葡萄糖注射液无菌检查的方法验证

葡萄糖注射液无菌检查的方法验证

1、样品：

葡萄糖注射液，规格：500ml：25g(批号：101001)：2、方法：

按照中国药典2010年版二部无菌检查中薄膜过滤方法验证。

3、仪器及用具：

TXQ-LS-30SII小型真空灭菌柜（山东新华），JT2010集菌仪(杭州泰林有限公司)，APY220型全封闭无菌试验过滤培养器（杭州泰林有限公司）。

4、培养基

无菌检查用硫乙醇酸盐流体培养基，批号：；改良马丁培养基，批号：；营养琼脂培养基，批号：；玫瑰红钠琼脂培养基，批号：（均由北京三药科技开发公司生产）。

5、验证试验用菌种（第三代）：

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B) 26 003]；铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B) 10104]；枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63 501]；生孢梭菌（Clostidium sporogenes）[CMCC(B) 64 941]；白色念株菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98 001]；黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F) 98 003]；菌种均由中国生物制品检定所提供。

6、菌液制备：

取经35℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌的营养琼脂培养物1ml，加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50～100cfu/ml菌悬液备用。

取经35℃培养18～24小时的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养物1ml，加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6约为50～100cfu/ml菌悬液备用。

取经35℃培养18～24小时的白色念株菌改良马丁液体培养物1ml，加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50～100cfu/ml菌悬液备用。

取经25℃培养一周的黑曲霉改良马丁斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液

10ml，将孢子洗脱，然后，吸出孢子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗（湿热灭菌）过滤，除去菌丝，收集菌液至另一无菌试管内作为菌原液，取此菌原液0.1ml加入到0.9%无菌氯化钠溶液至9.9ml中，稀释至10-5约为50～100cfu/ml孢子悬液备用，同时进行菌液计数。

各菌液计数结果见表1。

表1细菌和真菌计数结果（菌数为2个平皿的平均数cfu/ml）

7、验证试验：

7.1薄膜过滤法：

取规格为每支装10ml的供试品2支，加至100ml0.9%无菌氯化钠溶液中，混匀，按薄膜过滤法全量过滤，在约50ml的0.9%无菌氯化钠溶液中加入少许100cfu试验菌，同法过滤，将100ml相应的培养基加至封闭式薄膜滤器中，作为一株菌的供试品管。同法制备其它5株菌所用的供试品管，按规定的温度培养3～5天，每天观察并记录结果。

规格为每支装2ml的样品除取用量为5支外，其他操作同上。

7.2菌液对照：

另取封闭式薄膜过滤器，不过滤供试品，其它操作同上（同法加入等量的试验菌），作为菌液对照管。6种试验菌分别同法操作，按规定的温度培养3～5天，每天观察并记录结果。

7.3阴性对照：

两个滤器内过滤0.9%无菌氯化钠溶液各200ml，然后分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100ml，不加对照菌液，分别培养。

7.4培养：

硫乙醇酸盐流体培养基置35℃培养；改良马丁培养基于25℃培养。

8、验证试验结果：

供试品管及菌液对照管见表2，阴性对照管在规定时间内没有菌长出。

表2 香丹注射液无菌检查验证试验结果

9、结论：

根据上述验证结果，本品香丹注射液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念株菌、黑曲霉无抑菌作用，其无菌检查应按照中国药典2005年版一部无菌检查法（附录XIII B）中的薄膜过滤法进行，不需冲洗，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌。

10、无菌检查法：取本品，按中国药典2005年版一部无菌检查法（附录XIII B）中的薄膜过滤法检查，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，应符合规定。

湖北省药品检验所

2008年2月

湖北清大康迪药业有限公司

2009年3月25日