生物活性测定法的原理
实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法一、实验目的掌握抑菌圈法测定杀菌剂的生物活性的方法及步骤。
二、实验原理本实验主要采用抑菌圈法来测定杀菌剂的生物活性。
抑菌圈法是利用杀菌剂在琼脂平板上产生的抑菌效果来对其生物活性进行测定的一种方法。
通常，将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，使其均匀地分布在琼脂上。
然后，将含有细菌培养物的琼脂平板放入恒温箱中进行培养。
在培养一段时间后，观察平板上是否出现了抑菌圈，并测量抑菌圈的直径来评估杀菌剂的生物活性。
三、实验仪器和材料1.显微镜2.恒温箱3.滴定管或移液管4.琼脂平板5.细菌培养物6.杀菌剂溶液四、实验步骤1.准备琼脂平板。
将琼脂平板置于恒温箱中，加热至溶化状态后取出，待其稍微冷却后均匀地倒入培养皿中。
2.滴加杀菌剂溶液。
将杀菌剂溶液滴加到琼脂平板上，并用移液管在平板上转动，使杀菌剂均匀地分布在琼脂上。
3.检验杀菌剂效果。
取一定量的细菌培养物，将其在琼脂平板上均匀涂布。
4.培养细菌。
将含有细菌培养物的琼脂平板放入预先恒温箱中，设置合适的温度和培养时间。
5.观察抑菌圈。
在培养一段时间后，取出琼脂平板，用显微镜观察平板上是否出现了抑菌圈。
6.测量抑菌圈直径。
使用直尺或量角器等工具测量抑菌圈的直径，并记录结果。
五、实验注意事项1.操作时要注意无菌技术，以避免细菌污染。
2.滴加杀菌剂溶液时要均匀并轻柔，以保证杀菌剂能充分分散在琼脂平板上。
3.培养细菌时要控制好温度和培养时间，以确保细菌能够充分生长。
4.观察抑菌圈时要注意使用合适的放大倍数，以免错过细小的抑菌圈。
5.测量抑菌圈直径时要使用准确的测量工具，以获得准确的结果。
六、实验结果处理根据实验所得的抑菌圈直径数据，可以通过计算其平均值、标准差等统计指标来评估杀菌剂的生物活性。
较大的抑菌圈直径通常表示杀菌剂具有较强的抑菌效果，反之则表示其抑菌效果较弱。
可以将实验结果与已有的标准值进行比较，以判断杀菌剂的生物活性。
七、实验结果分析根据测得的抑菌圈直径结果，可以对杀菌剂的生物活性进行分析。
中药生物活性测定指导原则
中药生物活性测定指导原则生物活性测定法是以药物的生物效应为基础，以生物统计为工具，运用特定的实验设计，控制药物有效性的一种方法，从而达到控制药品质量的作用。
其测定方法包括生物效价测定法和生物活性限值测定法。
中药的药材来源广泛、多变，制备工艺复杂，使得中药制剂的质量控制相对困难，此外，中药往往含有多种活性成分和具有多种药理作用，因此，仅仅控制少数成分不能完全控制其质量和反映临床疗效。
为了使中药的质量标准能更好地保证每批药品的临床使用安全有效，有必要在现有对指标成分“含量测定”的基础上增加生物活性测定，以综合评价其质量的可靠性和可控性。
本指导原则的目的是规范中药生物活性测定研究，为该类实验设计、方法学建立等过程和测定方法的适用范围提供指导性的原则要求。
基本原则符合药理学研究基本原则 建立的生物活性测定方法应符合药理学研究的随机、对照、重复的基本原则；具备简单、精确的特点；应有明确的判断标准。
体现中医药特点 鼓励应用生物活性测定方法探索中药质量控制，拟建立的方法的测定指标应与该中药的“功能与主治”相一致。
品种选择合理 拟开展生物活性测定研究的中药材或中成药应功能主治明确，其中，优先考虑治疗适应症明确单一的中药注射剂品种，对急重症用药、保护品种应重点进行研究。
方法科学可靠 优先选用生物效价测定法，不能建立生物效价测定的品种可考虑采用生物活性限值测定法，待条件成熟后可进一步研究采用生物效价测定法。
基本内容1.实验条件试验系选择 生物活性测定所用的试验系，包括整体动物、离体器官、血清、微生物和组织、细胞、亚细胞器、受体、离子通道和酶等。
试验系的选择与试验原理和测定指标密切相关，应选择背景资料清楚、影响因素少、检测指标灵敏和成本低廉的试验系统。
应尽量研究各种因素对试验系的影响，采取必要的措施对影响因素进行控制。
如采用实验动物，尽可能使用大鼠和小鼠等来源多，成本低的实验动物，并说明其种属、品系、性别和年龄。
实验动物的使用，应符合“优化、减少、替代”的“3R”原则。
食品中生物活性肽的鉴定方法研究
食品中生物活性肽的鉴定方法研究引言：食品中的生物活性肽一直是食品科学领域的研究热点之一。
生物活性肽具有一定的生物活性和保健功能，在食品营养研究和功能性食品开发中具有重要价值。
因此，鉴定食品中的生物活性肽成为了食品科学研究中的一个重要课题。
本文将探讨食品中生物活性肽的鉴定方法研究，介绍目前常用的几种鉴定方法，以及各自的优缺点。
一、质谱法质谱法是目前鉴定食品中生物活性肽常用的方法之一。
质谱法可以通过测量肽的质荷比来确定其分子量。
通过质谱法的鉴定，可以快速准确地确定食品中的生物活性肽成分，帮助科研人员了解其结构和功能。
二、色谱法色谱法也是鉴定食品中生物活性肽的重要方法之一。
色谱法可以通过对样品进行分离和纯化，进而得到纯净的肽物质，以便进一步进行鉴定和功能研究。
常用的色谱法包括高效液相色谱、气相色谱和超高效液相色谱等，其中超高效液相色谱是一种新兴的技术，具有分离效果好、分析速度快等优点。
三、酶法酶法是一种常用的生物鉴定方法，通过在特定条件下，使用适当的酶将样品中的生物活性肽分解为较小的肽或氨基酸。
常用的酶包括胰蛋白酶、蛋白酶K等。
酶法鉴定的优点是简便易行，但对样品的处理和酶选择要求较高。
四、免疫学方法免疫学方法是指通过抗体的特异性识别与结合来鉴定食品中的生物活性肽。
例如，可以利用免疫层析法、酶联免疫吸附测定法等方法。
免疫学方法的优点是高度特异，可以检测特定肽的存在，但需要制备特异性抗体，制备成本较高。
五、生物活性测定法生物活性测定法是通过生物学活性来鉴定食品中的生物活性肽。
例如，可以使用细胞实验来检测肽对细胞的生长、分化等影响。
此外，还可以通过动物试验来评估肽对机体的生理效应。
生物活性测定法的优点是直接反映肽的生物功能，但需要相对复杂的实验体系和数据分析。
六、综合方法针对食品中生物活性肽的鉴定，综合多种方法可以提高鉴定的准确性和可靠性。
例如，可以结合质谱法和色谱法进行分析，或者结合酶法和免疫学方法进行鉴定。
中药生物活性测定的指导原则解读
分组或抽样时指按照机遇的原则进行，使各受试对象被分配到各组的机 会均等，而不受主观因素的影响。
随机化的方法有抽签法、抛硬币法、随机数字表等。
设置对照，排除非实验因素的影响，消除实验误差，保证实验结果的可 比性和实验结论的正确性。
正常对照、模型对照、阳性对照、溶剂对照。
重复是指在相同实验条件下进行多次研究或多次观察。
中药生物活性测定的指导原则解读
中药生物活性测定的指导原则解读
标准品或对照品
生物效价测定法：首选中药标准品，也可以考虑化学药 作为标准品
生物活性限值测定法：可采用中药成分或化学药品作为 方法可靠性验证用对照品。
采用标准品或对照品均应有理论依据和/或实验依据。 国家标准中采用的标准品或对照品的使用应符合国家有关 规定要求。
中药生物活性测定的指导原则解读
基本内容
中药生物活性测定的指导原则解读
✓ 效价测定结果：由于金纳多注射液在药典中尚无效价的规定，因此假设 对照品(s)金纳多注射液的效价为100 u/mL，由于舒血宁注射液与金纳多 注射液成分相同，且基本成分的含有量也相同，如果舒血宁注射液抑制 血小板聚集的效果与金纳多相同，则其测得效价也应为100 u/mL，结果 见表1。
中间精密度
考察实验室内部条件改变（如不同人员、不同仪器、不同工作日和实验时间） 对测定结果的影响，至少应对同实验室改变人员进行考察。
重现性
生物活性测定试验结果必须在3家以上实验室能够重现。
3. 方法适用性考察
按拟采用的生物活性测定方法和剂量对10批以上该产品进行测定，
以积累数据，考察质量标准中该测定项目中药的生适物活用性测性定。的指导原则解读
✓ 试验方法：家兔颈总动脉放血75 mL，加3.8％枸橼酸纳(1:9)抗凝，1 000 r/min
农药生物活性测定实验指导(精)
农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。
二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。
因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。
饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。
棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。
食性杂，可长年饲养。
但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。
对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。
若连续大量饲养，须用人工饲养。
三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。
3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度1.0——1.5cm，冷却后备用。
四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。
2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法work Information Technology Company.2020YEAR实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。
二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。
在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。
其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。
但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。
根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。
三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。
供试病原菌：番茄灰霉病菌。
实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。
四、实验方法采用管碟法。
将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。
1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。
灭菌蒸馏水为对照。
2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。
在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。
用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。
生物活性测定法
生物活性测定法
重组人促红素体内生物学活性测定法 网织红细胞法) (网织红细胞法)
本法系依据人促红素(EPO)可刺激网织红 可刺激网织红 本法系依据人促红素 细胞生成的作用,给小鼠皮下注射EPO后, 细胞生成的作用,给小鼠皮下注射 后 其网织红细胞数量随 EPO注射剂量的增加 注射剂量的增加 而升高. 而升高.利用网织红细胞数对红细胞数的 比值变化,通过剂量-反应平行线法检测 比值变化,通过剂量 反应平行线法检测 EPO体内生物学活性. 体内生物学活性. 体内生物学活性
按标准品说明书, 标准品溶液的制备 按标准品说明书, 标准品复溶, 将EPO标准品复溶,用稀释液将 标准品复溶 用稀释液将EPO标准 标准 品稀释成高, 个剂量EPO标准溶 品稀释成高,中,低3个剂量 个剂量 标准溶 液. 供试品溶液的制备 用稀释液将供试 品稀释成高, 个剂量与EPO标准 品稀释成高,中,低3个剂量与 个剂量与 标准 溶液单位相近的供试品溶液. 溶液单位相近的供试品溶液.
然后弃去细胞培养板中的上清液, 然后弃去细胞培养板中的上清液,每孔 加染色液50ul 室温放置30分钟后, 50ul, 30分钟后 加染色液50ul,室温放置30分钟后,用 流水小心冲去染色液,并吸干残留水分, 流水小心冲去染色液,并吸干残留水分, 每孔加入脱色液100ul 室温放置3 100ul, 每孔加入脱色液100ul,室温放置3～5分 混匀后,用酶标仪以630nm 630nm为参比波 钟.混匀后,用酶标仪以630nm为参比波 在波长570nm处测定吸光度, 570nm处测定吸光度 长,在波长570nm处测定吸光度,记录测 定结果. 定结果. 试验数据采用计算机程序或四参数回归 计算法进行处理. 计算法进行处理.并按下式计算试验结 果:
中药生物活性测定指导原则
中药生物活性测定指导原则生物活性测定法是以药物的生物效应为基础，以生物统计为工具，运用特定的实验设计，控制药物有效性的一种方法，从而达到控制药品质量的作用。
其测定方法包括生物效价测定法和生物活性限值测定法。
中药的药材来源广泛、多变，制备工艺复杂，使得中药制剂的质量控制相对困难，此外，中药往往含有多种活性成分和具有多种药理作用，因此，仅仅控制少数成分不能完全控制其质量和反映临床疗效。
为了使中药的质量标准能更好地保证每批药品的临床使用安全有效，有必要在现有对指标成分“含量测定”的基础上增加生物活性测定，以综合评价其质量的可靠性和可控性。
本指导原则的目的是规范中药生物活性测定研究，为该类实验设计、方法学建立等过程和测定方法的适用范围提供指导性的原则要求。
基本原则符合药理学研究基本原则 建立的生物活性测定方法应符合药理学研究的随机、对照、重复的基本原则；具备简单、精确的特点；应有明确的判断标准。
体现中医药特点 鼓励应用生物活性测定方法探索中药质量控制，拟建立的方法的测定指标应与该中药的“功能与主治”相一致。
品种选择合理 拟开展生物活性测定研究的中药材或中成药应功能主治明确，其中，优先考虑治疗适应症明确单一的中药注射剂品种，对急重症用药、保护品种应重点进行研究。
方法科学可靠 优先选用生物效价测定法，不能建立生物效价测定的品种可考虑采用生物活性限值测定法，待条件成熟后可进一步研究采用生物效价测定法。
基本内容1.实验条件试验系选择 生物活性测定所用的试验系，包括整体动物、离体器官、血清、微生物和组织、细胞、亚细胞器、受体、离子通道和酶等。
试验系的选择与试验原理和测定指标密切相关，应选择背景资料清楚、影响因素少、检测指标灵敏和成本低廉的试验系统。
应尽量研究各种因素对试验系的影响，采取必要的措施对影响因素进行控制。
如采用实验动物，尽可能使用大鼠和小鼠等来源多，成本低的实验动物，并说明其种属、品系、性别和年龄。
实验动物的使用，应符合“优化、减少、替代”的“3R”原则。
生物学活性检测ppt课件
2018/11/17
例：抗肿瘤药物细胞学活性检测
• 肿瘤细胞（对数期） 胰蛋白酶处理 细胞悬液 稀释 96孔板培养24h 实验组、对照组设置 培养4~5d 弃去上清液 加MTT， 37℃继续培养4 h 小心弃上清，加 DMSO 37℃继续培养4 h 测定光密度值
肿瘤细胞生长抑制率％＝(1- OD实验/OD对照) ×100％
生物学活性检测
2018/11/17
2018/11/17
2018/11/17
1.生物学活性检测必要性
• 药品有效性必须是疗效确切，且含有特定 的有效活性成分和一定浓度含量 • 凡是不能用理化方法测定其含量或有效成 分或虽有理化方法测定但不能真实反映临 床实际应用价值的药物效价测定，可用生 物测定法进行测定 • 生物学活性测定是生物测定的重要内容
2018/11/17
2.生物技术药物的生物学活性检测方法
• 体内：动物模型分析 • 体外：细胞（组织、器官）培养分析 • 酶促反应法、免疫学法（体外）
2018/11/17
• 蛋白药物的细胞学活性检测原理：相同条 件下通过实验组与对照组对特定细胞生理 或生存状况的影响程度来判断药物的活性 • 例：抗肿瘤药物活性检测
3.药物生物学活性检测的意义
•
2018/11/17
• 思考题:
1.重组蛋白药物的生物学活性检测方法主要有哪些？ 2.抗肿瘤药物细胞学活性检测一般步骤？
thank you！
2018/11/17
在酶标仪上以实验波长为570 nm，参比波长为450 nm
2018/11/17
细胞培养分析
• 优点：时间较短（1~3d）成本低、重复性好 • 缺点：不精确
• 如：MTT显色反应
生物活性测定法
EA K3
X
A+ E
有R'
RO
E + PX
有机磷类
K d PX .E K2
PX K3
P+ E
X
PX代表有机磷杀虫剂，X代表侧链部分例如对氧磷中的-O- NO2。E代表 AChE，Kd是解离常数(或者称亲和力常数)，K2是磷酰化反应速率常数有时写作 Kp，K3是脱磷酰基水解速率常数或者称酶致活常数。反应开始时有机磷酸酯先与 酶形成复合体(PX·E)，X分离后形成磷酰化酶(PE)，再经过脱磷酰基使AChE恢复。
淡水发光菌青海弧菌的发现解决了这一问题。
2 用家蝇检测蔬菜中的残留农药
60年代后期，台湾农业试验所采用生物测定方法进行农药残留 检验，其原理是释放高敏感性的家蝇于菜汁中，4～5ｈ后家蝇死亡 率在10%以下即为合格，该方法优点是过程简单无须复杂仪器检测， 缺点是检测时间较长，仅适用于田间未采收的蔬菜，另外该方法只 对部分杀虫剂有反应，无法分辨残留农药的种类，准确性较低。
明亮发光杆菌(Photobacterium phosphoreum)
最小检出浓度为3ｍｇ·Ｌ-1 已用于检测甲胺磷、敌敌畏等常用有机磷农 药。 特点：快速、简便、灵敏、价廉，适合于现 场分析 缺点：农药浓度与发光强度的线性关系不够 准确，只能用于半定量测定。
长期以来使用的发光细菌是海洋发光细菌，但该方法有严重不 足，即必须在检测的样品中加入3%的ＮａＣｌ的细菌才能正常发 光。
AchE及其功能 Ach是一种神经传递介质 , AchE是一个水解酶，底物
是Ach。水解作用的反应式如下：
CH3COOCH2CH2N+(CH3)3 + H2O CH3COOH+HOCH2CH2N+(CH3)3
生物活性物质筛选与活性评价方法
生物活性物质筛选与活性评价方法生物活性物质是指具有一定的生物活性和药理效应的物质，包括药物、天然产物和化学合成产物等。
筛选和评价生物活性物质是药物研发和天然产物利用的重要环节。
本文将探讨生物活性物质的筛选与活性评价方法。
一、生物活性物质筛选方法1. 高通量筛选技术高通量筛选技术是一种同时测试大量样品的方法，通过高通量筛选平台，可以对数千个化合物进行快速筛选。
其中，常用的方法包括酶抑制剂筛选、细胞增殖抑制筛选、酶底物筛选等。
这些方法通过检测样品对生物体系的作用来判断其生物活性。
2. 超高效液相色谱质谱联用技术超高效液相色谱质谱联用技术（UHPLC-MS）是一种结合了高效液相色谱和质谱技术的分析方法。
它可以用于分离和鉴定复杂样品中的化合物。
在筛选生物活性物质方面，UHPLC-MS可以用于快速鉴定样品中的目标成分并评估其生物活性。
3. 表型筛选表型筛选是通过观察生物体系的表现来评估化合物的生物活性。
例如，可以通过观察细胞形态、细胞增殖、细胞凋亡等现象来评价化合物的活性。
表型筛选可以非常直观地评估化合物对生物体系的影响，是药物研发中常用的方法之一。
二、生物活性物质活性评价方法1. 生物测定法生物测定法是一种通过观察生物体系的生物学反应来评价化合物的活性的方法。
常用的生物测定法包括细胞毒性测定、酶活性测定、细胞增殖测定等。
通过这些方法，可以评估化合物对生物体系的毒性、抑制作用、促进作用等。
2. 动物模型法动物模型法是一种通过在动物体内测试化合物的活性来评价其药理效应的方法。
常用的动物模型包括小鼠模型、大鼠模型、猪模型等。
通过观察化合物对动物体内疾病的影响，可以评估其治疗作用和毒性。
3. 结构活性关系分析结构活性关系分析是一种通过分析化合物结构与其生物活性之间的关系来预测和优化化合物的活性的方法。
通过对一系列结构类似但活性不同的化合物进行分析，可以找出结构与活性之间的规律。
这种方法可以为化合物的设计和优化提供方向。
细菌内毒素工作标准品标定
细菌内毒素工作标准品标定细菌内毒素是一种由细菌产生的有毒物质，它可以引起人体免疫系统的异常反应，导致严重的感染和疾病。
因此，对细菌内毒素进行标定是非常重要的，它可以帮助我们更好地了解细菌内毒素的性质和浓度，为研究和临床诊断提供重要的参考依据。
一、标定原理。
细菌内毒素的标定是通过比较待测样品与已知浓度的内毒素标准品的反应，来确定待测样品中内毒素的浓度。
常用的标定方法包括内毒素结合试验、生物活性测定法和免疫学检测法等。
其中，内毒素结合试验是通过将内毒素与其受体结合来测定内毒素的浓度，生物活性测定法则是通过观察内毒素对生物体的毒性作用来确定其浓度，免疫学检测法则是利用抗体与内毒素特异性结合来检测内毒素的浓度。
二、标定步骤。
1. 准备工作，准备好内毒素标准品、待测样品、试剂和实验仪器。
2. 内毒素结合试验，将不同浓度的内毒素标准品和待测样品分别与其受体结合，观察其结合效果。
3. 生物活性测定法，将不同浓度的内毒素标准品和待测样品分别加入到生物体中，观察其对生物体的毒性作用。
4. 免疫学检测法，利用抗体与内毒素特异性结合的原理，对不同浓度的内毒素标准品和待测样品进行免疫学检测。
5. 数据分析，根据实验结果，利用标定曲线或其他相关方法，计算出待测样品中内毒素的浓度。
三、注意事项。
1. 实验操作要严格按照标定方法进行，避免操作失误导致实验结果不准确。
2. 内毒素标准品的保存和使用要符合相关规定，避免污染和变质。
3. 实验过程中要注意安全，避免接触内毒素对人体造成伤害。
4. 实验结果要进行重复实验和数据统计分析，确保结果的准确性和可靠性。
四、应用领域。
细菌内毒素的标定在医学、生物制药、食品安全等领域具有重要的应用价值。
在临床诊断中，可以通过标定细菌内毒素来判断感染程度和预后情况；在生物制药领域，可以通过标定内毒素来评估生物制品的质量和安全性；在食品安全领域，可以通过标定内毒素来监测食品中的细菌污染情况。
综上所述，细菌内毒素的标定是一项重要的工作，它对于保障人体健康和生产安全具有重要意义。
生物活性测试的原理与方法
生物活性测试的原理与方法生物活性测试是用来评估物质对生物体的活性的一种实验方法，可以用来研究物质对疾病的治疗作用、毒性作用以及其他生物效应。
其原理和方法主要包括以下几个方面：一、生物活性测试的原理：生物活性测试的基本原理是利用生物体作为测试对象，通过观察生物体的生理反应、药物代谢以及疾病模型的建立，来评估物质对生物体的活性。
生物活性的产生通常是由于物质与生物体的生物分子发生相互作用，进而影响生物体的生理功能。
二、生物活性测试的方法：（一）细胞活性测试：细胞活性测试是一种常用的生物活性测试方法，通过将物质加入到细胞培养基中，观察对细胞的生长、分裂、凋亡等生物学行为的影响。
常用的细胞活性测试包括MTT（3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）法、CCK-8（Cell Counting Kit-8）法等。
（二）动物活性测试：动物活性测试是一种比较复杂的生物活性测试方法，通过给动物投放物质，观察其对动物的生理反应、生化指标的改变以及对疾病模型的影响，来评估物质的生物活性。
常用的动物活性测试包括急性毒性测试、慢性毒性测试、药效学实验等。
（三）靶标活性测试：靶标活性测试是通过与生物体内相关的蛋白质靶标相互作用，来评估物质对蛋白质功能的影响。
常用的靶标活性测试包括酶活性测定、蛋白质结合实验、分子动力学模拟等。
（四）体外体内活性测试：体外体内活性测试是将物质在体外和体内进行测试，综合评估物质对生物体的活性。
体外活性测试一般包括细胞外药效学实验、体外脏器模型实验等。
体内活性测试则通过给动物或人类实验对象投放药物，观察其对整体生物的生理反应、药代动力学等。
（五）相关指标的测定：在生物活性测试中，还可以通过测定相关的生物标志物来评估物质的生物活性。
如测定病理标记物、生物化学指标以及生物体的组织学改变等。
总结：生物活性测试的原理和方法主要包括细胞活性测试、动物活性测试、靶标活性测试、体外体内活性测试以及相关指标的测定等。
活性氧测定的基本原理与方法
活性氧测定的基本原理与方法活性氧测定是指测定细胞或生物体中活性氧分子的浓度，活性氧是一类具有高度活性的氧分子，包括一氧化氮（NO）、超氧化物自由基（O2-）、羟基自由基（•OH）和过氧化物自由基（ROO•）等。
活性氧在生物体内的生成与清除是维持生物体正常代谢的重要环节，但过多的活性氧会对细胞结构和功能产生损害，甚至引发疾病。
1.超氧自由基（O2-）测定方法：超氧自由基的测定通常采用还原性品质荧光法。
超氧自由基与荧光染料2,7-二氨基苯基荧光素（DHE）反应生成有荧光属性的产物。
通过测定荧光强度来反映细胞或生物体中超氧自由基的浓度。
2.羟基自由基（•OH）测定方法：羟基自由基的测定通常使用t-Butanol为指示剂，通过和羟基自由基发生反应形成酚类产物，并通过分光光度计测定反应后酚类产物的吸光度来测定羟基自由基的浓度。
3.过氧化氢（H2O2）测定方法：过氧化氢是常见的活性氧物种之一，可以通过酶法或化学法进行测定。
其中酶法常采用过氧化酶（catalase）催化过氧化氢与4-氨基安替比林（4-AAP）反应生成有色产物，并通过分光光度计测定反应后产物的吸光度来测定过氧化氢的浓度。
4.一氧化氮（NO）测定方法：一氧化氮是一种重要的信号分子，在体内具有多种生理功能。
目前常用的一氧化氮测定方法是Griess法。
该方法将一氧化氮转化为一种比较稳定的化合物（例如亚硝酸盐），再通过与N-(1-Naphthyl)ethylenediamine反应生成有色产物，通过分光光度计测定反应后产物的吸光度来测定一氧化氮的浓度。
除了上述方法外，还有许多其他常用的活性氧测定方法，如电子自旋共振（ESR）法、化学发光法、荧光法等。
总之，活性氧测定方法可以根据具体的活性氧物种的特性和试剂的选择进行优化，通过测定与活性氧反应后的产物或信号来反映活性氧的浓度。
这些方法在生物医学研究和临床实践中具有重要的应用价值，可用于研究活性氧在生物体内的生成与清除机制，为研究相关疾病的发生机制和寻找相关的治疗方法提供参考。
简述测量细胞因子的两种方法和对应原理
简述测量细胞因子的两种方法和对应原理
测量细胞因子的方法主要有两种：生物学活性测定法和免疫测定法。
生物学活性测定法是通过观察细胞因子对特定细胞系的生物学效应来测量其活性水平。
这种方法常用的有：
1. 细胞增殖测定法：通过测量细胞因子对特定细胞系的增殖能力来评估其活性水平。
2. 细胞迁移测定法：通过观察细胞因子对特定细胞的迁移能力来评估其活性水平。
3. 蛋白质合成测定法：通过测量细胞因子对特定细胞合成特定蛋白质的能力来评估其活性水平。
免疫测定法是通过特异性抗体与细胞因子结合，并通过染色、放射性标记或荧光标记等方式来检测抗原-抗体结合的量来测量细胞因子的水平。
这种方法常用的有：
1. ELISA：通过固相酶联免疫吸附实验法，在微孔板上涂覆抗细胞因子的抗体，然后加入细胞因子样品和标记有抗细胞因子抗体的辣根过氧化物酶，最后用底物显色反应来测量细胞因子水平。
2. 免疫印迹（Western Blot）：将细胞因子样品经过电泳分离后，通过蛋白质转印和抗体结合来检测细胞因子的水平。
3. 流式细胞术：将单个细胞或细胞样品与标记有抗细胞因子抗体的荧光染料共同孵育，然后用流式细胞仪来检测细胞因子的水平。
以上两种方法分别基于细胞因子的生物学活性和免疫反应来测
量其水平，具有高灵敏度和特异性，广泛应用于细胞因子的研究和临床诊断。
生物活性测定法
Ds×Es 供试品生物学活性(IU/m1) 供试品生物学活性(IU/m1) = Pr× Dr×Er
式中:Pr为标准品生物学活性 IU/ml; 为标准品生物学活性, 式中:Pr为标准品生物学活性,IU/ml;
Ds为供试品预稀释倍数; Ds为供试品预稀释倍数; 为供试品预稀释倍数 Dr为标准品预稀释倍数 为标准品预稀释倍数; Dr为标准品预稀释倍数; Es为供试品相当于标准品半效量的稀释 Es为供试品相当于标准品半效量的稀释 倍数; 倍数; Er为标准品半效稀释倍数 为标准品半效稀释倍数. Er为标准品半效稀释倍数.
按标准品说明书, 标准品溶液的制备 按标准品说明书, 标准品复溶, 将EPO标准品复溶,用稀释液将 标准品复溶 用稀释液将EPO标准 标准 品稀释成高, 个剂量EPO标准溶 品稀释成高,中,低3个剂量 个剂量 标准溶 液. 供试品溶液的制备 用稀释液将供试 品稀释成高, 个剂量与EPO标准 品稀释成高,中,低3个剂量与 个剂量与 标准 溶液单位相近的供试品溶液. 溶液单位相近的供试品溶液.
(7)脱色液 (7)脱色液 取无水乙醇50ml,乙酸0.1ml, 取无水乙醇50ml,乙酸0.1ml, 50ml 0.1ml 加水稀释至100ml 100ml. 加水稀释至100ml. 取氯化钠8.0g 氯化钾0.20g 8.0g, 0.20g, (8)PBS 取氯化钠8.0g,氯化钾0.20g, 磷酸氢二钠1.44g 磷酸二氢钾0.24g 1.44g, 0.24g, 磷酸氢二钠1.44g,磷酸二氢钾0.24g,加 水溶解并稀释至1000ml 1000ml, 15分钟 水溶解并稀释至1000ml,经121℃ 15分钟 灭菌. 灭菌.
将配制完成的标准品溶液和供试品溶液 移入接种WISH细胞的培养板中,每孔加 移入接种WISH细胞的培养板中, WISH细胞的培养板中 100ul. 37℃, 入100ul.于37℃,5%二氧化碳条件下 培养18 24小时 18～ 小时. 培养18～24小时.弃去细胞培养板中的 上清液.将保存的水泡性口炎病毒(VSV (VSV, 上清液.将保存的水泡性口炎病毒(VSV, 70℃保存 用攻毒培养液稀释至100 保存) -70℃保存)用攻毒培养液稀释至100 每孔100ul 100ul. 37℃, CCID50,每孔100ul.于37℃,5%二氧 化碳培养24小时(镜检标准品溶液的50 24小时 化碳培养24小时(镜检标准品溶液的50 病变点在lIU/m1) lIU/m1). %病变点在lIU/m1).
实验二 杀菌剂生物活性测定-生长速率法
实验二杀菌剂生物活性测定-生长速率法一、实验原理将不同浓度的药液与融化的培养基混合，制成带毒培养基平面，在平面上接种病原菌，以病菌生长速度的快慢来判定药剂毒力的大小。
病菌生长速率可用两种方法表示：①一定时间内菌落直径的大小；②菌落达到一定直径所需的时间。
二、实验目的通过本试验要基本掌握杀菌剂室内（离体）活性的生物测定操作技术，掌握杀菌剂毒力回归曲线的制作及LC50的求解。
三、实验材料1．供试药剂：70%甲基托布津2．供试病原菌：苹果炭疽病菌3．马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA）配方：马铃薯200g；葡萄糖20g；琼脂粉10g（或琼脂条18g）；自来水1000 mL；pH自然偏酸（5-6）制作方法：选择质量较好的马铃薯，削皮，去芽眼，切成薄片，称取200g，加自来水1000mL，煮沸后改小火煮30min（直至马铃薯片呈半透明状），然后用4层沾湿纱布过滤，滤液用水补足至1000mL。
再加入琼脂10g，用玻棒搅拌使其溶解（可适当加热）后加入葡萄糖20g，搅匀，再补足水1000 mL，最后分装于试管（用于接斜面）或三角瓶（250mL三角瓶盛约150mL培养基），用无菌封口膜封好灭菌备用。
采用湿热灭菌法，121℃下保持30min。
4、实验器材：φ90cm的培养皿（72个），PDA培养基，1mL移液管（10个），酒精灯，10mL具塞刻度试管（10个），接种针（4个），超净工作台（2台）。
四、方法与步骤1．菌种准备实验室准备有菌源，在生测前一个星期请自行转接。
对菌种的要求：病原菌应容易培养，菌丝生长快速、整齐，产生孢子缓慢；菌丝最好在培养基平面上呈平伏放射状生长（有利于结果的测量）。
在φ90cm的培养皿中，倒入约10-15mL PDA。
从培养皿或者斜面培养基上取一块病菌，放在培养皿中间，于26℃下培养（3-7d）备用。
2．药液准备将供试药剂70%甲基托布津用无菌水分别稀释成800、400、200、100、50、25mg/L 六个浓度的药液。
活性代谢产物的检测原理
活性代谢产物的检测原理活性代谢产物是指生物体在代谢过程中产生的具有一定生物活性的化合物。
这些化合物广泛存在于人体内，对于了解生物体的代谢状态和健康状况具有重要意义。
因此，活性代谢产物的检测方法在医学、药物研发和临床诊断等领域具有重要应用价值。
活性代谢产物的检测的原理主要包括两个方面：样品准备和检测方法。
样品准备是指将生物体组织、体液、尿液或其他样品中的活性代谢产物与其他物质进行分离、纯化和浓缩。
而检测方法则是指通过特定的技术手段对样品中的活性代谢产物进行定量或定性分析。
在样品准备过程中，常用的方法包括抽提、纯化和浓缩。
抽提是指将样品与溶剂混合，利用溶剂的物理或化学性质使活性代谢产物从样品中移动到溶剂中。
纯化是指通过物理或化学方法分离目标物质与其他杂质。
浓缩是指将大量样品体积缩小到相对较小的体积，以增加活性代谢产物的浓度，提高检测灵敏度。
活性代谢产物的检测方法主要包括光谱法、色谱法和电化学法等。
其中光谱法是一类常用的检测方法，如紫外-可见吸收光谱法、红外光谱法和核磁共振光谱法等。
这些方法通过测定活性代谢产物在不同波长或频率下吸收、发射或散射光线的强度来定量或定性分析活性代谢产物。
色谱法是另一类常用的检测方法，如气相色谱法和液相色谱法等。
这些方法通过将样品与柱内流动相分离，利用活性代谢产物在固定相与流动相之间的物理或化学性质差异来实现分离和检测。
此外，还可以采用高效液相色谱法(GC-MS)和液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)等联合技术进行分析，提高分析的灵敏度和准确性。
电化学法是一类基于电化学原理的检测方法，如电化学分析法、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)和电化学发光法等。
这些方法通过测量活性代谢产物在电极上的电流、电位或电荷来分析活性代谢产物的含量和性质。
此外，还可以将上述的检测方法与分子生物学技术和生物传感器等技术相结合，实现对活性代谢产物的敏感、选择性和高通量的检测。
例如，可以借助PCR技术、基因芯片技术和荧光探针等技术实现对活性代谢产物的定量或定性检测。
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生物活性测定法的原理
生物活性测定法是一种通过观察或测量生物体对化学物质或其他环境因素的反应来评估其活性的方法。
常用的生物活性测定法包括细胞增殖或生长抑制实验、细胞毒性实验、酶活性实验、抗菌活性实验等。
生物活性测定法的原理主要基于以下几个方面：
1. 细胞反应原理：生物活性测定法常通过观察或测量细胞对化学物质的反应来评估其活性。
例如，通过在培养基中加入待测物质，观察细胞的增殖情况或生物学特征的改变，从而评估其对细胞的生长抑制或促进作用。
2. 酶反应原理：酶在生物体内发挥着极为重要的生物催化作用。
生物活性测定法中常通过测量酶的活性来评估待测物质的生物活性。
例如，通过添加待测物质到含有酶底物的体系中，观察酶反应的速率或生成产物的量来评估待测物质对酶的影响。
3. 细菌抗菌原理：生物活性测定法中常通过测量待测物质对细菌的抑制作用来评估其抗菌活性。
例如，利用平板扩散法或微量稀释法，将待测物质与细菌共同培养，观察细菌的生长情况或测量细菌的最小抑菌浓度，从而评估其抗菌活性。
4. 动物体内反应原理：一些药物或化学物质的生物活性往往需要通过动物体内实验来评估。
常见的方法包括动物行为观察、组织活检、毒性评估等。
通过观察
动物对待测物质的生理、行为或组织结构的变化，来评估其生物活性。
综上所述，生物活性测定法的原理主要是通过观察或测量生物体对待测物质的反应来评估其活性。
具体的原理可以根据不同实验方法和待测物质的性质来确定。