浙江大学生物化学实验甲定磷法测定RNA含量

标准曲线上查得
的含磷量（ug）
1000
RNA（ug/mg鲜重）=
× 稀释倍数 ×
样品鲜重（mgຫໍສະໝຸດ Baidu）
95
0
定磷法测定RNA含量
3、RNA含量的测定原理 • 由于RNA的含磷量为9.5%，因此，将测得的含磷量
乘以100/9.5即为RNA的量。 4、定糖法的定性测定原理
戊糖 H+ 糠醛 苔黑酚-FeCl3 绿色复合物 △
2、材料与试剂
1、实验材料 • RNA粗制品
定磷法测定RNA含量
2、实验试剂 ▪ 实验试剂配制中的注意事项参P-139。
定磷法测定RNA含量
2、定磷法的原理
磷酸 + 钼酸 H+ 磷钼酸 还原剂 钼蓝 （抗坏血酸） 蓝色，660nm处有特征光 吸 收 ， OD 值 与 无 机 磷 含 量成正比，可据此通过比 色法测定磷含量。
➢ a、比色法的测定原理
• 由于钼蓝的OD660值与溶液中的磷含量成正比，因此， 如以磷含量为横坐标，OD660值为纵坐标，二者之间 的关系应为直线。如下图：
3、实验步骤
• 实验中的注意事项及解说详见实验讲义P-140。
4、实验结果及处理
1 、无机磷标准曲线的制作 • 将所得的实验数据以磷含量为横坐标，光密度为纵坐
标，画出标准曲线。
定磷法测定RNA含量
2 、样品测定 ➢ a、RNA的定性鉴定 • 认真观察颜色变化并解释实验现象。 ➢ b、RNA的定量测定 • 记录样品的光密度值，根据下式计算RNA的含量：
定磷法测定RNA含量
未知样品磷含量的测定： • 由未知样品的OD660值，OD660
通过标准曲线，用作图
法即可知道未知样品的
磷含量，如右图所示： ➢ b、定磷法的特点：
未知 磷含量（ug）
• 定磷法测定时如用抗坏血酸作还原剂，比色的最适范 围为1-10微克无机磷。
• 钼蓝反应极为灵敏，微量杂质的磷、硅酸盐、铁离子、 以及酸度偏高偏低均会影响测定结果。