月HIV抗体确证阳性方可诊断 HIV感染。
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
核酸检测主要应用：
2）对18个月婴儿HIV抗体WB试验的不确定 （或可疑）结果进一步做辅助诊断；
细胞培养与血清学方法相比，专一性很强， 不会出现假阳性。但其敏感性不如血清学或 PCR。
必须在P3级生物安全实验室进行。
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
HIV病毒分离培养的应用
1.能得到最原始的临床毒种，其重要意义在于确认对 WB不确定的可疑感染者及母婴传播、婴幼儿HIV感 染者。对法律纠纷或职业暴露明确毒主株亲缘关系。
是一种血清学夹心法EIA。 （1） HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。 （2）HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助诊断。 （3）第四代HIV抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反
应，但HIV-1抗体确认试验呈阴性者的辅助诊断。 （4）监测病程进展和抗病毒治疗效果。
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NASBA的反应分为两相：循环相和非循环相。
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
NASBA图解
引物1
逆转录酶
liniar phase
RNA酶H
amplification phase
引物 2
逆转录酶 引物 2
T7 RNA多聚酶
逆转录酶
RNA酶 H 引物1
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HIV-1 P24抗原检测结果报告和解释：
（1）HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中 和试验确认，若阳性标本的OD值比中和反 应前减少50%以上，才确定为HIV P24抗原 结果阳性。
（2）HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的 辅助诊断依据，不能据此确诊。
（3）HIV-1P24抗原阴性结果只表示在本试 验中无反应，不能排除HIV感染。
–
1. 核酸检测（ cDNA测定-PCR、 RNA测定-病毒载量）
– 2. 病毒培养分离
– 3. P24抗原检测
–常用HIV抗体检测方法:
– 初筛：1.酶联免疫吸附法 ELISA：第三代、第四代
–
2.快速检测 RT：金标、硒标
–
3.简单法 PA: 明胶颗粒凝集
– 确证：免疫印迹法 WB:（Western Blot）、RIBA
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
核酸检测特点：
① 能 够 用 于 常 规 不 能 培 养 和 分 离 的 病 毒 的 检 测 （ 如 HBV、 HCV、HIV等）；
②仅需少量标本或标本中仅含少量病毒也能检测；
③在病毒感染的急性期抗体尚未出现之前，病毒感染的诊断 主要依靠NAT，适用于早期诊断；
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
bDNA HIV 核酸检测的反应原理
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
核酸检测主要应用：
1） 早期诊断围产期HIV感染的辅助诊断： 宫内感染（检测定义）： 新生儿出生48小时内，检测到病毒核
酸，或病毒培养阳性，则提示孕期（宫内）感染。 对围产期感染儿童在18月龄前的早期诊断，目前以2次核酸检测
艾滋病感染实验室检测
HIV相关检测目的
1.临床诊断 2.安全输血 3.流行病学调查、高危人群监测 4.自愿咨询检测VCT 5.抗病毒治疗后效果检测 6.抗病毒治疗耐药性检测 7.免疫功能测定
2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班
HIV感染的实验室源自文库测方法
–常用HIV病原学检测方法: