壁虎抗肿瘤作用的研究进展

2011年11

月山东中医药大学学报

第35卷第6期

壁虎为壁虎科无蹼壁虎或多疣壁虎及其他几种壁虎的干燥全体，又叫天龙、守宫等。其味咸寒有

小毒，具有祛风定惊、软坚散结、解毒的功效。近几年的研究发现其具有显著的抗肿瘤作用。现将近年来壁虎在抗肿瘤方面的研究作一综述。1壁虎抗肿瘤成分的寻找和精制

1．1提取工艺的研究壁虎的传统提取工艺是壁虎原粉、水煎煮以及鲜壁虎入药等。目前新工艺主要是层析分离纯化技术和酶解技术。

传统炮制方面，杨丽华等［1］发现，75℃恒温炮制能保持壁虎抗肿瘤活性成分，是有效的炮制温度，冻融并不是壁虎保持抗肝癌活性的必要条件。

层析纯化能够改善壁虎有效成分的分离纯化效果，抗肿瘤效果增强。李耀辉等［2］改进无蹼壁虎药用成分的分离纯化方法，使用Al 2O 3柱层析来替代硅胶柱层析分离纯化壁虎抗肿瘤成分，HPLC 色谱法检测改进方法的分离纯化效果，以甲基噻唑蓝法（MTT ）测定HepG2肿瘤细胞株的生长，观察壁虎药用成分的抗肿瘤作用以及流式细胞仪测定药物诱导的细胞凋亡率。结果发现，纯化后的成分对人肝肿瘤生长具有显著的抑制作用且呈与时间和剂量的相关性，亦显示出诱导肿瘤细胞凋亡的作用。抑瘤率由硅胶柱层析所得样品对CT -26肿瘤细胞的45．50%，上升为Al 2O 3柱层析所得样品对HepG2肝肿瘤细胞的60．33%。

壁虎在临床上用于肿瘤的治疗，一般焙干研细粉或水煎煮入药，但其抗肿瘤作用的物质基础还不清楚。小分子肽抗肿瘤作用逐渐引起了人们的注意，越来越多的研究表明，动、植物含有小分子肽具有很好的抗肿瘤作用，世界上许多国家正在竞相研究开发小分子肽类抗肿瘤的药物，如谷胱甘肽、海

参五肽、槲寄生肽、胸腺五肽等，而杨金霞等［3］认为壁虎中的有效抗肿瘤成分是蛋白质类的大分子化合物，因此有必要运用酶解的方式，使壁虎含有的蛋白类成分酶解成小分子肽，对其抗肿瘤作用进行研究。

酶解技术使壁虎的提取工艺得到改进，抗肿瘤效果更加明显，尤以仿生酶解效果最佳。仿生酶解是指模拟人体消化过程，先用胃蛋白酶酶解，再以胰蛋白酶酶解的方法，对壁虎进行酶解。李钦青等［4］比较了壁虎不同提取工艺成分对S 180和H 22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫器官的影响。以肉瘤S 180、肝癌H 22荷瘤小鼠作为动物模型，以抑瘤率及胸腺、脾脏指数为指标比较壁虎原粉及水煎煮、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解等不同工艺提取成分的抗肿瘤作用。结果3种酶解工艺提取成分对肉瘤

S 180和H 22肝癌抑瘤率均明显高于原粉与水煎煮液，相比模型组有显著性差异（P <0．05），但对荷瘤小鼠

的胸腺指数、脾脏指数无明显影响。

1．2壁虎不同提取部位抗肿瘤作用的比较

在中

医传统治疗中，一般是整只壁虎去内脏入药，抗肿瘤成分和部位不明确，抗肿瘤机制不清，抗肿瘤效果亦不甚明显，故有必要对壁虎抗肿瘤有效部位和成分以及作用机制进行更进一步的探讨，比较壁虎不同部位的抗肿瘤效果。杨丽华等［5］探讨了鲜壁虎不同部位提取液对培养的H 22肝癌细胞体外抑制增殖作用和对H 22实体型移植瘤小鼠的体内抑制作用，发现壁虎各部位提取液均可抑制H 22细胞的体外增殖，其抑制率以内脏高剂量组最高，为61．6%。由此可知壁虎内脏是抗肿瘤活性成分的富集部位，表明壁虎内脏抗肿瘤效果最佳，这与传统的去除内脏用药有所差异。

1．3化学成分的确定

壁虎主要含有与马蜂毒相

似的有毒物质及组织胺类、蛋白质、氨基酸、维生素和各种微量元素，但在抗肿瘤有效成分的寻找上取得成果不多。目前多以壁虎小分子肽类成分研究为主。吴雄志带领的课题组在国内首次从壁虎中成

壁虎抗肿瘤作用的研究进展

孙

超1，孙明江2

（1．山东中医药大学药学院，山东济南250355；2．山东中医药大学基础医学院，山东济南250355）［摘要］综述了近年来关于壁虎的来源、抗肿瘤化学成分、提取工艺、药理活性以及临床应用于恶性肿瘤的研究进展，阐明其药用价值、发展前景以及发展方向。参考文献16篇。

［关键词］壁虎；抗肿瘤成分；提取工艺；药理研究；综述［中图分类号］R285．6

［文献标识码］A

［文章编号］1007-659X （2011）06-0576-03

［收稿日期］2011-03-11

［作者简介］孙超（1986-），男，山东青岛人，2009年级硕士研究生，主要从事中药药理研究。

［通讯作者］孙明江（1965-）山东济南人，副教授，硕士研究生导师，E -mail ：sunmingjiang＠yahoo．com．cn 。

第35卷第6期

山东中医药大学学报

Vol．35，No．62011年11月JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY OF TCM Nov .2011576

2011年11月第35卷第6期

功地分离获得抗肿瘤活性成分守宫硫酸多糖［6］。实验表明，守宫多糖是壁虎抗肿瘤与免疫调节的重要物质基础之一。壁虎新的抗肿瘤成分的再寻找将是壁虎研究的新方向。康建功等［7］通过试验发现，壁虎脂质体亦有明显的抗肿瘤作用。壁虎含有多种维生素以及胡萝卜素。维生素C可提高人体免疫力，对抗肿瘤大有益处；胡萝卜素作为维生素A的来源，也就有抗肿瘤价值。有研究人员将维生素A与5-Fu 合用，用以治疗支气管肺癌，取得了较好疗效。因为维生素A类具有控制靶细胞上皮DNA的合成和细胞分裂的作用，是其预防癌变的作用基础。目前的研究热点是抗肿瘤小肽的研究，我们的研究初步证实其抗肿瘤效果相当明显，效果不逊于部分传统西药，且毒性低并能够提高机体免疫力，但是其具体结构的确定有待进一步的研究。随着各种新工艺、新技术、新设备的创新和发现，将使壁虎的抗肿瘤活性成分更加确切。

2壁虎抗肿瘤药理研究

中药抗肿瘤药理作用机制各种各样，既可直接抑制肿瘤细胞生长与增殖，也可通过免疫系统的调节来杀伤肿瘤细胞；既可诱导肿瘤细胞凋亡，也可通过影响物质代谢而抑制肿瘤的生长。壁虎抗肿瘤也不是单一作用机制。目前进行的壁虎抗肿瘤药理试验中，作为一种抗癌中药单品，不管精制单独用药还是复方配伍使用，抗肿瘤效果明显，并且毒性低。

2．1壁虎单味药药理作用的研究近年来，在壁虎抗肿瘤作用机制研究方面取得很大进展。王晓兰等［8］研究了壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞株EC9706的生长抑制作用及其机制。通过MTT法检测不同浓度、不同时间壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞的生长抑制作用，倒置显微镜观察不同浓度壁虎醇提物作用细胞24h后细胞形态的改变，吉姆萨染色后光学显微镜下观察细胞凋亡的形态改变，SP免疫组化法检测细胞内凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果6～8mg/mL壁虎醇提物作用于细胞24，48，72h后能够明显抑制EC9706食管鳞癌细胞株的生长（与阴性对照比较P<0．01），抑制率分别为13%～76%、37%～88%、54%～93%，抑制作用呈剂量和时间依赖性；Geimsa染色可见凋亡细胞，免疫组化结果显示：壁虎醇提物（6～7mg/mL）处理细胞24h后，与阴性对照组比较，细胞内Bcl-2蛋白无明显变化，而Bax蛋白表达升高，Bax/Bcl-2比值升高。结论是壁虎醇提物能够抑制EC9706细胞的增殖并诱导其凋亡，其作用机制可能与凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值升高有关。

宋佳玉等［9］观察了壁虎醇提物对小鼠肾包膜下移植S180肉瘤的作用。将肾囊膜下移植S180肉瘤模型的正常小鼠随机分为阴性对照生理盐水组、阳性对照环磷酰胺组（0．1g/kg）、壁虎醇提物高剂量组（2．4g/kg）、壁虎醇提物低剂量组（1．2g/kg）共4组。腹腔注射给药6d后，杀鼠称量荷瘤小鼠体质量，测量小鼠肉瘤体积及胸腺、脾脏质量，计算抑瘤率以及胸腺、脾脏指数；用SABC免疫组化法检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果壁虎醇提物可抑制小鼠肉瘤S180生长，环磷酰胺组、壁虎醇提物高剂量组、壁虎醇提物低剂量组抑瘤率分别为74．5%、77．5%、57．5%，且各组末体质量/初体质量比分别为0．94，1．03，0．99；壁虎醇提物对免疫器官无影响，而环磷酰胺组胸腺指数、脾脏指数与阴性对照组比较有显著性差异（P<0．05）；免疫组化显示环磷酰胺组、壁虎醇提物组与生理盐水组比较，VEGF蛋白的表达明显减少。壁虎醇提物有抗肿瘤活性，其抗肿瘤机制可能通过抑制肿瘤血管的生成而实现。

杨金霞等［10］研究了壁虎冻干粉对移植性小鼠S180肉瘤的抑制作用及壁虎冻干粉的安全性。将移植S180肉瘤模型小鼠随机分为模型组，西药组，干、鲜壁虎低、中、高组。用不同浓度的干、鲜壁虎冻干粉灌服荷瘤小鼠10d后，分别计算抑瘤率、胸腺质量和脾脏指数。急性毒性实验：检测干、鲜壁虎半数致死剂量（LD50）及干、鲜壁虎的最大耐受剂量（LD0）。结果：干、鲜壁虎低、中、高3个剂量组的抑瘤率分别为31．4%、50．8%、37．7%和14．8%、19．1%、54．7%，且均不同程度地提高了荷瘤小鼠的胸腺质量和胸腺指数。8组小鼠的脾脏质量及脾脏指数无显著性差异（P>0．05）。急性毒性实验无法测出干、鲜壁虎冻干粉的LD50；LD0实验结果显示二者在给药量均超过人临床用量的2000倍以上时，仅鲜壁虎组小鼠体质量在灌胃后3d较对照组和干壁虎组明显减轻（P<0．01），其第5，7天体质量与另两组比较均无显著性差异；干壁虎组小鼠未发现体质量减轻及其他异常反应。结论：干、鲜壁虎均可抑制小鼠S180肉瘤的生长，且抑瘤作用相近，其机制可能与提高机体的细胞免疫功能有关。急性毒性实验表明，干、鲜壁虎常规临床用量安全可靠。

宋萍等［11］探讨了鲜壁虎冻干粉对C6胶质瘤细胞凋亡的影响。将小鼠随机分为3组，分别给予顺铂腹腔注射，口服鲜壁虎冻干粉及口服等量蒸馏水；20d后，取小鼠血清体外处理C6胶质瘤细胞，通过形态学分析、流式细胞仪及TUNEL法观察细胞凋亡情况，S-P免疫组化法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果：形态学变化、流式细胞仪分析和TUNEL法结果均证实含鲜壁虎血清在体外可诱导C6胶质瘤细胞凋亡；鲜壁虎组与空白对照组比较，细胞内的bcl-2基因表达无明显变化，bax基因表达升高。结论：含鲜壁虎血清能够诱

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