Duchenne 肌营养不良症
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Duchenne 肌营养不良症 的基因诊断
云南省第一人民医院生殖遗传科 云南省围产医学遗传诊断中心
贺静 朱宝生 李春华
进行性肌营养不良症是一组原发于肌肉组
织的遗传性疾病，其主要临床特点是进行性肌
肉的萎缩与无力。
假肥大型肌营养不良症 肢带型肌营养不良症 面-肩肱型肌营养不良症 远端型肌营养不良症 眼肌型肌营养不良症 眼咽型肌营养不良症 先天性肌营养不良症
45
547
52
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6
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12
331
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181
44
268
60
139
4
196
现经我室已做了7例DMD基因诊断， 其中产前诊断3例，患者DMD基因诊断4 例。
病史简介 病例
诊断结果
产 有DMD生育史 前 诊 有DMD生育史
缺失型DMD的基因诊断
是
否
对胎儿进行缺失型 DMD的基因诊断
Βιβλιοθήκη Baidu
利用连锁分析进行 携带者的诊断及产前诊断
谢 谢！
三、发病机理
dystrophin位于肌细胞膜的内层，是 一种细胞骨架蛋白，能与肌动蛋白结合。 在患者中，由于缺乏dystrophin，因而引 起肌细胞功能障碍，使大量的游离Ca2+以 及高浓度的细胞外液和补体成分进入肌纤 维内，引起肌细胞内的蛋白质释放和补体 激活，导致肌原纤维断裂、坏死和巨噬细 胞对这些坏死组织的吞噬、清除。
四、实验室检查
1、生化检查
其中以CPK、PK最为敏感。
2、肌电图检查
主动收缩时动作电位波幅降低，时限缩短， 单个运动单位范围和纤维密度减少，多相电位 增加，轻度收缩时即见大量干扰相。
3、肌肉活检
早期可发见大圆形透明变性和肌纤维坏死 中期则有坏死与再生纤维减少乃至消失
后期限则肌纤维几乎消失，代之脂肪和纤维减 少结缔组织。
4、心脏检查
多有不同程度的心脏损害，表现在心电图 的右心前导联的高R波和左心前导联的深Q波、 心律失常及束支传导阻滞等。
5、肌肉CT和MRI检查
受累的肌肉CT检查可发现密度减低区， MRI检查可发现程度不等的“蚕蚀现象”。
五、基因诊断
1、限制性内切酶图谱的应用 （1）基因缺失的检测
cDNA探针可在患者中检测到60%以 上的DNA片段缺失及5%的重复突变。
Duchenne 肌营养不良症（ Duchenne muscular dystrophy, DMD）是最常见的神 经肌肉疾病之一，主要累及男性个体， 呈 X连锁的隐性遗传，其发生率为1/3500。
二、遗传学
20世纪80年代一批科学家从X(q21.2) 染色体上分离到突变后可产生DMD的 DNA片段。这个片段包含了70多个外显 子，整个长度达2.2Mb，由此转录后形成 mRNA为14Kb大小，由此翻译形成 dystrophin蛋白质。
（1）用多重PCR方法检测DMA基因缺失 选择了DMD基因两个缺失热点区内
共18个易缺失外显子的旁侧顺序为引物， 进行多重PCR扩增（即多对引物在同一 PCR反应体系中扩增），可迅速检出 DMD基因缺失的98%以上。
DMD引物及扩增片段
外显子 产物片段（bp） 外显子 产物片段（bp）
1
535
（2）RFLP的连锁分析
在人类基因组中，平均约200bp可发生一次变异
（称中性突变），中性突变造成了序列上的多态性，不
少序列多态性发生在限制酶识别位点上，产生了限制酶
酶切位点的多态性。用该限制酶水解DNA就会产生长度
不同的片段，称为限制酶片段长度多态性（RFLP）。
约30%~40%的患者不能检测到明显的基因缺失或重
排。这时可利用RFLP的连锁分析来进行产前诊断或检 出到致病基因携带者。
2、PCR方法的应用
聚合酶链式反应（PCR），即 通过引物延伸核酸的某个区域而进 行的重复双向DNA合成，在设计上 十分简单并且似乎有无限的应用方 式。
PCR扩增一个模板要求一对寡核苷酸 引物、4种脱氧核糖核苷酸（dNTP）、摩 尔数超过dNTP的镁离子和进行DNA合成 的热稳定DNA聚合酶。
多重PCR扩增后电泳结果
1 23M12 3
（2）用PCR方法检测多态性位点
随DMD基因中多态性位点的发现及
旁侧顺序的测定，现已开始用PCR方法
扩增多态性位点区域，酶解扩增产物，
电泳分后便可对多态性进行分析。
六、DMD基因诊断的一般程序
胎儿性别诊断
46,XY 先证者缺失型基因检测
46,XX 也可检测胎儿是否为携带者
断 其弟为DMD患者
散发
胎儿获得母源正常基因 标记X染色体
散发 先证者为非缺失型，胎 儿有和先证者同源X
散发 先证者为缺失型， 胎儿正常
患者 6岁有典型DMD症状 散发 患者为缺失型
诊断 9岁有典型DMD症状 散发 患者为缺失型
7岁有典型DMD症状 散发 患者为缺失型
5岁有典型DMD症 散发 患者为缺失型
云南省第一人民医院生殖遗传科 云南省围产医学遗传诊断中心
贺静 朱宝生 李春华
进行性肌营养不良症是一组原发于肌肉组
织的遗传性疾病，其主要临床特点是进行性肌
肉的萎缩与无力。
假肥大型肌营养不良症 肢带型肌营养不良症 面-肩肱型肌营养不良症 远端型肌营养不良症 眼肌型肌营养不良症 眼咽型肌营养不良症 先天性肌营养不良症
45
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现经我室已做了7例DMD基因诊断， 其中产前诊断3例，患者DMD基因诊断4 例。
病史简介 病例
诊断结果
产 有DMD生育史 前 诊 有DMD生育史
缺失型DMD的基因诊断
是
否
对胎儿进行缺失型 DMD的基因诊断
Βιβλιοθήκη Baidu
利用连锁分析进行 携带者的诊断及产前诊断
谢 谢！
三、发病机理
dystrophin位于肌细胞膜的内层，是 一种细胞骨架蛋白，能与肌动蛋白结合。 在患者中，由于缺乏dystrophin，因而引 起肌细胞功能障碍，使大量的游离Ca2+以 及高浓度的细胞外液和补体成分进入肌纤 维内，引起肌细胞内的蛋白质释放和补体 激活，导致肌原纤维断裂、坏死和巨噬细 胞对这些坏死组织的吞噬、清除。
四、实验室检查
1、生化检查
其中以CPK、PK最为敏感。
2、肌电图检查
主动收缩时动作电位波幅降低，时限缩短， 单个运动单位范围和纤维密度减少，多相电位 增加，轻度收缩时即见大量干扰相。
3、肌肉活检
早期可发见大圆形透明变性和肌纤维坏死 中期则有坏死与再生纤维减少乃至消失
后期限则肌纤维几乎消失，代之脂肪和纤维减 少结缔组织。
4、心脏检查
多有不同程度的心脏损害，表现在心电图 的右心前导联的高R波和左心前导联的深Q波、 心律失常及束支传导阻滞等。
5、肌肉CT和MRI检查
受累的肌肉CT检查可发现密度减低区， MRI检查可发现程度不等的“蚕蚀现象”。
五、基因诊断
1、限制性内切酶图谱的应用 （1）基因缺失的检测
cDNA探针可在患者中检测到60%以 上的DNA片段缺失及5%的重复突变。
Duchenne 肌营养不良症（ Duchenne muscular dystrophy, DMD）是最常见的神 经肌肉疾病之一，主要累及男性个体， 呈 X连锁的隐性遗传，其发生率为1/3500。
二、遗传学
20世纪80年代一批科学家从X(q21.2) 染色体上分离到突变后可产生DMD的 DNA片段。这个片段包含了70多个外显 子，整个长度达2.2Mb，由此转录后形成 mRNA为14Kb大小，由此翻译形成 dystrophin蛋白质。
（1）用多重PCR方法检测DMA基因缺失 选择了DMD基因两个缺失热点区内
共18个易缺失外显子的旁侧顺序为引物， 进行多重PCR扩增（即多对引物在同一 PCR反应体系中扩增），可迅速检出 DMD基因缺失的98%以上。
DMD引物及扩增片段
外显子 产物片段（bp） 外显子 产物片段（bp）
1
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（2）RFLP的连锁分析
在人类基因组中，平均约200bp可发生一次变异
（称中性突变），中性突变造成了序列上的多态性，不
少序列多态性发生在限制酶识别位点上，产生了限制酶
酶切位点的多态性。用该限制酶水解DNA就会产生长度
不同的片段，称为限制酶片段长度多态性（RFLP）。
约30%~40%的患者不能检测到明显的基因缺失或重
排。这时可利用RFLP的连锁分析来进行产前诊断或检 出到致病基因携带者。
2、PCR方法的应用
聚合酶链式反应（PCR），即 通过引物延伸核酸的某个区域而进 行的重复双向DNA合成，在设计上 十分简单并且似乎有无限的应用方 式。
PCR扩增一个模板要求一对寡核苷酸 引物、4种脱氧核糖核苷酸（dNTP）、摩 尔数超过dNTP的镁离子和进行DNA合成 的热稳定DNA聚合酶。
多重PCR扩增后电泳结果
1 23M12 3
（2）用PCR方法检测多态性位点
随DMD基因中多态性位点的发现及
旁侧顺序的测定，现已开始用PCR方法
扩增多态性位点区域，酶解扩增产物，
电泳分后便可对多态性进行分析。
六、DMD基因诊断的一般程序
胎儿性别诊断
46,XY 先证者缺失型基因检测
46,XX 也可检测胎儿是否为携带者
断 其弟为DMD患者
散发
胎儿获得母源正常基因 标记X染色体
散发 先证者为非缺失型，胎 儿有和先证者同源X
散发 先证者为缺失型， 胎儿正常
患者 6岁有典型DMD症状 散发 患者为缺失型
诊断 9岁有典型DMD症状 散发 患者为缺失型
7岁有典型DMD症状 散发 患者为缺失型
5岁有典型DMD症 散发 患者为缺失型