血液标本的微生物学检验程序
微生物检验标本的正确采集及注意事项
微生物检验标本的正确采集及注意事项正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。
可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。
为此应正确采集各种细菌学标本。
一、血液标本的采集1、采集方法（1）75%酒精清洁局部皮肤。
（2）待皮肤干后，再用2%—2.5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒，范围不应小于5cm（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。
（3）皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人5-10ml，婴幼儿1-5ml。
（4）采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。
2、注意事项（1）怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。
（2）对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。
切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。
（3）培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质；有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。
（4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。
（5）每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。
（6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。
（7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。
（8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。
二、骨髓的采集1、采集方法在病灶部位或髂前（后）上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。
2、注意事项（1）骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的诊断较血培养优越。
临床微生物检验基本技术标准操作规程
临床微生物检验基本技术标准操作规程微生物检验实验室标本处理标准操作规程 (137)微生物检验实验室标本接种标准操作规程 (138)微生物检验实验室细菌鉴定操作规程 (139)微生物检验实验室不染色标本检查法标准操作规程 (140)微生物检验实验室革兰染色标准操作规程 (141)微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程 (142)微生物检验实验室墨汁染色标准操作规程 (144)微生物检验实验室药物敏感试验标准操作规程 (145)取粪便脓血部位标本根据检验申请单要求选择平板，立即接种。
4.6 尿标本接收标本后，立即对标本进行编号、登记，将尿标本混匀，用10ul定量接种环立即接种血琼脂平板、麦康凯平板，分离细菌和菌落计数。
参考文献[1] 周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室标本接收标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0563灭菌。
用接种环伸入菌种管内挑取移种之菌落。
伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上蜿蜒划线。
将接种环垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后穿刺线推出接种环。
4.4 穿刺培养法4.4.1 此法用于保存菌种，观察动力及某些生化反应。
4.4.2 以接种环挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种环。
4.5 液体培养基接种法用灭菌接种环挑取菌落或标本。
在试管内壁于液面交界处研磨，使细菌混匀在液体培养基中。
参考文献[1] 周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：革兰阳性球菌：选择GP卡（阳性菌鉴定卡）。
临床微生物学检验的标本采集
临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。
（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。
2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。
按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。
2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。
2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。
3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。
（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。
2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。
3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。
4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。
（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。
2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。
二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。
（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。
准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。
2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。
为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。
（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。
因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。
1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。
病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。
对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。
2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。
若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。
3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。
另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。
4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。
如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。
【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。
细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。
一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。
穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。
2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。
伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。
3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。
血液培养标准操作规程
10临床意义
3.3标本拒收
3.3.1血培养瓶破裂或明显污染。
3.3.2培养瓶标识与检验申请单不符。
3.3.3用过期培养瓶采集标本，采血量不足等。
3.3.4对不合格标本，应及时通知采集人员重新留取标本。
3.4标本保存
采集标本后立即送检，不能及时送检的可室温放置，切勿放冰箱。冬季血培养瓶在送检过程应采取一定的保暖措施。
4试剂、仪器
4.1革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、沙保罗平板及相关生化试剂等。
4.2恒星BC-60血液细菌培养仪、恒星HX-21细菌鉴定药敏分析仪，成人血培养瓶，厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶、恒星细菌鉴定药敏分析试剂板。
4.3接种针、接种环、红外灭菌器、显微镜、电热恒温箱、CO2恒温培养箱、生物安全柜等。
4.4试剂有效期和使用参照试剂说明书。
5细菌鉴定及药敏质控
参见《微生物组内质量的控制程序》。
6检验步骤
接收标本后，立即对标本进行编号登记。门诊病人登记联系方式
6.1自动化培养
6.1.1置全自动血培养仪中。当标本有细菌生长时，仪器发出阳性报警，应立即用无菌注射器抽取瓶内培养液作直接涂片格兰染色，镜检，将结果向临床医生报告，同时转种血琼脂平板，并进行直接药敏试验，置35℃、5%CO2培养箱培养18-24h。若涂片为酵母样真菌时转接沙保罗培养基。从琼脂平板挑去菌落进行涂片染色及触酶和氧化酶实验。根据初步分出的菌属选不同的鉴定及药敏卡片上机进行细菌鉴定和药敏试验。
8.4传染病（伤寒沙门菌）报院感科及医务科。
8.5传染病菌株保存（伤寒沙门菌）交疾病控制中心复核
血液标本的微生物学检验程序
血液标本的微生物学检验程序1．血液中可能出现的微生物、化脓性球菌：革兰阳性球菌、革兰阳性杆菌、革兰阴性球菌、革兰阴性杆菌、真菌、厌氧菌、支原体、螺旋体、病毒等金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌等2.基本思路：在血液琼脂培养基上分区划线对未知细菌进行分离培养，根据其菌落特征以及不同的溶血现象，挑出单个菌落，进行下一步鉴定。
不同的细菌具有不同的生理特性，通过多种实验操作的阴性阳性对照，可以较为准确地辨别未知菌属。
3.实验内容：⑴过氧化氢酶实验有些细菌含过氧化氢酶能催化过氧化氢生成水和新生态氧⑵凝固酶试验金葡菌能产生血浆凝固酶，使血液凝固⑶甘露醇发酵实验致病性葡萄球菌能发酵甘露醇产酸⑷新生霉素敏感实验表皮葡萄球菌对其敏感⑸胆汁溶菌实验胆汁可溶解肺炎链球菌⑹菊糖发酵实验肺炎链球菌能发酵菊糖产酸⑺奥普托辛实验肺炎链球菌对Optochin敏感⑻杆菌肽敏感实验A群溶血性链球菌对杆菌肽敏感⑼透明质酸酶实验A群溶血性链球菌可产生透明质酸酶⑽药敏实验：纸片扩散法该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
粗略结果表：试验项目结果XXXX 阴性阳性 ++++XXXX（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。
血培养操作规程
血培养检测规范化操作（世上最全基本操作流程）2016-08-22来源:南方检验医学网阅读: 1291次【字号：大中小】导读：一、血培养检测采血指征：对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前，应及时进行血液培养，患者出现以下体征时可作为采集血培养的重要指征： 1．发热（38℃）或低温（36℃）。
2．寒战。
3．白细胞增多（1010 9/L，特别有核左移未成熟的或带状的白细胞一、血培养检测采血指征：对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前，应及时进行血液培养，患者出现以下体征时可作为采集血培养的重要指征：1．发热（≥38℃）或低温（≤36℃）。
2．寒战。
3．白细胞增多（>10×10 9/L，特别有“核左移”未成熟的或带状的白细胞增多。
4．粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1×10 9/L）。
5．血小板减少。
6．皮肤粘膜出血。
7．昏迷。
8．多器官衰竭。
或同时具备上述几种体征时应采血培养。
在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外，很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。
肺炎链球菌与流感嗜血杆菌菌血症的患儿（特别是2岁以下的幼儿）一般多见于门诊，常伴有明显发热（≥38.5℃）和白细胞增多（≥20×109/L）。
老年菌血症患者，可能不发热或不低热，如伴有身体不适，肌痛或中风可能是感染性心内膜炎的重要指征。
血培养检测皮肤消毒程序：血培养为防止皮肤寄生菌污染，可使用消毒剂（碘酊或碘伏）对皮肤进行严格仔细的消毒处理，最大限度地减低皮肤污染。
感染性心内膜炎，特别是心脏瓣膜修复术的感染，可能由皮肤寄生的微生物引起（例如：表皮葡萄球菌或棒杆菌属）。
因此，在采集过程中血培养的污染一定要减小至最低程度。
用做培养的血液均不应该在静脉或动脉的导管中抽取，除非静脉穿刺无法得到血液或用来评价与导管感染相关性指标。
如果抽取了导管血，也应同时在其他部位穿刺获取非导管内静脉血液进行血培养。
皮肤消毒严格按以下步骤进行：1．首先用70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒钟以上。
微生物检验标本采集运送程序
标本的采集和运送具有重要意义，其质量直接影响到微生物实验室检测结果的可靠性。标本的采集和处理方式不当将导致病原体分离失败，或无法确定真正致病的微生物，给医院感染的病原学诊断造成困难，因此必须规范微生物检验标本的采集、运送，保证实验检测前标本质量。
标本
类型
采集
时间
温度
转运
报告时间
2、液体粪便取1～3ml
无菌
容器
常温
≤2h
住院超过3d或入院诊断不是胃肠炎的病人，不做常规粪便培养
直肠拭子
1、小心插入拭子超越肛门括约肌，轻轻旋转拭子，在肛门隐窝取样
2、用于检测病原的拭子应能见到粪便
无菌
试管
褥疮溃疡
1、一般不选择拭子标本
2、无菌盐水清洗表面
3、如得不到活检标本或抽吸物，则用拭子用力采集损伤底部
由于褥疮溃疡拭子提供不了什么临床信息，一般选择组织活检或针头抽吸标本
1/d#表示一天中仅需送检1次，无需多次重复送检相同标本
涂
片
抗
酸
染
色
痰
量多为宜
无菌容器
无
1h出报告
至少连续送3d，每日1次
尿（24h尿沉淀或12h全夜尿沉淀）
10ml
无菌管
留取24h尿或12h全夜尿于洁净容器中，必须静止2h后，弃上清液，收集沉渣约10ml于无菌容器送检
血培养瓶有两种规格，采血量不一样。
成人瓶：
8～10ml/瓶
小儿瓶：
1～3ml/瓶
≤2h
常温
禁止冷藏
阴性：5d
阳性：随时报告危急值，最终报告及时发出
建议从不同部位各采1瓶，共2瓶同时送检。
1、采集部位通常为肘静脉，疑为细菌性心内膜炎时以肘动脉或股动脉为宜。
血液标本的细菌学检验微生物学实验
实验十、血液标本的细菌学检验【器材】发已增菌血液标本1套/桌（1#、2#、3#、4#），发血琼脂平板1个/人【分离培养】（仅做有氧培养）标本→分区划线血平板，35℃18—24h观察结果。
【形态学检查】（每人做）（1#尿标本）涂片，革兰染色镜检。
【鉴定】1.观察菌落形态：2.涂片、革兰染色镜检：3.生化试验1）G+C→触酶：①触酶阳性，为葡萄C→血浆凝固酶试验：阳性为金葡，阴性为表葡②触酶阴性，为链C2）G-b→氧化酶①氧化酶阳性，为非发酵菌，O-F,铜绿水溶性色素→绿脓b②氧化酶阴性，肠道杆菌→KIA、MIU→初步鉴定→血清学试验最终鉴定结合凝固酶试验、胆汁溶菌试验、氧化酶试验鉴定。
【实验结果】（1#尿标本）1.观察菌落形态：在血平板上完全透明的溶血环（β溶血）2.直接镜检，G+葡萄状球菌葡萄状球菌3.生化试验1）触酶试验（+）2）血浆凝固酶试验（+）鉴定结果：1#血液标本直接涂片革兰染色观察：G+球菌，单个或呈葡萄状排列；再经过血平板分离培养，观察菌落特征，革兰染色，生化鉴定（触酶+、血浆凝固酶+）鉴定1#血液标本中的细菌为金黄色葡萄球菌。
【实验讨论】1.血液标本的采集：①采血时间和次数：血标本一般应在病人发热初期或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集作细菌培养，为提高阳性率常需连续三次采血进行血培养。
②血部位及抽血量：一般抽取肘静脉血做血培养。
采血量为成人一次5ml～10ml，儿童为3-5ml。
抽取的血液立即以无菌要求注入血培养瓶中，迅速送检。
③采集血标本和接种时要严格无菌操作，避免杂菌污染。
④根据菌血症和脓毒症所引起的疾病，还可采集不同部位的分泌物（痰液和脓液等）标本做涂片、染色和镜检或培养。
2.血液标本采集注意事项：血液标本的细菌学检验，一般不用抗凝剂(因为氟化钠、EDTA、枸橼酸钠可对细菌不利，肝素目前尚未报导有影响)近年来认为在培养中加入0.03-0.05%聚茴香脑磺酸钠有抑制血清中的杀菌物质作用，效果较好。
初级检验士考试(微生物学检验)讲义第二十九章临床标本微生物检验概述
临床标本微生物检验概述● 考点临床标本微生物学检验（血液、脑脊液、痰、尿液、粪便、性传播疾病、创伤）（1）常见病原菌（2）标本采集及运送（3）检验方法（4）临床意义一、临床标本细菌检验的基本程序二、血液感染◆正常人的血液是无菌的。
◆菌血症是指在血液中可检测到细菌，包括一过性和持续性在血中存在。
◆败血症是指病原菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性产物，引起全身中毒症状。
◆脓毒血症是指化脓性细菌败血症时，细菌通过血流扩散至全身其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。
（一）常见病原菌（二）标本采集1.采血时间和频率◆病人发热初期或高峰期采集，或在未用抗生素前采集。
但怀疑细菌性心内膜炎时，血培养不少于三次。
2.采血量◆一般为静脉采血，成人采血量10～20ml，儿童3～5ml，婴儿1～2ml。
3.床边直接注入血液培养基，否则用SPS抗凝剂送检，不得用EDTA，枸橼酸钠抗凝。
4.检查血管内导管有无细菌污染，可无菌操作，剪下导管5cm远侧段，置无菌容器内送检。
（三）微生物分离培养和鉴定1.培养基的选择◆用自动血培养分析仪时选用相应的血培养瓶，如需氧＋厌氧，需氧＋高渗等。
2.分离和鉴定当观察有细菌生长时或血培养仪阳性报警时，应及时作如下检验：◆（1）涂片染色镜检，结果及时与临床联系；◆（2）转种血平板、巧克力平板、厌氧血平板或其他特殊培养基等分离培养纯菌再进行鉴定；◆（3）同时做药敏试验，结果及时报告临床作治疗参考。
（四）报告方式阴性结果：◆7d报告无细菌生长。
◆疑为亚急性细菌性心内膜炎、布鲁菌病、厌氧菌血症、真菌血症时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长者可报告为阴性。
阳性结果——三级报告方式：◆第一级报告告知标本已出现阳性并报告直接细菌涂片结果，同时做初步药敏试验；◆第二级是报告初步药敏结果，同时做正式鉴定和药敏试验；◆第三级报告正式鉴定和药敏试验结果。
（五）临床意义◆葡萄球菌菌血症常由疖、痈、脓肿及烧伤创面等原发感染灶继发，也可由呼吸道感染引起。
2021整理 《微生物检验技术》实训指导
医学检验技术专业教学资源库实训指导微生物检验技术实训一：临床标本采集【实训目的】1学会无菌操作采集静脉血液标本。
2掌握血液标本采集的皮肤消毒程序。
【材料准备】1试剂 75%酒精、2%碘酊。
2培养基增菌肉汤培养基、需氧及厌氧血培养瓶、血琼脂平板、麦康凯平板、不含万古霉素的巧克力平板。
3其它材料 5ml一次性无菌注射器、消毒棉签、止血带等。
【实训内容】1确定采血部位大多由肘静脉采集，对亚急性心内膜炎的患者一般采集股动脉血，多部位采集血液标本可以增加阳性率。
2消毒皮肤的准备①%碘伏作用30秒，以穿刺点为中心向外画圈消毒，消毒区域直径应达3cm以上。
②75%酒精脱碘。
有碘过敏体质者，可用75%酒精消毒60秒，待酒精挥发枯燥后采血。
3培养瓶的消毒 75%酒精擦拭血培养瓶橡皮塞，作用60秒；然后用无菌纱布或无菌棉签去除橡皮塞外表剩余酒精。
4采血戴乳胶手套固定静脉防止静脉滑动，注意手套不可接触穿刺点。
用无菌注射器穿刺取血。
成人采血量每次10～2021，儿童3～5ml。
血液与培养基的比例应为1∶5～1∶10。
5标本运送标本采集后应立即送检，对于不能立即送检的标本需室温保存或置35℃孵箱中，切勿冷藏。
6接种血液和骨髓标本采集后直接注入需氧瓶和厌氧瓶中，其他无菌体液标本在采集量少的情况下，也可划线接种血平板、麦康凯平板和不含万古霉素的巧克力平板。
7其他无菌体液胸腹水、脑脊液、心包积液、胆汁等穿刺取得后都可按照无菌操作注入血培养瓶内送检。
【考前须知】1血液标本应在病人发热1～2 天内或发热顶峰采集培养为宜，此时阳性率较高。
2培养基与血液的比例为5∶1～10∶1 。
3用无菌注射器穿刺取血后，勿换针头〔如果进行第二次穿刺，应换针头〕，直接注入已消毒好的血培养瓶。
4标本应同时接种一套培养瓶，以兼顾厌氧菌和需氧菌的检出；作厌氧培养的血液标本，应防止接触空气，立即注入专用厌氧培养瓶内；如果同时做厌氧培养和需氧培养，应先将血标本接种厌氧培养瓶，然后再接种需氧培养瓶。
微生物检验流程及操作标准
微生物检验流程及操作标准微生物检验的流程包括以下步骤：1. 标本采集：根据患者的症状和规章制度正确采集标本，及时将采集到的标本送至检验科进行接种处理。
在运送标本的过程中，需要保持相应的温度和氧气，以防止标本干燥。
2. 镜检：检验人员运用显微镜直接观察标本，辨别相关致病菌的形态与数目，并进行初步判断。
必要时，还需要对标本进行染色后再观察，以对致病菌的性质和来源进行鉴别，更能排除污染因素，使标本致病菌的检出率得到大幅度提升。
3. 分离培养：采集的标本中不可避免地会吸附细菌，如果在镜检环节发现标本上吸附的细菌，就需要对标本实施分离纯化，并将其接种于适宜的培养基上，如显色培养基、血平板培养基、营养琼脂培养基等。
再将空气和温度调整至适合细菌生长的数值，获得便于进一步鉴定的细菌。
4. 细菌鉴定：检验人员通过细菌形态、菌落特点、酶类检测、血清学试验、生化反应等方式鉴定分析分离获得的标本，明确致病原因。
微生物检验的操作标准如下：1. 尽量在病程早期、症状典型以及在使用抗生素之前采集标本。
2. 标本应使用无菌容器盛放。
3. 血液为无菌液体，因此在采集时要避免皮肤的正常菌群污染。
多采用血培养瓶运送，随后放入血培养系统自动培养。
如有报阳则进行下一步检验：涂片镜检报给临床初步结果；需氧和厌氧瓶分别转种血平板，巧克力平板与厌氧血平板等；随后进行菌种鉴定以及药敏试验。
4. 脑脊液标本一般需要进行离心，以富集细胞。
一般检验流程为进行涂片镜检，包括革兰染色，抗酸染色与墨汁染色等。
增菌管进行增菌，分离培养转至血平板，巧克力平板，沙保弱平板等。
5. 痰液镜检一般包括革兰染色与抗酸染色，分离培养多用巧克力平板和血平板。
6. 尿液常做定量检测，取10微升尿液进行连续划线。
7. 粪便常用革兰染色做菌群比检测；分离培养多用麦康凯与SS平板。
8. 各类微生物标本应通过传递窗进行传递。
以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取准确信息。
血培养标本的留取
先将血培养瓶盖打开，瓶口以安尔碘消毒
使用真空采血器以无菌技术采集静脉血
再次核Байду номын сангаас
如用注射器采血，则将针头用酒精灯消毒后方可将血液注入血培养瓶
粘贴化验单，在化验单上标明抽血时间，及时送检
洗手、收拾用物、记录特护记录单
（四）简要说明
1.标本采集基本原则
(1)尽量在抗菌药物使用前采集标本。
(2)标本采集时应严格执行无菌操作，减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染。
(3)标本采集后立即送至检验科，床旁接种可提高病原菌检出率。
(4)盛标本容器须经灭菌处理，但不得使用消毒剂。
5.血培养的数量和采血时间
(1)怀疑菌血症应尽早采血，体温上升阶段采血可提高阳性率，但要防止因等待而延误时机。对已用抗菌药物而又不能停药者，可在下次用药前采血；每例至少采血两次，间隔0.5~1 h，以利于提高阳性率和区分感染菌与皮肤污染菌。
(2)对间歇性菌血症，用于培养的血液应在估计寒战或体温高峰到来之前采集。采集血培养应该在使用抗生素之前进行，推荐同时采集2～3瓶，每瓶20～30 ml血样进行培养来做最初的评估。
血培养标本的留取
（一)目的
进行血液微生物学检查。
（二)用物准备
按医嘱准备血培养瓶（需氧或厌氧）、治疗盘、真空采血器（或注射器）。
（三）操作程序
留取血培养
核对医嘱及化验单、明确检验项目，检验目的及注意事项
核对病人、并向病人作耐心解释，以取得合作
(2)寒战；
（3)白细胞增多(>10×lOg/L，特别有“核左移”未成熟的或带状的白细胞增多；
(4)粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1×109/L)；
微生物标本采集操作规程
微生物标本采集操作规程基本原则1.发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查，三级医院微生物标本送检率不应低于60%。
2.尽量在抗菌药物使用之前采集标本。
3.标本采集时应严格无菌操作，减少或避免机体正常菌群及其它杂菌污染。
4.标本采集后应立即送至细菌室。
床旁接种可提高病原菌检出率。
5.以棉拭子采集的标本如咽拭子、肛拭或伤口拭子，宜插入运送培养基送检。
6.送检标本应注明姓名、床号、标本来源、检验目的和标本采集具体时间，使细菌室能准确及时接种相应的培养基和适宜的培养环境，提高阳性检出率。
一、血液与骨髓的送检方法1.一般原则:在出现临床症状后应尽快抽血样作培养，最好在发热初期、高热或寒战时，原则上应选择在抗菌药物应用之前，对已应用药物而病情不允许停药的患者应在下一次用药前采血。
2.采血部位：肘静脉。
疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本。
3.采血最佳时间与频率：急性败血症应在治疗前24小时内抽血3次或者更多次，并在不同部位，如左右手臂或颈部，分别做厌氧、需氧培养以及内毒素、降钙素原检测；急性心内膜炎在治疗前1-2小时内分别在3个不同部位抽血样；怀疑伤寒病人，在病程第1-2周内采静脉血液；肺炎链球菌在寒战、高热或者休克时；布鲁杆菌感染除在发热期采血，还要多次采血，一般是24小时抽3-4次；分枝杆菌感染早期采血样阳性率高。
怀疑菌血症因尽早采血，体温上升阶段采血可提高阳性率，但要防止因等待而延误时机，对已用抗菌药物而不能停药者，可在下次用药前采血。
对疑为伤寒病人，在第1-3周内采集骨髓是最佳时间，在病灶或髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml 作细菌培养。
4.采血部位的局部皮肤应严格消毒。
将采集的血液注入血培养瓶前，认真识别相应颜色的瓶，并仔细检查培养瓶有无变色或混浊。
过火消毒针头，血培养瓶撕掉塑料盖后，瓶口不是无菌部位必须消毒。
消毒不能用碘酒消毒而是75%酒精消毒。
革兰氏阴性杆菌微生物学检验的标准操作程序
革兰氏阴性杆菌微生物学检验的标准操作程序
1 检验目的
做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。
2 原理
使用梅里埃ATB微生物鉴定系统，原理见鉴定系统操作规程。
3 标本要求
（1）标本类型：血液，骨髓，脑脊液，胸水，腹水，尿液，等体液；痰液，前列腺液，脓液，组织分泌物或穿刺液等。
（2）标本采集：见标本采集手册
（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。
（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本或未按要求部位采取的标本。
4 容器和添加剂类型
均使用灭菌器皿盛放标本
5 试剂
（1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、中国蓝平板、SS平板、柯玛嘉平板、相关生化试剂等。
6仪器设备：
（1）接种针、接种环、酒精灯
（2）梅里埃ATB药敏鉴定仪
（3）显微镜、SPX-150B型生化培养箱、超净工作台、台式离心机、天平
7 校准程序
(送市计量质量检测研究所校准)
8 操作步骤
9质量控制：
参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动10患者检验结果的可报告区间
细菌鉴定到种或属，同时报告药物敏感试验结果。
11 临床意义：
为医生提供感染的病原学诊断。
血液标本的细菌学检验
血液标本的细菌学检验发表时间：2013-05-21T10:52:18.263Z 来源：《中外健康文摘》2013年第12期供稿作者：袁颖何小芹徐建利[导读] 血及骨髓常规培养的三级报告方式如下。
袁颖何小芹徐建利 (山东省威海市立医院264200)【中图分类号】R446.11 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）12-0160-02 1 标本采集1.1 采血部位与方法：实验室应按照CLSI的有关文件制定用不同采血管采集血液标本的规范(如：H3-静脉穿刺血液标本采集程序，H4-外周血液标本采集装置和程序，H11-动脉血液标本采集程序，H21-凝血检验血液标本的采集、运输和处理及各种抗凝方法的性能特点)。
采血部位通常为肘静脉，以无菌操作方法抽取血液后，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。
疑为细菌性心内膜炎时，以在肘动脉或股动脉处采血为宜。
疑为细菌性骨髓炎或伤寒时，在病灶或髂前(后)上棘处严格消毒后抽取骨髓1～2 mL注入培养瓶内。
要事先规定好是何种血液标本，是动脉血、静脉血还是毛细血管血；如果需要抗凝血，应选择何种抗凝剂。
还应考虑到样品是否应该维持在真空状态(例如钙离子的检测)。
分离血清或血浆的真空采血管和硅化注射器能干扰某些测试，甚至可能导致错误的结果[1]。
血液采集后应尽快分离红细胞和其他细胞碎片。
当采样条件偏离标准状态时，实验室工作人员应考虑其对检验结果的影响，并从已报道的文献中寻找解决方法。
1.2 采血量：一般要求血液量与培养基量之比应为1：5～1：10。
采血量每人每份1瓶，成人每瓶8～10mL，儿童每瓶l～5 mL。
骨髓采血量每瓶1～2mL。
1.3 采血时间及采集份数：采集血液标本应尽量在使用抗菌药物之前进行，于24h内采集2～3份血液标本(抽取1次血做多个培养应视为1份)，最好分别于不同部位采集(如左、右肘静脉，颈静脉)。
对间歇性寒战或发热的患者，应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h采集血液，或于寒战、发热后1h进行。
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血液标本的微生物学检验
程序
Prepared on 22 November 2020
血液标本的微生物学检验程序
1．血液中可能出现的微生物、化脓性球菌：
革兰阳性球菌、革兰阳性杆菌、革兰阴性球菌、革兰阴性杆菌、真菌、厌氧菌、支原体、螺旋体、病毒等
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌等
2.基本思路：
在血液琼脂培养基上分区划线对未知细菌进行分离培养，根据其菌落特征以及不同的溶血现象，挑出单个菌落，进行下一步鉴定。
不同的细菌具有不同的生理特性，通过多种实验操作的阴性阳性对照，可以较为准确地辨别未知菌属。
3.实验内容：
⑴过氧化氢酶实验有些细菌含过氧化氢酶能催化过氧化氢生成水和新生态氧
⑵凝固酶试验金葡菌能产生血浆凝固酶，使血液凝固
⑶甘露醇发酵实验致病性葡萄球菌能发酵甘露醇产酸
⑷新生霉素敏感实验表皮葡萄球菌对其敏感
⑸胆汁溶菌实验胆汁可溶解肺炎链球菌
⑹菊糖发酵实验肺炎链球菌能发酵菊糖产酸
⑺奥普托辛实验肺炎链球菌对Optochin敏感
⑻杆菌肽敏感实验A群溶血性链球菌对杆菌肽敏感
⑼透明质酸酶实验A群溶血性链球菌可产生透明质酸酶
⑽药敏实验：纸片扩散法
该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
粗略结果表：
试验项目结果
XXXX 阴性阳性 ++++
XXXX。