第一节免疫细胞的分类与分离PPT课件
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免疫学(全套课件475P)
防御功能过强（亢进）： 变态反应
异常 ？？
防御功能低下或缺失： 反复感染
14
2020/3/11
2、自身稳定（Homeostasis） 指机体具有清除衰老和破坏的组织细胞的
一种功能。 维持机体的正常生理平衡，保证机体组织
细胞进行正常生理活动。
自身稳定功能失调或异常： 自身免疫性疾病！
15
2020/3/11
——机体对病原微生物（细菌，病毒）及其 有害产物（毒素）的侵入所引起的发病，具 有抵抗力。（Jenner and Pasteur）
—5 5—
2020/3/11
•现代的“免疫”概念
机体识别(区分)自身成分和异己物质， 产生一系列特定的应答过程,最后排除异 物，对自身组织形成耐受，以维持内环 境稳定的一种生理功能。
—20—
（二）特异性免疫（specific immunity）
在动物长生活过程中，机体感染了某种病原体 或接种过某种疫苗后，由于机体与病原体的直接的相互作 用，使其产生一种具有明显针对性的免疫，这种免疫称为 特异性免疫，也称获得性免疫。特异性免疫的主要功能是 识别非自身和自身的抗原物质，并对它们产生免疫应答， 从而保证机体内环境的稳定状态。
四、免疫的分类
免疫
非特异性免疫
天然自动免疫 自动免疫
人工自动免疫
特异性免疫
天然被动免疫 被动免疫
人工自动免疫
（一）非特异性免疫（nonspecific immunity）
凡在生物长期进化过程中形成，属于先天即有、 相对稳定、无特殊针对性的对付病原体的天然抵抗能力， 称为非特异性免疫，也称先天免疫、固有免疫。
1、非特异性免疫功能任何动物都有，受遗传基因控制， 非常稳定。
异常 ？？
防御功能低下或缺失： 反复感染
14
2020/3/11
2、自身稳定（Homeostasis） 指机体具有清除衰老和破坏的组织细胞的
一种功能。 维持机体的正常生理平衡，保证机体组织
细胞进行正常生理活动。
自身稳定功能失调或异常： 自身免疫性疾病！
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2020/3/11
——机体对病原微生物（细菌，病毒）及其 有害产物（毒素）的侵入所引起的发病，具 有抵抗力。（Jenner and Pasteur）
—5 5—
2020/3/11
•现代的“免疫”概念
机体识别(区分)自身成分和异己物质， 产生一系列特定的应答过程,最后排除异 物，对自身组织形成耐受，以维持内环 境稳定的一种生理功能。
—20—
（二）特异性免疫（specific immunity）
在动物长生活过程中，机体感染了某种病原体 或接种过某种疫苗后，由于机体与病原体的直接的相互作 用，使其产生一种具有明显针对性的免疫，这种免疫称为 特异性免疫，也称获得性免疫。特异性免疫的主要功能是 识别非自身和自身的抗原物质，并对它们产生免疫应答， 从而保证机体内环境的稳定状态。
四、免疫的分类
免疫
非特异性免疫
天然自动免疫 自动免疫
人工自动免疫
特异性免疫
天然被动免疫 被动免疫
人工自动免疫
（一）非特异性免疫（nonspecific immunity）
凡在生物长期进化过程中形成，属于先天即有、 相对稳定、无特殊针对性的对付病原体的天然抵抗能力， 称为非特异性免疫，也称先天免疫、固有免疫。
1、非特异性免疫功能任何动物都有，受遗传基因控制， 非常稳定。
第五章免疫细胞
第四节 抗原提呈细胞
凡能加工、处理抗原，并将抗原信息 呈递给淋巴细胞的一类免疫细胞（APC）
专职 单核/巨噬细胞、树突
状细胞、B细胞
非专职 内皮细胞、上皮
细胞等
单核-巨噬细胞 B淋巴细胞
树突状细胞
(一)单 核 吞 噬 细 胞（MON和Mφ）
包括骨髓中的前单核细胞、外周血中的单 核细胞和组织内的巨噬细胞，具有重要的抗 感染、抗肿瘤和免疫调节的作用。 （一）表面标志：
二、免疫细胞的膜表面分子
免疫细胞膜表面存在着大量不同种类的 蛋白质分子。这些分子与免疫细胞的分化 成熟和免疫功能发挥密切相关。 免疫细胞的膜表面分子是区分和鉴别不 同免疫细胞及其亚群的重要标志。 分化抗原、粘附分子、膜受体。
第二节 T淋巴细胞
T淋巴细胞是来自胚肝或骨髓的始祖T 细胞，在胸腺内微环境作用下分化发育成 熟的淋巴细胞，又称胸腺依赖的淋巴细胞 简称T细胞。 介导细胞免疫应答，并在TD—Ag诱导 的体液免疫应答中起重要的辅助和调节作 用。
植物血凝素（PHA）受体
刀豆蛋白（ConA）受体
美洲商陆（PWM）受体
分化抗原（CD 抗原/分子）
CD3 CD4
生物学功能
与TCR相连，稳定TCR结构，传递细 胞活化信息
为MHCⅡ类分子的受体
CD8
CD28 CD2
为MHCⅠ类分子的受体
为B7分子的受体 即淋巴细胞相关抗原-2（LFA-2）， 为LFA-3的受体或绵羊红细胞 （SRBC）的受体
1、T细胞的表面标志
特有的细胞表面的膜分子， 包括抗原受体、分化抗原(CD)抗原、 MHC抗原、黏附分子等。 这些分子是T细胞识别抗原、与其他免 疫细胞相互作用以及接受信号刺激并产生 应答的物质基础，也是鉴别和分离T、B细 胞的重要依据。
免疫器官和组织PPT课件32页PPT
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
结构 白髓：胸腺依赖区: 沿中央小 动脉分布(淋巴鞘), 主要含T细 胞 非胸腺依赖区:白髓内的淋巴 小结和生发中心,含大量Ｂ细 胞 红髓: 内有大量Ｂ细胞、浆细 胞、巨噬细胞和树突状细胞.
脾的功能
1
T、B细胞定居的场所
2
免疫应答发生的场所
3
分泌体液因子
4
过滤作用
三、粘膜相关淋巴组织
（一）粘膜免疫系统组成 包括消化道、呼吸道、泌尿生殖道等粘膜
免疫器官和组织PPT课件
•
26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
•
27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
•
28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯
胸腺微环境
胸
胸腺基质细胞
腺
(胸腺上皮细胞)
微
环
胸腺细胞
境
(未成熟的T细胞)
增殖、分化 和发育
细胞因子 胸腺肽类:
胸腺素 胸腺肽
胸腺的功能
T C分化、发育、 成熟的场所
1
免疫调节作用
3
自身耐受的建立 与维持
5
2
分泌胸腺激素
免疫细胞ppt
① 抗感染作用
病毒感染细胞分泌
IL-12 、TNF-α、IFN-αβ 激活NK细胞
破坏病毒感染细胞
分泌TNF-β 、 IFN-γ 干扰病毒复制
②抗肿瘤作用
广谱抗肿瘤作用
直接与肿瘤细胞密切接触
直接杀伤
（细胞间的黏附作用）
ADCC作用
③免疫调节作用
NK细胞 CKs
调节T、B、骨髓干细胞免疫功能。
本章要点
1、T细胞表面受体
① T细胞抗原受体（TCR）： TCR-CD3复合体 TCRαβ：60-70% 成熟T细胞表面 TCRγδ： 早期T，成熟T（5-15%）
②细胞因子受体： IL-1、2、4、5、6、7
③丝裂原受体： 能诱导T、B细胞增殖和分化的 物质
T细胞： 刀豆蛋白（ConA） 植物血凝素 （PHA）
细胞→前B细胞→ 未成熟B细胞→成熟B细胞。 第二阶段发生在外周免疫器官(抗原依赖期) 接受抗原刺激后，B细胞可发生类型转换，最
终分化为浆细胞
二、B细胞的表面分子
1. B细胞抗原受体（BCR复合体）： 嵌入细胞膜脂类分子中的表面膜免疫球
蛋白（mIg），识别不同的抗原分子，使B 细胞活化
分化成浆细胞，发挥体液免疫。
T、B细胞发育基本过程、表面分子（抗原、 受体）
T细胞亚群及其功能 抗原提呈细胞（APC）的概念、种类 抗原提呈有哪两种途径？ 单核巨噬细胞的功能 NK细胞的概念、功能
BCR与TCR比较
辅助受体：CD19、CD21、 CD81等
协同刺激分子：CD40、 CD80（B7）等 细胞因子受体：IL-1、2、4、6、7 受体，IFN-γ受体 丝裂原受体： 美洲商陆（PWM）
脂多糖（LPS） MHC抗原：MHC-I，MHC-II
临床免疫学检验-第十三章细胞免疫学技术
➢人的红细胞密度为1.093 ➢粒细胞密度为1.092 ➢单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为 1.075-1.090 ➢Ficoll分离液的密度为1.077±0.001
Ficoll分离法
聚蔗糖-泛影葡胺分层液的制备
6%聚蔗糖溶液 (Ficoll溶液)密度1.020
34%泛影葡胺溶液 (Hypaque溶液)密度1.2
酸性磷酸酶测定 非特异性酶的测定
巨噬细胞功能检测
炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90% 炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据 此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)， 间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒 的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判 断巨噬细胞的功能。
吞噬功能检测
鸡RBC
l液 密度1.135
细胞混悬液
高速离心 密
度
6小时
梯 度
低速离心 密 度 梯 度
死细胞残片和血小板 富含单核细胞的组分
富含淋巴细胞的组分 红细胞与粒细胞组分
淋巴细胞亚群的分离
T细胞和B细胞的分离
E花环分离法 尼龙棉分离法
E花环分离法
E受体
T
SRBC
B
E花环 T
离心
B
E花环
聚蔗糖-泛影
形成溶血空斑
可以检测致敏红细胞的各种抗原所对应的抗体,临 床应用比较广泛
反向空斑形成试验
反应物: 琼脂凝胶
SPA致敏的SRBC B细胞 补体 抗Ig抗体
形成溶血空斑
体外检测人类Ig分泌细胞的方法,与抗体的特异性 无关
酶联免疫斑点法
反应物:
包被在固相载体上的抗原 B细胞 酶标二抗
加底物显色
计数斑点形成细胞
Ficoll分离法
聚蔗糖-泛影葡胺分层液的制备
6%聚蔗糖溶液 (Ficoll溶液)密度1.020
34%泛影葡胺溶液 (Hypaque溶液)密度1.2
酸性磷酸酶测定 非特异性酶的测定
巨噬细胞功能检测
炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90% 炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据 此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)， 间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒 的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判 断巨噬细胞的功能。
吞噬功能检测
鸡RBC
l液 密度1.135
细胞混悬液
高速离心 密
度
6小时
梯 度
低速离心 密 度 梯 度
死细胞残片和血小板 富含单核细胞的组分
富含淋巴细胞的组分 红细胞与粒细胞组分
淋巴细胞亚群的分离
T细胞和B细胞的分离
E花环分离法 尼龙棉分离法
E花环分离法
E受体
T
SRBC
B
E花环 T
离心
B
E花环
聚蔗糖-泛影
形成溶血空斑
可以检测致敏红细胞的各种抗原所对应的抗体,临 床应用比较广泛
反向空斑形成试验
反应物: 琼脂凝胶
SPA致敏的SRBC B细胞 补体 抗Ig抗体
形成溶血空斑
体外检测人类Ig分泌细胞的方法,与抗体的特异性 无关
酶联免疫斑点法
反应物:
包被在固相载体上的抗原 B细胞 酶标二抗
加底物显色
计数斑点形成细胞
免疫细胞
Developmental time course of TCR gene expression
T细胞发育的阳性选择
早期胸腺细胞为CD2+CD5+CD4-CD8-， TCRβ基因重排和表达，继而发育成双阳 性CD4+CD8+（DP） 机制：如DP细胞的TCRαβ能与胸腺基质 细胞表面的MHC-I和MHC-II类分子高亲 和力结合，被选择继续发育，否则凋亡
脑
神经元、胶质细胞、血细胞
间质干细胞
骨髓
肌肉细胞、骨骼、脂肪细胞
造血干细胞的生物学特征
1．自我更新（self-renewal） 造血干细胞 不对称有丝分裂 子代细胞1（早期祖细胞）：继续分化 子代细胞2（自我更新）：
（维持造血干细胞的全部生物学特征： 维持干细胞池大小、干细胞数量/质量不变。）
2．多向分化 * 造血干细胞早期祖细胞 对称性有丝分裂多向分化
T细胞的发育过程
造血干细胞(PHSC) 前体T细胞（有TdT）
成熟T细胞
效应T细胞
CD4+
CD8+
T细胞在胸腺内的发育
骨髓：pro-T 早期阶段：DN
CD4-CD8-
第二阶段：DP
CD4+CD8+
第三阶段：SP
CD4+CD8- 或CD4-CD8+
T细胞受体的发育
最早表达CD3δ基因
随即出现pTα的mRNA， TCRβ的胚系转录本
组织专一干细胞
* 是特定组织的起源细胞，具发育潜能； * 动物成体多数组织中保留有部分干细胞；
不同组织来源的干细胞可能互相转化。
神 经
骨髓环境
干
细 胞
脑部
免疫细胞分离技术
流程长, 步骤繁, 成本高
上海交通大学医学院
人外周血淋巴细胞(亚群)的分纯(purificcation) 人外周血单个核细胞（PBMC）主含淋巴细胞, 但混有 单核细胞、粒细胞、红细胞和血小板等。淋巴细胞的分纯： （一）红细胞的去除（0.83%氯化铵、蒸馏水） （二）血小板的去除（离心、洗涤） （三）单核、粒细胞的去除（黏附去除，羰基铁粉吞噬） （四）淋巴细胞亚群的分离★
上海交通大学医学院
正选（positive selection）法： 磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞
负选（negtive selection）法： 磁珠结合不需要的细胞，游离于上清液的细胞为所需细胞
一般而言，负选法比正选法的磁珠用量大
上海交通大学医学院
评价(evalution)：
Lymphocytes + sRBC , centrifugation----T lympho-cytes(底) / B lympho-cytes（界面）
上海交通大学医学院
2、黏着性（理化）： B淋巴细胞易黏附聚酰胺纤维（尼龙纤维）表面，而T淋巴细胞则不易附 着～
（例）尼龙棉柱分离 — 直接流出的是T淋巴细胞。 3、免疫学：用特异性抗体并使其固相化，捕获具特定膜抗原的细胞～ （例）1、亲和板结合分离
上海交通大学医学院
Precipitation of E rosette
Erythrocyte Rosette forming cell; ERFC The sueface of T lymphocyte contains the receptor (CD2) of sheep erythrocyte ,which is called E receptor for short . T lympho-cytes can form E rosette with sheep erythro-cytes by its E receptor.
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人外周血淋巴细胞(亚群)的分纯(purificcation) 人外周血单个核细胞（PBMC）主含淋巴细胞, 但混有 单核细胞、粒细胞、红细胞和血小板等。淋巴细胞的分纯： （一）红细胞的去除（0.83%氯化铵、蒸馏水） （二）血小板的去除（离心、洗涤） （三）单核、粒细胞的去除（黏附去除，羰基铁粉吞噬） （四）淋巴细胞亚群的分离★
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正选（positive selection）法： 磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞
负选（negtive selection）法： 磁珠结合不需要的细胞，游离于上清液的细胞为所需细胞
一般而言，负选法比正选法的磁珠用量大
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评价(evalution)：
Lymphocytes + sRBC , centrifugation----T lympho-cytes(底) / B lympho-cytes（界面）
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2、黏着性（理化）： B淋巴细胞易黏附聚酰胺纤维（尼龙纤维）表面，而T淋巴细胞则不易附 着～
（例）尼龙棉柱分离 — 直接流出的是T淋巴细胞。 3、免疫学：用特异性抗体并使其固相化，捕获具特定膜抗原的细胞～ （例）1、亲和板结合分离
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Precipitation of E rosette
Erythrocyte Rosette forming cell; ERFC The sueface of T lymphocyte contains the receptor (CD2) of sheep erythrocyte ,which is called E receptor for short . T lympho-cytes can form E rosette with sheep erythro-cytes by its E receptor.
15-免疫细胞的分离和保存技术
淋 T细胞：CD2、CD3、CD4、CD8、
巴
CD25等。
细 胞
B细胞：CD19、CD20、CD21、CD22、 CD29等。
1、E花环沉淀法 方法：淋巴细胞+ SRBC悬液→加入 分层液→T细胞形成E花环而沉于管→ 悬液中为B细胞。
2、尼龙毛分离法
方法：淋巴细胞→通过聚酰胺纤维管 →洗脱下来的是T细胞。
（二）斑螯敷法
•此法可从人体组织液中获取较纯的吞噬细胞。 •方法：
用滤纸蘸取10%中药斑螯酒精浸出液 → 贴敷在臂内侧皮肤表面 → 4~5小时后皮肤局部充血 → 48小时后局部形成水泡 → 吸取水泡中的组织液，内 含大量巨噬细胞。 •但此法对病人皮肤有一定损伤，有时可引起局部感 染。
• 中性粒细胞的分离
→与磁珠结合的细胞运动将受限， 未与磁珠结合的细胞将先被洗脱
→再将该柱移出磁场
→与磁珠结合的细胞将被洗脱。
5、磁性激活细胞 分离器分离法
6、淘选法 (利用 表面标志分离淋 巴细胞亚群）
五、单核巨噬细胞的分离
（一）Percoll分离法 •此法从外周血中分离出单核-巨噬细 胞，但由于此类细胞在外周血中的含 量较低，分离时所需的血量较多。
人：静脉采血，抗凝剂抗凝。 动物：颈静脉采血法、尾部采血法、
眼眶采血法、心脏采血法等。
二、外周血中白细胞的分离
血液中红细胞与白细胞比例约为600:1~1000:1， ➢ 两者的比重不同，其沉降速度也不同，通常
用两种方法加以分离。 1、自然沉降法 2、聚合物加速沉淀法 ➢ 或采用0.83%氯化铵分离法使红细胞破裂后， 洗涤得到白细胞。
2、吸附柱过滤法 •将单核 细胞吸附于玻璃柱中，洗脱下 来的主要是淋巴细胞。
第一节细胞通过分裂产生新细胞(ppt)
遗传物质也相同。
讨论
细胞分裂前后，虽然数目增倍，但 每个细胞的染色体和遗传物质却没有增 减，这有何意义？
保证分裂出来的新细胞跟原来是一样的。 保证遗传信息的稳定性。
细胞分裂的意义
促进生物体的正常生命活动 • 繁殖新个体 • 新个体由小长大 • 更新衰老、死亡细胞
脱缰之马——癌细胞
脑癌细胞
胸癌细胞
免疫细胞攻击癌细胞
你知道威胁人类健康 的四大“杀手”吗？
✓心血管病
✓癌症
✓艾滋病
✓糖尿病
结肠癌的发生过程
全世界每年约有700万人被癌症夺 去了生命。原因是：
1、癌细胞分裂速度非常快，且无限分裂形成肿瘤。 2、癌症晚期癌细胞可侵入邻近的正常组织，并通 过血液、淋巴进入其他组织和器官
1951年 ，科学家从黑人妇女海拉体内，通过细胞分离 建立了“海拉细胞系”，至今已有50多年，仍然在世界许 多实验室中广泛地传代使用。“海拉细胞系”属于：癌细 胞
细胞癌变的原因
（1）物理致癌因子 射线：紫外线、X射线等
二战后日本广岛、长崎
切尔诺贝利核电站核泄漏
幸存居民癌症发生率明显增加
悲惨的受害者
（2）化学致癌因子 如砷、苯、煤焦油等
丙烯酰胺
亚硝胺
苯并芘
DNA 基因
染色质丝
组蛋白
染色体
练习
按下图方法，用图示表示下列概念的关系
生物体 细胞
动物 细胞
植物 细胞
细胞核 染色体
DNA 基因 细胞
细胞
细胞核 染色体
DNA 基因
想一想：细胞分裂过程中，染色体是如何变化？
A
√B
• 染色体复制，数量增加一倍，再平均分配到两个 新细胞里。
讨论
细胞分裂前后，虽然数目增倍，但 每个细胞的染色体和遗传物质却没有增 减，这有何意义？
保证分裂出来的新细胞跟原来是一样的。 保证遗传信息的稳定性。
细胞分裂的意义
促进生物体的正常生命活动 • 繁殖新个体 • 新个体由小长大 • 更新衰老、死亡细胞
脱缰之马——癌细胞
脑癌细胞
胸癌细胞
免疫细胞攻击癌细胞
你知道威胁人类健康 的四大“杀手”吗？
✓心血管病
✓癌症
✓艾滋病
✓糖尿病
结肠癌的发生过程
全世界每年约有700万人被癌症夺 去了生命。原因是：
1、癌细胞分裂速度非常快，且无限分裂形成肿瘤。 2、癌症晚期癌细胞可侵入邻近的正常组织，并通 过血液、淋巴进入其他组织和器官
1951年 ，科学家从黑人妇女海拉体内，通过细胞分离 建立了“海拉细胞系”，至今已有50多年，仍然在世界许 多实验室中广泛地传代使用。“海拉细胞系”属于：癌细 胞
细胞癌变的原因
（1）物理致癌因子 射线：紫外线、X射线等
二战后日本广岛、长崎
切尔诺贝利核电站核泄漏
幸存居民癌症发生率明显增加
悲惨的受害者
（2）化学致癌因子 如砷、苯、煤焦油等
丙烯酰胺
亚硝胺
苯并芘
DNA 基因
染色质丝
组蛋白
染色体
练习
按下图方法，用图示表示下列概念的关系
生物体 细胞
动物 细胞
植物 细胞
细胞核 染色体
DNA 基因 细胞
细胞
细胞核 染色体
DNA 基因
想一想：细胞分裂过程中，染色体是如何变化？
A
√B
• 染色体复制，数量增加一倍，再平均分配到两个 新细胞里。
免疫细胞的分离技术
CD80 (B7-1)、CD86 (B7-2) 、CD267(TACI)、CD268(BAFFR)、
CD269(BCMA)、CD307(IRTA2)
髓样细胞 CD14、CD35(CR1)、CD64 (FcRI)、CD256(APRIL)、
CD257(BAFF)、CD312(EMR2)
血小板 CD36、CD41(整合蛋白IIb)、CD42aCD42d、CD51(整合蛋白v) 、
➢ 不同细胞密度不同 ➢ 不同细胞表面生物学特性不同 ➢ 不同细胞表面分化抗原不同
17
免疫细胞的分离技术
根据不同的实验目的可以采取下列不同的分离方法
1、密度梯度离心法 2、黏附分离法（尼龙毛法、贴壁法、亲和板法） 3、磁性分离法 4、荧光激活分离法 5、其他分离法（花环沉降法）
18
（一）外周血单个核细胞分离
加工处理抗原，将抗原肽提呈给抗原特异性淋巴细胞的 一组免疫细胞。血液中主要的APC细胞主要包括单核细 胞、树突状细胞、B细胞
10
其他细胞
自然杀伤(NK)细胞，肥大细胞，嗜酸性粒细胞，嗜中 性粒细胞，嗜碱性粒细胞，血小板等
NK细胞 肥大细胞 嗜酸性粒细胞 嗜中性粒细胞 嗜碱性粒细胞 血小板
11
免疫细胞的特征
39
方法 （以CD4+T细胞为例）
1. 羊抗兔Ig包被平皿 2. CD4 一抗培育T细胞，倒入平皿，4℃孵育1小时； 3. 收集未粘附的CD4-T细胞 4. PBS漂洗非特异吸附的CD4-T细胞 5. 收集粘附的CD4+T细胞，可以用刮板刮取并在显微
镜下观察
40
免疫磁珠法 （Magnetic activated cell
CD55(DAF)、CD59、CD252(OX40L)、 CD279(PD1)、
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抗原肽分子四聚体技术
细胞的冻存与复苏
细胞冻存的原理与方法 细胞复苏的原理与方法
细胞冻存罐
第二节 免疫细胞膜分子的检测
一、免疫细胞膜分子检测的原理与类型 二、免疫细胞膜分子的检测方法
免疫细胞膜分子检测的原理与类型
、以抗体识别抗原 、以配体识别受体
免疫细胞膜分子的主要检测方法
、免疫标记检测方法 荧光抗体法 酶免疫检测法 免疫金银染色法
、补体依赖的细胞毒试验（） 、花环形成试验
的荧光抗体检测法
的酶免疫检测法
染料
补体
补体依赖的细胞毒试验（）
花环
花环形成细胞 细胞
绵羊红细胞 细胞
花环
花环
第三节 免疫细胞功能测定
一、转化、增殖试验 二、细胞毒试验 三、抗体形成试验 四、细胞吞噬与杀伤试验
转化、增殖试验
、淋巴细胞转化试验 、混合淋巴细胞培养
密度
直径（ ）
血小板
—
淋巴细胞 —
—
粒细胞
—
红细胞
—
黏附分离法
尼龙毛法 贴壁法 亲和板法 吸附柱法
样品
流体护套
喷嘴 偏转板
接物镜
透镜
滤光片
荧光检测器ຫໍສະໝຸດ 激光束细胞收集管荧光激活分离法（）
流式细胞仪
磁性分离法
磁铁吸引法 磁式细胞分类术法
(阳性选择法）
(阴性选择法）
其他分离法
花环沉降法 细胞活化克隆法 分子四聚体法
、密度梯度离心法 、黏附分离法 、荧光激活分离法 、磁性分离法 、其他分离法
密度梯度离心法
稀释抗凝血
血浆
淋巴细胞分离液 离心前
单个核细胞
粒细胞 红细胞 离心后
沉降速度
（—）
颗粒比重 溶质比重 颗粒半径 形状因子 颗粒摩擦系数同体积球型颗粒摩擦系数 粘稠度 相对离心力
人类血液有形成分的平均密度与直径
细胞凋亡机制
细胞凋亡的特点
、细胞皱缩 、染色质边集 、凋亡小体出现
细胞凋亡
细胞凋亡的检测方法
、形态观察法 、生化检测法 、流式细胞仪检测法
形态观察法
普通光镜检测——染色 甲基绿派诺宁染色
荧光显微镜检测——溴化丙锭染色
透射电镜检测——典型形态改变
生化检测法
凝胶电泳法 原位末端标记法 二苯胺分光光度法
、细胞吞噬功能试验 、细胞杀菌功能试验
吞噬百分率
吞有颗粒的吞噬细胞数 计数的吞噬细胞数
吞噬指数
吞噬细胞吞噬的总颗粒数 计数的吞噬细胞数
还原试验
原理：
四氮唑基（淡黄色）
甲月簪基（紫黑色）
还原试验
方法： 、抗凝血 硝基蓝四氮唑（），。孵育。
、推片染色、镜检。 正常值： 阳性细胞
第四节 免疫细胞凋亡测定
感谢聆听
不足之处请大家批评指导
Please Criticize And Guide The Shortcomings
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
凝胶电泳法
原理：断裂在凝胶中呈梯形排列 （）
方法：提取总 凝胶电泳 观察 现象
原位末端标记法（）
原理：利用标记的，在作用 下结合断片的’末端羟基， 显示断链，提示凋亡
方法：制备组织切片 标记物结合 标记物显色 镜检
二苯胺分光光度法
原理：细胞凋亡可产生低分子量，通过超速 离心可与细胞核的高分子量分离，分别测定 两种，即可得出凋亡百分率。 方法：裂解细胞
超速离心 分别提取 使显色，测定
凋亡百分率
上清液值 上清液值沉淀值
流式细胞仪法
原理：标记凋亡细胞，通过可 显示凋亡细胞的特征性亚二倍体 峰。并可经计算分析得出凋亡百 分率。
方法：制备细胞悬液 染色 检测
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End
淋
丝裂原（抗原）刺激
巴
细
胞
转
化
试
验
原
理
示
放射性测定
意
细胞毒检测试验
、细胞介导的细胞毒试验 、活性测定 、作用测定
细
胞
毒
靶细胞
效应细胞
试
验
原
分离上清
理
示
意
放射性测定
抗体形成试验
、直接溶血空斑试验 、间接溶血空斑试验 、溶血空斑试验
直接溶血空斑试验
间接溶血空斑试验
溶血空斑试验
细胞吞噬与杀伤功能试验
第一节 免疫细胞的分类与分离
一、免疫细胞的种类与特征 二、免疫细胞的分离技术 三、细胞的冻存与复苏
免疫细胞的特征
、免疫细胞的形态学特征 理化性状 生物学特性
、免疫细胞的膜分子特征 分子
免疫细胞的起源与分化
红细胞 血小板 肥大细胞 中性粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 细胞 细胞
免疫细胞的分离技术
一、细胞凋亡的概念与原理 二、细胞凋亡的检测方法
细胞凋亡的概念与原理
、细胞凋亡的概念 、细胞凋亡的原理 、细胞凋亡的特点
细胞凋亡（）
细胞在内源性基因调控下 发生的主动死亡过程，也称程 序性死亡。
细胞凋亡的过程
凋亡信号——凋亡受体——信号传导— —凋亡基因启动——编码程序性死亡蛋 白——细胞结构解体——细胞凋亡