基因工程制药复习提纲
基因工程1-2节 复习提纲
专题一基因工程1、基因工程的原理是，是在水平上进行设计和施工。
2、限制酶主要是从生物中分离纯化出来的。
3、限制酶能够识别双链DNA分子的某种，并且使每一条链中部位的两个核苷酸之间的键断开。
4、限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：和。
5、DNA连接酶可分为和两大类。
二者都缝合键，但是前者只能连接末端。
6.运载体具备的条件：①有一个至多个，以便于。
②能进行，以便于保持遗传信息的连续性。
③有特殊的，以便于。
7、基因工程中使用的载体有：、和等。
其中最常用的是。
8、质粒本质上是小型环状的。
9、基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：、、、。
10、利用PCR技术扩增目的基因的原理是11、基因工程操作程序的核心步骤是12、构建好的基因表达载体包括、、和四部分。
13、启动子是一段有特殊结构的，是识别和结合的部位，能驱动基因。
终止子也是一段有特殊结构的，位于基因的。
14、标记基因的作用：；常用的标记基因是。
15、将目的基因导入植物细胞时受体细胞既可以是也可以是。
采用最多的方法是，其次还有和等。
16、将目的基因导入动物细胞时最常用的方法是。
此方法的受体细胞必须是。
17、原核生物细胞作为基因工程受体细胞的原因是，其转化方法中要先用处理受体细胞，使其成为细胞，18、目的基因的检测与鉴定(1)首先要检测目的基因是否插入受体细胞染色体DNA上，方法是采用技术。
(2)其次还要检测，方法是采技术。
(3)最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是采用。
19、探针本质上是用放射性同位素标记的含有基因的一段DNA单链。
1。
基因工程复习提纲
1. 基因工程概念：基因工程是一门以分子遗传学为理论基础、以分子生物学和微生物学的现代技术方法为手段的新兴交叉学科，它诞生于1973年，其发展十分迅速，新知识、新概念、新技术不断涌现，并广泛渗透到生命科学的各个领域，带动了整个生命科学的发展，是现代生物技术中的核心技术。
它为人类创造新生物开辟了新天地。
2. 基因工程的定义：基因工程是将不同来源的基因（DNA分子），按照工程学的方法进行设计，在体外构建成杂种DNA分子，然后导入受体细胞，并在受体细胞内复制、转录、表达的操作。
基因工程又称DNA重组技术。
3. 基因工程的特点及实施条件：基因工程的最大特点是分子水平上的操作，细胞水平上的表达。
其实施包括四个必要条件：工具酶、基因、载体和受体细胞。
4. 基因工程的基本步骤：（1）分离制取带有目的基因的DNA片段；（2）DNA片段和载体DNA 在体外连接；（3）将重组DNA分子导入合适的受体细胞，并扩增繁殖；（4）从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分子的重组体克隆；（5）外源基因的表达和产物的分离纯化。
5. DNA复制的特点：（1）DNA的复制是从特定的复制起始点开始并按5’-3’的方向进行；（2）DNA 分子的半保留复制；（3）DNA分子的半不连续复制；（4）DNA分子复制是通过DNA聚合酶及各种相关酶蛋白、蛋白因子的协同有序的工作完成的；（5）DNA分子复制具有高度的精确性和准确性。
6. DNA的变性、复性与杂交：在高温、强碱及某些试剂存在的条件下，双链DNA分子氢键断裂，两条链完全分离，形成单链DNA分子，这种情况称为DNA变性。
DNA的复性是指变性DNA在适当的条件下，二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象，它是变性的逆转过程。
热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性，此过程称之为“退火”。
杂交的基本原理是应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA（或RNA）片段按碱基互补关系形成杂交双链分子。
基因工程复习提纲
基因工程复习重点一、载体PTXBⅠOri 原核生物复制起点T7 promotor T7启动子是最强的启动子，指导转录起始。
Lac opterator 乳糖操纵基因，可被Lac I编码的阻遏蛋白结合抑制转录。
SD 原核生物翻译起始时核糖体的识别序列位于mRNA上MCS 多克隆位点可插入外源基因，不影响其复制。
内含多个酶切位点、如图。
Intein 内含肽CBD chitin binding domain（几丁质结合位点）可与Tag（亲和标记）结合Stop code 终止密码子Amp氨苄抗性基因可用作抗性筛选的重要标记Lac I 乳糖调控基因编码阻遏蛋白二、质粒提取原理：答：三种溶液：溶液1：50 mmol/l 葡萄糖- --维持渗透压，防止DNA受机械损伤降解；25 m mol/l Tri· Cl （pH 8.0)---维持pH;10 m mol/l EDTA (pH 8.0)------螯合Ca2+, DNase 失活，保护DNA溶液2：0.2 mol/ NaOH----------核酸变性（pH>12或pH<3) (解链）1% SDS-----------------蛋白变性，裂解细胞。
溶液3：7.5 mol/L NH4AC （pH 7.6) -------沉淀蛋白，大分子核酸，调节pH,使小分子核酸复性（可溶）。
其它溶液：(1)2M NH4AC------------------------------沉淀蛋白，溶解核酸；(2)异丙醇-----------------------------沉淀质粒(3)70％乙醇----------------沉淀质粒，除去异丙醇，盐分。
(4) RNase--------------------------------除去细菌RNA过程及作用：(1) 1.5 ml 菌液，12000 rpm * 1 min, 弃上清（repeat) －－收集细菌(2)溶液1 (200 ul), 剧烈混匀－－－－－－－－－－－－－提供缓冲液(3)溶液2 (400 ul)，温柔混匀，冰中5 min;－－－－－－－裂解细胞，蛋白核酸变性(4)溶液3 (300 ul), 温柔混匀，冰中10 min;－－－－－－－质粒复性(5)13000 rpm* 5 min, 取上清；－－－－－－－－－－－－除去细菌蛋白，基因DNA(6)540 ul 异丙醇，室温10 min;－－－－－－－－－－－－沉淀质粒(7)14000 rpm * 10 min, 弃上清；－－－－－－－－－－－－除去可溶性杂质(8)100 ul 2M NH4AC(9)13000 rpm* 5 min, 取上清；(10)100 ul 异丙醇，室温10 min;(11)14000 rpm * 10 min, 弃上清；(12)70%乙醇500 ul, 14000 rpm * 10 min, 弃上清；－－－－－除去异丙醇，盐分(13)烘干10-30 min, －－－－－－－－－－－－－－－－－除去乙醇(14)50 ul ddH2O (含0.1 mg/ ml RNase), 37°C* 30 min.－－－－除去细菌RNA(15)电泳鉴定三、连接反应答：1、总体积为10 ul ；2、16 ℃连接过夜；（为什么是16 ℃？答：连接反应包括两步一是将碱基50%连接（变性）：Tm=2（A+T）+4（G+C），一般在8℃左右。
生物技术制药期末复习提纲
生物技术制药期末复习提纲
一、分子生物学
1.克隆技术：反应机理、克隆流程以及克隆技术的应用
2.基因工程：基因分子的识别、基因突变以及基因工程的应用
3.基因转录与转译：基因转录反应的步骤、转录末端修饰以及基因转录和转译的应用
4.基因表达：基因表达技术的基本原理、转录组研究方法以及应用
二、制药技术
1.生物技术制药：生物技术制药的优势、研发流程以及生物技术制药的应用
2.双孢制药：双孢药物的原理、双孢药物的药动学以及双孢药物的应用
3.化学合成制药：化学合成制药的优势、合成流程以及化学合成制药的应用
4.生物制药：生物制药的优势、研发流程以及生物制药的应用
三、制药公司
1.实验室：实验室设备、实验室运行方式以及实验室的重要性
2.生物制造：生物制造原理、生物制造过程以及应用
3.GMP质量控制：GMP质量控制的基本原则、GMP系统的运行原理以及GMP的应用
四、再生医学
1.再生植入物：再生植入物的分类、再生植入物的研发过程以及再生植入物的应用
2.细胞培养：细胞培养技术的基本原理、细胞培养的研究方法以及细胞培养的应用
3.细胞治疗：细胞治疗的优势、细胞治疗的产品开发过程以及细胞治疗的应用
五、细胞分子生物学。
最新基因工程复习提纲-完善
基因工程复习提纲-完善复习提纲1．什么是基因？基因：DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。
2．基因工程的诞生基因工程诞生于1973年。
1973－1974年，美国科学家科恩等以大肠杆菌为材料，成功地进行了三次基因工程试验。
试验结果证明，用基因工程可以打破不同物种间在亿万年中形成的天然屏障，任何不同种类生物的基因都有可能通过基因工程技术而组合到一起。
人类进入了激动人心的基因工程时代。
3．基因工程的定义及三大基本元件。
定义：基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。
上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。
三大基本元件：限制性核酸内切酶（restriction enzymes）/DNA连接酶（ligase）/基因工程载体（vector）4．基因工程的研究内容(1) 从生物有机体复杂的基因组中，分离出带有目的基因的DNA片段；(2) 在体外，将带有目的基因的DNA片段连接到能够自我复制并具有选择标记的载体分子上，形成重组DNA分子;(3) 将重组DNA分子引入（转）到受体细胞(亦称宿主细胞或寄主细胞);(4) 从大量的细胞繁殖菌落中，筛选出具有重组DNA分子的细胞克隆;(5) 将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生出所需要的物质。
5．基因工程的技术准备及技术支撑。
技术准备技术支撑：核酸凝胶电泳技术核酸分子连接技术/细菌转化技术/DNA序列分析技术/寡核苷酸合成技术/基因定点突变技术/聚合酶链式反应（PCR）技术5．基因工程的基本用途分离、扩增、鉴定、研究、整理生物信息资源大规模生产生物活性物质设计、构建生物的新性状甚至新物种基因工程在农业生产中的应用1.提高植物的光合作用效率2.提高豆科植物的固氮效率3.转基因植物4.转基因动物基因工程在工业中的应用1.纤维素的开发利用2.酿酒工业基因工程在医药上的应用1.用转基因植物或动物生产药物2.用微生物生产药物3.设计高效高特异性的生物制剂4.研制疫苗5.基因诊断6.法医鉴定7.基因治疗基因工程在环境保护中的应用1.检测水污染2. 生物降解7．核酸酶的分类1）根据核酸底物分RNA酶（Rnase）/DNA酶（Dnase）/底物非专一性核酸酶；2）根据作用方式分内切核酸酶（endonuclease）/外切核酸酶（exonuclease）；3) 根据对底物碱基专一性分碱基专一性核酸酶（切割部位的碱基序列高度专一性）非碱基专一性核酸酶（切割部位的碱基序列随机性）8．细菌中的防卫系统：限制与修饰现象。
生物制药技术复习提纲
生物制药技术复习提纲第一章绪论1.生物技术涵盖的技术范畴：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、生化工程、蛋白质工程、抗体工程等。
2.生物制品：指以微生物、寄生虫、动物毒素、生物组织为起始材料，采用生物学工艺或分离纯化技术制备，并以生物学技术和分析技术控制中间产物和成品质量制成的生物活性制剂。
3.生物制品的分类：预防用~（疫苗、菌苗和类毒素）；治疗用~（抗血清与抗毒素、血液制品、细胞因子和抗体）；诊断用~（细菌学试剂、免疫试剂和临床化学试剂）。
4.生物技术制药：采用现代生物技术,借助某些微生物、植物、动物生产医药品。
5.生物技术药物的分类（1）按药物化学本质和特性：①aa及其衍生物类药物；②多肽及pro类药物；③酶与辅酶类药物；④核酸及其降解物和衍生物类药物；⑤糖类药物；⑥脂类药物；⑦vit与辅酶（2）按原料来源分类：①人组织来源的药物；②动物组织~；③植物组织~；④微生物~；⑤海洋生物~ （3）按功能用途分类：①治疗药物；②预防药物；③诊断药物；④其他用途6.生物技术药物的特性（1）药理学特性①治疗的针对性强，疗效高生理生化机制合理，疗效可靠（细胞色素C：治疗缺氧性疾病）②药理活性高（ATP直接供能，效果确切、显著）③毒副作用小，营养价值高（生物药物主要有:蛋白质、核酸、糖类、脂类）④生理副作用常有发生（免疫反应、过敏反应）（2）原料的生物学特性①原料中有效成分含量低，杂质多；②原料的多样性；③原料的易腐蚀性（3）在生产制备中特殊性①提取纯化工艺复杂；②稳定性差；③易变质腐败；④注射用药的特殊要求（4）检验的特殊性①理化性质指标；②生物活性指标；③安全性指标7.蛋白质类药物的分离纯化方法（1）沉淀法（2）按分子大小分离方法①超滤法；②透析法（膜分离法）；③凝胶过滤法；④超速离心法（3）按分子所带电荷进行分离的方法①离子交换层析法；②电泳法；③等电聚焦（4）亲和层析法8.核酸类药物的分离纯化方法（1）提取法：先提取核酸与蛋白质复合物,再解离核酸与蛋白质,然后分离RNA与DNA。
基因工程作业复习提纲
基因工程作业复习提纲基因工程作业复习提纲一、名词解释基因工程、基因克隆、显性质粒、质粒DNA、染色体DNA、Southern 印迹、Western印迹、PCR技术、限制性内切酶、相容性末端、部分酶切、标记基因、T克隆、表达载体、基因组文库、目的基因、RT-PCR、受体细胞、感受态细胞、外植体、基因工程药物、核酸疫苗、转基因动物、基因治疗、表达系统、包涵体蛋白、星活性、结构基因、cDNA 文库、启动子、酶单位、定量PCR、电穿孔转化法、基因枪法。
基因工程：在体外将目的基因片段插入载体上，构建重组DNA （基因的新组合),并使之进入到原先没有这类分子的受体细胞内，而能持续稳定的增殖和表达的过程。
基因工程又名：遗传工程(genetic engineering) 重组DNA技术(recombination DNA technique) 分子克隆(molecular cloning) 基因克隆(gene cloning)基因克隆：基因工程的核心内容是基因克隆和基因表达染色体DNA：分离目的基因和基因表达调控因子的主要材料，也可提供构建染色体和染色体基因整合平台系统之用标记基因：当载体进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。
这才介于克隆操作。
即带有筛选标记或抗药基因T A克隆载体：用耐热DNA聚合酶经PCR法扩增基因片段时、将PCR产物的3’端加上了一个A。
根据这一特点研制出一种线性质粒，其5’端突出的T，它们之间可以连接，即TA 克隆。
表达载体：原核表达载体表达载体中含有复制起始位点、抗性基因、克隆位点、启动子、核糖体结合位点和转录终止信号。
基因组文库: 某种生物的基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌中的群体之中，这个群体极为该生物的基因组文库。
目的基因: 优良性状相关的基因，即用于克隆的基因受体细胞: 能够接受外源DNA并使其稳定维持的细胞，也指具有应用价值和理论研究的细胞.电穿孔转化法: 将待转化的质粒或DNA重组连接液加在电穿孔转化仪的样品池中，两极施加高压电场。
基因工程操作复习提纲
基因工程操作复习提纲一、考试题型选择题、判断题、填空题、问答题二、提纲（重点在于理解、熟悉操作过程原理，了解操作注意事项）什么是基因工程、基因工程主要操作流程、基因工程的主要应用？基因工程：是将不同来源的基因（DNA分子），按照工程学的方法进行设计，在体外构建成杂种DNA分子，然后导入受体细胞，并在受体细胞内复制、转录、表达的操作。
基因工程又称DNA重组技术。
操作流程：（1）目的基因的获取：从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR 扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片断。
（2）重组体的制备：将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记（抗菌素抗性）的载体分子上。
（3）重组体的转化：将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。
（4）克隆鉴定：挑选转化成功的细胞克隆（含有目的基因）。
（5）目的基因表达：使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。
应用：医药业：疾病的预防;病的诊断;病的治疗农业及食品工业: 提高作物抗性;改良作物品质;延长果实货架期;用农作物生产药物畜牧业;加工食品环境: 环境检测;环境净化什么是基因？是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。
什么是质粒？质粒的分类和性质？质粒是一种裸露的,结构简单,独立于细菌DNA之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
分类：两种复制类型：紧密控制型和松弛控制型克隆质粒载体；多功能质粒载体；穿梭质粒载体性质：质粒DNA的分子特性；质粒的复制类型；质粒的不亲和性；转移性。
碱法提取大肠杆菌中质粒的操作步骤、注意事项及使用试剂的用途？步骤：1. 培养细菌扩增质粒将携带pBR322质粒的大肠杆菌接种于含2 ~ 5mL 氯霉素的LB液体培养基中，37℃摇床培养24h左右。
2. 收集菌体和裂解细菌（1）取1.5mL培养液置Eppendorf管内，离心，10000r/min，5min，弃去上清，保留菌体沉淀。
《基因工程》复习大纲
《基因工程》复习大纲一、考试性质基因工程研究生入学考试科目是为我校招收生物工程专业硕士研究生而实施的水平考试，选拔具有较全面的基因工程理论知识和操作技术的学生。
其指导思想是有利于国家对高层次人才的选拔，促进基因工程课程教学质量的提高。
考试对象为2011年起参加我校硕士研究生入学基因工程考试的考生。
二、考试基本要求要求学生比较系统的理解和掌握基因工程的基本原理、单元操作和应用战略，掌握基因的高效表达原理、重组表达产物的活性回收原理、基因工程菌（细胞）的稳定生产原理、DNA的切接反应、重组DNA分子的转化、转化子的筛选与重组子的鉴定等内容，能综合运用所学知识分析和解决以大肠杆菌、酵母等基因工程受体系统为主线的实验案例，并熟悉蛋白质工程和代谢工程的基本原理和应用。
笔试内容包括具体实验方法。
三、考试方法和考试时间硕士研究生入学基因工程考试为笔试，总分150，考试时间为3小时。
四、参考书《基因工程（第2版）》张惠展主编，高等教育出版社（2010年1月出版）或《基因工程》张惠展主编，华东理工大学出版社（2005年8月出版）五、试题类型1、单项选择题（每题2分，共20分）2、填空题（每空1分，共25分）3、名词解释（每题5分，共30分）4、简答题（每题6分，共30分）5、综合题（每题15分，共45分）六、考试内容、考试要求第一部分DNA重组克隆的单元操作（40%）掌握：质粒载体；限制性核酸内切酶、DNA分子重组的方法；重组DNA转化的基本概念、转化方法、转化率及其影响因素、转化细胞的扩增；基于载体遗传标记的筛选与鉴定、基于克隆片段序列的筛选与鉴定；PCR扩增法、基因文库的构建。
熟悉：噬茵体DNA载体；T4-DNA连接酶、DNA切接反应的影响因素；受体细胞的选择；基于外源基因表达产物的筛选与鉴定；鸟枪法、cDNA法、化学合成法。
第二部分大肠杆菌及其它原核生物基因工程（30%）掌握：启动子、终止子、SD序列、密码子、质粒拷贝数；细菌生长的动力学原理、发酵过程的最优化控制、基因工程菌的高密度发酵；基因工程菌的遗传不稳定性及其对策；利用重组菌生产氨基酸、有机酸等生物基产品。
基因工程复习提纲
基因工程复习提纲1.1 DNA重组技术的基本工具一、基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA 重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。
概念分析①基因工程技术的原理：基因重组②目的：创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
③操作水平：DNA分子水平④操作环境：体外⑤优点：克服远缘杂交不亲和障碍，定向改造生物性状从结构上分析，为什么不同生物的DNA能够重组?(1)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。
(2)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构(1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。
(2)遗传信息的传递都遵循中心法则。
(3)生物界共用一套遗传密码。
二、基础理论和技术的发展催生了基因工程（一）基础理论的重大突破①DNA是遗传物质的证明1944年，艾弗里等人通过不同类型肺炎双球菌的转化实验，不仅证明了生物的遗传物质是DNA，还证明了DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体，艾弗里等人的工作可以说是基因工程的先导。
②DNA双螺旋结构和中心法则的确立1953年，沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型。
1958年，梅赛尔松和斯塔尔用实验证明了DNA的半保留复制。
中心法则阐明了遗传信息流动的方向。
③遗传密码的破译人们认识到，自然界中从微生物到人类共用一套遗传密码，而且为基因的分离和合成等提供了理论依据。
（二）技术发明使基因工程的实施成为可能①基因转移载体的发现1967年，罗思和赫林斯基发现细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力，并可以在细菌细胞间转移，这一发现为基因转移找到了一种运载工具②工具酶的发现科学家发现了多种限制酶、连接酶、逆转录酶，这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
③DNA合成和测序技术的发明④DNA体外重组的实现⑤重组DNA表达实验的成功 1973年，博耶和科恩选用仅含单一EcoRI酶切位点的载体质粒pSC101，使之与非洲爪蟾核糖体蛋白基因的DNA片段重组。
13秋基因工程复习提纲1.doc
第一章绪论基因工程概况1、第一个实现DNA重组的人，现代基因工程的创始人——1972年，美国斯坦福大学医学屮心的P.Berg2、基因工程诞生的元年——1973年，以科恩（Coher）和博耶（Boyer）建立的基因工程的基本模式为标志3、基因工程概念：按照人们事先设计的蓝图，在体外将不同来源的DNA分子进行剪切重组，与载体DNA形成镶嵌DNA分子（即重组DNA分子），然后将之导入宿主细胞，使之在宿主细胞屮扩增表达，从而使宿主或宿主细胞获得新的遗传特性，或形成新的基因产物。
理论依据：不同基因具科相同的物质基础、基因是可以切割的、基因是可以转移的、多肽与葙因之间存在对应关系、遗传密码是通用的、葙因可以通过制把遗传信息传递给下一代。
基本技术路线主要内容（基因工程的上游操作过程可简化为：切、接、转、增、检）及基本要素。
①从供体细胞屮分离出基因纟II DNA,川限制性核酸内切酶分别将外源DNA （包拈外源基因或目的基因）和载体分子切开（切）；②川DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段接到载体分子上，形成DNA重组分子（接）;③借助于细胞转化手段将DNA重组分子导入受体细胞中（转）：④短时间培养转化细胞，以扩増DNA重组分了•或使其整合到受体细胞的难因组中（增）；⑤筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞（检）。
要素：基因工異酶载体受体细胞7、基因工程的现实应用方Ifti噬歯体遗传学细歯抗药性的遗传学插人生殖细胞定点突变改功能分析序列分析变基因结构基因工程的诞生与有关学科之间的联系第二章基因克隆所需的工具酶1、基因工程使用的工其酶的种类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶，其巾以限制性内切酶和DNA连接酶为主的多种工具酶的发现和应用，为葙因操作提供广丨•分重要的技术菽础。
2、限制性核酸内切酶的类型（I、II、III类）命名（一般是以微生物属名的第一个字母和种名的前两个字母组成，第叫个字母表示菌株（品系），即属名+种名+株名。
基因工程制药复习提纲 答案
名词解释1.基因工程基因工程是值在体外合成或重组特定的DNA，再与载体连接，最后导入到宿主细胞内表达、扩增出人们需要的蛋白质，而且使这种性状可遗传给后代的技术。
包含上游技术和下游技术。
2.基因工程制药基因工程制药是通过基因工程的方法生产药物，具体包含获得目的基因、构建重组质粒、构建基因工程菌、培养工程菌、产物别离纯化、产品加工检验等步骤。
3.逆转录逆转录〔reverse transcription〕是某些RNA病毒由逆转录酶直接利用RNA为模板合成DNA的过程。
4.CDNA以生物细胞的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，然后在合成双链DNA，并将合成的cDNA双链重组到质粒载体或噬菌体载体上，倒入宿主细胞进行增殖。
在这个过程中合成的双链DNA叫做cDNA。
5.引物引物是人工合成的单链DNA小片段，碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的5’端相同。
是PCR的起始点。
6.表达载体所谓表达载体〔expression vector〕是指具有宿主细胞基因表达所需的调节操作序列，能使外源基因在宿主细胞内转录和翻译的载体。
7.克隆载体克隆载体〔cloning vector)是把一个有用的制药DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中进行繁殖的工具。
8.载体载体〔vector〕，指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段〔目的基因〕转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。
9.汇报基因载体分子上有一种特别意义的基因序列，它们表达的目的是为了证明载体已经进入宿主细胞，并将含有外源基因的宿主细胞从其他细胞中区分并挑选出来。
这种基因就是汇报基因。
10.启动子启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能被RNA聚合酶识别并结合，具有转录起始的特异性11.PCR聚合酶链式反响是一种体外放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它主要包含变性、退火、延伸三个过程，并且屡次循环。
12.包涵体包涵体〔inclusion body〕是存在于细胞质中的一种不可溶的蛋白质聚集折叠而形成的晶体结构物。
(整理)基因工程制药-复习.
一、名词解释1.杂交核酸分子杂交技术：具一定同源性的两条（DNA或RNA）单链在适宜的温度及离子强度等条件下，可按碱基互补配对原则特异性地复性，形成双链。
2.探针：一段序列已知的单链核酸片段，通过互补的方式检测单链核苷酸序列。
3.粘粒粘粒载体（cos质粒载体）：Cos质粒是一类人工构建的含有λ-DNA cos序列和质粒复制子的特殊类型的载体。
4.同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。
如BamH I、BglⅡ、Bcl I、XhoⅡ等。
5.同裂酶：来源不同的内切酶，识别和切割的是同样的核苷酸靶序列的酶。
不同同裂酶对位点的甲基化敏感性有差别，用来研究甲基化作用。
6.cDNA文库：某生物mRNA反转录产生cDNA片段分别与合适的克隆载体相连，通过转化贮存在一种受体菌的群体之中，把这种包含某生物基因组全部基因cDNA的受体菌群体，称为该生物cDNA文库。
7.基因工程药物：指利用基因工程技术研制和生产的药物，主要包括重组蛋白（多肽）药物、反义核酸药物、DNA药物和基因工程抗体等。
8.盐析盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。
9.星活性星号（*）活性：高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值等，会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特异性，即所谓的“星活性”现象。
Eco RI*代表Eco RI的星号活力。
星活性的特点：限制酶识别序列特异性降低例如：EcoRI（高pH值或低盐离子强度）5’G AATTC3’变成5’N AA TTN3’，另有一种情况是对AATT中的A、T分辨不严格。
二、简答题1.如何克隆微生物的纤溶酶基因？PCR法分离目的基因：根据核酸序列的相关信息，设计简并引物，通过对mRNA进行反转录得到cDNA，以cDNA为模板，然后将目的基因通过PCR方法扩增，或者直接从基因组DNA扩增的方法。
根据已知探针克隆基因：首先将探针作放射性或非放射性标记，再将其与用不同内切酶处理的基因组DNA杂交，最后将所识别的片段从胶中切下来，克隆到特定的载体（质粒、噬菌体或病毒）中作序列测定或功能分析。
03-2 基因工程制药资料精
0.015
6.0
酶表达水平 15.0%
0.049
19.1
31.1%
0.160
72.5
41.5%
0.225
102.6
49.8%
0.295
165.0
57.7%
0.360
105.5
53.4%
0.410
62.4
44.5%
0.450
30.2
22.5%
*L-天冬酰氨酶
生长与表达的影响因素
5 减少乙酸积累的对策 宿主菌 可通过诱变使乙酸生成途径中的两个关键酶突变 或活性降低，使乙酸合成受阻。 培养基
以天冬酰氨酶表达为例，在A600=0.295*10时生长速度比 较快，这时菌体进入诱导状态，酶蛋白的积累加快，酶活 和表达水平都较高。
而菌体进入对数期后期，由于发酵液中营养的消耗， 氧气的缺乏及代谢产物的积累，使菌体的生长速度明显受 到抑制。
生长与表达的影响因素
诱导时机对酶表达水平和活力的影响
生物量（A600） 酶活力
段，后期为蛋白诱导表达阶段。 偏碱性的pH对外源蛋白的表达不利。表达开始要调节
pH在6.8-7.0之间，以保证外源蛋白的高水平表达。
生长与表达的影响因素
3 诱导时间对外源蛋白表达的影响
诱导时间对酶表达水平和活力的影响 诱导时间 酶活力 酶表达水平
0
0.02
1
52.3
37%
2
118.8
57%
3
120.8
43
500
4.0 7.0 0.83 6
2.27 26.4%
53
500
3.6 7.0 2.44 6
5.185 8.9%
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名词解释1.基因工程基因工程是值在体外合成或重组特定的DNA，再与载体连接，最后导入到宿主细胞内表达、扩增出人们需要的蛋白质，而且使这种性状可遗传给后代的技术。
包括上游技术和下游技术。
2.基因工程制药基因工程制药是通过基因工程的方法生产药物，具体包括获得目的基因、构建重组质粒、构建基因工程菌、培养工程菌、产物分离纯化、产品加工检验等步骤。
3.逆转录逆转录（reverse transcription）是某些RNA病毒由逆转录酶直接利用RNA为模板合成DNA的过程。
4.CDNA以生物细胞的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，然后在合成双链DNA，并将合成的cDNA双链重组到质粒载体或噬菌体载体上，倒入宿主细胞进行增殖。
在这个过程中合成的双链DNA叫做cDNA。
5.引物引物是人工合成的单链DNA小片段，碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的5’端相同。
是PCR的起始点。
6.表达载体所谓表达载体（expression vector）是指具有宿主细胞基因表达所需的调节控制序列，能使外源基因在宿主细胞内转录和翻译的载体。
7.克隆载体克隆载体（cloning vector)是把一个有用的制药DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中进行繁殖的工具。
8.载体载体（vector），指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。
9.报告基因载体分子上有一种特殊意义的基因序列，它们表达的目的是为了证明载体已经进入宿主细胞，并将含有外源基因的宿主细胞从其他细胞中区分并挑选出来。
这种基因就是报告基因。
10.启动子启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能被RNA聚合酶识别并结合，具有转录起始的特异性11.PCR聚合酶链式反应是一种体外放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它主要包括变性、退火、延伸三个过程，并且多次循环。
12.包涵体包涵体（inclusion body）是存在于细胞质中的一种不可溶的蛋白质聚集折叠而形成的晶体结构物。
通常包涵体虽然具有正确的氨基酸序列，但是空间结构却是错误的。
13.蛋白表达系统蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过这个体系实现外源基因在宿主细胞中表达的目的。
14.单克隆抗体由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。
15.基因工程抗体基因工程抗体就是按不同的目的和需求，对抗体基因进行加工、改造和重新装配，然后导入适当的受体细胞中表达得到的抗体分子。
16.改形抗体改性抗体（reshaped antibody,RAb）是指利用基因工程技术，将人抗体可变区（V）中互补决定簇序列改换成鼠源单抗互补决定簇。
重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。
17.嵌合抗体在基因水平上将鼠源单克隆抗体可变区和人抗体恒定区连接起来并在合适的宿主细胞中表达，这种抗体叫做嵌合抗体（chimeric antibody）。
18.镶面抗体将鼠源单抗可变区中氨基酸残基改造成人源的，消除了异源性且不影响可变区的整体空间构象。
19.单链抗体单链抗体(single chain antibody fragment，scFv)，是由抗体重链可变区和轻链可变区通过15～20个氨基酸的短肽(linker)连接而成。
scFv能较好地保留其对抗原的亲和活性,并具有分子量小、穿透力强和抗原性弱等特点。
20.双特异性抗体双特异性抗体（bispecific antibody,BsAb)是指具有两种抗原结合特性的抗体21.展示技术是在基因或突变体文库中选择有用的基因或突变体的一种高通量的筛选方法，该技术的特点是利用筛选基因的表型和基因型密切相连的特性，通过筛选表型而获得基因型22.重组蛋白药物的复制对专利期满的重组蛋白药物进行复制生产23.易错PCR易错PCR 是指通过改变PCR反应条件来调整PCR反应中的突变频率，降低聚合酶固有的突变序列的倾向性，提高突变谱的多样性，使得错误碱基随机地以一定的频率掺入到扩增的基因中，从而得到随机突变的DNA群体，最后用合适的载体克隆突变基因。
24.Gene 改组DNA改组是指DNA分子的体外重组，是基因在分子水平上进行有性重组(sexual recombination)。
通过改变单个基因(或基因家族，gene family)原有的核苷酸序列，创造新基因，并赋予表达产物以新功能。
25.盒式诱变是一种定点突变技术，将目的基因的一段DNA删掉，并用人工化学合成所具有的突变核苷酸的双链寡核苷酸片段取代，产生相应的突变体。
26.大引物诱变法一种简单的PCR定点诱变法，是以第一轮PCR扩增产物作为第二轮PCR扩增的大引物，只需三种扩增引物进行两轮PCR反应，即可获得突变体DNA27.基因工程疫苗使用DNA重组生物技术，把天然的或人工合成的遗传物质定向插入细菌、酵母菌或哺乳动物细胞中，使之充分表达，经纯化后而制得的疫苗。
28.新型疫苗新型疫苗是采用生物化学合成技术、人工变异技术、分子微生物学技术、基因工程技术等现代生物技术制造出的疫苗，是近年来新发展的疫苗。
其有别于传统常规疫苗。
包括基因工程亚单位疫苗、重组疫苗、合成肽疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗和抗独特型抗体疫苗等。
29.灭活疫苗灭活疫苗是先对病毒或细菌培养，然后用加热或化学剂（通常是福尔马林）将其灭活使其失去致病力，但仍保留免疫原性而制成的生物制剂30.弱毒疫苗弱毒疫苗，是一种病原致病力减弱但仍具有活力的完整病原疫苗，也就是用人工致弱或自然筛选的弱毒株，经培养后制备的疫苗。
31.合成多肽疫苗用化学手段合成病原微生物的保护性多肽活表位并将其连接到大分子载体上，再加入佐剂制成的疫苗。
32.基因缺失疫苗用基因工程技术将病毒或细菌的致病性基因进行缺失，从而获得弱毒株活疫苗。
33.亚单位疫苗指除去病原体中无免疫保护作用的有害成分，保留其有效的免疫原成分制成疫苗。
34.重组活载体疫苗用基因工程技术将病毒或细菌构建成一个载体，把外源保护性抗原基因插入其中使之表达的活疫苗。
35.反向遗传操作与经典的从表型改变到进行基因特征研究的思路相反，是指通过构建RNA病毒的感染性分子克隆，在病毒cDNA 分子水平上对其进行体外人工操作36.基因疫苗基因疫苗指的是DNA疫苗，即将编码某种抗原蛋白的外源基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达合成抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。
37.核酸疫苗核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA 或RNA ) 直接导入动物体细胞内，并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的38.肿瘤疫苗是通过激活患者自身免疫系统，利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应，增强机体的抗癌能力，阻止肿瘤的生长、扩散和复发，以达到清除或控制肿瘤的目的。
39.避孕疫苗避孕疫苗是一种具有科学性、长期性及可逆性的避孕方法。
世界各国都在从事这方面的研究工作。
其基本原理是通过提取一种抗原成分制成疫苗，给予受试对象产生相应的免疫反应，从而阻止受孕。
此法只处于实验和研究阶段，尚未进入临床试验。
问答题、1．制药基因的获得方法有哪些制药基因获得的方法一般分为直接获得法和间接获得法。
一般来说，所谓的直接获得法就是直接从基因组DNA中获得制药基因；而间接获得法要先获得mRNA、cDNA等，间接从基因组DNA中获得制药基因。
但真核生物基因组不仅庞大，而且结构复杂，分离时还要尽可能排除内含子，所以常用间接法获得制药基因。
具体方法常有两种：一是从cDNA文库克隆制药基因，首先以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，然后再合成双链DNA，并将双链DNA重组到质粒载体或噬菌体载体上，导入大肠杆菌宿主细胞进行增殖；二是通过RT-PCR以mRNA逆转录得到的cDNA第一条链为模板，设计特定的引物，扩增获得制药基因产物。
但是RT-PCR分离制药基因必须以制药基因的序列已知为前提。
2．基因工程制药的内涵？基因工程制药是根据所需要的蛋白药物，3．什么是PCR?一般的PBL包括哪些步骤？PCR是聚合酶链式反应，聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）技术是利用酶促反应在体外指导特定DNA序列扩增的方法，以热变性的双链DNA分子为模板，利用引物和四种脱氧核苷三磷酸（dNTPs）为原料在DNA聚合酶的作用下大量扩增了特定的DNA片段。
一般的PCR包括以下几个过程：1.变性，DNA双链在高温下（一般为94℃）会解离成两条单链DNA分子。
2.退火，降低反应温度（约50℃），使专门设计的一对寡核苷酸引物与两条单链模板DNA因发生退火作用而结合在靶DNA区段两端的互补序列位置上。
3.延伸，将反应混合物的温度上升到72℃左右，此时在DNA聚合酶的作用下，引物的3端便开始依次参入脱氧核苷三磷酸分子，并沿着模板分子按照5——3方向延伸，合成新的DNA互补链。
4．什么是引物？引物设计的原则有哪些？引物是人工合成的两端寡核苷酸序列，一个引物与目的基因一段的一条DNA模板链互补，另一个引物与目的基因的另一端的另一条DNA模板链互补。
是PCR的起始点。
1.引物长度在15-30bp之间，而且上下游引物长度差别不能大于3bp.2引物碱基的分布是随机的，理论上是分布均匀的。
3.GC碱基含量在45%——55%左右。
4.两个引物在3端必须与模板互补，在5端可以不互补。
5.自身连续互补碱基小于4个6.引物之间连续互补碱基应小于4—5个7.3端末位碱基最好不选A5．基因工程载体的特性有哪些？1能够在宿主细胞内进行独立和稳定的自我复制，尽管有外源基因的插入，这种稳定复制状态和遗传特性不会改变。
2易于从宿主细胞中分离、纯化。
3具有较小的分子量和松弛型复制子。
、4在载体DNA复制的非必需区内，存在有适当的限制性内切酶位点。
5具有能够观察的表型特征。
6．基因工程载体一般分为哪两类？分别适应于何种实验目的？基因工程载体一般分为克隆载体和表达载体。
克隆载体是携带外源基因进入宿主细胞，使外源基因在宿主细胞中繁殖的载体。
适用于扩增重组质粒但不要求表达蛋白。
表达载体是适合在宿主细胞中表达外源基因的载体，它必须具有强启动子和终止子，能够高效的转录来自外源基因的mRNA。
适用于下游技术中蛋白质的表达。
7．cDNA的获得过程？cDNA是以生物细胞内的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，再经过RNAse酶的作用消化RNA链，再以得到的cDNA单链为模板合成双链cDNA。
并将合成的cDNA双链重组到质粒载体或噬菌体载体中增殖。