中药化学试验黄柏中生物碱的提取

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中药化学试验黄柏中生物碱的提取

结晶（含一个β OH )
沉淀重结晶
NaOH液酸化
乙醚液
结晶（含二个α OH ）
沉淀
重结晶
结晶（含一个α OH ）
鉴定实验一
显色反应取上述三种乙醚液： ①加氢氧化钠溶液。 ②加醋酸镁试液。观察颜色变化。
鉴定实验二
薄层色谱鉴别
样品：上述三种乙醚液吸附剂：硅胶CMC-Na板，湿法铺板，105℃活
沉淀
氧化铝柱色谱纯化一
湿法装柱
取一根直径约1.5cm，长约40cm带玻璃活塞的色谱柱，在柱子的下端填一层松紧合适平整的脱脂棉，将其垂直地固定在铁架台上
柱内先加入一定体积的洗脱剂(实验中使用的是乙醇)，打开活塞，放出柱内乙醇，将色谱柱下端的空气泡充分赶尽，然后再加入乙醇至距色谱柱的下端1-2cm处，关闭活塞
性能：苦、寒。功效：利湿退黄，清热解毒，散瘀止痛，化
痰止咳。
应用：湿热黄疸，淋浊，带下，痈肿疮痛，经闭痛经，风湿痹症，肺热咳嗽等。
中药虎杖主要化学成分简介
OH
白藜芦醇葡萄糖苷
大黄素型蒽醌类成分
Oglu
OH O OH
OH
R1
R2
O
大黄酚大黄素大黄素甲醚芦荟大黄素
大黄酸
R1 H OH OCH3 H
鉴定实验一
苷的水解，苷元和糖的分离芦丁1g
置150ml圆底烧瓶中，加2％H2SO480ml，加热微沸1h 水解 (注意观察有何现象，为什么?)，放冷后抽滤
滤液
沉淀
(保留作糖的纸色谱鉴定)
水洗至中性，用乙醇－水（1：1）30ml混合溶剂重结晶：
加热溶解，趁热抽滤，放置析晶，抽干，干燥，

黄柏中生物碱提取工艺的研究

誅兽药黄柏由芸香科植物黄皮树干燥树皮制成。

黄柏含有多种生物碱成分，主要为小檗碱。

其他生物碱有黄柏碱、巴马丁、白瓜蒌碱、蝙蝠葛任碱等，其总生物碱具有抗溃疡及抗腹泻作用，对免疫功能具有调节作用。

本篇文字以几个实验的形式，以小檗碱含量作为判定标准，研究能影响黄柏提取效率的因素。

希望能对广大读者生产提供一定的参考意见，与之分享。

1仪器与试药医用电子天平（瑞士梅特勒公司产），M202/LC 电磁炉（广东美的电器股份有限公司），电热套（河南爱博特科技发展有限公司），RE-5205旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），紫外可见分光光度计（上海谱元仪器有限公司），高效液相色谱仪（美国生产制造）。

本实验中使用的硫酸、生石灰、乙醇均为分析纯试剂。

盐酸小聚碱对照品来自中国药品生物制品检定所。

黄柏药材购自河北安国市药昌药材有限公司。

试验中所用的水为双蒸水。

2测定方法与结果盐酸小檗碱含量测定方法：色谱条件为使用高效液相色谱仪其流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（50: 50），每100毫升，加十二烷基磺酸钠0.1克。

流速为1.0毫升每分钟，高效液相色谱仪柱温：35℃。

标准曲线制备，用医用电子天平称量适量的干燥至恒重的盐酸小檗酸对照品后加乙3醇，制成每毫升含0.120毫克的溶液，吸取其2、4、6、8微升注入液相色谱仪，连续进样5次。

以对照品进样量为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，盐酸小檗碱在0.30~1.02微克范围内线性良好。

配置供试品溶液的方法：取精确上述样品50毫克，置100毫升量瓶中，加乙醇85毫升，超声处理40分钟，加乙醇定容，用0.2微米滤膜过滤。

制备对照品溶液的方法：准确称取1.5毫克盐酸小檗碱标准品，置50毫升容量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，即得。

加0.05摩尔/升硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，另取乙醇1毫升，置100毫升量瓶中，加0.05摩尔/升硫酸溶液稀释至刻度，作为空白对照溶液，检测波长：345纳米。

试验一黄柏中小檗碱的提取分离和鉴别

天然药物化学实验讲义
重庆医科大学药学院
目录
一、黄柏中生物碱的提取、分离和鉴别二、槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离与鉴别三、穿心莲中穿心莲内酯的提取、分离与鉴别四、八角茴香挥发油的提取及鉴别五、大黄中蒽醌苷元的提取、分离与鉴别六、苦参生物碱的提取、分离与鉴别
前言
《天然药物化学实验》是一门实践性很强的课程，理论教学与实验教学是一个不可分割的完整体系。通过实验课的学习使学生能印证并加深理解课堂讲授的理论知识，掌握由天然药物中提取、分离、精制有效成分，并对其进行鉴别的基本方法和技能，提高学生独立动手、观察分析、解决问题的能力，培养学生严谨的科学态度和良好的科研作风。
【实验步骤】 1.提取称取黄柏粗粉 200g，加入 1%硫酸 600mL，搅拌均匀，浸泡过夜，纱布过滤。或称取黄柏粗粉 200g，加入 1%硫酸 200mL，搅拌均匀，使湿润度合适，放置 30min 后，装
入渗漉筒内，用 1%硫酸浸泡过夜，渗漉，速度以 5～6mL/min 为宜。收集渗漉液 500～600mL 即可停止渗漉。
于紫外灯下观察荧光变化，并记录。 ⑤锆-枸橼酸反应：取试样溶液各 2mL，分别置于两支试管中，各加 2%二氯氧锆甲醇
溶液 3～4 滴，观察颜色，然后加入 2%枸橼酸甲醇溶液 3～4 滴，观察并记录颜色变化。（2）糖的纸色谱鉴定取水解母液 20mL，用 Ba(OH)2 的细粉（约 2.6g）中和至 pH7，
（聚酰胺色谱）。显色： ①可见光下观察及紫外灯下观察。 ②喷三氯化铝试剂后再观察。
【基本操作注意事项】 1.加入石灰乳即可达到碱溶解提取芸香苷目的，又能使槐米中含存的大量粘液质生成钙盐沉淀除去，但应严格控制在 pH8～9，不得超过 10。pH 过高，在加热提取过程中可促使芸香苷水解破坏，造成产率明显下降。酸沉时加浓硫酸调 pH3～4，不宜过低，否则会使芸香苷生成盐溶于水，也会降低收率。 2.加入硼砂的目的是使其与芸香苷邻二酚羟基结合，这样既保护邻二酚羟基不被氧化破坏，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芸香苷不受损失。同时还有调节碱性水溶液 PH 值的作用。 3.芸香苷的提取还可以利用芸香苷在冷、热水中的溶解度不同，采用沸水提取法。

实验一黄柏皮中小檗碱的提取

实验一黄柏皮中小檗碱的提取、分离与鉴定一、实验目的1掌握从黄柏皮中提取小檗碱的原理和方法。

2掌握柱层析的基本操作方法以及其在中药有效成分提取分离过程中的应用。

3掌握生物碱的鉴别方法。

二、实验原理1、概述生物碱是植物中含氮的碱性有机化合物,大都有明显的生理活性,是许多中草药中的有效成分。

它们是人类对植物研究得最早最多的一类有效成分,现已分离出有六千余种。

这些生物碱在植物体内一般均与有机酸或无机酸结合成盐而存在,只有弱碱性生物碱往往呈游离状态,还有一些是与糖结合成苷而存在。

小檗碱又名黄连素,是最先由毛莨科黄连（Coptis chinensis Fran ）和芸香科黄柏(Phellodendron amurense Rup.)等植物中提出的一种黄色生物碱。

黄连属植物的根茎、须根、叶中等都含有小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马亭等生物碱,我国黄连药材产量占世界第一位。

现已发现，唐松草属（Thalictrum ）、小檗科的小檗属(Berberis L.)、十大功劳属(Mahomia Nuff )及防己科的天仙藤属（Fibraurea ）等都可作为提取小檗碱的资源植物本实验是从黄柏皮中提取小檗碱。

黄柏皮是豆科植物黄皮树（Phellodendron chinense Schneid ）或黄檗（P.amurense Rupr .）的树皮，其主要有效成分为小檗碱，小檗碱及其盐类有较好的抗菌作用，临床用以治疗菌痢和一般炎症。

小檗碱是一种季铵碱,其游离碱为黄色针晶,Mp.145℃(乙醚),微溶于水,能溶于热水和乙醇中，难溶于苯、丙酮、氯仿，几乎不溶于石油醚。

小檗碱与氯仿、丙酮、苯在碱性条件下均能形成加成物。

不同小檗碱盐类在水中的溶解度均有较大差别。

小檗碱盐酸盐难溶于冷水，易溶于热水；硫酸盐易溶于水。

溶解度分别为:小檗碱,1∶２０（冷水）,1∶100(冷乙醇);盐酸盐,1∶500(冷水);硫酸盐,1∶30(冷水),利用这些特性提取盐酸小檗碱。

黄柏的实验报告

一、实验模块1. 黄柏的提取2. 黄柏中盐酸小檗碱的鉴定3. 黄柏的药理活性研究二、实验标题黄柏的提取、鉴定及药理活性研究三、实验目的1. 提取黄柏中的有效成分。

2. 鉴定黄柏中盐酸小檗碱的含量。

3. 研究黄柏的药理活性。

四、实验日期、实验操作者实验日期：2021年X月X日实验操作者：XXX、XXX、XXX五、实验原理黄柏（Phellodendron amurense Rupr.）为芸香科植物，其干燥树皮具有清热解毒、燥湿止痒、抗菌消炎等功效。

黄柏中的主要有效成分是盐酸小檗碱，具有显著的抗菌、抗病毒、抗肿瘤等药理活性。

本实验采用溶剂提取法提取黄柏中的有效成分，利用高效液相色谱法（HPLC）鉴定盐酸小檗碱的含量，并研究黄柏的药理活性。

六、实验步骤1. 黄柏的提取（1）称取干燥黄柏粉末5.0g，置于100mL圆底烧瓶中。

（2）加入50mL 70%乙醇，回流提取1小时。

（3）过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩至干。

（4）加入5mL甲醇溶解，备用。

2. 黄柏中盐酸小檗碱的鉴定（1）标准品溶液的制备：准确称取盐酸小檗碱标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，配制成浓度为1.0mg/mL的标准品溶液。

（2）样品溶液的制备：取上述提取得到的黄柏溶液1.0mL，用甲醇稀释至10mL，配制成样品溶液。

（3）HPLC分析：色谱柱：C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（70:30）；流速：1.0mL/min；检测波长：345nm；柱温：30℃。

（4）标准曲线绘制：取不同浓度的盐酸小檗碱标准品溶液，按上述HPLC条件进行分析，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

（5）样品中盐酸小檗碱含量测定：将样品溶液按上述HPLC条件进行分析，根据标准曲线计算样品中盐酸小檗碱的含量。

3. 黄柏的药理活性研究（1）抗菌活性研究：将金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌分别接种于平板上，用无菌棉签蘸取不同浓度的黄柏提取液涂布于平板上，37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈的大小。

黄柏中黄连素的提取

黄柏中黄连素的提取摘要：报道了黄柏中黄连素的提取方法，用川黄柏中的荥经6年生的优质黄柏皮作为材料。

通过乙醇回流提取、减压回收溶剂、结晶得出黄连素的粗品，重结晶得黄连素的精品。

收率7.42%,含量为98.4%。

关键词：黄柏; 黄连素; 提取; 含量测定Abstract:CorkwerereportedBerberineextractionmethod,thePhellodendronofYingjingsix-year-old Huang Baipi quality as a material. By ethanol extraction and solvent recovery decompression, drawn berberine crystallization of crude goods, recrystallization in berberine excellent. Yield of 7.42%, the content of 98.4%。

Key words：Cork，Berberine，Extraction，Determination1. 前言1.1 天然药用植物植物中含有很多次生代谢物，是药物天然宝库。

世界有75%的人依赖从植物中获得的药物，除化学合成之外，人类大量依赖植物次生代谢物作为药物。

药用植物是中药的主要来源，我国的传统中草药已有数千年的历史，是世界上首屈一指的中草药生产和应用大国。

可用于治疗疾病的药用植物有11146种，其中有280种可以通过人工栽培获得原料，其余种类全部来源于野生资源。

与化学合成相比，植物药具有低毒性.天然性.成本低等特点，植物产生的药物在微生物中很少发现，且结构复杂.多样，合成难度大.耗时长。

并且天然的植物药在药用等方面比较安全，比化学合成药物的副作用要小。

1.2 黄柏药用价值黄柏别名黄薜、薜木、黄坡椤，为芸香科植物。

据有关资料介绍，黄柏内皮性味苦寒，含有黄柏酮、甾醇类化合物，是清热解毒、燥湿泻火的良药，可治疗阴虚火旺、骨蒸盗汗、风湿性关节炎、细菌性痢疾、黄疸等疾病。

高速逆流制备分离中药黄柏中的生物碱

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色
谱
第 ," 卷
$%&&& 溶剂系统及分离操作溶剂系统：氯仿!甲醇!" # $ %&’ ( ) *+’（体积比，上相为固定相，下相为移动相。为 , - . - .）取 “. / ,” 节所制备总生物碱 $" % 0，溶于 , %) 两相溶剂（上相、下相各 . %) ）中，用注射器进样。移动相流速 , # "" %) ( %12，螺旋管转速 3"" 4 ( %12，检测器波长 ,$5 2%，灵敏度 . 6，记录仪量程 " 7 $" 纸速 5 %% ( %12。 %8 ，
’
结果与讨论
在高速逆流色谱中，溶剂系统的选择至为关键，
它意味着对色谱固定相和移动相的同时选择。溶剂系统必须具备 , 个条件：首先溶剂混合 . %12 后能分层清晰，其次是组分在两相中的分配系数要适宜。组分之间的分配率越大，分离效果就越好。为了确保所选系统的合理性，我们用圆形纸色谱和分配薄层色谱先对各种溶剂分离系统进行了初选，然后在高速逆流色谱上进一步对初选的各种溶剂系统进行了试验，最后得到满意的氯仿!甲醇!" # $ %&’ ( ) *+’ （体积比为 , - . - .）溶剂分离系统。使用前先将两相溶剂系统在分液漏斗中充分振荡，让其两相间彼此尽量饱和，然后再静置分层，取上相做固定相，下相做移动相。有了好的溶剂系统，还需选好上机条件，使之在运动的螺旋管内达到最佳稳态分布，让固定相保留达到最大并且稳定，否则，就得不到最佳分离效果。通过一定的试验，我们考察了一定综合参数条件下，两相溶剂分布与转速的关系，同时还考虑了移动相流速对分离的影响，选择了移动相流速为 , # "" 螺旋管转速为 3"" 4 ( %12 的分离条件。 %) ( %12，取总生物碱 $" % 0，溶于 , %) 两相溶剂（上相、下相各 . %)）中，用注射器一次全部进样， 9" %12 后开始流出移动相，接着在色谱图上出现了分离较好的 : 个峰（见图 .）。

观察黄柏的实验报告

一、实验目的1. 通过对黄柏的性状、显微特征和化学成分的观察，了解黄柏的药用价值和鉴定方法。

2. 培养学生的实验操作技能和观察分析能力。

二、实验原理黄柏（Phellodendron amurense Rupr.）为芸香科植物，具有清热燥湿、泻火解毒、祛风除湿、通经活络等功效。

黄柏主要成分为小檗碱，具有抗菌、消炎、镇痛、降血压等作用。

本实验通过观察黄柏的性状、显微特征和化学成分，验证其药用价值。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：黄柏根茎、乙醇、盐酸、硫酸、苯、水等。

2. 实验仪器：显微镜、烧杯、酒精灯、试管、蒸馏器、离心机、pH计等。

四、实验步骤1. 性状鉴定（1）观察黄柏根茎的形状、颜色、气味等特征。

（2）将黄柏根茎横切，观察其断面特征，包括木栓层、皮层、韧皮部、木质部等。

2. 显微鉴定（1）取黄柏粉末，制成临时装片，在显微镜下观察其显微特征，包括细胞形状、细胞壁、细胞间隙等。

（2）观察黄柏粉末中淀粉粒、纤维、导管等组织的特征。

3. 化学成分鉴定（1）提取黄柏中的盐酸小檗碱，采用盐析法进行分离。

（2）用紫外分光光度法测定盐酸小檗碱的含量。

五、实验结果与分析1. 性状鉴定黄柏根茎呈圆柱形，表面黄棕色或暗棕色，有纵皱纹。

断面呈淡黄色，皮层与木质部界限明显。

气微，味苦。

2. 显微鉴定显微镜下观察黄柏粉末，可见细胞壁呈网状纹理，细胞间隙较大。

淀粉粒呈椭圆形，直径约20μm。

纤维呈长条形，直径约10μm。

导管呈圆形或椭圆形，直径约20μm。

3. 化学成分鉴定（1）盐酸小檗碱的提取：经过盐析法分离，得到淡黄色固体。

（2）盐酸小檗碱含量测定：紫外分光光度法测定结果显示，盐酸小檗碱含量为0.75mg/g。

六、实验结论1. 黄柏具有清热燥湿、泻火解毒、祛风除湿、通经活络等功效，具有很高的药用价值。

2. 本实验通过性状鉴定、显微鉴定和化学成分鉴定，验证了黄柏的药用价值。

3. 实验过程中，学生掌握了黄柏的性状、显微特征和化学成分的观察方法，提高了实验操作技能和观察分析能力。

黄柏的药理作用及其活性成分提取

ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＥｆｆｅｃｔｓｏｆＣｏｒｔｅｘｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉａｎｄＩｔｓＡｃｔｉｖｅＩｎｇｒｅｄｉｅｎｔＥｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ＣＨＥＮＹａｎｇｆｅｎｇ，ＺＨＯＮＧＸｉａｏｈｏｎｇ
（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＬａｎｄｓｃａｐｅ，ＨｕｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ４１０１２８，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＣｏｒｔｅｘｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｉｓｔｈｅｄｒｙｂａｒｋｏｆｒｕｔａｃｅａｅｐｌａｎｔｓＰｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎｃｈｉｎｅｎｓｅＳｃｈｎｅｉｄｏｒＣｏｒｔｅｘｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉ，ｗｈｉｃｈｈａｓｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆｂｉｔｔｅｒａｎｄｃｏｌｄａｎｄｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｌｅａｒｉｎｇｈｅａｔ，ｄｒｙｉｎｇｄａｍｐｎｅｓｓ，ｒｅｍｏｖｉｎｇｆｉｒｅｌｉｇｈｔａｎｄｅｘｃｅｐｔｉｎｇ，ｃｕｒｉｎｇｐｏｉｓｏｎａｎｄｓｏｒｅ．Ｃｏｒｔｅｘｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｈａｓｅｘｔｅｎｓｉｖｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ｓｕｃｈａｓａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ，ａｎｔｉｖｉｓｔｅａｍ，ｒｅｌｉｅｖｉｎｇｃｏｕｇｈ，ｄｅｐｒｅｓｓｕｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｅｎｈａｎｃｅｉｍｍｕｎｉｔｙ，ｅｔｃ．ＡｌｋａｌｏｉｄｓａｒｅｔｈｅｍａｉｎａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｉｎＣｏｒｔｅｘｒａｌｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉ，ｉｎｗｈｉｃｈｃｏｎｔｅｎｔｏｆｂｅｒｂｅｒｉｎｅｉｓｈｉｇｈｅｓｔ，ｗｈｉｃｈｒｅａｃｈｅｓｔｏ１．４％～５．８％．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｊａｔｅｏｒｒｈｉｚｉｎｅ，ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｎｅ，ｐａｌｍａｔｉｎｅ，ｏｂａｃｕｌａｃｔｏｎｅａｎｄｏｂａｃｕｎｏｎｅａｌｓｏｏｃｃｕｐｙｃｅｒｔａｉｎｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈＣｏｒｔｅｘｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉａｎｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｅｓｏｆｉｔｓａｌｋａｌｏｉｄｓ．ｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆＫｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｏｒｔｅｘｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉ；ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ；ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ

实验8 黄柏中生物碱的提取渗漉法

实验步骤
提取分离实验一
黄柏粗粉100g
加入100ml石灰乳①拌湿②，溶胀 30min③，加入6倍量水浸渍60min ④
，渗漉⑤（每分钟流出5~6mL
）
渗漉液
收集⑥
药渣（除去）
提取分离实验二
渗漉液
加入总体积5%的食盐，静置，分层，抽滤⑦
沉淀
不溶物滤液
滤液
溶于20倍量沸水中，趁热抽滤⑧
加浓H1.制作石灰乳时候，要把水快速倒入装有氧化钙的烧杯内，以免水沸腾溅出。 2.石灰乳和药材需要搅拌均匀，需要充足时间溶胀。 3.进行渗漉的时候，流速要控制，不能流的太快，否则药物提取不完全。
实验结果
1.取得渗漉 2.加入Nacl 最后获得粗提物 ml。 g。
中药黄柏简介
芸香科植物黄皮树及黄檗的干燥树皮。性能：苦，寒。功效：清热燥湿、泻火解毒、退虚热。
仪器和试药
自制渗漉筒一个（1L的饮料瓶，带孔橡皮塞、玻璃管、绳子）、布氏漏斗、抽滤瓶、循环水泵、平整干净的大石块一个（直径稍微比瓶子小）。
黄柏树皮、氯化钠、氧化钙、蒸馏水石灰乳：20g Cao加入80mL 水制得。新配！！！
g。
思考题
实验中，石灰乳的主要作用是什么？氧化钙遇水会发生什么样的反应，写出化学式。
黄柏中生物碱的提取（渗漉法）
目的要求
掌握从黄柏中提取小檗碱的原理和方法。掌握渗漉的基本操作。
基本原理
小檗碱为季铵碱，其游离型在水中溶解度较大，其盐酸盐在水中溶解度较小。利用小檗碱的溶解性及黄柏中含黏液质的特点，首先用石灰乳沉淀黏液质，用碱水提出小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。

黄柏的升华实验报告

一、实验目的1. 了解升华现象及其应用。

2. 掌握黄柏中有效成分的提取方法。

3. 分析黄柏升华产物的性质。

二、实验原理升华是指固体直接从固态转变为气态，不经过液态的过程。

黄柏中含有的盐酸小檗碱等有效成分具有升华性质，通过升华法可以将这些成分从药材中提取出来。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：黄柏粉末、蒸馏水、乙醇、盐酸、氢氧化钠、活性炭等。

2. 实验仪器：电子天平、干燥箱、升华装置、蒸发皿、酒精灯、烧杯、漏斗、滤纸等。

四、实验步骤1. 准备黄柏粉末：将黄柏药材研磨成粉末，过筛，取适量备用。

2. 提取有效成分：将黄柏粉末放入烧杯中，加入适量蒸馏水，加热煮沸，使有效成分充分溶解。

3. 升华操作：将提取液倒入蒸发皿中，置于升华装置中。

用酒精灯加热，使水分蒸发，待蒸发皿中出现固体时，停止加热。

4. 冷却结晶：将升华产物置于干燥箱中，冷却至室温，观察固体是否结晶。

5. 精制：将结晶固体用滤纸过滤，收集滤液，加入适量的活性炭，搅拌，静置。

再次用滤纸过滤，收集滤液。

6. 结晶：将滤液倒入烧杯中，加入适量的乙醇，搅拌，静置。

待固体结晶后，用滤纸过滤，收集滤液。

7. 干燥：将滤液倒入蒸发皿中，置于酒精灯上加热，使水分蒸发，待蒸发皿中出现固体时，停止加热。

8. 分析：观察升华产物的性状，并与文献报道进行比较。

五、实验结果1. 黄柏粉末经加热后，有效成分盐酸小檗碱升华，形成白色固体。

2. 冷却结晶后，观察到白色固体结晶，表明盐酸小檗碱已从药材中提取出来。

3. 精制后，滤液颜色变浅，固体含量增加，说明盐酸小檗碱的纯度提高。

4. 干燥后，得到白色固体，具有盐酸小檗碱的典型性状。

六、实验结论通过升华法，成功从黄柏中提取出盐酸小檗碱，并对其进行了精制。

实验结果表明，升华法是一种有效的黄柏有效成分提取方法，为黄柏药材的开发利用提供了实验依据。

七、注意事项1. 实验过程中，注意加热温度的控制，防止过度加热导致有效成分分解。

2. 升华操作过程中，注意防止水分过多，影响升华产物的质量。

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沉淀
氧化铝柱色谱纯化一
湿法装柱
取一根直径约1.5cm，长约40cm带玻璃活塞的色谱柱，在柱子的下端填一层松紧合适平整的脱脂棉，将其垂直地固定在铁架台上
柱内先加入一定体积的洗脱剂(实验中使用的是乙醇)，打开活塞，放出柱内乙醇，将色谱柱下端的空气泡充分赶尽，然后再加入乙醇至距色谱柱的下端1-2cm处，关闭活塞
在提取中药其他成分时，少量粘液质的存在使其水提取液粘稠性较大而极难过滤
稀醇沉淀或加入石灰水形成钙盐沉淀
提取分离的基本原理
小檗碱为季铵碱，其游离型在水中溶解度较大，其盐酸盐在水中溶解度较小。利用小檗碱的溶解性及黄柏中含黏液质的特点，首先用石灰乳沉淀黏液质，用碱水提出小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。
取中性氧化铝（100—200目)约35g于烧杯中，加入一定体积的乙醇调成浆状，赶尽气泡，然后经小玻璃漏斗将浆状氧化铝徐徐注人柱中，当氧化铝到达柱底时，打开活塞，让洗脱剂缓缓流出，并不断用手轻轻振动色谱柱，使氧化铝沉降均匀，当柱内液面接近氧化铝柱时，关闭活塞。再轻轻盖上一层大小合适的滤纸，加上几颗玻璃珠。
中药黄柏主要化学成分简介
药根碱盐酸盐为黄色结晶， HO mp206℃，在冷水中溶解 MeO 度比盐酸小檗碱大，易溶于热水和乙醇。
巴马丁盐酸盐为黄色针晶， MeO mp241℃，在冷水中溶解度比盐酸小檗碱大，易溶于 MeO 热水和乙醇。
+
N OMe OMe
+
N OMe OMe
生物碱碱性理论要点复习
鉴定实验二
特殊鉴别反应
取盐酸小檗碱少量，加稀盐酸2ml溶解后，加漂白粉少许，振摇后观察颜色变化。
取盐酸小檗碱50-100mg，溶于50ml热水中，加入10%氢氧化钠2ml，混合均无沉淀析出及颜色变化。
鉴定实验三
薄层色谱鉴别
生物碱碱性理论要点复习
一般来说双键和羟基的吸电诱导效应使生物碱的碱性减小。但具有氮杂缩醛结构的生物碱常易于质子化而显强碱性。
O
O
N OH
O
O
N + OH -
OMe
OMe
OMe
OMe
粘液质基本知识点复习
定义：与树胶结构相似的多糖类物质，多存于植物薄壁组织的粘液细胞内
基本性质：干燥粘液质为白色粉末，有强烈的吸湿性，在水中能迅速膨胀，溶解形成粘稠的胶浆，不溶于有机溶剂。分子中含有酸性基团——游离的羧基。
中药化学实验
黄柏中生物碱的提取、分离和鉴定虎杖中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定槐米中黄酮类成分的提取、分离和鉴定陈皮挥发油的提取及鉴定甘草中甘草酸和甘草次酸的提取、分离和鉴定
实验一黄柏中生物碱的提取、分离和鉴定
目的要求
掌握从黄柏中提取小檗碱的原理和方法。掌握柱色谱的基本操作以及在中药有效成分
提取分离实验一
黄柏粗粉300g
加入240ml石灰乳①拌湿②，溶胀 30min③，加入8倍量水浸渍60min ④ ，渗漉⑤
渗漉液
药渣
加入总体积5%的食盐⑥
提取分离实验二
渗漉液
加入总体积5%的食盐，静置，抽滤⑦
沉淀
滤液
溶于20倍量沸水中，趁热抽滤⑧
不溶物
滤液
加浓HCI调pH2左右⑨，放置，抽滤
样品：①自制盐酸小檗碱甲醇溶液。②盐酸小檗碱对照品甲醇溶液。
吸附剂：硅胶G—CMC板，湿法铺板，105℃活化30min。展开剂：①正丁醇—冰醋酸—水(7∶1∶2，上层)
应用：湿热泻痢、黄疽、带下、热淋、脚气、骨蒸劳热、盗汗、遗精、疮疡肿毒、湿疹骚痒；盐黄柏滋阴降火，用于阴虚火旺，盗汗骨蒸。
中药黄柏主要化学成分简介
小檗碱(berberine)，含量为1.4%-4%(川黄柏含量较高)
性状：黄色结晶，有5.5个结晶水，mp145℃
溶解性：
O
能缓缓溶于冷水中（1∶20）
微溶于冷乙醇（1∶100）
+
N
易溶于热水和熱乙醇
O
微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮
OMe
硝酸盐极难溶于水
盐酸盐微溶于冷水（1:500）但较易溶于沸水
OMe
硫酸盐和枸橼酸盐在水中溶解度较大（1 ∶30）
盐酸小檗碱为黄色结晶，含2分子结晶水，220℃时分解并转变为棕红色小檗红碱，285℃时完全熔融
氧化铝柱色谱纯化三
洗脱
用滴管吸取乙醇，绕管壁轻轻加入柱内，开启活塞，控制流速20-30滴/min，不断加入乙醇，保持色谱柱内乙醇不低于2-3cm高度，待氧化铝柱上呈现不同颜色的色带时，继续冲洗，使其彼此分离，并收集开始流出的鲜黄色带，此段为盐酸小檗碱，其余色带为其他成分。
鉴定实验一
氧化铝柱色谱纯化二
湿法上样：
取50-100mg盐酸小檗碱粗晶，加少量乙醇于水浴上加热溶解，用滴管沿色谱柱管壁小心加入，勿使氧化铝柱面受到振动，开启活塞，当液体表面下降接触到氧化铝柱面时，关闭活塞。用少量乙醇淋洗柱内壁，将沾于管壁周围的样品液轻轻洗人柱面上，至洗净后关闭活塞，准备进行洗脱。
生物碱的一般鉴别反应
取少量精制盐酸小檗碱，用酸水溶解，分成4份，分别滴加以下试剂，观察有无沉淀析出及颜色变化，记录所观察到的现象和反应结果，并根据现象得出结论。
碘化铋钾( Dragendorff )试剂碘化汞钾( Mayer )试剂碘化碘钾( Wagner )试剂硅钨酸( Bertrand )试剂
提取分离中的应用。掌握小檗碱的理化性质和鉴别方法
中药黄柏简介
芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid及黄檗Phellodendron amurense
Rupr．的干燥树皮，前者习称“川黄柏”，
后者习称“关黄柏”。
性能：苦，寒。功效：清热燥湿、泻火解毒、退虚热。
碱性是生物碱最重要的化学性质，也是提取、分离和结构鉴定的理论依据
生物碱的碱性大小与pKa的关系：pKa＜2为极弱碱，pKa2~7为弱碱，pKa7~11为中强碱， pKa11以上为强碱
生物碱分子中碱性基团的pKa值大小顺序一般是：胍基＞季铵碱＞N-烷杂环＞脂肪胺＞芳香胺≈N-芳杂环＞酰胺≈吡咯

中药化学试验黄柏中生物碱的提取