原核生物鞭毛
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细菌的鞭毛可被去除,因此可对鞭毛丝的再生进行研究。认为鞭 毛蛋白是一种呈球状或卵圆状蛋白,在细胞质内合成,通过鞭毛丝的 中央髓孔进行运输的。当它们到达顶端时,鞭毛蛋白亚基在特定丝状 体帽的指引下自发聚合,所以鞭毛丝是在其顶端而非基部生长的。由 鞭毛蛋白分子来合成鞭毛的过程称为自我组装:鞭毛丝组装所必需的 所有信息都存在于蛋白亚单位本身的结构中,虽然在鞭毛丝延长期, 生长速率很慢,但鞭毛的生长或多或少是不间断的,如果尖端部分折 断,它是可再生。
图16 细菌鞭毛马达结构示意图
MotA/MotB复合物
MotB的穿膜区域具有一个 保守的关键氨基酸—Asp, 它是质子的结合位点;
质子的转移会导致MotA胞 质区(MotAC)的构象改 变,这一改变可能会使 MotAC的关键带电残基 (Arg90和Glu98)与FliGC 上的保守带电残基相互作 用,进而驱动鞭毛马达的 旋转。
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二. 鞭毛的合成
鞭毛的合成是一个复杂的过程,涉及至少40多个 基因,除鞭毛蛋白基因外,还有10个或更多基因用 于编码钩形鞘蛋白和基体蛋白。fla、fli和flg基因是运 动所必需的,这些基因具有几种功能,包括编码鞭 毛器官的结构蛋白,将鞭毛组分从膜运到细胞外 部,还有在新的鞭毛合成中调控其周围的一些生化 变化。细胞中,从细胞分裂周期中发出的代谢因子 信号紧密地调节着鞭毛合成。
FliJ是胞质中的分子伴 侣,它和底物(即未 成熟的鞭毛蛋白)结 合,可以防止底物在 胞质中聚集。
4.3、蛋白输出过程
近期的遗传分析表明FliI水解ATP产生 的能量并不是直接被用于鞭毛蛋白的 转移过程的。而是用于诱导FliHx/FliI6 复合物解聚释放的。真正驱动蛋白转 移的是跨膜质子动力。
图23 鞭毛蛋白输出过程
FliG
F具li有GME和HFPlQiGRC的,保分守别 表面补丁和保守的疏 水补丁,并由一个а螺旋和一个短的延伸
连接子连接起来,该
连接中具有两个保守 的Gly残基,使连接更 加灵活;
图14 FliGMC的保守表面特征示意图
FliG
FliGM和FliGC所具有 EHPQR的保守表面区 和保守的疏水区均与 FliM存在相互作用, 在FliM的调节下,二 者通过它们之间的铰 链连接相对运动,进 而调节马达顺时针或 逆时针旋转。
鞭毛蛋白输出设备: 位于转子胞质面,该 设备可以识别、展开 鞭毛组分,并可以使 这些组分移位进入鞭 毛的中央通道和生长 末端,进而在细胞膜 外构建鞭毛;
定子:图中绿色部分所显 示,它是一种穿膜蛋白复 合物,并与肽聚糖层相 连,起到锚定基体的作 用;另外,形成了质子或 钠离子通道,并把质子流 或钠离子流跨膜形成的运 动力转化成为鞭毛马达旋 转所需要的机械功。
鞭毛丝的生长。鞭毛蛋白亚基通过鞭毛髓孔运输并加到正在生长的端部
鞭 毛 的 生 长 方 式 是 在 其 顶 部 延 伸
鞭毛的合成是自我装配(self-assembly)的一个极好例子。其过 程“是一个比我们任何人以前所想象的都要更复杂的过程”。鞭毛 丝组装所需要的信息就存在于鞭毛蛋白亚基结构中。
“帽子”在合成鞭毛中的作用
T环将PomA/PomB复合物募 集到马达中的一个适当的位 置,进而行使Na离子通道的 功能。
图20 钠离子驱动的鞭毛马达 中的定子装配模型
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4. 鞭毛蛋白输出设备
鞭毛蛋白输出设备由6种 整合膜蛋白(FlhA, FlhB,FliO,FliP,FliQ 和FliR)和三种可溶性 蛋白(FliH,FliI和FliJ) 组成;
G-菌鞭毛的超微结构 左:箭头所指是弯曲的钩形鞘和基体的位置 右:鞭毛基体
一、鞭毛的结构
从Sslmonella(沙门氏菌)野生型细胞 中分离得到的鞭毛的电子显微镜照片
鞭毛的示意图
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鞭毛由三部分组成:
基体:嵌入在细胞壁内的部分,即分子马达; 鞭毛钩:作为分子万向铰链,连接马达的主轴 和鞭毛丝,起传递扭矩的作用; 鞭毛丝:作为执行部件由马达驱动旋转,产生 推进力,驱动细菌运动,功能类似螺旋桨。
图22 FliI及其六聚体的结构示意图
4.2、FliH、FliJ
FliH二聚体结合于一分 子的FliI上;
FliH是FliI ATP酶活性 的负调节蛋白,它与 FliI结合,不但可以使 没有与底物结合的FliI 保持ATPase的低活 性,而且,它还是将 携带底物的FliI定位于 FlhA和FlhB 所必需 的。
2.2、FliM、FliN
FliM和FliN形成一个稳 定的复合物,其中包括 1个FliM拷贝和4个FliN 拷贝,这个复合物占据 了C环的大部分;
FliM既和FliG结合,又 和FliN结合,所以FliM 位于FliG和FliN之间。
图10 C环中FliG, FliM和FliN的假定位置
FliN
FliN是一个环状四聚体;
三. 鞭毛运动的机理
原核鞭毛的工作原理不同于真核鞭毛,其鞭毛丝的形状像一个刚性的螺旋,当 螺旋转动时,细菌运动。大量的证据表明,鞭毛的作用与小船的螺旋桨相似,而具 有直鞭毛或异常的长钩形鞘区域的细菌突变株不能游动。
鞭毛旋转的方向决定了细菌运动的性质。在进 行正常的向前运动时,极生单鞭毛逆时针(CCW) 转动,而细胞本身进行缓慢的顺时针(CW)旋 转。随着拖曳在后面的鞭毛的运动,旋转的螺旋状 鞭毛丝推动着细胞前进。同时,单鞭毛细菌还可通 过改变鞭毛旋转方向而随机停止并翻滚。
2 转子的结构
转子由四种蛋白组 成:FliF,FliG,FliM 和FliN; FliF自装配成嵌于细 胞膜中的MS环;
2.1、FliF(MS环)
利用去污剂溶解细菌 细胞膜碎片,可以分 离得到鞭毛基体,在 这个基体中的MS环主 要是由FliF构成的,所 以它又被称为FliF环, 具有5个结构域 :R, S,C,M,P。
图7 FliF环的三维结构
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Crystal structures of FliGMC, FliM, and FliN, and a model for subunit organization in the C ring
FliM,FliN和FliG 自装配成C环,并 位于MS环的胞质 侧,它们不但负责 产生扭矩,而且还 可以切换方向,使 得马达可以逆时针 (CCW)或顺时 针(CW)旋转, 因此C环又被称为 切换蛋白(复合 体)。
周生鞭毛细菌,其鞭毛CCW旋转时向前运动, 这时鞭毛的钩形鞘区域弯曲,形成一个旋转簇,推 动它们前进,而鞭毛CW旋转则使该簇解开,细胞 发生翻滚。
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运动机制 鞭毛的运动机制是通过“栓菌”试验验证的。
鞭毛逆时针旋转推动细菌向前运动; 鞭毛顺时针旋转,菌体停止并翻滚(周 生鞭毛菌)或改变运动方向(极生鞭毛 菌,拉细胞代替了推细胞),然后回到 逆时针旋转推动细菌向前运动。
图17 转子与定子上的一些重 要功能性残基示意图
3.2、PomA/PomB复合物
PomA/PomB定子复合物与基体 的连接需要MotX和MotY; MotY的晶体结构包括两个明显的 区域,MotYN和MotYC; MotYN的作用是与MotX协同,将 PomA/PomB复合物连接在转子 周围; MotYC具有一个假定的肽聚糖结 合基序,通过结合于肽聚糖层来 稳定定子和转子之间的连接; 图18 MotY的晶体结构示意图
细菌也可不通过鞭毛旋转来运动。蓝 藻类细菌、粘细菌和一些支原体存在滑 动的运动方式,这些细菌可以3μm/s的 速率沿着固体表面滑动。
从图中可以看出:马达的转子部分看起来主要由杆,以及在 基体的胞质侧与其相连的M环和C环组成。M环和C环由多种蛋 白构成,其中FliG对鞭毛旋转的形成尤其重要。而马达定子部分 的两个最重要蛋白则是MotA和MotB,它们形成一个穿越质膜的 质子通道。
图11 FliN四聚体的晶体结构示意图 图12 FliN 四聚体在基体中的相对位置
2.3、FliG
FliG可以被分成三个结构域:FliGN,FliGM和 FliGC,FliGN负责结合到MS环上,形成M环的 外缘(有时也算作MS环的一部分); FliGM和FliGC是两个紧凑的球形结构域。
图13 FliGMC的模式图
鞭毛合成涉及到众多微小部件,这些微小部件可以穿过鞭毛 中的空心通道从细胞胞体到达鞭毛的顶端。鞭毛顶端被一个 蛋白复合物“帽子”所覆盖,当微小部件吸附在鞭毛上时,不 知什么原因蛋白复合物总会使其通过。利用电子显微镜观察 这个过程,Koji Yonekura和同事们确定这个“帽子”有5条朝 下指向鞭毛生长区域的“腿”。当“帽子”旋转时,这些“腿”灵活 地调整它们形态,只为鞭毛留出一个小狭缝用于通行。 Robert M. Macnab在一篇相关的研究评述中写到,如果这种 解释是正确的话,这个远离细菌细胞的结构的装配过程“是一 个比我们任何人以前所想象的都要更复杂的过程”。
该设备位于MS-C环胞质 面的中央;
其中, FlhA和FlhB是 FliI/FliH的附着平台。
图21 鞭毛蛋白输出设备模型
4.1、FliI
FliI是蛋白输出设备的ATP酶; FliI的原子结构由三个结构域组成:N端的 β状结构域,α/βATP酶结构域和C端α 螺旋结构域; 它的序列与F0F1-ATP合成酶的α、β亚单 位具有显著的相似性; FliI能自装配成同源六聚体。
革兰氏阴性和阳性细菌的鞭毛
G-
G+
三部分:
(1)鞭毛丝:为中空、坚硬的圆柱体,由分子量为3~6×104的单一蛋白构成,称为鞭 毛蛋白,其顶端是封盖蛋白; (2)钩形鞘:连结鞭毛丝和基体的一段短小、弯曲的部分,相当于一个弹性联轴节, 比鞭毛丝略宽,由不同的蛋白亚基组成; (3)基体:包埋于细胞中,固定在细胞质膜与细胞壁上,是鞭毛中最复杂的部分。
图15 切换蛋白复合体中 亚单位的组织形式
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Fra Baidu bibliotek
3.定子在基体上的定位和结合
定子分为两类: 1、MotA/MotB复合物—由质子流驱动(如:
大肠杆菌和沙门氏菌);
2、PomA/PomB复合物 —由钠离子流驱动 (如:溶藻弧菌);
3.1、MotA/MotB复合物
MotA和MotB是整合膜蛋白,其 中,MotA有4个穿膜α螺旋结构 域,而MotB只有1个。它们形成的 复合物是由4个MotA和2个MotB组 成的;
MotA/MotB复合物作为跨细胞质膜 的质子通路,将质子流和扭矩的产 生偶联起来;
M处o,tB具在有它一的个C肽端聚周糖质结域合(mMoottiBf,C) 用于与肽聚糖层非共价连接,进而 将MotA/MotB复合物锚定于转子周 围。但定子与转子之间的相互作用 并不总是紧密结合的,而是高度动 态的。
1、基体(鞭毛马达)的结构
马达是由以下部分组成:
LP环:作为马达轴承, 其中L环固定于细胞壁外 层,P环固定于细胞壁内 层;
转子:也就是MS-C环, 它是穿膜蛋白复合物, 也是带动鞭毛运动的关 键部分;
图5 鞭毛钩—基体的示意图
中心杆:位于轴承中 央,相当于转杆,它 穿过L、P和M S环, 可以自由转动;
鞭毛不是直的而是螺旋形,平展时,在两个相邻弯曲间表 现出恒定的长度,叫做波长,这种波长对各种生物体来说是恒 定的。
鞭毛的形状和波长一部分由鞭毛蛋白质的结构决定,在 某种程度上还由鞭毛旋转方向决定。这里讨论的基本鞭毛结构 在原核生物机制中是基本不变的,在细菌和古细菌的各种种类 中鞭毛基本结构与运动是非常相似的。鞭毛的结构在相关各群 细菌中是高度保守的,这进一步说明鞭毛运动性有很深进化根 源。
鞭毛(flagella)
引言——细菌的鞭毛
极生单毛 铜绿假单胞菌
Pseudomonas aeruginosa on Mica Imaged in Air; AC mode, 5µm scan.
端生丛毛
幽门螺杆菌 Helicobacter pylori
周生鞭毛 破伤风梭菌 Clostridium tetani
PomA/PomB复合物
MotY输出到周质,并 和MotX一起自由扩 散,找到鞭毛基体上 的结合位点,以此在 基体上适当地安装和 锚定,最终形成T 环。
图19 T环在基体中的相对位置
PomA/PomB复合物
MotY被输出到周质,和MotX 形成一个复合物,该复合物在 基体周围扩散;
通过MotYN介导,MotX/MotY 复合物与基体,可能为基体中 P环之间的相互作用,导致了 MM也oo因ttYY此CC的牢稳构固定象的了发结M生合otX变在/M化PoG,t上Y这复,使合 物与基体的结合,进而形成T 环;