细胞培养考试重点整理

（2）机械划除法

原代培养成功后，上皮细胞和成纤维细胞混杂生长，常常分区成片，每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。因此可以采用机械刮除的方法去除不需要的细胞。

（3）反复贴壁法

成纤维细胞贴壁过程快（10-30min），而上皮细胞大部分在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，这样可以利用此差别来纯化细胞。

（4）克隆法

采用细胞克隆法将细胞分成单个细胞，使之分别生长成克隆，选择出所需要的克隆。

（5）培养及限定方法

某些细胞在生长过程中必须存在或去除某种物质，否则无法生长，可以利用这种技术来纯化细胞。如选用不含血小板生长因子的无血清培养基可去除表皮细胞中的成纤维细胞。

（6）流式分选

⑥亦可用全皮消化法或组织块培养法培养，但表皮细胞和成纤维细胞混合生长，难以纯化。

⑦表皮细胞采用角蛋白的特异性抗体鉴定。

1．根据导入基因不同分为：

（1）染色体基因转导：利用细胞融合或显微注射法将带有目的基因的染色体或染色体片段，整合入受体细胞内的技术。

（2）基因转导：是把已克隆的基因、含有目的基因的DNA片段或序列等导入受体细胞基因组中的技术。

2.根据受体细胞不同，基因转导分为：

（1）基因转染（Gene Transfection）：

●将基因导入体外培养细胞中，观察目的基因在体外细胞中的表达。

●取出体内二倍体细胞导入基因后，再输回体内。

（2）转基因技术（Transgenic Technique）：

受体细胞是受精卵，向受精卵导入目的基因后，再置入宿主动物子宫，发育成个体；可在胚胎期检测基因表达，也可于生后再进一步观察目的基因在整体水平内的表达。该动物称为转基因动物。

3．从基因表达的持续性上可分为；

（1）稳定表达：导入的基因整合入受体细胞基因组中，能长期表达，对这类表达的检测，需借助于筛选标记（如抗neo Gene）才能测知。（2）瞬时表达：在基因转移后一周内即可观察到基因表达现象，但不持久，随时间推移表达逐渐减弱或消失。（未整合？）