总蛋白性能验证
双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价
双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价吴文钦（广东医学院医学检验学院广东-东莞 523808）摘要：目的对双缩尿法测定血清总蛋白进行方法性能评价，达到提高分析方法质量的目的。
方法配制双缩脲试剂，并用所配制的双缩脲试剂与标准血清总蛋白进行批内重复性试验、回收试验以及线性范围评价试验，从而评价双缩尿法测定血清总蛋白的精密度、准确度和线性范围。
结果用分光光度计测定波540nm 处的吸光度A，进行相关数据分析，双缩脲法测定血清总蛋白的批内重复性试验的变异系数 CV%为2.36%，回收试验平均回收率为105%，线性范围评价试验R2为0.9980。
结论在严格规范操作下，双缩脲法测定血清总蛋白的精密度高，准确度以及线性范围较好，满足临床对血清总蛋白定量测定要求，是临床测定血清总蛋白的常规方法。
关键词：双缩脲法；血清总蛋白；方法学评价Biuret method was developed for the determination of protein evaluation methodologyAbstract Objective The purpose of the double reduction of urine protein determination of serum total performance evaluation methods, to improve the quality of analytical methods.Methods Biuret test preparation, and formulated with the biuret test standard serum total protein in the assay reproducibility test, recovery test and linear range of evaluation test to evaluate the double reduction of urine assay precision of serum total protein, accuracy and linear range.Results A spectrophotometer absorbance at 540nm wave, the associated data analysis, determination of intra-assay coefficient of variation of total serum protein test reproducibility CV% was 2.36%, the average recovery recovery test 105% biuret method, linear evaluation test range R2 is 0.9980.Conclusion In the strictly regulate the operation, biuret serum total protein, high precision, accuracy and linearity better meet the clinical requirements for quantitative determination of total serum protein, serum total protein conventional methods of clinical measurement.Key words Biuret method; Total serum protein; Evaluation Methodology为满足临床医疗对实验室检验的不断要求，实验室需要不断引进新方法或者改进原有的方法。
检验科生化总蛋白测定的标准规程
总蛋白测定的标准规程【目的】体外检测血清中总蛋白（TP ）的含量。
【职责】1. 实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ，室负责人监督落实。
2. 本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】 1. 受检者的准备病人空腹12h ，不饮酒24h 后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况。
孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。
此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。
2. 静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机 一、检测原理本试剂采用双缩脲反应，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物。
反应中生成的蓝紫色络合物与样本中总蛋白浓度成正比。
通过在540nm 处测定吸光度值的变化值，即可测得样本中总蛋白的浓度。
二、试剂 1. 试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司TP 试剂盒，为液体单试剂，其各组分如下：硫酸铜12 mmol/L 酒石酸钾钠64 mmol/L 6 mmol/L2 mmol/L碘化钾 氢氧化钠测定：酒石酸钾钠＞5g/L试剂：硫酸铜＞2g/L 、碘化钾》1g/L 、NaOH ＞30g/L 2. 校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号: 449 5 0/4 5 9 5 0对测定进行校准。
2. 2校准间隔2. 2. 1试剂批号变更时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。
2. 2. 2室内质量控制出现问题时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准并确认问题得到解决后方可对临床病人样本进行测定。
总蛋白的测定
总蛋白的测定1.原理；在碱性条件下，蛋白质多肽链中的肽链与铜离子络合形成紫红色化合物。
2.标本采集与处理：2.1受检者准备：病人必须空腹12小时，不饮酒24小时后采集血样。
2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般采血取坐位，从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带；2.3标本拒收：标本应无溶血，对不符合要求的标本，应重新采集。
2.4采血管要求:采血时要求使用一次性无菌注射器，一人一管，用后毁形，用500mg/L有效氯浸泡消毒３０分钟，回收、焚烧、做好登记。
3.试剂：3.1试剂组成：（柏定生物工程（北京）有限公司）NaoH 0.6 mol/L酒石酸钾钠32mmol/L碘化钾20mmol/L硫酸铜12mmol/L3.2标准液：70g/L3.3质控血清：应在测量未知样本的同时检测质控物并确保质控在可接受的范围内，并且结果必须在三个标准差范围内。
3.3.1质控品批号及范围:批号022431，范围*±2st和*±3s。
3.3.2保存环境:在2—8℃保存，有效期内稳定。
3.4试剂的贮存与稳定性：试剂在2—8℃保存，有效期内稳定。
4.仪器：上海迅达公司的半自动生化分析仪XD811。
5.操作程序：5.1分析参数：温度：20—25℃比色杯光径：1cm5.2操作步骤：6.计算方法：样品中总蛋白浓度A样品C= ×C标准（g/L）A标准7.操作性能：线性范围100g/L，如超出此范围，可用生理盐水稀释样品，结果乘以稀释乘倍数。
8、参考值：66——87g/L9、结果审核：9．1室内质控结果的判断：对质控结果进行分析是否在控。
9．2对检验结果进行审核，包括检验项目是否漏项，打印是否清楚。
10．临床意义：高热、腹泻、呕吐、休克各种因素引起钠潴留，营养不良、肝脏疾病中华人民共和国卫生部医政司。
总蛋白测定试剂(盒)产品技术审查规范
总蛋白测定试剂（盒）产品技术审查规范（2016版）本规范旨在指导注册申请人对总蛋白测定试剂（盒）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本规范是对总蛋白测定试剂（盒）的一般要求，申请人应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化，并依据产品特性确定其中的具体内容是否适用。
本规范是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料。
应在遵循相关法规的前提下使用本规范。
本规范是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本规范相关内容也将进行适时调整。
一、适用范围总蛋白测定试剂（盒）用于体外定量测定人血清或血浆中总蛋白的浓度。
从方法学考虑，本规范主要指基于分光光度法原理，利用全自动、半自动生化分析仪或分光光度计，在医学实验室采用双缩脲法进行总蛋白定量检验所使用的临床化学体外诊断试剂。
本文不适用于干式总蛋白测定试剂。
依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号）总蛋白测定试剂（盒）管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。
二、注册申报资料要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、临床意义、产品描述、有关生物安全性方面说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（以下简称《办法》）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）相关要求。
下面着重介绍与总蛋白测定试剂（盒）预期用途有关的临床背景情况。
总蛋白（TP）是血清固体成分中含量最多的一类物质。
在机体中具有重要的生理功能。
Microtech 648 ISO型电泳分析仪测定血清蛋白的性能验证研究及应用
Microtech 648 ISO型电泳分析仪测定血清蛋白的性能验证研究及应用苗玉发;马犇;潘东升;刘芳;汪巨峰;李波【摘要】目的验证Microtech 648 ISO型电泳分析仪的性能,并建立实验动物的血清蛋白电泳参考值.方法用商业质控血清作为测试物,分别测定日内精密度、日间精密度、灵敏度和准确性.结果Alb、α1、α2、β、γ区带的日间CV分别为2.5％、7.4％、7.6％、7.1％、9.9％；在同一膜片上的日内CV值分别为1.6％、8.9％、4.9％、4.6％、5.4％；在不同膜片上的日内CV值分别为3.5％、8.7％、9.3％、9.3％、5.8％；准确度在可接受的范围内；白蛋白和球蛋白的裣测灵敏度分别为1.1g/L和1.2g/L.用验证后的仪器建立了常用实验动物的血清蛋白电泳参考值.结论Microtech 648 ISO型电泳分析仪的性能良好,可以用于实验研究.%Objective To qualify the performance to measure serum protein with Microtech 648 ISO electrophoresis analyzer,and establish reference ranges for serum protein electrophoresis of laboratory animals. Methods Precision, sensitivity and accuracy were analyzed using commercial quality control serum. Results The day to day CV of Alb,α1,α2,β,γ was 2-5%,7.4%,7.6%,7. 1% and 9. 9%, respectively. The within-day CV of Alb,α1,α2,β,γ on the same film was1.6%,8. 9%,4. 9%,4, 6%,5.4%, respectively.The within-day CV ofAlb,α1,α2,β,γ on diff erent films was 3.5%,8.7%,9.3%,9.3%,5.8%, respectively. Accuracy was acceptable, and sensitivity of album and globulin was 1.1g/L and 1. 2g/L. Reference ranges of laboratory animals were established using the qualified electrophoresis analyzer. Conclusion Performance ofMicrotech 648 ISO electrophoresis analyzer is good, and can be used in scientific studies.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2012(041)009【总页数】3页(P37-39)【关键词】电泳;精密度;灵敏度;准确性;参考值【作者】苗玉发;马犇;潘东升;刘芳;汪巨峰;李波【作者单位】100176 北京,中国食品药品检定研究院;100176 北京,中国食品药品检定研究院;100176 北京,中国食品药品检定研究院;100176 北京,中国食品药品检定研究院;100176 北京,中国食品药品检定研究院;100176 北京,中国食品药品检定研究院【正文语种】中文血清蛋白电泳是根据蛋白质的物理特性对蛋白进行分离的一种方法。
基层医院中生化分析仪的性能验证方法
基层医院中生化分析仪的性能验证方法何乐春;陈福军【摘要】Objective To establish an active and reliable performance verification method for automatic chemistry analyzer. Methods By referring to industry standards, this paper verified tow automatic chemistry analyzers for accuracy, repeatability, linearity range and the sample carry-over. Results Analyzer with slow testing speed was failed in testing accuracy, repeatability; analyzer with high testing speed met all standard requirements. Conclusion Because of the long period of absorbance observation, analyzer with slow testing speed was worse than the high speed analyzer, and performance verification for automatic chemistry analyzer should be carried out by using kinetic assay kit.%目的为基层医院建立一种可行性强、结果可靠的全自动生化分析仪性能验证方法.方法参考全自动生化分析仪行业标准,对两台国产生化仪的准确性、重复性、线性范围和样品污染携带进行检测.结果低测速生化仪在使用速率法试剂时,检测结果的准确性和重复性为不合格;高测速生化仪各项检测结果均合格.结论由于检测周期过长,低速生化仪在同样的时间内监测反应过程吸光度的次数少于高速生化仪,因此参照本文的验证方法时应多使用速率法试剂盒.【期刊名称】《中国医疗设备》【年(卷),期】2018(033)005【总页数】4页(P100-103)【关键词】生化分析仪;准确性;重复性;线性范围;污染携带【作者】何乐春;陈福军【作者单位】重庆医疗器械质量检验中心&重庆市医疗器械质量与安全控制工程技术研究中心,重庆 401147;辽宁省药械审评与监测中心,辽宁沈阳 110006【正文语种】中文【中图分类】R197.39引言生化分析仪对于所有医院的检验科都属于最基本和必不可少的诊断分析仪器。
开放检测系统中检测血清总蛋白的性能验证
开放检测系统中检测血清总蛋白的性能验证摘要】目的：建立自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量在开放检测系统中的性能验证和实验方法。
方法：参考美国临床和实验室标准化协会系列文件和相关文献[1]，结合实际工作，设计实验方案[2]。
对在Roche公司的 Modular P的开放检测系统中测定血清总蛋白的精密度、准确度、线性范围、回收试验等进行性能验证[3]。
结果：自配总蛋白试剂在检测低、高浓度质控血清的变异系数均符合原配试剂的相关标准；准确度试验结果在允许范围内；线性范围试验中实测值与理论值呈高度相关；回收率在90%～110%范围内。
结论：在Roche公司的 Modular P中利用开放检测系统使用自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量达到质量要求的标准，对降低检测成本有重要意义。
【关键词】自配总蛋白试剂；开放检测系统；性能验证【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）20-0367-02Roche公司的 Modular P生化分析仪操作简便、检测快速、试剂稳定性好、重复性佳，无污染等优点，是实验室重中之重的仪器之一。
而Roche公司的Modular P除了封闭系统必须使用配套的原装试剂以外，其还设置了少量开放系统可以使用其他厂家的试剂。
这对与一般实验室来说无疑也是一大优点，因为这就意味着可以降低检测成本。
可是其他的试剂能否符合质量的要求还有待实验来验证。
国际标准化组织于2003年颁布的《医学实验室质量和能力的专用要求》作为医学实验室认可的标准，该标准要求申请的实验室应对检测系统的主要分析性能进行验证，证实其能够达到所要求的性能标准。
因此我们结合工作的实际，对自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量在Roche公司的 Modular P生化分析仪的开放检测系统中进行精密度、准确度、线性范围、回收试验等性能验证。
1.材料与方法1.1 材料1.1.1仪器 Roche公司的 Modular P生化分析仪。
总蛋白检测验证方案
总蛋白检验方法验证方案编制: 日期：审核: 日期：批准：日期：1.概述验证总蛋白含量测定试验检测方法2.验证目的通过实验验证总蛋白检验检测方法的重复性、中间精密度、重现性、线性、耐用性，确认该检测方法是否适用于本公司生产的产品检验，确保检验结果的准确可靠。
3.验证环境3.1环境洁净度不应低于C级，洁净工作台洁净度为A级。
3.2操作间应保持负压，低于-15Pa。
4.样品信息中农威特猪口蹄疫O、A二价灭活疫苗；生产管理部中间产品5.验证内容（1）重复性（2）中间精密度（3）重现性（4）线性（5）耐用性（6）试验设备及器材6. 试验设备及器材酶标仪（全波长），“M”型96孔板，卡介苗注射器，单通道和多通道移液器，涡旋震荡仪，酶标板振荡器，商品化Lowry法改良试剂盒 7.验证步骤（1）重复性取同一批次中农威特灭活疫苗1瓶及生产管理部样品3份，用同一批次的试剂盒，在同一环境，同一设备，同一操作者按照《总蛋白含量测定标准操作程序》操作用酶标仪完成6次试验，计算样品含量及其标准差。
（2）中间精密度取同一批次中农威特灭活疫苗1瓶及生产管理部样品3份，用同一批次的试剂盒，在同一环境，同一设备，不同操作者按照《总蛋白含量测定标准操作程序》操作用酶标仪完成6次试验，计算样品含量及其标准差。
（3）重现性取同一批次中农威特灭活疫苗1瓶及生产管理部样品3份，用同一批次的试剂盒，在不同实验室，同一设备，同一操作者按照《总蛋白含量测定标准操作程序》操作完成试验，计算样品含量及其标准差。
（4）线性取同一批次中农威特灭活疫苗1瓶，用同一批次的试剂盒，在相同实验室，同一设备，同一操作者对样品进行1:1、1:2、1:3、1:4、1:5稀释，按照《总蛋白含量测定标准操作程序》操作完成试验，计算样品含量及其标准差。
（5）耐用性取同一批次中农威特灭活疫苗1瓶及生产管理部样品3份，用不同批次的试剂盒，在相同实验室，同一设备，同一操作者按照《总蛋白含量测定标准操作程序》操作完成试验，计算样品含量及其标准差表1 样品中待测成分含量和精密度RSD可接受范围样品成分含量重复性（RDS%）重现性（RDS%）中间精密度（RDS%）100%122 8.验证结果（1）重复性实验结果第二次试验结果第五次试验结果（2）中间精密度实验结果第四次试验结果（3）重现性实验结果（4）线性实验结果（5）耐用性实验结果9.验证结果分析参考公式：标准差=（1）卢志强完成试验，检测结果如下：(2)中间精密度结果分析（3）重现性结果分析（4）线性结果分析依照数据绘制出线形图，列出回归方程。
双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价
双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价摘要：目的评价双缩脲法测定血清总蛋白的方法性能。
方法配制双缩脲试剂，并用所配双缩脲试剂和标准血清蛋白进行批内重复性试验、回收试验、线性范围测定。
结果双缩脲法测定血清总蛋白的批内重复性试验的变异系数CV%为6.42，回收试验平均回收率为109.3%，线性范围测定的R²为0.9877。
结论双缩脲法测定血清总蛋白的性能不高，本人测得的批内重复性试验的变异系数CV%偏大，回收率偏高，线性范围一般，或许这是个人操作因数，因为还有其他同学的结果比较好的。
关键词：双缩脲法；血清总蛋白；方法学评价双缩脲法测定血清总蛋白至今已经有近100年的历史，其间该方法也得到不断改进，是目前测定血清总蛋白的常用方法之一。
《全国临床检验操作规程》推荐Doumas双缩脲配方作为血清总蛋白测定的常规方法[1]。
方法学评价对于医学检验专业学生日后在工作中评价检验方法非常重要，对培养学生逻辑思维和实验室质量控制具有重要作用。
本文介绍双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价，对学生练习和掌握方法学评价有重要意义。
双缩脲试剂鉴定蛋白质的原理：双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，因此，也能在碱性环境中与二价铜离子结合生成紫红色络合物。
此反应不需要加热，被用来定性鉴定蛋白质。
但请注意：凡含有2个以上肽键的物质或含有1个肽键和1个一CS—NH2、一CH2一NH2、一CH20H、一CHOHCH2NH2等基团的物质，以及乙二酰乙二胺都有此颜色反应。
因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽均有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽[2]。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定
血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定1.实验原理双缩脲比色终点法。
在碱性条件下，蛋白与铜离子生成紫蓝色复合物。
显色强度和蛋白浓度成正比。
OH—蛋白质+ Cu2+ -------------﹥紫红色复合物2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清或血浆。
3. 标本存放20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。
4. 标本运输室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料:6.1 奥林巴斯总蛋白测定试剂盒试剂1＋试剂26.1.1试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：试剂中含有氢氧化钠，不可入口！如与皮肤及粘膜接触，请立即用大量水冲洗。
使用试剂时应采取必要的防护。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以g/L报告。
手工丽春红S法检测尿总蛋白的分析性能验证及与干化学法的比较
手工丽春红S法检测尿总蛋白的分析性能验证及与干化学法的比较发表时间：2012-11-22T09:19:43.780Z 来源：《医药前沿》2012年第23期供稿作者：马美红陈春妍[导读] 分析灵敏度验证实验：分析灵敏度或检测限系指检测系统可检测的最低分析物浓度。
马美红陈春妍（惠东县人民医院检验科广东惠东 516300）【摘要】目的建立手工丽春红S法检测尿蛋白的性能验证方案和实验方法。
方法参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）系列文件和相关文献[3-5]，结合工作实际，设计验证方案。
对手工丽春红S法检测尿蛋白的精密度、准确度、分析灵敏度、分析测量范围、临床可报告范围等性能进行验证和评价，并将实验结果与美国强生Vitros 350干式生化分析仪所检测尿蛋白的结果进行比较。
结果尿蛋白含量在0.2g/L、4.0g/L时，手工丽春红S法测得日间不精密度分别为6.4%和1.05%；10个标准浓度检测结果与靶值的相对偏差均小于6.4%；检测低限为0.2g/L；生物检测线在0.2～4.0g/L，功能灵敏度为0.5g/L，分析测量范围为0.2～4.0g/L。
厂商提供的美国强生Vitros 350干式生化分析仪日间不精密度CV<2.4%；检测低限为0.012g/L；分析测量范围0.017～0.024g/L。
结论建立了临床手工丽春红S法检测尿蛋白的分析性能验证方案和实验方法。
本研究对规范医学实验室建设和实验室认可，提高实验室手工法检测质量有重要意义。
【关键词】性能验证尿总蛋白丽春红比色法干化学法【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）23-0035-03 国际标准化组织（ISO）于2003年颁布了《医学实验室质量和能力的专用要求》（ISO 15189）[1] 作为医学实验室认可的标准，该标准要求申请认可的实验室应对设备、检测系统或方法的主要分析性能进行验证，证实其能够达到所要求的性能标准。
国产邻苯三酚红试剂检测尿蛋白的性能验证
（ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｃｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ， ｔ ｈ ｅ Ｆｉ ｒ ｓ ｔ Ａ ｌ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｃｈ ｏ ｎ ｇ ｑ ｉ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｃ ｈ ｏ ｎ ｇ ｑ ｉ ｎ ｇ ４ ０ ０ ０ １ ６ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： ０ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔｏ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｄ ｏ ｍｅ ｓ ｔ ｉ ｃ ｐ ｙ ｒ ｏ ｇ ａ ｌ ｌ ｏ ｌ ｒ ｅ ｄ ｒ ｅ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ ｉ ｎ ｕ ｒ ｉ ｎ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｍｅ －
密度 、 回收 率 、 最 低检 出限 、 线 性 范 围 以及 临 床 可 报 告 范 围 进行 验证 。结 果 高 、 低 ２个 浓 度 水 平 尿 液 样 本 总 蛋 白测 定 的批 内 Ｃ Ｖ 值分别为 ２ ． ３ ４ 及 １ ． １ １ ， 批问 Ｃ 值 分别 为 ３ ． ２ １ 及 １ ． ６ ５ ； 平均 回收率 为 ９ ７ ． ５ ， 最低检 出限为 ０ ． ３ ６ ７ ｍｇ ／ ｄ Ｌ， 在 ｌ １ ～ ２ ９ ８ ｍｇ ／ ｄ Ｉ 的 浓度 范 围 内 线性 良好 ， 最 大稀 释 倍 数 为 ２ Ｏ倍 ， 临床 可 报 告 范 围为 １ １ ～５ ９ ６ ０ ｍｇ ／ ｄ Ｌ 。 结 论 不 精 密 度 、 回 收 率 指 标 可满足临床要求 ， 最低 检 出 限 线性 范 围 、 最 大 稀 释倍 数及 ・ 床 可报 告 范 围 可提 供 更好 的质 量 保 证 ， 但 高 浓度 标 本 需稀 释 处 理 。 关键词 ： 尿； 蛋 白； 邻苯三酚红 ； 性 能验 证 ； 自动 生 化 分 析仪 Ｄ ＯＩ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ ． ２ Ｏ １ ３ ． ２ １ ． ０ ２ ２ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： ｌ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ２ １ － ２ ８ ４ ０ — ０ ２
西门子Atellica CH930 全自动生化分析仪常规生化检测项目性能验证
西门子Ａｔｅｌｌｉｃａ ＣＨ９３０全自动生化分析仪常规生化检测项目性能验证吴波1，许安春1，江泽友1，张琼芳1，沈漪萍2*1.成都中医药大学附属医院检验科，四川 成都 610072；2.四川省中西医结合医院检验科，四川 成都 610041【摘要】目的：对西门子Atellica CH930全自动生化分析仪常规生化检测项目：总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、尿素(UN)、肌酐(CREA)、尿酸(UA)、血糖(GLU)、胆固醇(Cho)、甘油三酯(TG)的分析性能进行验证。
方法：参考《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》、《临床化学定量检验程序性能验证指南》并结合检验工作实际情况，对Atellica CH930全自动生化分析仪测定血清总蛋白等13项常规生化项目的精密度、正确度、临床分析测量范围以及生物参考区间进行验证和评价。
结果：总蛋白等11项常规生化检测项目在2个不同浓度水平测定的期间标准差都小于厂家规定的不精密度要求；采用室间质评样本作为参考物质，11项常规生化检测项目的参考物质偏移值小于参考物质赋值的不确定度，验证厂家声称可靠；验证的分析测量范围分别为：TP 21.35～108.9 g/L，ALB 13.5～57.4 g/L，AST 9.5～862 U/L，ALT 11～776 U/L，AKP 11～931 U/ L，UN 2.04～48.77 mmoml/L，CREA 14.85～2400.65 Umol/L，UA 39.5～1095 mmol/L，GLU 0.75～38.27 mmol/L，Cho 0.87～7.59 mmol/L，TG 0.14～5.82 mmol/L；经验证仪器自动稀释功能稀释检测后，临床可报告范围分别为：TP 21.35～217.8 g/L，ALB 13.5～114.8 g/L，AST 9.5～5172 U/L，ALT 11～2329 U/L，AKP 11～2793 U/L，UN 2.04～97.54 mmoml/L，CREA 14.85～12003.25 Umol/L，UA 39.5～5475 mmol/L，GLU 0.75～84.81 mmol/L，Cho 0.87～15.18 mmol/L，TG 0.14～11.64 mmol/L；生物参考区间验证结果均在设定的范围之内。
血清总蛋白测定标准操作规程
血清总蛋白测定标准操作规程1实验原理：（双缩服法）本试剂采用双缩胭反应，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物，其中每个铜离子与五至六个肽键络合。
双缩胭反应被广泛应用于临床检验，具有简便、快速可靠的特点。
在试剂中加入碘化物有助于防止碱性铜络合物的自动还原，反应形成的蓝紫色物质与样本中总蛋白浓度成正比，通过测定520-56Onm处吸光度值的变化，即可计算出样本中总蛋白的浓度。
Cu"+蛋白质3→Cu蛋白质复合物2~8C保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释6.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本试剂线性范围可样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。
达100g∕1o最大稀释5倍。
6.2单位换算:g∕d1=g∕1×O.17检验结果的局限性6.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在540nm处吸光度大于0.200时不能使用。
8.产品性能指标8.1试剂外观：蓝色透明液体，无悬浮物及沉淀物。
8.2装量：不低于标识值8.3空白吸光度：在54Onm处，光径ICm时，空白吸光度AWO.200。
8.4分析灵敏度：在540nm处，光径ICm时，测量70g∕1的总蛋白，吸光度差4A20.1509.5线性区间：试剂的线性区间为[30.0T00.0]g∕1,在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.995；b）线性相对偏差不超过±6.0机8.6精密度8.6.1重复性：重复测试（70.0÷10.0）g/1的样本,所得结果的变异系数（CV）应W2.0%8.6.2批间差：重复测试（70.0±10.0）g/1的样本，所得结果批间相对极差（R）应W5.0%8.7准确性：相对偏差应不大于±5.0机8.8稳定性：（2-8）C下，原包装存放的试剂有效期为18个月.取到期后一个月的试剂进行测试，应满足-6.1、7的要求。
VITROS_5600型全自动生化免疫分析仪检测性能验证
学术论著中国医学装备2023年6月第20卷第6期 China Medical Equipment 2023 June V ol.20 No.6[文章编号] 1672-8270(2023)06-0038-05 [中图分类号] R197.39 [文献标识码] AVerification of the test performance of VITROS 5600 fully automatic biochemical immune analyzer/SU Yong, LU Kui-ying, WANG Yong-bin, et al//China Medical Equipment,2023,20(6):38-42.[Abstract] Objective: T o perform performance verification for the detection system, detection program and detection method of the VITROS 5600 fully automatic biochemical immune analyzer. Methods: Using the VITROS 5600 fully automatic biochemical immune analyzer, the performances of 16 conventionally detective indicators included creatine kinase (CK), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), γ-glutamate (GGT), total protein (TP), albumin (ALB), creatinine (CRE), uric acid (UA), urea nitrogen (BUN), glucose (GLU), sodium (NA), potassium (K), chlorine (CL), calcium (CA) and phosphorus (P) were tested according to a series of performances included precision, accuracy, linear range, maximum dilution and biological reference interval. Results: The coefficient of variation (CV) of intra batch of the two standards with different concentrations ( detective level 1: low value, detective level 2: high value) of 16 items with different concentration levels of high and low values were ≤ 1/4 of the allowable total error (TEa), and the inter batch CVs both of them were ≤ 1/3 of TEa, and the precision verification passed. The average bias of 16 indicators was ≤ 1/2 TEa between the inter laboratory quality assessment of the National Center for Clinical Laboratories of the National Health Commission in the last 3 times and target values, and the accuracy verification passed. In the validation of linear range, the slopes (b) in the linear equations of 16 items was within the range from 0.97 to 1.03, and the square values (R 2) of the correlation coefficients of them were greater than 0.95, which was consistent with the parameters provided by the manufacturer. The maximum dilution ratio was within the range from 1:1 to 1:32 in 10 items except 6 items (ALB, Na, K, Cl, Ca, P) did not need be diluted in the conventional detection. In the validation of biological reference interval of 16 items, the ratio (R) value that detective value of each item for health population was within the reference range was ≥ 95%, which indicated that the biological reference intervals provided by the manufacturer for the 16 detective items were acceptable. Conclusion:The VITROS 5600 fully automatic biochemical immune analyzer verified the performance of 16 detective items in terms of precision, accuracy, linear range, the maximum dilution and biological reference interval. The verified result of each item is consistent with the requirement of the declaration of manufacturer for each item, and the detective result is accurate and reliable, which can meet the detective requirement of above items are used in clinical specimens. [Key words] Biochemical immune analyzer; Precision; Accuracy; Linear range; Performance verification[First-author’s address] Department of Laboratory, Affiliated Hospital of Y angzhou University, Y angzhou 225001, China.[摘要] 目的：对VITROS 5600型全自动生化免疫分析仪检测系统、检测程序和方法进行性能验证。
生化检测系统分析性能的评价
生化检测系统分析性能的评价（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的应用Westgard方法评价决定图对我实验室生化检测系统的可接受性作出评价。
方法将各检测项目变异指数得分（VIS）=150时的不准确度（Bias）确定为允许总误差，根据室内质控和室间质评得出的不精密度和不准确度作为操作点，应用Westgard方法评价决定图判断各项目的方法性能的可接受性。
结果钙（Ca）、尿素（Ur）、钠（Na）、氯（CL）、总胆红素（TB）、磷（P）、肌酐（Cr）、总蛋白（TP）方法性能属于临界水平；总胆固醇（TC）、淀粉酶（AMY）的方法性能属于良好水平，其他各检测项目的方法性能属于优秀水平。
结论应用Westgard方法评价决定图判断生化检测检测系统的分析性能简便易行，适合临床实验室使用；并且认为本实验室的检测系统是可接受的。
【关键词】允许总误差；不准确度；质量控制检测系统是完成检测项目测试所涉及的包括仪器、试剂、校准品、检验程序、质量控制、保养计划等一系列的模块的组合［1］；大部分检测系统是开放的也就是非配套系统。
需要对检测系统的分析性能可否接受作出判断，决定取舍或以期逐步改进。
判断检测系统的可接受性，首先要确定各检测项目的分析性能标准-允许总误差（TEa）；其次要明确各检测项目的总误差，既不精密度（CV）和不准确度（Bias），以此为操作点应用Westgard方法评价决定图，在图上根据预期操作点的所在区域，来判断分析性能的可接受性。
本实验室所在地区的室间质评采用VIS得分评价系统，现对参加室间质评活动中的17个检测项目作了分析性能可接受的判断，分析如下。
1 材料和方法1.1 检测系统仪器为东芝40-FR生化分析仪、康立AFT-500电解质分析仪。
室内质控品、校准品、试剂均为德塞诊断系统（上海）有限公司提供。
其中甘油三酯(TG)、总胆固醇（TC）试剂由中生北控试剂有限公司提供。
总蛋白性能验证
总蛋白性能验证总蛋白(TP) 检测方法学性能验证评价报告验证内容：正确度、重复精密度、中间精密度、线性范围、临床可报告范围及参考区间的确认验证人员：一检测系统信息项目：TP仪器名称: 强生Vitros仪器型号:V350试剂及厂商：Ortho-Clinical Diagnostics公司检测方法：速率法二厂商提供的相关参数三验证过程1 正确度1.1 目的：评价仪器测试结果与接受参考值之间的一致程度。
通过实验室检测数据的偏倚从而评价和验证实验室检测结果的准确性。
1.2 评价方法：参加卫生部临检中心的室间质评，本组参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价标准，最近一次参加卫生部室间质评卫生部质控值。
1.3 结果判断方式：<1/2 CLIA’88正确度验证试验数据记录表2 精密度2.1 重复精密度2.1.1 目的：考察仪器检测方法的随机误差2.1.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20个结果，判断这20个独立结果间的一致程度2.1.3 方法：选择新鲜混合血清标本（病人高值、低值）各20份，测量前先定标，再做质控，质控结果在控制范围内，连续重复测定20次，计算SD，CV，得到重复性精密度。
2.1.4 标本来源：高、低值标本均为混合血清。
2.1.5 结果判断方式：<1/4CLIA’ 88 2.5%重复性精密度验证试验数据记录表2.2 中间精密度：2.2.1 目的：考察目前实验室检测方法中间精密度。
2.2.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20天，取得20个结果，判断这20个独立结果间的一致程度。
2.2.3 方法：取一个月的室内质控值（高值、低值）计算CV、SD，得到批间精密度。
2.2.4 结果判断方式：<1/3 CLIA’ 883.33%中间精密度验证试验数据记录表3 线性范围（Linearity range, AMR）3.1 目的：在确定某项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系，从而保证该浓度范围检测结果的准确性。
总蛋白Doumas法检测操作规程
总蛋白Doumas法检测操作规程产品注册号：国食药监械（准）字2004第3400359号产品执行标准：YZB/国2217-2003原理：在碱性条件下，蛋白质多肽链中的肽键与铜离子作用形成紫色化合物。
样品准备：样品为空腹血清、血浆（肝素抗凝，0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液；EDTA抗凝，1.8mgEDTA 可抗凝1.0ml血液）。
样品应在低温条件下运输保存，样品中TP在2～8℃可稳定5天。
测定步骤：1.基本参数：方法：终点法样品/试剂:1/50主波长：540nm 反应温度：37℃副波长：none 反应时间：10min计算：样品TP含量（g/L）=Au÷Ac×Cc校准及质控：1.使用本公司提供的总蛋白校准液或本公司的多项校准血清进行校准。
2.推荐使用本公司的生化质控血清进行室内质控。
性能指标：1.线性范围：0.7～100.0g/L,r≥0.992.精密度：批内CV≤2.8%、批间相对极差≤3.3%。
3.准确度：不准确度≤10%。
4.空白吸光度：本试剂在540nm波长处，10mm光径下，吸光度值≤0.500。
注意事项：1.样品中TP含量超过100.0g/L，则用蒸馏水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。
2.试剂与样品量可根据需要按比例改变。
3.试剂使用后立即盖紧瓶盖，避免污染。
警示及提示性说明：1.试剂混浊变色或空白吸光度值＞0.500，应弃去。
2.试剂反应后所产生的废液及使用后难降解的包装材料应集中收集后交当地废物处理站处理。
贮存条件及稳定性：本试剂2～8℃密闭避光贮存可稳定12个月，开瓶上机2～8℃避光稳定30天。
参考值范围：60.0～85.0g/L建议各实验室建立自己的参考值范围。
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总蛋白(TP) 检测方法学性能验证评价报告
验证内容：正确度、重复精密度、中间精密度、线性范围、临床可报告范围及参考区间的确认验证人员：
一检测系统信息
项目：TP
仪器名称: 强生Vitros
仪器型号:V350
试剂及厂商：Ortho-Clinical Diagnostics公司
检测方法：速率法
二厂商提供的相关参数
三验证过程
1 正确度
1.1 目的：评价仪器测试结果与接受参考值之间的一致程度。
通过实验室检测数据的偏倚从而评价和验证实验室检测结果的准确性。
1.2 评价方法：参加卫生部临检中心的室间质评，本组参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价标准，最近一次参加卫生部室间质评卫生部质控值。
1.3 结果判断方式：<1/2 CLIA’88
正确度验证试验数据记录表
2 精密度
2.1 重复精密度
2.1.1 目的：考察仪器检测方法的随机误差
2.1.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20个结果，判断这20个独立结果间的
一致程度
2.1.3 方法：选择新鲜混合血清标本（病人高值、低值）各20份，测量前先定标，再做质控，
质控结果在控制范围内，连续重复测定20次，计算SD，CV，得到重复性精密度。
2.1.4 标本来源：高、低值标本均为混合血清。
2.1.5 结果判断方式：<1/4CLIA’ 88 2.5%
重复性精密度验证试验数据记录表
2.2 中间精密度：
2.2.1 目的：考察目前实验室检测方法中间精密度。
2.2.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20天，取得20个结果，判断这20个
独立结果间的一致程度。
2.2.3 方法：取一个月的室内质控值（高值、低值）计算CV、SD，得到批间精密度。
2.2.4 结果判断方式：<1/3 CLIA’ 88
3.33%
中间精密度验证试验数据记录表
3 线性范围（Linearity range, AMR）
3.1 目的：在确定某项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系，从而保证该浓度范围
检测结果的准确性。
3.2 标本要求：
高值标本可使用病人混合血清。
一般地样本的高值推荐在AMR上限的90％，低值推荐在AMR下限的10％，但这不是绝对的规则。
最好有5个或以上的系列浓度的实验样品，数据点数不得低于4个，浓度范围遍布整个预期可报告范围。
3.3 方法：
a)以50ul为一个体积单位，将高值标本与低值标本以3：1、2：2、1：3的体积比例混合，
加上高低值标本共5个标本按照由低到高测定，记录结果。
b)线性统计：以直接测定结果计算得出的相应浓度为X，以通过稀释测定结果为Y，回归方法
学统计，得到a、b及r值。
c)结果判断：
①若b在0.97-1.03范围内，r2>0.95，作a与0有无显著性差异的t检验，如果P>0.05，则可直接判断线性范围在实验已涉及浓度。
②若b不在0.97-1.03范围内，a较大，舍去高值或低值组数据，另做回归统计，直至缩小
的分析范围其回归方程的a 和b 的判断符合要求，则该范围为线性范围。
线性范围验证试验数据记录表
项目名称/单位 总蛋白（TP ）/ g/L
检测设备/编号 强生Vitros350/ DC-VITROS-1 检测试剂/批号 Ortho-Clinical Diagnostics/*** 校准品/批号 Ortho-Clinical Diagnostics/*** 质控品/批号 Ortho-Clinical Diagnostics/*** 检测方法 速率法
厂家声明线性范围：20.0-110.0g/L ，线性方程：Y=bX+a ，R 2>0.975
样本编号
配制比例
测定值1 测定值2 测定均值 预期值 差值 1 4L 1.82 1.80 1.81 1.81 0 2 3L+1H 288.6 288.8 288.7 279.11 -9.59 3 2L+2H 645.8 645.7 646.0 556.41 -89.59 4 L+3H 872.7 873 872.4 833.7 -38.7 5 4H
1110.9
1110.8
1111
1111
平均斜率b
采用线性回归，以预期值为X ，以按比例稀释的实测均值为Y ，得线性方程：
Y= X+
线性回归散点图：
计算每一稀释度测定均值和预期值的差值。
以预期值为横轴，差值为纵轴，制作线性差异图。
-100
-500
200
400
600
800
1000
1200
线性差异图
残
差
预期值
4 临床可报告范围（Clinical reportable range ,CRR）
4.1 目的: 分析各稀释浓度的线性关系，确定最高稀释倍数，从而确保高值样本报告的准确
性。
4.2 原理：未经过任何处理的病人检验标本，通过检测系统检测得到的可靠结果范围。
4.3 方法：结合本实验室制定的TP的可报告范围（CRR）及该项目的检测范围，从而确定该项
目的最大稀释倍数，予以验证。
临床可报告范围试验数据记录表
4.4 结论：
TP临床可报告范围20.0-110.0g/L，最大稀释倍数50倍，当结果>110g/L时，用生理盐水试剂级别的水进行稀释，结果乘以稀释倍数，若 50倍稀释结果仍超出报告>110g/L。
5 灵敏度:
6 干扰物质
干扰物质对本项目的影响大小沿用厂商参数，详细内容见本项目SOP。
7 参考区间（Reference intervals）:
7.1 目的：选择20份体检合格的健康人标本，在检测系统上进行测定，对结果进行统计并与仪器说明书提供的参考区间进行比较。
7.2 原理：收集20 例正常健康人血清标本及时检测，要求其年龄，性别等均匀分布，对参考范围进行验证，只允许10%的数据超过所验证的参考范围，否则需建立参考范围。
验证范围：63-82g/L
7.3 标本的要求
1)体检合格健康的筛选者
2)脂血、溶血均勿用
7.4 结果判断方式：R= ≥90%即合格
生物参考区间数据及验证记录表
7.5 结论：
若本实验室所检测的20个标本其检测结果19个均在验证区间63-82g/L内，故本实验室参考区间验证通过。
四总结(Summary)
总蛋白试剂盒在强生V350分析仪检测系统的精密度、正确度、线性范围、可报告范围及生物参考区间通过验证。
通过以上各项性能验证室验的结论，强生V350分析仪检测系统达到检测要求，保证检验结果准确可靠，可以满足临床需求。