复习3.3体外受精 胚胎培养及移植的应用前景

根据来源和个体发育过程中先后次序不同， 干细胞可分为： 胚胎干细胞和 成体干细胞／组织干细胞
全能细胞
多能、专能.
按照分化潜能大小来分类
• 全能干细胞（胚胎干细胞）
– 桑椹胚及以前（如受精卵）
– 由内细胞团细胞、原始性腺细胞分离出来
分 类•
– 能发育成完整个体
多能干细胞(成体干细胞)
– 能分化出动物体内的多种组织（造血干细胞）
4) 保存品种资源和保护濒危物种；
5)充分发挥雌性个体的繁殖潜力,缩短供体本身的 繁殖周期。
4、胚胎移植的基本程序
阅读课本，思考胚胎移植的基本 程序包括哪几个步骤？ P76 （1）供体、受体的选择和处理
（2）配种或进行人工授精
（3）胚胎的收集、检查、培养或保存
（4）胚胎移植
（5）移植后的检查
（1）对供体、受体进行选择
对于大家畜或大型动物如何采集卵子
屠宰场从刚屠宰的雌性动物体内摘取卵巢，再从卵巢中采集卵母细胞。 超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜（活体采卵）
采集的卵子是否马上可以受精 初级卵母细胞，体外培养至MII中期
2.精子的收集和获能
收集精子的方法有：
假阴道法 手握法 电刺激法
精子的获能
培养法：（啮齿动物、家兔和猪的精子）精子在 获能液 中
胚胎工程技术： 胚胎移植 体外受精 胚胎分割 胚胎干细胞培养 目前应用较多的是： 胚胎移植、胚胎分割、 早期胚胎培养技术。
概 念：---试管动物技术
通过 人工操作使卵子和精子在 体外条件 下成熟和受精，并通过培 养发育成 早期胚胎 后，再经移植产
生后代的技术。
试管动物培育过程： 第一步：体外受精 第二步：早期胚胎的培养 第三步：胚胎移植
将雌性动物的早期胚胎,或者通过 体外受精及其他方式得到的胚胎,移 植到同种的、生理状态相同的其他 雌性动物的体内,使之发育为新个体 的技术。
胚胎的来源： 雌性动物的早期胚胎或体外受精及 其他方式得到的胚胎。 供体： 提供胚胎的个体。 受体： 接受胚胎的个体。 受体的条件：同种、生理状态相同。
总结：
胚胎培养发育到适宜阶段时，可将其取出向受体移
植或冷冻保存。 不同动物胚胎移植时间不同 牛、羊： 桑椹胚或囊胚阶段 卵裂期或囊胚 小鼠、家兔： 试管婴儿： 8个或16个细胞阶段
小 结
采集卵母细胞
1）超数排卵（试剂） 方法 2）活体取卵（仪器） 3）从屠宰的卵巢取卵
采集精子
方法①②③
体外培养 成熟的卵子
体外获能
（方法，试剂）
（时期：MII中期 ）
获能的精子
体外受精
（试剂）
（培养条件） 早期胚胎培养 胚胎移植 受体牛
比较试管动物和克隆动物 试管动物 克隆动物
生殖方式
技术手段
有性生殖
体外受精 胚胎移植
无性生殖
核移植技术、
胚胎移植
主要来自核供体 不遵循
遗传物质 遗传规律
来自2个个体 遵循
1.胚胎移植 —— P74
为什么在第7天 进行冲卵？
（5）对胚胎进行质量检查
你知道检查的 目的吗？ 此时胚胎处于 什么时期？
（6）胚胎的保存或移植
胚胎保存的条件是什么？
胚胎为什么要保存？
（7）胚胎的移植
方法一：手术法
具体做法：引出受体子 宫和卵巢，将胚胎注入 子宫角，缝合创口。
方法二：非手术法 将装有胚胎的移植管送 入受体母牛子宫的相应 部位，注入胚胎。
胚胎移植的实质
胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生 理环境条件下空间位置的转换，而胚
胎本身的遗传物质并不发生改变，因
此各种性状均能保持其原来的优良特
性。
3.胚胎移植的现状和意义
1)保持供体优良特性(加速育种工作和品种改良) 2)节约成本\费用(大量节省购买种畜的费用)； 3)大规模繁殖(一胎多产)；
动物胚胎细胞的全能性。
所以胚胎分割的时期为： 囊胚或桑椹胚。
4、选择的胚胎： 发育良好的,形态正常的桑椹胚或囊胚。 5、使用的主要仪器： 实体显微镜和显微操作仪。 6、具体操作 用分割针或分割刀片将胚胎切开， 吸出其中的半个胚胎，注入预先准备好 的空透明带中，或直接将裸半胚移植给 受体。
.
.性别鉴定2
.优点
第二次对受体母牛是否妊娠进行检查。
③产下的犊牛性状取决于所用公牛和供体牛，
性别取决于公牛提供何种类型的精子，二者与受体牛 没有关系。
④冲卵的含义是从子宫中冲出胚胎，而非冲出卵子。
胚胎移植成功与否要有两个条件
• （1）胚胎移植一般应在同种 的雌性供体和受体之间进行。 • （2）进行胚胎移植的供体和 受体的生理状态要相同。
选择 供体母牛
受体母牛
……同期发情处理…… 超数排卵
供体公牛
配种（人工授精）
收集胚胎（冲卵） 胚胎移植 质量检查、培养 妊娠检查
分娩（胚胎移植的犊牛）
【归纳总结】
①该过程中两次使用促性腺激素，
第一次对受、供体进行同期发情处理；
第二次用于供体的超数排卵。 ②该过程中的两次检查：
第一次对收集的胚胎进行检查；
诱导因子：诱导ES细胞向不同类型的组织细 胞分化。
胚胎干细胞的应用前景
1）移植ES细胞修复坏死或
退化部位，治愈糖尿病、肝 成骨不良 (心)衰竭、 ________等病症 2）ES细胞体外诱导分化， 人造组织器官 可培育________
3)ES细胞在牛黄酸、丁酰环
腺苷酸等诱导因子作用下可 向不同类型组织细胞 分化 ________
• 专能干细胞
– 如成肌细胞、皮肤生发层细胞等 – 能分化出特定的（一种或两种）组织
.分别指什么, 分化程度, 潜能；核全能性；目前初始化 .应用
.
.分类
干细胞可以通过以下四个途径获得： (1)从体外培养的胚胎获得；
(2)从早期流产的胎儿中获得；
(3)从克隆的胚胎中获得；
(4)从成体中获得。
胚胎干细胞
•胞核大、 核仁明显
• 功能：
– 具有发育的全能性， 可以分化成任何一种 组织。 – 体外培养，只增殖不 分化。可冷冻保存； 可进行遗传改造
.为什么要移植，练习册P56 11 .全能细胞
3.主要用途
（1）治疗人类的某些顽症。
（2）培育出人造组织器官，用于器官移植 （3）ES细胞也是研究体外细胞分化的理想 材料。 ES细胞在饲养层细胞上，或在添加抑制因 子的培养液中，能够维持不分化的状态。
供体： 遗传性能和生产 性能优秀的个体； 受体： 健康和正常繁殖 能力的个体 处理： 同期发情 具体做法： 注射相关激素。
（2）采集卵母细胞
方法：
超数排卵 具体做法：
注射促性腺激素
（3）配种或人工授精 精子来源：
同种优良的 雄性动物。
（4）胚胎的收集
在配种或输精后第 7天，用特制的冲卵装 置，把供体母牛子宫内 的胚胎冲洗出来。
__________________
获能。 化学诱导法：（牛、羊等家畜） 精子在一定浓度的 肝素 或
_______________ _______________________ ______________________________________
钙离子载体A23187溶液 中，
用化学药物诱导获能。
一、体外受精 概念：采取雌性动
物的 卵母细胞 和雄
性动物的 精子，使
其在 试管 中受精。
主要包括 卵母细胞的采集 、 精子的获取 和 受精 等几个主要步骤 。
如何使雌性动物排出更多的卵子 促性腺激素处理（使雌性动物超数排卵）
对实验动物小鼠、兔和小家畜,猪、羊动物如何采集卵子 从输卵管中冲取卵子，又叫（冲卵 ）
3.受精
获能的精子和
培养成熟的MⅡ 卵子，一般情况
下在 获能溶液
或 专用受精溶液 中完成受精过程。
二、胚胎的早期培养
概念：应用人工创造条件，对获取的 进行体外 早期胚胎 盐类：无机盐和有机盐 培养。
营养物质：氨基酸、核苷酸 调节物质：维生素、激素
培养液成分：
特有物质：动物血清
气体：02和c02
三、胚胎移植
8、胚胎分割技术的缺陷
（1）刚出生动物的体重偏低， 毛色和斑纹还存在差异；
（2）采用胚胎分割技术产生同 卵多胎的可能性是有限的。 9、胚胎分割技术的应用: 为转基因技术、性别控制技 术提供活胚材料。
干细胞
原始性腺中分离 概念：由 早期胚胎 或_______
出来的一类细胞。简称ES或EK细胞。
干细胞是一种具有多项分化潜能和自我复制、 更新能力的原始未分化细胞，是形成哺乳类 各种组织器官的细胞。
（8）对受体母牛进行是否妊娠的检查
（9）受体母牛产下胚胎移植的犊牛
二、胚胎分割 1.概念: 采用显微手术（机械方法）的 方法将早期胚胎分割成2分胚,4 分胚或8分胚,经体内或体外培养 后植入受体，以得到同卵双胎或 同卵多胎的技术。
2.特点：
后代具有相同的遗传物质， 因此胚胎分割可以看做动物 无性繁殖或克隆的方法之一。 3、理论基础