细胞培养考试重点整理
植物细胞工程考试重点资料
植物细胞工程一、名词解释1、离体生殖：是指人工操纵的无菌条件下，使植物在人工培养基上生殖的技术。
2、外植体:取至生物体用于组织培养的活的生物细胞或组织切段、或用于继代培养的组织培养物均称之为外植体。
3、悬浮培养：是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。
4、互不选择：两个具有不同生理或遗传特性的亲本，在形成杂种细胞时能产生互补作用，依据这一特性进行杂种细胞选择的方法称互补选择。
5、极性：是指植物的器官、组织、甚至单个细胞在不同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化上的梯度差异。
它是植物细胞分化中的一个全然现象。
6、体细胞胚：离体培养下没有通过受精过程，但通过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物。
7、TE细胞：植物在系统发育中，由根和芽的原形成层或次生形成层细胞分化形成的管状细胞，它在维管系统的形成中具有中心作用。
在离体培养条件下，TE细胞由愈伤组织薄壁细胞分化形成，这也是愈伤组织细胞分化器官的前提。
8、人工种子：又称合成种子或体细胞种子，任何一种在离体培养条件下产生的生殖体，不管是在涂膜胶囊中包裹的、裸露的或通过枯燥的，只要能够发育成完整的植株。
均称之为人工种子。
9、器官发生：植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或细胞团〔愈伤组织〕分化形成不定根、不定芽等器官的过程。
10、脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态中的过程。
11、生长素感应：生物细胞由生长素受体感受生长素信号与其结合，进而使生长素受体被活化的过程。
12、转分化：在培养条件下，具有一定分化程度的植物细胞在不通过分裂，但通过类似脱分化过程和再分化过程而转变为另一类分化细胞的过程。
13、体细胞无性系：有任何形式的细胞培养所产生的植株。
14、玻璃化冻存：是指在超低温保留生物细胞中，通过一定程序使细胞质液体转变为非晶体〔玻璃化〕的固化过程。
15、早熟萌发：幼胚接种后，离体胚不接着胚性生长，而是在培养基上迅速萌发呈幼苗，通常称之为早熟萌发。
(完整版)细胞培养技术练习题.doc
细胞培养技术练习题选择题 1.接种工具灭菌常采用（A） A. 灼烧 B. 高压 C.过滤 D.熏蒸2.具有促进愈伤组织生产的物质是（ B ） A. 维生素 PP B. 维生素 B1 C.维生素 B6 D. 甘氨酸3.微量元素母液的配制浓度（ B ） A.10 倍 B.100 倍 C.1mg/ml D.10mg/ml4.配制 10 倍大量元素母液，所需硝酸铵（ C ） mg A.9000 B.3700 C.16500 D.44005.配制 100 倍有机物母液时，所需维生素B1 ( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.16.下列哪种不是组织培养常用的维生素（ A ） A. 维生素 B 2 B. 维生素 B 1 C.维生素 B6 D.维生素 C7.下列哪种激素不属于生长素类（ C ） A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA8.下面哪种是MS 培养基大量元素所用药剂（A） A.硫酸镁 B.硫酸亚铁 C. 硫酸锌 D.硫酸铜填空： 1、组织块的分离方法有机械分散法、剪切分离法、消化分离法。
2、目前，较常用的消化试剂有胰蛋白酶、胶原酶、EDTA 消化液。
3、接种培养瓶的细胞数量一般为5× 105-1× 106/ml。
4、培养细胞的污染一般包括微生物污染、细胞交叉污染、化学物质的污染。
5、细胞冻存时DMSO 常用的浓度为10%的浓度。
1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。
体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。
2. 贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。
3. 细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。
4. 培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。
名词解释1、原代培养：原代培养也叫初代培养，是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。
4细胞工程(安利国)第四章考试重点
第四章细胞培养1、培养细胞分为：贴壁型和悬浮型。
2、细胞培养培养基可分为天然培养基和合成培养基。
3、细胞培养包括原代培养和传代培养。
4、原代培养：指细胞或组织离开有机体之后的首次培养。
5、传代培养：培养细胞生长到一定密度后就需要更换新的培养液，这就是细胞的传代培养。
细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程称之为传代或再培养。
6、细胞培养的基本方法有：悬滴培养法、培养瓶培养法、旋转管培养法。
7、常用培养技术有：二倍体培养、克隆培养、同步化培养、大规模培养。
8、原代培养的细胞一经传代就称之为细胞系，是一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。
细胞系经过进一步的克隆化，便得到由单一细胞组成的细胞群体称之为细胞株。
9、动物的细胞与组织培养是从动物体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、适温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术。
10、1907年Harrison采用淋巴液做培养基，培养蛙胚神经组织生活了数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，创立了在体外观察和研究活组织的方法。
1912年Carrel发现鸡胚胎抽取液有促进细胞生长的作用。
11、贴附包括细胞与细胞之间的相互接触和细胞与细胞外基质之间的相互接触两种方式。
12、根据体外培养细胞在支持物上贴附生长时的形态，大致分为如下四种类型：上皮细胞型、成纤维细胞型、游走细胞型、多形型细胞。
13、培养细胞的生长特点：贴附、接触抑制（由细胞接触而抑制细胞运动的现象，是区别正常细胞与癌细胞标志之一）密度抑制。
14、细胞周期：指一个母细胞分裂结束后形成的细胞至下一次再分裂结束形成两个子细胞的时期，可分为G1期、S期、G2期和M期。
15、细胞系生长阶段包括：原代培养期（指从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段）、传代期（将原代细胞分开至多个新的培养瓶中，这个过程叫传代）、衰退期（转化的标志之一是细胞获得永久性增殖能力，成为连续细胞系）16、每代细胞一般要经过三个生长阶段：（1）潜伏期、（2）指数生长期、（3）停止期。
细胞工程考试总结
细胞工程考试总结细胞工程是近年来兴起的一个研究领域，其涉及分子生物学、细胞生物学、生物化工等多个学科的交叉与融合。
细胞工程在医药、食品、能源等领域有着广泛的应用。
考试是检验学习成果的一个重要方式，通过总结细胞工程考试可以更好地发现自己的不足，提高学习水平。
一、考试形式细胞工程考试通常采用笔试形式，试卷包括选择题、填空题和简答题。
选择题占比较大，通常是单选题和多选题，试题涵盖了细胞工程的基本概念、实验技术和应用等方面。
填空题考察对实验数据的分析和理解能力，而简答题则需要考生掌握基本理论知识并能够结合实际进行分析和解决问题。
二、考试知识点1. 细胞基础知识：细胞生物学基础知识、细胞培养、细胞的生理和代谢等方面。
2. 分子生物学：DNA结构与功能、基因调控、基因克隆等。
3. 技术与方法：基因工程、PCR、蛋白质纯化、细胞流式分析等。
4. 细胞工程应用：生物药物、生物制品、生物能源等。
三、注意事项1. 模拟考试：在考试前可以进行模拟考试，模拟考试可以让我们更好地感受到考试的难度，同时也可以预测自己的得分情况，对知识掌握情况有一个比较清晰的了解。
2. 补充知识：细胞工程的内容比较广泛，考试可能会涉及到一些我们没学过或者没有掌握的知识，那么考试之前需要对一些基础知识进行巩固，同时也可以通过阅读相关的文献、视频或者向老师请教等方式来补充知识。
3. 做好笔记：在学习过程中，应尽可能的记录下自己的笔记，对于一些重要的知识点、公式、实验名称等也要做好标注，这有助于我们在考试时快速找到相关知识点，减少遗漏。
4. 做好时间规划：在考试时，应该根据试卷题目难易程度、所占分值大小、自己的掌握程度来做好时间规划，尽可能地把握好答题时间，并避免在最后没有时间答题的情况出现。
总之，细胞工程考试虽然难度较大，但只要我们掌握好基本知识并紧密结合实践，认真备考，制定好合理的考试策略，突破自我，就可以取得优良的成绩。
细胞组织培养重点
体外培养包括组织培养、细胞培养、器官培养Tissue culture:从体内取出组织摹拟体内的生理环境，在无菌、适当温度、和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。
细胞培养：培养物是单个细胞或细胞群。
细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些其他因素的影响，培养时间加长，传代导致细胞出现单一化型。
器官培养：与组织培养条件相似，培养的是器官的原基，器官的一部分或整个器官，以便能够在体外生存、生长和保持一定功能的方法体内外细胞分化的差异：“反祖”（Atavism)现象：细胞失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱或不显；表现为细胞趋于单一化，或获得永生性，或变成具有恶性性状的细胞群。
不适应（deadaption) 细胞在原体内时所拥有的分化特征减弱或不显。
（培养的肝细胞酪氨酸转移酶特性丧失）。
生存条件改变使分化阻抑。
脱分化或去分化：细胞失掉发生分化的能力（培养的肝细胞失掉产生精氨酸酶、氨基转移酶等特性后，则失去储存肝糖原能力）。
是基因突变所致培养细胞在体外生存时间与其分化能力呈反向关系。
细胞分化的关键在于是否存在有诱导细胞发生分化的因子原代培养（primary Culture) 从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段。
细胞群是异质的，细胞相互依赖性强。
细胞独立生存性差。
传代培养：当细胞增殖达到一定密度后，需要分离出一部分细胞和更新培养液，继续接种进行培养。
这一过程称为传代。
否则将影响细胞的继续生存。
组织培养细胞生命期：原代培养期传代期衰退期细胞系（cell line)：初代培养细胞一经传代后，称做细胞系。
无限细胞系：细胞获永久性增殖能力。
核型大多变成异倍体。
克隆形成率（Cloning Efficiency)：细胞被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细胞小群（克隆）的百分数。
克隆细胞株:从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群冻存配方：向培养液中加入DMSO或甘油，封与安瓶，存于温度达-196℃液氮中长期储存连续细胞系：获得持久性增殖能力的细胞群体。
细胞培养技术题库
细胞培养技术题库细胞培养技术准备⼯作常⽤设备准备室的设备：单蒸馏⽔蒸馏器、双蒸馏⽔蒸馏器、酸缸、烤箱、⾼压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭⼒天平和电⼦天平（称量药品）、PH计（测量培养⽤液PH值）、磁⼒搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、⽇光灯和紫外灯、空⽓净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、⼆氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在⽆菌间的设备：离⼼机（收集细胞）、超净⼯作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、⽔浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养⽤液）。
⽆菌操作⽆菌室的灭菌：1.定期打扫⽆菌室：每周打扫⼀次，先⽤⾃来⽔拖地、擦桌⼦、超净⼯作台等，然后⽤3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧⼄酸擦拭。
2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先⽤3‰新洁尔灭擦拭，然后⽤75％酒精擦拭或者0.5％过氧⼄酸，再⽤紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空⽓净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：⽤75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验⼈员的⽆菌准备：1.肥皂洗⼿。
2.穿好隔离⾐、带好隔离帽、⼝罩、放好拖鞋3.⽤75％酒精棉球擦净双⼿。
⽆菌操作的演⽰：1.凡是带⼊超净⼯作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋⽩酶的瓶⼦均要⽤75％酒精擦拭瓶⼦的外表⾯2.靠近酒精灯⽕焰操作。
3.器⽫使⽤前必须过⽕灭菌4.继续使⽤的器⽫（如瓶盖、滴管）要放在⾼处，使⽤时仍要过⽕。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使⽤液时要注意更换吸管，防⽌交叉污染。
器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：⼀、新的玻璃器⽫的洗消：1.⾃来⽔刷洗，除去灰尘。
2.烘⼲、泡盐酸：烤箱中烘⼲，然后再浸⼊5％稀盐酸中12⼩时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘⼲：12⼩时后⽴即⽤⾃来⽔冲洗，再⽤洗涤剂刷洗，⾃来⽔冲⼲净后⽤烤箱烘⼲。
细胞培养重点
4细胞培养研究的内容
⑴ 细胞内的活动：例如，能量的代谢、DNA转录、凋亡、蛋白质合成等。
⑵细胞内部与细胞外界之间的作用：例如， 细胞对外界刺激的反应、药物对细胞的作用、细胞内产物的分泌等
⑶细胞与细胞之间的相互作用：例如，形态的改变、细胞与细胞之间的粘着作用、接触抑制、密度抑制等。
1体外培养（in vitro culture）：是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。
体外培养的三个层次：细胞培养，组织培养，器官培养
2细胞培养(Cell Culture)：是指从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。
（2）培养室和超净工作台的消毒
（3）洗手和着装：原则上须彻底洗手并按外科手术要求着装
（4）无菌培养操作
18无菌室的消毒：①紫外线照射1-2h /日（使用前）；
②甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸2h / 周；
③新洁尔灭擦拭地面和墙壁1次 / 月。
实际工作中，要根据无菌室建筑材料的差异来选择合适的消毒方法。
（2) 成纤维细胞型：细胞的形态类似于在体内生长的成纤维细胞。
A, 来源 ：凡由中胚层的组织细胞，如纤维结缔组织、心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。
B,细胞形态：成纤维细胞形态为，具有长短不等的数个细胞突起，因而多成梭形、不规则三角形或扇形，核为卵圆形位于靠近胞质的中央。
C，细胞生长特点：细胞一般并不紧靠相连成片，而是排列为旋涡状、放射状或似栅栏状。
⑶无菌操作间 — 专用于无菌操作、细胞培养
①大小要适当，其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；②墙壁光滑无死角以便清洁和消毒；
细胞培养考试重点整理 南方医科大学
细胞培养cell culture:从活体中取出细胞活其它建系细胞，在体外使之能继续生存﹑生长甚至增值的一种方法。
细胞融合：指两个或两个以上的细胞合并成为双核或多核细胞的过程。
细胞系cell line:原代培养物经首次传代成功后形成的。
细胞株cell strain:通过筛选或克隆化，具有特殊性质或特异标记的细胞且这些特异在以后的培养中必须持续存在。
原代培养primary culture:从机体取得材料细胞组织或器官，在培养瓶内培养到第一次传代前，即为原代培养或初代培养。
传代培养passage:将细胞从一个培养瓶容器移植到另一培养容器中培养。
贴壁依赖性：细胞培养过程中的特性，有大部分细胞在生长过程中都是贴壁生长的就是要附着在培养用的器皿上。
细胞对培养用器皿的附着能里的不同就是细胞贴壁性能代表了细胞的活力。
贴壁率seeding effifiency:在一定时间内，接种细胞贴附于培养器皿表面的百分率，但应当说明培养时的培养条件。
体外转化in vitro transformation:细胞在体外培养过程上中发生与原代细胞形态﹑抗原﹑增殖或其他特性的可遗传的变化。
细胞周期：细胞每一次增殖所经历的全过程称为细胞的增殖周期，理论上，细胞每经过一个增值周期，在数量上就增加一倍。
1.细胞冻存与复苏的原则？慢冻快融，以最大限度的保存细胞活力。
慢冻，主要是防止细胞在冷冻过程中形成冰晶，对细胞造成损害，加DMSO也是这个原理。
快融。
主要是防止DMSO在液体状态下对细胞的毒害作用，快速使细胞进入复苏和生长状态。
分别经过4度，-20度，-80度和液氮的依次过程进行冻存；经过37度水浴1分钟之内解冻细胞冻存液进行复苏。
2. 玻璃器皿的清洗（新买的和用过的）玻璃器材清洗要领有煮沸﹑刷洗﹑冲洗﹑酸泡和浸泡步骤如下a.刷洗：热水浸泡过用软毛刷带热刷洗瓶内外和盖子使用面；b.冲洗：流水振荡冲洗15-20次；c酸泡：器材50度烤干后清洁液（高锰酸钾﹑重铬酸钾﹑去离子水）酸泡24h；d.浸泡：酸泡器材冲洗沥水后用去离子水浸泡2次每次24h。
细胞培养考试题目
细胞培养考试题目(总3页) -本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-细胞培养特性：分为贴壁性（上皮细胞型、成纤维细胞型）和悬浮型（白细胞、癌肿细胞）体外培养细胞生长特点：贴附和伸展以及接触抑制和生长的密度限制。
原代培养（原代细胞）：取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前称为原代培养或原代细胞。
传代培养：细胞持续生长繁殖一段时间，到达一定浓度之后，就应当将细胞分离成两部分（或更多）至新的培养器皿，并补充更新培养液。
细胞系：原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。
有限细胞系：一般正常细胞系的寿命只能维持一段时间期限。
无限细胞系：传代中极少的后代发生转化，通过“危机期”，获得不死性而具有持久或无限增值能力，这种永生化细胞即为无限细胞系。
细胞株：通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株。
克隆：在动物细胞培养中从细胞群体中分离出一个细胞开始，其在体外无性繁殖成新的基因型相同的细胞群体，这种纯化的细胞群称为细胞株，他们中的每个细胞的遗传特征及生物特性极为相似，常用的细胞克隆技术有有限稀释法和平皿克隆分离法。
杂交瘤技术：主要由免疫动物、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、克隆化培养、单克隆抗体的制备与鉴定等一系列实验组成的实验系统，核心是细胞融合。
杂交瘤：由产生抗体的肿瘤细胞与抗原-刺激的正常浆细胞融合而形成的细胞，这种细胞产生的抗体称为单克隆抗体。
基本原理是用分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交。
筛选得到的杂交瘤细胞应该是既能分泌抗体又有瘤细胞的特性，可长期传代培养，又可在液氮中保存的细胞。
把这些细胞单克隆化，用单克隆化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产。
细胞杂交：通过人工培养和诱导将不同种生物或同种生物不同类型的两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。
杂交技术过程:①免疫动物及细胞培养:用特定抗原免疫纯系动物获得预定抗体B 淋巴细胞,利用细胞融合技术可使短寿命抗体形成细胞与能永久生长的同种骨髓瘤细胞系融合,获得既有分泌抗体能力,又有无限繁殖能力的细胞②筛选杂交瘤细胞(在具有筛选作用的培养基上培养)③克隆化培养④单克隆抗体的大量制备与鉴定(动物体内诱生法和体外培养法)⑤进一步分离和纯化单克隆抗体,鉴定单克隆抗体类型及亚类,测定抗体亲和力以及相应抗原的分子量等.显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，其计算公式是σ=λ/NA 式中σ为最小分辨距离；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径。
温州医学院《细胞工程学》考试重点
第四章细胞培养1、体外培养细胞有哪些类型？（1）按生长方式：2种类型粘附型(贴壁型)细胞：附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
悬浮型细胞：不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。
（2）根据粘附生长时形态的不同，主要分为4类：上皮细胞型、成纤维细胞型、游走细胞型、多形型细胞。
2、细胞系的生长过程包括哪些主要阶段？每一生长阶段各有什么特征？组织培养细胞生命期(Life Span of Culture Cells)所谓培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间，包括原代培养期、传代培养期及衰退期三个阶段。
（1）原代培养期(Primary Culture)也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。
特点：1、细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。
2、与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。
3、细胞群是异质的，各细胞的遗传性状互不相同，细胞相互依存性强，即细胞独立生存性差。
4、初代培养的细胞多呈二倍体核型。
（2）传代期传代：体内细胞生长在动态平衡环境中，而组织培养细胞的生存环境是培养瓶、皿或其它容器，生存空间和营养是有限的。
当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代。
初代培养的细胞一经传代后便改称做细胞系（Cell Line）。
特点：在整个生命期中此期的持续时间最长，整个培养过程的主要时期。
细胞增殖旺盛，细胞生长活跃，并能维持二倍体核型。
（3）衰退期特点：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，最后衰退凋亡。
3. 每代细胞的生长曲线包括哪几个主要时期？各期细胞有何特点？所谓“一代”是指从细胞接种到分离再培养的一段时间。
包括潜伏期、指数增生期、停滞期。
（1）潜伏期➢细胞对传代操作所致损伤的恢复期和对新的生长环境的适应期，一般为期6~24h。
也是原代培养开始时细胞必须经历的时期。
➢接种到培养器皿内以后，细胞开始经历黏附、贴壁和铺展等过程。
细胞培养基础知识
四条肽链通过链间二硫键组成H2L2
3
抗体的结构
轻链：两型(k、l)
抗体基本概念及抗体结构
抗体基本概念及抗体结构
抗体的三个功能区可变区(Variable region, VH/VL, Fv)：结合抗原 VH和VL：重链可变区与轻链可变区 高变区 HVR－抗原结合部位－互补决定区CDR 骨架区 FR1－4 恒定区(Constant region, CH/CL) 绞链区(Hinge region)
原核细胞与真核细胞：这两种细胞是根据进化程度与结构的复杂程度来划分的。原核细胞（Procarytic cell）它没有典型的核结构，没有核膜，只有一个比较集中的核区，其中分布着环装DNA丝，细胞内缺少重要细胞器，但有时有核蛋白体及游离的质粒（plasmid），原核细胞的繁殖以直接分裂（无丝分裂）为主，DNA复制、RNA转录与蛋白质合成同时连续进行。
细胞基本知识
细胞基本知识
从进化角度真核细胞与原核细胞有两点区别，第一细胞膜系统的分化与演变不同。真核细胞以膜系统的分化为基础，分化成各种重要的细胞器；第二遗传信息与遗传装置的扩增与复杂化程度不一。真核细胞（Eucaryotic cell）进化程度高，结构相当复杂。
细胞基本知识
”
细胞周期（细胞分裂周期）即单个细胞的生长过程，指母细胞分裂后形成的细胞到下一次再分裂成两个子细胞之间的时期。细胞的增殖是生物最根本的特征，细胞是借助分裂来进行增殖的。通过细胞分裂即可将复制的遗传物质平均地分配到两个子细胞中。
我们进行体外细胞培养，实际是在细胞群体和个体的情况下考查细胞行为的。大部分细胞群体都由分裂和不分裂两部细胞混合组成。而不分裂细胞又可分为两类：即保持再进入细胞周期能力的G0期细胞（或叫静置细胞或休止细胞）及不分裂最终注定要死亡的终止分化细胞（或称之终端分化细胞），他们不能再进入周期。进入周期内的细胞可以分为两个期：间期（G1+S+G2），M期（有丝分裂期），整个细胞周期组成是G0+G1+S+G2+M。
细胞培养复习题(含答案)
1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型?⑴按生长方式分为二型:粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面, 而在悬浮状态下即可生长的细胞。
（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。
）⑵可分四型: (1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程⑴通常, 体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段:①原代培养期: 也称初代培养, 是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。
此期的细胞呈现出活跃移动的特点, 可见细胞分裂, 但不旺盛。
处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。
细胞群具有明显的异质性, 细胞间的相互依存性强, 在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。
②. 传代期：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期, 原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。
一般情况下, 正常体细胞在传代10-50次左右后, 细胞分裂的能力就会逐渐减弱, 甚至完全丧失, 细胞便进入衰退期。
③衰退期：处于衰退期的培养细胞, 增殖速率已经变得很慢或不再增殖, 直至最后衰退死亡。
以上特点, 主要是针对体外培养的机体正常细胞, 对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言, 永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力, 这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。
⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态, 也称悬浮期。
此时细胞质回缩, 胞体呈圆球形。
时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上, 游离期结束。
底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动, 而无细胞分裂。
细胞株潜伏期一般为6～24小时。
④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长, 活力最佳, 最适合进行实验研究。
细胞培养复习题
细胞培养（动物细胞培养）：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液，然后放在类似于体内生存环境的体外环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。
组织培养：从生物体内取出活的组织（多只组织块）在体外进行培养的方法。
有时泛指所有的体外培养。
器官培养：是将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。
合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基。
无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子（生长因子和激素、结合蛋白等）组成。
完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基。
接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象。
无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。
去分化（脱分化）：细胞在体外不可逆地失去原有特性。
注意：去分化不意味分化能力完全丧失！在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性。
但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失。
不适应：各种分化细胞，在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征，表现出某种趋同性。
原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数（MI）：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间。
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。
培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。
1）体外培养细胞，其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁细胞和悬浮细胞。
2）一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型，最常见的为前两种。
3）体外培养细胞的主要生长特点：①贴附生长②接触抑制③密度依赖性培养细胞分化状态的变化：①去分化（脱分化）②不适应1、细胞培养的基本要求有哪些和工作方法要求：1）培养前准备2）操作间消毒3）洗手和着装4）火焰消毒培养前的准备的基本要求：培养基的选择和无菌配制动物细胞培养用液的类型、配制和无菌处理方法：1）操作程序规范2）试剂设备专人负责3）培养用品定点存放2、平衡盐溶液（BBS）：（1）成分：无机盐和葡萄糖，少量酚红。
细胞培养考试重点整理
细胞培养考试重点整理第一章绪论体外培养（IN VITRO CULTURE）：是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或活体器官等）甚或活的个体从体或其寄生体取出，模拟体的生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下使之存活和生长发育的方法。
按照体外培养的结构成分，可将体外培养人为分为：组织培养（tissue culture）指从生物体取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。
细胞培养（cell culture）指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。
器官培养（organ culture）指从生物体取出活的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或者器官原基在体外进行培养的方法。
单一化现象组织培养过程中，培养组织不能在体外长期维持其结构和功能，培养的时间长，经过反复传代，细胞出现单一化现象——趋向单一类型的细胞——最终成为细胞培养。
体培养（IN VIVO CULTURE)：将活体结构成分（如活体组织、活体细胞、活体器官等）甚至活的个体从体或其寄生体取出，放在其他生物体让其生长和发育的方法。
最常见的体培养方式就是移植（trans-plantation）。
体外培养技术创立代表性的人或者实验H ARRISON的工作，较为完善地建立了体外培养活体组织的培养体系，第一次较为系统地观察了体外培养活体组织的结果。
被公认为是体外培养技术的的开始。
标志着体外培养技术的创立，标志着盖玻片悬滴培养法的建立，标志着神经组织体外培养的开始，也标志着神经突起是由神经细胞长出的这一重论的诞生。
C ARREL对体外培养的贡献：◆将无菌操作观念引入体外培养过程中。
◆将培养组织包埋技术、营养供应以及继续培养（也称传代或继代培养）等许多重要的培养条件和方法引入盖玻片悬滴培养系统，从而完善了Harrison的方法。
◆发现鸡胚浸液能明显地促进多种细胞的体外生长。
◆设计卡氏培养瓶减少了污染，扩大了细胞生存空间。
现在一般认为体外培养技术是从Harrison和Carrel真正开始的。
细胞培养设计知识点
细胞培养设计知识点细胞培养是生物学和医学领域中的一项重要技术，它是指将细胞体外培养，并为其提供必需的条件来生长、繁殖和维持特定功能。
细胞培养的设计是成功进行细胞培养实验的关键，下面将从培养基的选择、细胞传代、处理细胞的方法以及细胞培养的环境控制等方面介绍细胞培养设计的相关知识点。
一、培养基的选择培养基是细胞培养中最重要的基础，它提供了细胞所需的营养物质、生长因子和环境条件。
培养基的选择应根据具体实验目的来确定。
常见的培养基包括DMEM、RPMI-1640、MEM等，不同类型的细胞常使用不同的培养基。
此外，还需要添加适当的血清、抗生素和缓冲剂等，以确保细胞的正常生长。
二、细胞传代细胞传代是指将细胞从一种培养器皿转移至另一种培养器皿中，以维持细胞生长和细胞系的延续。
在细胞传代中，需要注意以下几个知识点：1. 细胞密度：细胞密度应适当，过低会延长细胞生长周期，过高会导致细胞死亡和凋亡。
通常，当细胞生长至80%至90%的密度时进行传代较为适宜。
2. 去除培养容器中的血清：在细胞传代前，应将培养容器中的血清彻底去除，以免对细胞的生长产生影响。
3. 使用胰蛋白酶消化细胞：胰蛋白酶可以帮助将细胞从培养容器表面解离下来，以进行传代。
消化时间和使用的浓度需要根据不同的细胞类型进行调整。
4. 倍液和重新分装：将胰蛋白酶消化的细胞与新的培养基混合后，需要进行适当的倍液和重新分装，以提供新的生长环境。
三、处理细胞的方法在细胞培养过程中，有时需要对细胞进行处理以满足实验的需要，这涉及到以下几个知识点：1. 细胞冻存：将细胞冷冻保存可以长期保存细胞，并且在需要时可以重新进行细胞培养。
在细胞冻存过程中，需要使用适合的冻存液和冷冻容器，同时控制冻结速度和解冻温度。
2. 细胞分离和纯化：当需要分离细胞亚群或纯化细胞时，可以使用特定的细胞分离方法，如离心、负选择法、正选择法等。
3. 细胞转染：将外源DNA导入细胞内，以实现目标基因的表达或基因沉默。
南方医科大学研究生细胞培养技术考试重点总结
一. 细胞培养技术的概念,简史在体外对细胞培养并进行研究的技术, 也叫细胞克隆技术. 细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
细胞培养技术主要包括二大方面内容:1.微生物细胞培养技术2.动, 植物细胞培养技术：1) 器官培养技术 2) 组织培养技术 3) 细胞培养技术二. 细胞培养的优点1.得到的是活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动2.可控制：（1）可控制-选择对象：类型：上皮？间质？性质：正常？肿瘤？（2）可控制-调节条件：各种因素:物理、化学、生物等因素（3）可控制-利用方法。
采用各种研究技术、记录方法：研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记--记录：摄影照片、缩时电影、电视--3. 应用广（1）学科多：（2）对象广：各种动物：低等动物--高等动物--人类；一种动物：不同年龄；不同组织: 正常或异常（肿瘤）4.较经济：花钱较少但可得到大量、同时、重复性好的生物学性状相似的实验对象5. 不易污染环境三、细胞培养的缺点1. 现人工无法完全模拟体内环境：a. 失去彼邻关系b.失去神经体液的调节和细胞相互间的影响2. 细胞趋向单一化3.失去原有组织结构和细胞形态4.分化减弱或不显：要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。
5. 某些类型细胞还很难培养6.大规模培养难度大四. 体外细胞培养的方式1.粘附型培养: 附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
粘附是大多数有机体细胞在体内外生存和生长发育的基本存在方式2.悬浮型培养: 不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。
来源:来自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞.癌肿细胞也可以.特点:在悬浮中生长良好,细胞圆形，单个或小细胞团优点 : 生存空间大，提供数量大,传代方便(不需消化),易于收获可获得稳定状态.缺点:观察不方便, 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)五.体外培养细胞的生长形态分类根据形态大致的不同，主要2类：1.上皮样：来源：来源于外胚层，内胚层细胞如：皮肤及其衍生物, 消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺石状2.成纤维细胞样：培养中形态与成纤维细胞类似。
细胞学实验考试总结
细胞学实验考试总结细胞学实验考试总结名词解释1.渗透压：水从低渗溶液穿过半透膜进入高渗溶液时产生的压力。
水分子通过半透膜向溶液扩散的现象称为渗透现象，简称渗透；溶液促使膜外水分子向内渗透的力量即为渗透压。
2.高渗：体内的渗透压高于体外，水由环境中向体内扩散，体内的盐分向外扩散。
通过排泄作用排出多余的水，盐分通过食物和组织摄入。
3.低渗：体内的渗透压低于体外，水由体内向环境中扩散，环境中的盐分向内扩散。
水和钠同时缺失，但缺水少于缺钠，血清钠低于正常范围，细胞外液呈低渗状态4.凝集素：是一类含糖的并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
5.差速离心：利用不同物质沉降速率的差异，在不同离心速度下分离和收集不同颗粒的离心技术。
常用于分离细胞匀浆中的各种细胞器。
6.荧光：某些物质在一定短波长的光的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光，这种光成为荧光。
7.自发荧光：有些生物体内的物质受激发光照射后可直接发出荧光，成为自发荧光。
8.次生荧光：有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光材料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光。
9.活体染色：是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无害的一种染色方法。
分为体内染色和体外染色（超活染色）。
10.细胞培养：在实验室中用无菌操作的方法将动物体内的组织（或器官）取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养，使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
11.组织培养：从机体分离出的组织或细胞在体外人工条件下培养生长的技术。
12.原代细胞培养：是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直接到第一次传代为止。
13.传代细胞培养：是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移接种到另一培养瓶的培养。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
（2）机械划除法
原代培养成功后，上皮细胞和成纤维细胞混杂生长，常常分区成片，每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。
因此可以采用机械刮除的方法去除不需要的细胞。
（3）反复贴壁法
成纤维细胞贴壁过程快（10-30min），而上皮细胞大部分在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，这样可以利用此差别来纯化细胞。
（4）克隆法
采用细胞克隆法将细胞分成单个细胞，使之分别生长成克隆，选择出所需要的克隆。
（5）培养及限定方法
某些细胞在生长过程中必须存在或去除某种物质，否则无法生长，可以利用这种技术来纯化细胞。
如选用不含血小板生长因子的无血清培养基可去除表皮细胞中的成纤维细胞。
（6）流式分选
⑥亦可用全皮消化法或组织块培养法培养，但表皮细胞和成纤维细胞混合生长，难以纯化。
⑦表皮细胞采用角蛋白的特异性抗体鉴定。
1．根据导入基因不同分为：
（1）染色体基因转导：利用细胞融合或显微注射法将带有目的基因的染色体或染色体片段，整合入受体细胞内的技术。
（2）基因转导：是把已克隆的基因、含有目的基因的DNA片段或序列等导入受体细胞基因组中的技术。
2.根据受体细胞不同，基因转导分为：
（1）基因转染（Gene Transfection）：
●将基因导入体外培养细胞中，观察目的基因在体外细胞中的表达。
●取出体内二倍体细胞导入基因后，再输回体内。
（2）转基因技术（Transgenic Technique）：
受体细胞是受精卵，向受精卵导入目的基因后，再置入宿主动物子宫，发育成个体；可在胚胎期检测基因表达，也可于生后再进一步观察目的基因在整体水平内的表达。
该动物称为转基因动物。
3．从基因表达的持续性上可分为；
（1）稳定表达：导入的基因整合入受体细胞基因组中，能长期表达，对这类表达的检测，需借助于筛选标记（如抗neo Gene）才能测知。
（2）瞬时表达：在基因转移后一周内即可观察到基因表达现象，但不持久，随时间推移表达逐渐减弱或消失。
（未整合？）。