高效液相色谱-荧光检测法同时测定人体尿液中的多种蝶呤类化合物
四种原花青素含量测定方法比较
四种原花青素含量测定方法比较一、本文概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，因其强大的抗氧化和生物活性，近年来在营养学、食品科学、医药学等领域受到了广泛关注。
其中，四种主要的原花青素——儿茶素（Catechin）、表儿茶素（Epicatechin）、没食子儿茶素（Gallocatechin）和表没食子儿茶素（Epigallocatechin）的含量测定对于评估食品营养价值、研究药物作用机制以及监控产品质量具有重要意义。
本文旨在比较和分析目前常用的四种原花青素含量测定方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法（UV-Vis）、荧光光谱法（Fluorometry）和质谱法（MS），以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
通过比较这些方法的准确性、灵敏度、操作简便性以及成本效益等方面的优劣，我们期望能为科研人员和企业选择最适合的原花青素含量测定方法提供指导。
二、方法概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，具有强效的抗氧化性能，对多种疾病具有预防和治疗作用。
由于其生物活性的重要性，对原花青素含量的准确测定显得尤为重要。
目前，常用的原花青素含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法、薄层色谱法（TLC）和毛细管电泳法（CE）。
这些方法各有优缺点，适用于不同的样品类型和实验条件。
高效液相色谱法（HPLC）具有高分辨率、高灵敏度、高重现性等优点，可以同时分离和测定多种原花青素。
但是，该方法需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员，且样品处理过程繁琐，分析时间较长。
紫外可见分光光度法是一种简便、快速的测定方法，适用于大量样品的初步筛选。
然而，该方法只能测定总原花青素的含量，无法区分不同种类的原花青素，且易受样品中其他色素的干扰。
薄层色谱法（TLC）是一种基于原花青素在薄层板上的分离和显色进行测定的方法。
高效液相色谱_-内标法测定香辛料中15_种多环芳烃类污染物(PAHs)
高效液相色谱-内标法测定香辛料中15种多环芳烃类污染物（PAHs）侯美玲*，冯桂蓉，蔡小钦，黄丹丹，董宪兵（重庆市食品药品检验检测研究院，国家市场监管重点实验室（调味品监管技术），重庆 401121）摘要：该研究建立了高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）同时分析香辛料中15种多环芳烃类污染物（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs）含量的内标检测方法。
样品经氢氧化钠溶解，乙腈萃取，正己烷复溶后，过弗罗里硅土（Florisil）小柱净化浓缩，供HPLC 检测，苯并[a]芘-D12作为内标定量。
该方法在0~100 ng/mL内线性关系良好，辣椒中PAHs检出限：0.5~3.0 μg/kg；定量限2.0~10.0 μg/kg；花椒中检出限：0.5~1.0 μg/kg；定量限2.0~3.0 μg/kg。
在2.0、10.0、50.0 μg/kg 3个浓度水平，辣椒中回收率范围为60.58%~119.48%，相对标准偏差（Relative Standard Deviations，RSD）（n=6）为1.25%~9.61%，花椒中回收率为60.46%~119.24%，RSD （n=6）为1.10%~8.56%。
5种地产香辛料中∑PAHs含量由高到低为：青花椒（561.2 μg/kg）＞二荆条（448.8 μg/kg）＞红花椒（358.3 μg/kg）＞石柱红（353.6 μg/kg）＞小米辣（243.5 μg/kg），区县种植基地污染较严重的为璧山、江津和荣昌，∑PAHs分别为721.5、626.6和621.0 μg/kg，PAHs中污染较严重的化合物为菲、荧蒽和芘，平均含量分别为215.10、80.25和75.35 μg/kg。
该研究建立的内标法准确度高，重复性好，适用于香辛料及制品中PAHs检测。
关键词：多环芳烃；污染物；内标法；高效液相色谱；香辛料文章编号：1673-9078(2024)04-331-340 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2024.4.0429Determination of 15 Polycyclic Aromatic Hydrocarbon (PAH) Pollutants in Spices by an Internal Standard High Performance Liquid Chromatography (HPLC) HOU Meiling*, FENG Guirong , CAI Xiaoqin , HUANG Dandan, DONG Xianbing (Chongqing Institute for Food and Drug Control, Key Laboratory of Condiment Supervision Technology for StateMarket Regulation, Chongqing 401121, China)Abstract: An internal standard HPLC method was established for simultaneous determination of 15 kinds of PAHs in spices by. The samples were dissolved in sodium hydroxide, extracted with acetonitrile, redissolved by n-hexane, cleaned and concentrated by the Florisil SPE cartridge, and determined by HPLC, with benzo[a] pyrene D12 being used as the internal standard. This method had a good linear relationship in the range of 0~100 ng/mL, with the detection limits of PAHs in Capsicum being 0.5~3.0 μg/kg and the limits of quantitation as 2.0~10.0 μg/kg. The limits of detection and limits of引文格式：侯美玲,冯桂蓉,蔡小钦,等.高效液相色谱-内标法测定香辛料中15种多环芳烃类污染物（PAHs）[J].现代食品科技,2024,40(4): 331-340.HOU Meiling, FENG Guirong, CAI Xiaoqin, et al. Determination of 15 polycyclic aromatic hydrocarbon (PAH) pollutants in spices by an internal standard high performance liquid chromatography (HPLC) [J]. Modern Food Science and Technology, 2024, 40(4): 331-340.收稿日期：2023-04-10基金项目：重庆市市场监督管理局科研计划项目（CQSJKJ2022006）作者简介：侯美玲（1987-），女，硕士，工程师，研究方向：食品加工过程中污染物检测，E-mail：331quantitation of PAHs in Zanthoxylum were 0.5~1.0 μg/kg and 2.0~3.0 μg/kg, respectively. When the spiked levels were 2.0, 10.0 and 50.0 μg/kg, the recoveries in the two spices were 60.58%~119.48% and 60.46%~119.24%, with the RSD (n=6) being 1.25%~9.61% and 1.10%~8.56%. The concentration of ∑PAHs in the five spices from high to low were : green Zanthoxylum (561.2 ųg/kg) > erjingtiao (448.8 μg/kg) > red Zanthoxylum (358.3 μg/kg) > shizhuhongi (353.6 μg/kg) > chilli (243.5 μg/kg). The more seriously polluted areas of Chongqing were Bishan, Jiangjin and Rongchang, with ∑PAHs being 721.5, 626.6 and 621.0 μg/kg, respectively. The more seriously polluted compounds in PAHs were phenanthrene, fluoranthrene and pyrene, with their average contents being 215.10, 80.25 and 75.35 μg/kg, respectively. The internal standard method established in this study has high accuracy and good repeatability, which is suitable for the determination of PAHs in spices.Key words: Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs); pollutant; internal standard method; high performance liquid chromatography; spices多环芳香族碳氢化合物（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs）是一类具有“致畸、致癌、致突变”特性的环境污染物，因其危害性较大，美国环保署已将其中的16种列为监测重点对象，欧盟食品安全局也对其中8种做了限量要求，并选取了4种（䓛、苯并[a]芘、苯并[b]荧蒽和苯并[a]蒽）作为评价食品中PAHs污染的指标[1] 。
离子色谱法及其在药物分析中的应用
离子色谱法及其在药物分析中的应用吴燕;米亚娴【摘要】离子色谱(ion chroroatograpy,IC),是20世纪70年代发展起来的一种新型液相色谱分析技术,具有操作简便、灵敏快速、精密度高、抗干扰能力强、分析结果准确可靠等优点.本文简要综述近年来离子色谱在药物及合成中间体的分析、复杂组分中的某一组分鉴定、药物离子的价态及形态分析等方面的应用,为扩大离子色谱技术在药物分析领域中的应用提供参考.【期刊名称】《天津药学》【年(卷),期】2011(023)004【总页数】4页(P50-53)【关键词】药物分析;离子色谱法【作者】吴燕;米亚娴【作者单位】天津市药品检验所,天津,300070;天津市药品检验所,天津,300070【正文语种】中文【中图分类】R979.5离子色谱法是美国Small等人在离子交换色谱法的基础上建立起来的一种离子分离分析液相色谱技术，具有操作简便、灵敏快速、精密度高、抗干扰能力强、分析结果准确可靠等优点。
自20世纪70年代中期问世到今天，该项技术已成为检测无机阴阳离子的最有力的分析手段。
近年来，随着离子色谱本身的技术发展，离子色谱在药物分析中又有许多新的进展，在药物及合成中间体的分析、复杂组分中的某一组分鉴定、药物离子的价态及形态分析等方面都起了很大的作用[1]。
1 离子色谱法基本原理及研究进展1.1 离子色谱法的基本原理[2] 离子色谱法按分离模式分3种类型：离子交换色谱法、离子排斥色谱法和离子对色谱法。
离子交换色谱法，分离是基于发生在流动相和键合在基质上的离子交换基团之间的离子交换过程，也包括部分非离子的相互作用，这种分离方式可用于有机和无机阴离子和阳离子的分离。
离子排斥色谱法，分离是基于固定相和被分析物质之间3种不同的作用——Donnan排斥、空间排斥和吸附作用，这种分离方式主要用于弱的有机和无机酸的分离。
离子对色谱法，分离是基于被分析物在分离柱上的吸附作用。
分析柱的选择性主要取决于流动相的组成和浓度，流动相除了加入有机改进剂之外，还需加入离子对试剂，这种分离方式可用于表面活性阴离子和阳离子以及过渡金属络合物的分离。
人血浆中甲氨蝶呤的高效液相色谱法测定及其代谢物的质谱定性分析
人血浆中甲氨蝶呤的高效液相色谱法测定及其代谢物的质谱定性分析王漪璇;毋丹;曹军宁;钱隽【摘要】目的：建立固相萃取‐高效液相色谱法测定人血浆中的甲氨蝶呤浓度，用于临床治疗的监测，并通过质谱对甲氨蝶呤的人体代谢物进行定性分析。
方法血浆样本经C18固相萃取小柱净化洗脱后直接进样，以Diamonsil C18分析柱（150mm×4．6mm，5m）分离，流动相为甲醇和0．5％乙酸溶液（含0．3％三乙胺），采用梯度洗脱；流速为1．0ml／min；紫外检测波长为306 nm。
通过质谱全扫描（QLMS）和多反应监测‐信息关联采集‐增强子离子扫描（MRM‐IDA‐EPI）获得甲氨蝶呤代谢物的质谱信息。
结果甲氨蝶呤在0．05～100μmol／L范围内线性关系良好（r＝0．9999），提取回收率＞95％，准确度在97％～105％之间，日内与日间精密度（RSD ）均＜5％。
分析甲氨蝶呤代谢物的质谱信息，推断该代谢物为7‐羟基甲氨蝶呤。
结论本方法灵敏度高、重现性好、操作简便，适用于甲氨蝶呤的血药浓度监测。
%Objective To develop an SPE‐HPLC method for the determination of methotrexate (M TX) in human plasma to monitor the clinical drug use of M TX ,and to identify the human metabolite of M TX by mass spectrometry .Methods M TX was extracted from human plasma using C18 SPE column and analyzed directly after elution .The separation of MTX was per‐formed on Diamonsil C18 column (150 mm × 4 .6 mm ,5 m) with a gradient mobile phase of methanol and0 .5% acetic acid solu‐tion (containing 0 .3% triethylamine) at a flow rate of1 .0 ml/min .The detection wa velength was 306 nm .QLMS and MRM‐IDA‐EPI scan modes were used to obtain the mass spectrum of MTXmetabolite .Results The calibration curve of MTX in plasma was linear over the range of 0 .05‐100 μmol/L(r=0 .999 9) .The extraction recovery was above 95% an d accuracy was between 97% and 105% .Both intra‐and inter‐day precision were less than 5% .7‐OH MTX was identified to be the metabolite through the analysis of the mass spectrum .Conclusion The method is sensitive ,reproducible ,easy to operate and suits for monitoring the concentration of M TX in clinical practice .【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】5页(P143-146,158)【关键词】甲氨蝶呤;高效液相色谱法;固相萃取;代谢物【作者】王漪璇;毋丹;曹军宁;钱隽【作者单位】复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032;复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032;复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032;复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032【正文语种】中文【中图分类】R917.1·论著·Determination of methotrexate in human plasma by HPLC and qualitativeanalysis of its metabolite by mass spectrometryWANG Yixuan, WU Dan, CAO Junning, QIAN Jun(Department of Medical O ncology,Cancer Hospital Affilliated to Fudan University; Department of Onc ology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, Chin a)[Key words] methotrexate; HPLC; solid phase extraction; metabolite甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)为抗叶酸类抗肿瘤药，临床上广泛用于白血病、淋巴瘤、骨肉瘤的化疗。
固相萃取_高效液相色谱法测定人体尿液中邻苯二甲酸酯及其代谢物
DOI ：10．3724/SP．J．1096．2011．00877固相萃取-高效液相色谱法测定人体尿液中邻苯二甲酸酯及其代谢物林兴桃1王小逸*1夏定国2吴琼1赵靖强11（北京工业大学环境与能源工程学院，北京100124）2（北京大学工学院，北京100871）摘要建立了同时测定人体尿液中邻苯二甲酸酯及其代谢物的分析方法。
对洗脱剂种类、洗脱体积、洗脱流速等影响因素进行考察，确定了最佳洗脱剂及洗脱体积为2mL 乙腈、2mL 乙酸乙酯和1mL 乙醚-正己烷（1ʒ19，V /V ），洗脱流速1mL /min 。
在最优化的固相萃取-液相色谱条件下测定5种邻苯二甲酸酯及其5种相应的单酯代谢物，线性范围为20 10000μg /L ，相关系数均大于0．99；检出限为3．8 7．0μg /L ；加标回收率为72．2% 102．3%；相对标准偏差均小于8%。
利用本方法对5名育龄女性的尿液进行分析，除了邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二乙酯外，其余8种物质均在尿液中检出。
关键词固相萃取；液相色谱；邻苯二甲酸酯；代谢物；尿液2010-09-29收稿；2011-03-18接受本文系北京市教委科技发展计划基金（No．KM200710005025）、北京工业大学青年科研基金（No．X1005211200801）资助项目*E-mail ：wangxiaoyi@bjut．edu．cn1引言邻苯二甲酸酯（Phthalic acid esters ，PAEs ）是一类内分泌干扰物，具有类雌激素作用和抗雄激素作用，可干扰机体内分泌系统，导致生殖发育系统异常，并且具有一定的肝脏毒性和致癌作用［1］。
PAEs 是塑料行业常用的增塑剂，在塑料中的含量可高达20% 30%，广泛存在于各种塑料制品中，如儿童玩具、容器、医疗器具等。
由于PAEs 不以化学键形式与产品中的化学物质结合，在适当的条件下，可不断地向周围环境释放，造成环境污染。
大量的研究表明，在食品、饮用水、土壤、大气等环境中均不同程度的存在PAEs 污染［2 4］。
固相萃取—高效液相色谱—荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质
固相萃取—高效液相色谱—荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质作者：高慧邢燕汪洋来源：《中国测试》2017年第02期摘要：建立一种快速、准确测定人体尿液中肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺及5-羟色胺4种单胺类神经递质的方法。
尿液样品以Waters Oasis WCX固相萃取柱富集，依次用2 mL 20 mmol/L乙酸铵-甲醇溶液、2 mL甲醇淋洗杂质，最后用5 mL含2%甲酸的乙腈水溶液（85∶15，ν∶ν）提取被分析物。
经Agilent C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）分离，以甲醇与乙酸钠溶液的不同配比设置流动相梯度，在荧光检测激发波长280 nm，发射波长340 nm条件下，测定人体尿液中4种单胺类神经递质的含量。
结果表明：4种单胺类神经递质的回收率为92.2%～104.8%，相对偏差为1.6%～3.1%，检出限为0.002～0.05 μg/mL。
该方法稳定、快速、简便，能满足人体尿液中多种单胺类神经递质的含量测定。
关键词：单胺类神经递质；固相萃取；高效液相色谱；荧光检测文献标志码：A 文章编号：1674-5124（2017）02-0060-040 引言神经递质是神经末梢分泌的化学物质，在化学突触传递中担当信使的作用。
单胺类物质（MNTs）是最早发现的一类神经递质，包括多巴胺（DA）、肾上腺素（E）、去甲肾上腺素（NE）和5-羟色胺（5-HT）。
MNTs在中枢神经系统、外周植物神经系统和激素介导的内分泌及外分泌活动中起着极其重要的作用[1]。
固相萃取（solid-phase extraction，SPE）是近年发展起来的一种样品预处理技术，主要用于样品的分离、纯化和浓缩，与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更可将分析物与干扰组分有效分离，正成为复杂样品纯化、富集的有效手段。
人体尿液中单胺类神经递质含量的准确检测，对嗜铬细胞瘤等相关疾病诊断、新药研制开发、药物疗效评价等方面有重要意义。
高效液相色谱-荧光检测法测定土壤中的多环芳烃
高效液相色谱-荧光检测法测定土壤中的多环芳烃
多环芳烃在环境中广泛分布，其中通常含有强致癌有毒性质的基因毒性，因此关注其含量的测定是重要的。
高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FLD）是目前用于测定土壤中多环芳烃的有效方法。
HPLC-FLD测定多环芳烃的优点在于出色的灵敏性和选择性，它可以对多环芳烃的活性幅度在微量水平进行检测。
而且可以通过调整其条件来得到高分辨率和良好的稳定性。
HPLC-FLD测定多环芳烃的操作步骤也相对简单，无九醛长效保存剂和抗菌剂的使用，可以提高分析的准确性。
在使用HPLC-FLD进行多环芳烃分析时，首先需要对原样品进行加标、配制和调整处理。
经过样品预处理，将样品加入色谱柱，随后就可以进行检测。
使用荧光检测器进行峰特征定量，判断多环芳烃的浓度。
HPLC-FLD结合多环芳烃检测是一种有效的方法，准确度高、特异性强、快速灵敏，可以有效提高多环芳烃的检测精度和效率，为环境保护提供详细的资料。
超高效液相色谱-串联质谱筛查确证尿液中磺胺、喹诺酮与四环素抗生素
第42 卷第 10 期2023 年10 月Vol.42 No.101343~1350分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO（Journal of Instrumental Analysis）超高效液相色谱-串联质谱筛查确证尿液中磺胺、喹诺酮与四环素抗生素张楠1，唐增煦2，王莉莉1，孙开奇1，赵榕1*，范赛1*（1．北京市疾病预防控制中心，北京市预防医学研究中心，北京100013；2．中国疾病预防控制中心营养与健康所，北京100050）摘要：建立了超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定尿液中磺胺类、四环素类、喹诺酮类共45种抗生素的检测方法。
尿液样品经提取后，采用HLB固相萃取柱（200 mg/6 mL）净化，使用ThermoAccu⁃core RP-MS（100 mm×2.1 mm，2.6 µm）色谱柱进行分离，以乙腈-0.02%甲酸溶液为流动相梯度洗脱。
在正离子扫描模式下（ESI+），以选择反应监测模式（SRM）检测，外标法定量。
45种目标化合物在3个加标水平（2.0、5.0、10.0 µg/L）下的回收率为78.6%~114%，相对标准偏差为0.60%~18%；方法的检出限为0.1~0.5 µg/L，定量下限为0.3~1 µg/L。
将所建方法用于280个尿液样品中抗生素的检测，均未检测到抗生素残留。
所建方法的精密度和准确度高，操作简单便捷，为尿液中抗生素残留的筛查提供了方法支持。
关键词：抗生素；尿液；超高效液相色谱-串联质谱法；磺胺；喹诺酮；四环素中图分类号：O657.7；S816.73文献标识码：A 文章编号：1004-4957（2023）10-1343-08Study on the Method for the Identification of Sulfanilamide，Quino⁃lone and Tetracycline in Urine by Ultra-high Performance LiquidChromatography-Tandem Mass SpectrometryZHANG Nan1，TANG Zeng-xu2，WANG Li-li1，SUN Kai-qi1，ZHAO Rong1*，FAN Sai1*（1．Beijing Center for Disease Control and Prevention，Beijing Center for Preventive Medicine Research，Beijing 100013，China；2．Institute of Nutrition and Health，Chinese Center for Disease Control and Prevention，Beijing 100050，China）Abstract：A confirmatory test for the simultaneous determination of sulfonamides，tetracyclines，and quinolones in urine totalling 45 antibiotics by ultra-high performance liquid chromatography-tan⁃dem mass spectrometry（UPLC-MS/MS） was developed. The urine samples were extracted and then cleaned up by an HLB solid phase extraction column（200 mg/6 mL），and the separation of the target was performed on a ThermoAccucore RP-MS column（100 mm×2.1 mm，2.6 µm）using acetoni⁃trile-0.02%formic acid aqueous solution with gradient separation elution，detected in positive ion scanning mode（ESI+） in multiple selected reaction monitoring（SRM） and quantified by external stan⁃dard method. The recoveries of a total of 45 target compounds from three classes of antibiotics at three spiked levels（2.0，5.0 and 10.0 µg/L） were in the range of 78.6 %-114% with the RSDs in the range of 0.60%-18%，and the limits of detection（LODs） and the limits of quantification（LOQs） of the method were in the range of 0.1-0.5 µg/L and 0.3-1 µg/L，respectively. The developed meth⁃od was applied to 280 urine samples for the detection of antibiotics，none of which detected antibiot⁃ics residues in excess of limit. The results showed that the established method was highly precise and accurate，simple and convenient，and included commonly used antibiotic species，which can sup⁃port the screening antibiotic residues in urine.Key words：antibiotic；urine；ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spec⁃trometry；sulfonamides；quinolones；tetracyclines四环素类、磺胺类和喹诺酮类广谱抗生素是常见的既可治疗人类疾病，又可作为生长促进剂促进doi：10.19969/j.fxcsxb.23061602收稿日期：2023－06－16；修回日期：2023－07－22基金项目：国家重点研发计划（2017YFC160050002）∗通讯作者：赵 榕，主任技师，研究方向：食品安全，E-mail：lxyue@范 赛，博士，研究员，研究方向：食品安全，E-mail：fansai@第 42 卷分析测试学报动物生长的化学物质［1］，因此在医药卫生及动物养殖行业得到了广泛使用。
高效液相(HPLC)荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度
高效液相(HPLC)荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度杨涛;沈杰【摘要】目的建立同时测定人血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)等4种硫醇物的高效液相色谱法(highperformance liquid chromatography,HPLC).方法血浆经磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)稀释后,用三(2羧乙基)膦盐酸盐[tris (2 carboxyethyl) phosphine hydrochloride,TCEP]还原,用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7氟苯呋咱4硫酸铵盐(7 fluorobenzofurazan-4 sulfonic acidammonium salt,SBD F)进行衍生化反应,荧光检测器检测.色谱条件:色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6mm,5 μm),柱温29℃;流动相为甲醇:0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5,3.5:96.5,V/V),流速为0.8 mL/min,等度洗脱.激发波长385 nm,发射波长515 nm.采用外标法定量.结果 Cys、Hcy、CysGly和GSH的线性范围分别为50～800 μmol/L、4～64 μmol/L、10～160 μmol/L和2.5～40μmol/L.Cys、Hcy、CysGly和GSH的最低检测浓度分别为2.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.0 μmol/L和1.0 μmol/L.各组分日内、日间精密度RSD均＜12％.平均回收率为95.01 ％～116.17％.结论该方法具有检测时间短、灵敏性高、精密度和准确度好的特点,适用于临床人血浆中硫醇物浓度的常规检测.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2014(041)005【总页数】6页(P679-684)【关键词】高效液相色谱法(HPLC);同型半胱氨酸(Hcy);半胱氨酰甘氨酸(CysGly);半胱氨酸(Cys);谷胱甘肽(GSH)【作者】杨涛;沈杰【作者单位】复旦大学附属华东医院药剂科上海200040;上海市老年医学研究所老年临床药理研究室上海200040;复旦大学附属华东医院药剂科上海200040;上海市老年医学研究所老年临床药理研究室上海200040【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2生物硫醇，如半胱氨酸（cysteine，Cys）、同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）、半胱氨酰甘氨酸（cysteinylglycine，CysGly）和谷胱甘肽（glutathione，GSH），在生物组织和体液中广泛分布，并且在生物系统中起着非常重要的作用［1-2］。
高效液相色谱-荧光检测法同时测定香精香料中4种禁限用添加剂
高效液相色谱-荧光检测法同时测定香精香料中4种禁限用添加剂李韵;汪宏毅;廖晓玲;肖少红;陈慧【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2014(000)012【摘要】建立了一种测定烟用香精香料中芝麻酚、β-萘酚、β-细辛醚和黄樟素4种禁限用添加剂的高效液相色谱-荧光检测（HPLC-FD）方法。
样品用乙醇振荡萃取，提取液过0.45μm有机相滤膜后进行HPLC-FD分析。
结果表明：①以乙腈-水为流动相，在流速1.0 mL/min下梯度洗脱，4种添加剂在8 min内得到了良好分离；在0.02~10μg/mL线性范围内，方法的定性检出限为0.01~0.09 mg/kg （S/N=3）。
回收率为86.4%~112.1%，相对标准偏差（RSD）小于10%。
②19个烟用香精香料样品中均无禁限用成分检出，说明烟草行业在香精香料添加剂使用方面管理非常严格。
该方法操作简单快捷、重现性好，适用于烟用香精香料中芝麻酚、β-萘酚、β-细辛醚和黄樟素的同时测定。
【总页数】4页(P32-35)【作者】李韵;汪宏毅;廖晓玲;肖少红;陈慧【作者单位】湖北省烟草产品质量监督检验站，武汉市宝丰路6号 430030;湖北省烟草产品质量监督检验站，武汉市宝丰路6号 430030;湖北省烟草产品质量监督检验站，武汉市宝丰路6号 430030;湖北省烟草产品质量监督检验站，武汉市宝丰路6号 430030;湖北省烟草产品质量监督检验站，武汉市宝丰路6号430030【正文语种】中文【中图分类】TS426;TQ657+.4【相关文献】1.高效液相色谱法同时测定果蔬汁饮料中20种禁限用食品添加剂 [J], 刘胜男;张国庆;王素方;郭保宝;权明珠;石志格2.高效液相色谱法同时测定果蔬汁饮料中20种禁限用食品添加剂 [J], 刘胜男;张国庆;王素方;郭保宝;权明珠;石志格;3.超高效液相色谱法同时测定香精香料中14种禁限用物质 [J], 李晶;徐济仓;李雪梅;周建光;朱岩;缪明明4.新型基质固相分散萃取净化-高效液相色谱荧光检测法测定香精香料中的黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2 [J], 刘欣;杨叶昆;陈建华;李雪梅;米其利;杨光宇;孔维松;李晶5.微波萃取-高效液相色谱荧光检测法测定食品包装用纸中11种荧光增白剂 [J], 周良春;马俊辉;张晓飞;文彬羽;李双琦;杨婷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
嘌呤含量测量技术
嘌呤含量测量技术嘌呤是一种重要的有机化合物，在人体生理活动和代谢过程中起着重要的作用。
然而，由于嘌呤在体内代谢的异常，会导致一系列嘌呤代谢疾病，如痛风和遗传性尿酸尿症。
因此，准确测量嘌呤含量是非常重要的。
本文将介绍几种常用的嘌呤含量测量技术。
首先，高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的嘌呤含量测量技术之一。
该方法基于样品中嘌呤化合物在特定条件下与液相色谱柱相互作用的原理进行分离和检测。
通过检测峰面积或峰高度，可以定量分析样品中的嘌呤含量。
由于HPLC方法具有高分辨率、高灵敏度和高重复性的特点，因此被广泛应用于嘌呤含量测量领域。
其次，气相色谱法（GC）也是一种常用的嘌呤含量测量技术。
该方法通过将样品中的嘌呤化合物挥发成气体，然后经过色谱柱分离，并利用检测器测定峰面积或峰高度来定量分析。
与HPLC相比，GC方法具有更好的分离效果和更高的分析速度。
然而，由于嘌呤化合物的挥发性较差，GC方法在嘌呤含量测量方面的应用相对较少。
此外，近年来，质谱法（MS）在嘌呤含量测量领域得到了广泛应用。
质谱法结合了色谱技术和质谱检测器，可以实现嘌呤化合物的高灵敏度和高选择性分析。
质谱法可以通过分析嘌呤化合物的质荷比来进行定量分析，并且可以同时分析多种嘌呤化合物的含量。
然而，质谱法的设备价格较高，需要专业的操作技术和数据分析能力。
此外，最近兴起的纳米材料技术在嘌呤含量测量领域也显示出了巨大的潜力。
纳米材料具有高比表面积和特殊的电子结构，可以用于制备高灵敏度和高选择性的嘌呤传感器。
这些嘌呤传感器可以通过电化学或光学方法实现嘌呤化合物的高灵敏度检测。
然而，纳米材料技术在嘌呤含量测量领域的应用仍处于研究阶段，需要进一步的研究和发展。
综上所述，嘌呤含量测量技术是评估嘌呤代谢和相关疾病风险的重要手段。
目前常用的技术包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法以及纳米材料技术。
每种技术都具有其独特的优势和适应范围。
将来，随着科学技术的不断发展，嘌呤含量测量技术也将不断提高和完善，为嘌呤相关疾病的预防和治疗提供更好的支持和指导。
嘌呤的液质检测方法
嘌呤的液质检测方法
嘌呤的液质检测方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-质谱联用法（LC-MS）。
这些方法可以用于测定生物样品中嘌呤的含量，包括尿酸、肌酐、次黄嘌呤、黄嘌呤和鸟嘌呤等。
其中，高效液相色谱法是一种常用的分离和检测方法，具有分离效果好、灵敏度高、样品处理简单等优点。
该方法主要利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异进行分离，通过检测器检测物质的浓度或质量，实现对目标物质的定量或定性分析。
液相色谱-质谱联用法则结合了液相色谱的高分离效能和质谱的高鉴别能力，能够同时测定多种化合物。
该方法通过将样品注入色谱柱，在流动相的带动下经过一系列的分离后进入质谱仪进行分析，从而实现对目标化合物的定性和定量分析。
需要注意的是，生物样品中的嘌呤含量较低，因此需要进行适当的样品处理和前处理，以提高检测的灵敏度和准确性。
同时，在分析过程中需要注意干扰物质的影响，如蛋白质、色素等，以保证检测结果的可靠性。
荧光-紫外检测器高效液相色谱法检测地下水中16种多环芳烃
荧光-紫外检测器高效液相色谱法检测地下水中16种多环芳烃曹攽;马军;李云木子【摘要】应用荧光-紫外检测器联用的高效液相色谱法分析地下水中16种多环芳烃.对高效液相色谱条件进行优化,建立了分析方法,并用于实际水样分析.在较佳的实验条件下,加标回收率为86.3%~105%,方法精密度(RSD,n=7)为0.39%~2.55%,检出限为0.001~0.010μg/L.分析16种PAHs仅用20min,比EPA8310方法中采用的液相色谱法缩短了17min.方法灵简便、准确,灵敏度高,分析时间短,适用于大批量地下水中痕量多环芳烃的分析.【期刊名称】《岩矿测试》【年(卷),期】2010(029)005【总页数】4页(P539-542)【关键词】高效液相色谱法;多环芳烃;荧光-紫外检测器;地下水【作者】曹攽;马军;李云木子【作者单位】浙江省地质矿产研究所,浙江,杭州,310007;浙江省地质矿产研究所,浙江,杭州,310007;浙江省地质矿产研究所,浙江,杭州,310007【正文语种】中文【中图分类】O657.72%O625.1%P641多环芳烃(PAHs)具有极强的致癌、致畸、致突变性，是比较受关注的一类环境污染物，已被列入优先控制污染物名单[1]。
美国环保署(EPA)已将萘、蒽、荧蒽、苯并(a)芘、苯并(a)蒽、茚并(1,2,3-c,d)芘等16种PAHs确定为环境优先控制污染物。
PAHs普遍存在于水体中，但通常含量很低，因此对水体中痕量PAHs进行快速、准确的检测是十分必要的。
目前，PAHs的分析方法主要有气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)和高效液相色谱法(HPLC)[2-12]。
由于PAHs具有半挥发性和不挥发性特点，通常采用HPLC法来实现PAHs的定性定量检测；EPA公布的EPA 8310方法用于地表水中PAHs的测定，推荐使用HPLC方法[13-15]。
荧光检测器具有高灵敏度、高分辨率、低检出限和对某些物质具有高选择性等特点，因此采用荧光-HPLC检测是更为理想的检测手段。
高效液相色谱法同时测定尿中新喋呤和生物喋呤
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［’］ 免疫法［ & ］、 酶联免疫法 （ &’()* ） 、 高效液相色谱
法 （ +#’, ） 等。 放 射 免 疫 法 由 于 存 在 放 射 性 污 染， 现已少用； &’()* 法 则 存 在 制 备 抗 体 复 杂、 影响 因素多、 有交叉反应等缺点。由于 "# 受 -+ 值的影 响很大， 国外多 采 用 +#’, 法 或 固 相 萃 取 法 测 定 尿 中酸性碘氧化的 "# ， 操 作 复 杂， 成本较高 内采用 +#’, 法 多 测 定 尿 中 的 $#
。 另 外， "# 还 与 体 内 苯 丙 氨 酸、 色 氨 酸、 酪
［%］
氨酸的代谢有关， "# 缺乏引起苯丙氨酸代谢紊乱 和神经递质的 改 变 。 $# 和 "# 均 主 要 从 尿 中 排 泄， 因此有效分离测定尿中的 $# 和 "# 具有很重要 的临床意义。 $# 和 "# 的结构相 似， 采 用常 规 方 法 不易分离。目前国内外测定 $# 的方 法 主 要有 放 射
嘌呤含量测定方法
嘌呤含量测定方法嘌呤是一类重要的有机化合物，广泛存在于自然界中的动植物食物和人体组织中。
高嘌呤饮食与痛风、尿酸结石等疾病的发生密切相关。
因此，精确测定食物中的嘌呤含量对于饮食控制和疾病预防具有重要意义。
本文将介绍几种常用的嘌呤含量测定方法。
一、高效液相色谱法（HPLC法）高效液相色谱法是一种常用的嘌呤含量测定方法。
它基于样品中嘌呤化合物在色谱柱上的保留时间和峰面积与其浓度之间的线性关系。
该方法适用于多种食物样品的测定，操作简便，且结果准确可靠。
但由于设备和试剂费用较高，限制了该方法的广泛应用。
二、尿酸氧化酶法尿酸氧化酶法是一种常用的嘌呤含量测定方法，特别适用于尿液中尿酸含量的测定。
该方法是通过尿酸氧化酶催化反应将尿酸氧化为乙酰胺、丙酮和H2O2，再利用氧化反应使草酸还原成吲哚甲醛，生成紫色染料。
利用紫色染料的吸光度与尿酸浓度之间的线性关系来测定尿酸含量。
该方法操作简便，用于尿液样品的测定非常方便。
三、生物传感器法生物传感器是一种将生物元件与传感器研究方法相结合的新兴技术。
针对嘌呤含量测定，可以利用氧化酶、脱氨酶等酶类反应催化嘌呤类物质生成H2O2或氨气等反应，通过电流变化或电位变化等来测定嘌呤含量。
生物传感器法具有灵敏度高、选择性强、响应速度快等优点，是一种非常有潜力的嘌呤含量测定方法。
四、高分辨质谱法（HRMS法）高分辨质谱法可以实现对样品中嘌呤类物质的精确分析和鉴定。
该方法利用质谱仪对样品中的嘌呤类化合物进行分离和检测，并根据质谱图谱上的特征峰进行定性和定量分析。
由于其高灵敏度、高选择性和高分辨率的特点，HRMS法成为近年来嘌呤含量测定的前沿技术。
然而，由于设备昂贵、操作复杂等因素，该方法在实际应用中仍受到一定的限制。
综上所述，嘌呤含量测定方法根据实际需求和样品特点选择合适的方法至关重要。
高效液相色谱法、尿酸氧化酶法、生物传感器法和高分辨质谱法是常用的测定方法，在不同的应用场景中各有优劣。
未来随着科学技术的不断发展，嘌呤含量测定方法将更加完善和多样化，为嘌呤相关疾病的研究和防治提供更好的技术支持。
固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定尿液中8_种双酚类物质
引用格式：吴微, 管驰, 王顾希, 等. 固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定尿液中8种双酚类物质[J]. 中国测试，2023, 49(8):75-80. WU Wei, GUAN Chi, WANG Guxi, et al. Determination of 8 kinds of bisphenols in urine by solid phase extraction combined with high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. China Measurement & Test, 2023, 49(8): 75-80. DOI :10.11857/j.issn.1674-5124.2022100031固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定尿液中8种双酚类物质吴 微1,2， 管 驰1,2， 王顾希1,2， 王 智1,2， 陈泽羽1,2，李椤颢1,2， 陈 卿3， 曹 佳3， 冯德建1,2(1. 中国测试技术研究院生物研究所，四川 成都 610021; 2. 茶叶标准与检测技术四川省重点实验室，四川 成都 610021; 3. 陆军军医大学，重庆 400038)摘 要: 建立固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定人体尿液中8种双酚类物质（bisphenols ，BPs ）的含量。
尿液经β-葡萄糖苷酸酶/硫酸酯酶酶解，HLB 小柱富集净化，SB- C18柱（2.1 mm ×100 mm ，1.8 μm ）分离，负离子多反应监测模式测定。
方法线性范围为0.25～10 ng/mL ，r 2≥0.99，方法检出限范围为0.007～0.30 ng/mL ，方法平均回收率范围为81.7%～117%，相对标准偏差范围为0.9%～6.3%，65份人体尿样检测结果显示BPA 、BPS 、BPF 、BPAF 四者均有检测，检出率分别为76.9%、73.8%、40.0%和7.7%。
高效液相色谱―串联质谱法测定儿童和成人尿液中双酚A、四溴双酚A和辛基酚-文档
高效液相色谱―串联质谱法测定儿童和成人尿液中双酚A、四溴双酚A和辛基酚1 引言双酚A（Bisphenol A，BPA）、四溴双酚A （Tetrabromobisphenol A，TBBPA）和辛基酚（4-Tert-octylphenol，OP）作为典型环境内分泌干扰物[1～4]已经引起人们的广泛关注。
这3种化合物一般可以通过呼吸道和消化道等途径进入体内，流经血液、肝脏和肾脏，经过尿液排出体外[2，5，6]。
生物检测结果表明，在人体尿液[7，8]、血液[9，10]、母乳[11，12]、胆汁[13，14]、肝脏[15]等生物样品中均含有BPA和OP。
毒理研究表明，较低浓度的BPA对小鼠具有雌激素效应[16]，BPA和OP都可以通过调节E2目标基因对小鼠产生内分泌干扰效应[17]。
TBBPA可以干扰哺乳动物正常生殖行为[18]，通过与甲状腺激素受体结合产生内分泌干扰效应[19]。
目前，水体中BPA、OP和TBBPA含量的分析方法已经比较成熟[20～27]，但是关于人体尿液中3种化合物同时测定的研究鲜有报道。
此外，尿液分析中多采用固相萃取法[7，8，16，28]作为前处理方法，但对于大量样品检测时，存在费用较高、操作步骤较多的缺点。
因此，本研究采用液-液萃取的前处理方法，建立了高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）分析技术，同时检测成人和儿童尿液中BPA， OP和TBBPA的含量，并对成人和儿童尿液中3种内分泌干扰物的暴露水平作了初步分析评价。
2 实验部分2.1 仪器与试剂AG-285电子天平（瑞士Mettle公司）；数显往复振动摇床（德国IKA公司）；旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）；高效液相色谱-串联质谱仪（LC-Agilent Technologies 1290 Infinity，MS-AB SCIEX QTRAP 4500，美国）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；Centrifuge 5430R台式高速离心机（德国Eppendorf公司）。
嘌呤值检测方法
嘌呤值检测方法嘌呤是一种常见的有机化合物，存在于许多食物中，如肉类、海鲜、内脏等。
嘌呤代谢异常可能导致尿酸水平增高，引发痛风、尿酸结石等疾病。
因此，准确检测嘌呤值对于了解个体体内嘌呤代谢情况以及疾病的预防和诊断具有重要意义。
本文将介绍几种常见的嘌呤值检测方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种常用的嘌呤值检测方法。
该方法基于样品中嘌呤分析物在液相中的分离、定量原理，通过外部标准法来计算嘌呤值。
HPLC具有分离效率高、灵敏度高、准确性高等特点，能够快速、准确地检测嘌呤值。
然而，HPLC方法仪器设备较为昂贵，操作复杂，对操作者的技术要求较高。
二、比色法比色法是一种常见的嘌呤值检测方法。
在比色法中，嘌呤样品经过一系列的预处理后，与特定试剂反应生成有色产物。
通过比较产物的吸光度与已知嘌呤标准曲线的关系，可以计算出嘌呤值。
比色法操作简单、成本低廉，广泛应用于嘌呤值检测领域。
但是，比色法对样品的前处理要求较高，且存在检测范围狭窄的缺点。
三、电化学法电化学法是一种基于嘌呤样品的电化学性质进行检测的方法。
常见的电化学法包括循环伏安法、常规电化学法等。
这些方法通过对嘌呤样品施加一定的电压或电流，测量样品的电流响应，从而计算出嘌呤值。
电化学法具有检测灵敏度高、选择性好、响应迅速等优点。
然而，电化学法也存在对仪器设备的要求较高、操作技术要求较高等缺点。
四、质谱法质谱法是一种基于嘌呤样品的质量-电荷比进行检测的方法。
质谱法可分为质谱质量分析（Mass Spectrometry，MS）和质谱/质谱质量分析（Tandem Mass Spectrometry，MS/MS）等。
质谱法具有灵敏度高、准确性高、选择性好等优点，可以实现多种嘌呤分子的同时检测。
然而，质谱法设备昂贵，需要专业技术支持，对实验条件的控制要求较高。
小儿尿液中的新蝶呤及生物蝶呤检测方法优化
小儿尿液中的新蝶呤及生物蝶呤检测方法优化陈雪静;韩婷;马艳茹;徐蕊;姜盼盼;黄嘉雯【期刊名称】《罕少疾病杂志》【年(卷),期】2023(30)2【摘要】目的基于高效液相色谱法(HPLC)同时检测小儿尿液中新蝶呤(N,CAS No:2009-64-5)和生物蝶呤(B,CAS:22150-76-1)的含量并探究KI-I氧化的条件。
方法采用KI-I2法氧化原型新蝶呤及生物蝶呤,在激发波长为350 nm,发射波长460 nm下使用HPLC进行检测,其中色谱柱选用Kromasil EternityXTC18(4.6*250mm,5μm),流动相为甲醇:水(10:90)。
结果新蝶呤及生物蝶呤的线性均在0.9999以上,检测范围为新蝶呤:0.00625mg/m L~1.0mg/m L,生物蝶呤:0.00675 mg/m L~1.08 mg/m L,加标回收率在92.18%~98.24%。
氧化过程中,普通实验室的光照对实验无明显的影响,氧化前不酸化尿液会造成测量的N、B 值减小。
结论使用优化方法检测小儿尿液中的新蝶呤、生物蝶呤与尿肌酐的含量比值,并通过计算B%(百分比),有助于高苯丙氨酸的鉴别分型,对患儿的治疗及预防发病具有重要意义。
【总页数】3页(P95-97)【作者】陈雪静;韩婷;马艳茹;徐蕊;姜盼盼;黄嘉雯【作者单位】内蒙古巴彦淖尔市临河区妇幼保健院;深圳罕见病代谢组学精准医学工程研究中心;深圳爱湾医学检验实验室【正文语种】中文【中图分类】R744【相关文献】1.固相萃取-高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法检测人体尿液中的异黄蝶呤2.小儿病毒性脑炎和化脓性脑膜炎脑脊液四氢生物蝶呤、新蝶呤、一氧化氮水平的变化及临床意义3.高效液相色谱-荧光检测法同时测定人体尿液中的多种蝶呤类化合物4.高效液相色谱-紫外检测法测定人体尿液中的蝶呤-6-羧酸因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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Ｖ０１．２７ Ｎｏ．１
分析科学学报
ＪＯＵＲＮＡＩ。（）Ｆ ＡＮＡＩ。ＹＴＩ（、ＡＩ，Ｓ（、ＩＥＮＣＥ
２０１１年２月
Ｆｅｂ． ２０１ １
文章编号：１００６—６１４４（２０１１）ｏｌ—００２ｌ—０５
高效液相色谱一荧光检测法同时测定人体尿液中的
多种蝶呤类化合西南昌３３００４７） 摘要：建立了高效液相色谱一荧光检测法同时测定人体尿液中的蝶呤、新蝶呤、生物蝶 呤和墨蝶呤。尿液在酸性条件下经碘一碘化钾溶液氧化３０ ｍｉｎ，滴加抗坏血酸还原液 后，可进行液相色谱分析。色谱柱为Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ Ｃ１８柱，用体积比９：１０的水一甲醇为流动
第２７卷
蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤标准品均购自于美国Ｓｉｇｍａ公司；甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均
为分析纯；水为超纯水。 １．２标准溶液的配制
准确称取适量的蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤的标准品分别置于４个２５ ｍＩ。的棕色容量瓶中，加 数滴１．Ｏ ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ（）Ｈ溶液溶解，用超纯水稀释至刻度，摇匀，配成浓度分别是：蝶呤８４．８＂ｇ／ｍＩ。、新蝶 呤９０．Ｏ ｐｇ／ｍＩ。、生物蝶呤８０．Ｏ ｐｇ／ｍＬ和墨蝶呤７４．Ｏ ｐｇ／ｍＬ的标准储备液，置于冰箱内４℃保存，使用
１．４色谱条件
Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ
Ｃ，。色谱柱（２５０×４．６ ｍｍ，５弘ｍ）；柱温为室温；流动相：水一甲醇一９０：１０（Ｖ／Ｖ）；流速为１．ｏ
ｎｍ，Ａ。＝４４５ ｎｍ。
ｍＬ／ｍｉｎ；进样量为１０“Ｌ；荧光检测波长为Ａ。。＝３６０
２结果与讨论
２．１流动相的组成及流速的选择
分别采用甲醇一水、乙腈一水、甲醇一磷酸盐缓冲溶 液（ｐＨ＝６．５６，７．０，７．４３）作流动相，考察了不同流 动相配比及流速对四种蝶呤类化合物色谱分离行为 的影响。结果表明：乙腈一水体系作流动相时，墨蝶 呤的荧光响应强度不高，且四种蝶呤类化合物的保 留时间过小，尿液中的共存物质对其检测干扰较大； 甲醇一磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ＝６．５６，７．Ｏ，７．４３）作流 动相时，生物蝶呤和蝶呤的分离效果不够理想；甲 醇一水体系作流动相且当甲醇：水一ｌＯ：９０（Ｖ／Ｖ），流
ｍＬ、Ｏ．００２ ｐｇ／ｍＬ、Ｏ．００１弘ｇ／ｍＬ和Ｏ．１５ ｐｇ／ｍＬ。
２．３样品前处理方法的选择
人体尿液成分复杂，为保证分析结果的准确性，考察了以下三种样品前处理方法：（１）取晨尿１．ｏ
ｍＬ，
经０．４５肛ｍ的微孔滤膜过滤，定容至５ ｍＬ容量瓶中，待测。（２）取晨尿１．ｏ ｍＬ置于５ ｍＩ。塑料离心管
ｓ棚ｐｌ器ｆｒｏｍ啪ｃｅｒ
ｐａｔｉｅｎｔｓ（一＝６）
Ｓａｍｐｌｅ
Ｎｅｏｐｔｅｒｉｎ
Ｂｉｏｐｔｅｒｉｎ
Ｐｔｅｒｉｎ
Ｓｅｐｉａｐｔｅｒｉｎ
（弘ｇ／ｍＬ）
３ Ｏ１ ５
Ｏ
（“ｇ／ｍＬ）
３ ４４７ Ｏ ２４ １
０
（“ｇ／ｍＬ）
Ｏ ４７２ Ｏ ４３
Ｏ
ｏｏ
（ｐｇ／ｍＬ）
ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ
ｉ
万方数据
１．Ｎｅｏｐｔｅｒｉｎ（Ｏ．１ （Ｏ．１
ｐｇ／ｍＩ，）；４．Ｓｅｐｉａｐｔｅｒｉｎ（１．５ ｐｇ／ｍＩ。）．
蝶呤的色谱分离效果较好，荧光响应强度较高，分析 时间较短，尿液中共存物质对其测定无影响且系统压力不高。四种蝶呤类化合物的色谱图见图１。
２．２标准曲线与检出限
取适量的标准储备液，分别配制一系列不同浓度的标准工作液，按选定的色谱分离条件进行分析，并 以峰面积对浓度作图。结果表明：新蝶呤、生物蝶呤、蝶呤和墨蝶呤的含量分别在Ｏ．００５～１．５肛ｇ／ｍＬ、
ｌｉｐｏｒｅ公司）。
收稿日期：２０１０一０６一０８ 修回日期：２０１０—０９一０２
基金项目：国家自然科学基金（Ｎｏ．２０７６５００２）；江西省自然科学基金（Ｎｏ．０６２００４９）
。通讯作者：万益群，男，教授，博士研究生导师，研究方向：生命化学及色谱分析．
２１
万方数据
第１期
崔盼盼等：高效液相色谱一荧光检测法同时测定人体尿液中的多种蝶呤类化合物
１．Ｏ
ｍｏｌ／Ｌ的盐酸和５ｍｇ二氧化锰，摇匀，于暗处放置３０
ｍｉｎ，取上清液振荡１０ 瓶中，待测。
ｒ／ｍｉｎ下离心１０ ｍｉｎ，经ｏ．４５肛ｍ的微孑Ｌ滤膜过滤，定容至５ ｍＬ容量
将上述三种方法处理得到的空白尿样及添加蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤标准溶液的尿样按选定
２２
万方数据
第１期
分析科学学报
第２７巷
实验部分
１．１仪器与试剂 Ａｇｉｌｅｎｔｌｌｏｏ高效液相色谱仪（美国，Ａｇｉｌｅｎｔ公司），配荧光检测器，Ａｇｉｌｅｎｔ液相色谱工作站；ＫＱ－ ５０ＤＢ数控超声波清洗器（江苏昆山市超声仪器有限公司）；ＴＤＬ一５一Ａ型低速台式离心机（上海安亭科学仪 器厂）；ＭＳ２型迷你振荡器（广州仪科实验室技术有限公司）；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ＿Ｑ Ｇｒａｄｉｅｎｔ超纯水装置（美国，Ｍｉ卜
表５健康人尿样加标回收（ｎ＝５）
ＴａｂＩｅ ５ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ｕｒｉｎｅ ｓａｍｐｌｅ
Ｏ．０５～２．０肛ｇ／ｍＬ、ｏ．０１～１．ｏ ｐｇ／ｍＬ和Ｏ．３～１０．ｏ ｐｇ／ｍＬ范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，其 线性回归方程分别是：ｙ一２１７．５ｌｚ一１．１２７（ｒ＝０．９９９０）；ｙ一３１３．４３ｚ＋１２．６２２（ｒ—ｏ．９９８２）；ｖ一５１７．６１ｚ
＋２．２６５９（ｒ—ｏ．９９９５）；ｙ一５．１６１８ｚ—ｏ．１４４７（，．＝ｏ．９９９８）；以三倍信噪比计算，检出限依次是：ｏ．００３“ｇ／
中，加６．ｏ ｍｏｌ／Ｉ。的盐酸１～２滴，加ｏ．０５ ｍｏｌ／Ｌ碘一碘化钾氧化液１．ｏ ｍＬ，于暗处放置３０ ｍｉｎ，滴加ｏ．０５
ｍｏｌ／Ｌ抗坏血酸还原液１．ｏ ｍＬ，摇匀，加水至５ ｍＩ。，经Ｏ．４５弘ｍ的微孔滤膜过滤得进样液。（３）取晨尿
１．ｏ
ｍＩ。置于５ ｍＬ塑料离心管中，加入Ｏ．１ ｍＬ
ｍｉｎ，１２ ０００
中图分类号：０６５７．７＋２ 文献标识码：Ａ
蝶呤类化合物（Ｐｔｅｒｉｄｉｎｅｓ）在生物体代谢过程中起重要的辅助作用，可作为体内“淋巴细胞一巨噬细胞 轴”所介导的细胞免疫防御系统激活程度的标志物，体液中其水平的高低反映了体内细胞免疫状态，已用 于多种疾病的监测Ⅲ。主要的几种蝶呤类化合物包括蝶呤（Ｐｔｅｒｉｎ）、新蝶呤（Ｎｅｏｐｔｅｒｉｎ）、黄蝶呤（Ｘａｎ— ｔｈｏｐｔｅｒｉｎ）、异黄蝶呤（Ｉｓｏｘａｎｔｈｏｐｔｅｒｉｎ）、蝶呤一６一羧酸（Ｐｔｅｒｉｎ一６一ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、生物蝶呤（Ｂｉｏｐｔｅｒｉｎ）和墨 蝶呤（Ｓｅｐｉａｐｔｅｒｉｎ）等。其中，以新蝶呤的研究最为广泛，已应用于临床上多种类型疾病的诊疗∞４］，其它蝶 呤类化合物相对研究较少¨柚］。墨蝶呤是蝶呤类化合物的一种，目前主要研究对象为动物细胞及人体脑 脊液，对人体尿液中墨蝶呤含量检测的研究鲜有报道。 本文系统探讨了人体尿液中蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤的色谱分离条件，同时考察了尿液的前 处理方法，在此基础上，建立了四种蝶呤类化合物同时分析的新方法，并应用于健康人、普通病人和癌症病 人尿样检测，取得了较好的效果。 １
速为１．Ｏ ｍＬ／ｍｉｎ时，新蝶呤、蝶呤、生物蝶呤和墨
三．
‘晶 ￡
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１５
２０
２５
３０
Ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
图ｌ
Ｆｉｇ．１
四种蝶呤类化合物的色谱分离图
Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｆｏｕｒ ｐｔｅｒｉｄｉｎ器 ｐｇ／ｍＬ）；２．Ｂｉｏｐｔｅｒｉｎ（Ｏ．１肛ｇ／ｍＬ）；３．Ｐｔｅｒｉｎ
弘ｇ／ｍＬ和０．１５弘ｇ／ｍＬ。加标平均回收率在８４．８％～１２０．ｏ％之间。用该方法测定了 健康人、普通病人和癌症病人尿样中的蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤，发现癌症病人 尿样中的新蝶呤水平与健康人和普通病人相比有所升高，生物蝶呤水平有所降低。该 方法准确，可行，适用于临床上尿样中蝶吟类化合物的检测。 关键词：蝶呤类化合物；人体尿液；高效液相色谱；荧光检测
５ ６ ７
ＯＯ６
Ｏ Ｏ １１
Ｏ
Ｏ Ｏ７ １ Ｏ Ｏ １５ Ｏ ＯＯ５ Ｏ Ｏ２ ８
３ ２９ Ｏ Ｏ ３ ８７ ３ ５７１ ３
４
Ｏ ４３ ６
Ｏ
ＯＯ９
Ｏ １６
２ ６Ｏ
Ｏ Ｏ ５６
Ｏ Ｏ
Ｏ５
Ｏ●
ｌ８ ｌ９ ２０ ａ：ｊ±ｓ；ｂ：ｎｏｔ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．
Ｏ Ｏ３ ９
Ｏ ９２７ Ｏ ６ ５ ４ ＋一士±土士
所降低。
表ｌ健康人尿样的分析结果（疗＝６）
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ａｎａＩｙｔｉｃａＩ Ｉ‘ｅｓｕＩｔｓ ｏｆ ｕｒｉｎｅ ｓａｍｐＩｅｓ
ｆｒ咖ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｏｐｌｅ（ｎ＝＝６）
９ １０ １１ １２ １３ １４
Ｏ．４２８±Ｏ．０２３ ２．５５９士Ｏ．０７２ ２．０５０±Ｏ．０５７ ２．５７０士Ｏ．０１４ Ｏ．３９９士Ｏ．０５０ ３．４９ｌ士Ｏ．０１６
第２７卷
ＩｎｆＯｍａｔｉ伽０ｆ
Ｓｅｘ
Ｏｒｄｉｎａｒｙ ｐａｔｉｅｎ协ａｎｄ ＳａｍｐＩｅ １５ １６ １７ １８ １９ ２０
ｃａｎｃｅｒ
ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｓｅｘ ｍａｌｅ ｍａｌｅ ｍａｌｅ ｍａｌｅ ｍａｌｅ ｆｅｍａｌｅ Ａｇｅ ４８ ６５ ７６ ５３ ６３ ５９
Ａｇｅ ７９ ６９ ８ ２４ ３４ ２２
Ｏ．０１８±Ｏ．０１０ １．５１９±Ｏ．０２６ １．６５６ ２．３７５±Ｏ．０２１ Ｏ．１１４±Ｏ．００５ １．０５９士Ｏ．０２７
Ｏ．２６１±Ｏ．００６ Ｏ．６７９土Ｏ．０５９ ＮＤ ＮＤ Ｏ．０８２ Ｏ．６１４±Ｏ．００８
ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ ＮＤ
表３癌症病人尿样的分析结果（捍＝６）