第三节 常用生物制品的制备及检
生物制品研制程序归纳总结
生物制品研制程序归纳总结一、引言生物制品的研制是一项复杂而严谨的过程，涉及到多个环节和程序。
本文对生物制品研制的程序进行归纳总结，以帮助读者对生物制品研制流程有更清晰的了解。
二、研究设计1. 目标确定在研制生物制品之前，需要明确研究的目标和意义。
这包括确定研制的生物制品类型、作用机制以及预期效果等。
2. 实验设计根据研究目标，制定合适的实验设计。
这包括确定实验组和对照组、采用的实验方法和技术，以及实验所需的材料和设备等。
三、材料准备1. 细胞培养如果研究需要使用细胞进行实验，需提前准备细胞培养基、培养器具和细胞系等。
确保细胞的质量和活力。
2. 动物模型若研究需要使用动物进行实验，需提前准备合适的动物模型和动物实验所需的设备和试剂。
同时，需要严格遵循动物伦理规范，确保动物的福利和权益。
四、实验操作1. 样品制备根据实验设计，准备实验所需的样品。
如需提取生物制品的活性成分，需选择合适的样品来源，并进行相应的样品制备。
2. 测定方法确定适合的测定方法，以评估生物制品的质量和效力，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、聚合酶链式反应（PCR）等。
3. 实验操作按照实验设计和测定方法进行实验操作。
确保严谨和准确性，避免误操作和污染。
五、数据处理与分析1. 数据收集记录实验过程中所产生的数据，并进行准确的记录。
一般包括生物制品的浓度、活性、稳定性等数据。
2. 数据统计与分析采用合适的统计方法，对实验数据进行分析和解释。
通过数据分析，得出结论和科学推断。
六、结果与讨论1. 结果展示将实验数据整理成表格、图表等形式，以清晰展示实验结果。
2. 结果解读根据实验结果进行解读，并分析与研究目标之间的关系。
讨论实验数据的可靠性、有效性，以及与已有研究结果的一致性或差异。
七、总结与展望总结已完成的生物制品研制过程，并对未来可能的研究方向和改进提出展望。
指出研究的局限性，并提出改进和优化的建议。
八、结论通过对生物制品研制的程序进行归纳总结，可以看出生物制品的研制过程是一个综合性、系统性的工作。
一般生物制品的制备过程
一般生物制品的制备过程一、引言生物制品是指利用生物技术手段制备的各种产品，包括生物药品、生物饲料、生物肥料等。
生物制品的制备过程一般包括以下几个步骤：筛选目标生物、培养生物、提取目标产物、纯化目标产物和制剂生产等。
二、筛选目标生物根据生物制品的要求和目标产物的特性，选择合适的生物作为生产工具，这个生物被称为目标生物。
目标生物的选择通常基于其生长速度、产量、适应性以及对环境的适应能力等因素。
常见的目标生物有细菌、真菌、酵母、昆虫细胞等。
三、培养生物在选定的培养基中，将目标生物培养起来。
培养基是一种包含了生物所需的营养物质的液体或固体培养介质。
培养基中的营养物质可以为生物提供生长所需的能量和原料。
同时，培养条件如温度、湿度、氧气供应等也需要进行控制，以促进生物的生长和产物的积累。
四、提取目标产物当目标生物达到一定的生长程度后，可以采取适当的方法提取目标产物。
提取方法的选择通常基于目标产物的特性，可以是机械破碎、离心分离、滤液等。
提取的目标产物可以是蛋白质、酶、抗生素等。
提取产物的过程需要注意保持提取条件的稳定性和提取效率的高效性。
五、纯化目标产物提取得到的目标产物往往还伴随着其他杂质，需要进行纯化操作。
纯化的目的是去除杂质，使目标产物纯度更高。
常用的纯化方法包括离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。
通过这些方法，可以将目标产物与杂质分离，并得到纯度较高的目标产物。
六、制剂生产在获得纯化的目标产物后，需要对其进行制剂生产。
制剂是指将目标产物与其他辅料混合，并制成适合使用的形式。
常见的制剂形式有液体制剂、固体制剂、冻干制剂等。
制剂生产过程中需要注意配比的准确性、生产条件的控制以及生产工艺的规范性。
七、质量控制在生物制品制备过程中，质量控制是非常重要的环节。
质量控制的目的是确保生产的生物制品符合一定的质量标准和规范要求。
常见的质量控制方法包括物理性质检测、化学成分分析、生物活性测定等。
质量控制的结果将直接影响到生物制品的安全性和有效性。
生物制品工艺流程与质量控制
生物制品工艺流程与质量控制生物制品是指能够产生生物作用的药品，主要包括生物制剂、生物技术制品等。
由于其制备过程的不同，生物制品工艺流程也就有了不同的特点。
而为了保证其质量，生产企业必须采取一定的措施来进行严格的质量控制。
本文将就此进行探讨。
一、生物制品工艺流程生物制品的制备通常包括微生物培养、提取、纯化、制剂和包装等步骤。
具体的流程可根据药品的不同而有所变化。
这里以生物制剂为例进行简要介绍。
（一）微生物培养生物制剂的制备常常涉及到一些细菌、真菌、古菌等微生物，需要对其进行培养。
微生物的耗氧量、pH值、温度、搅拌速度等对于产物质量有着很大的影响，因此微生物培养需要精确控制。
培养的一般流程为：选取合适的基质和菌株，将其接种到培养基中，控制生长条件，定期取样进行检测，最后进行下一步操作。
（二）提取微生物或其他细胞制剂中所含的对于制品有用成分往往只占极小的比例，因此需要对其进行提取。
提取的方式包括机械破碎、化学溶解、超声波提取等。
不同的提取方式会对提取效率和活性产生影响，因此需要根据制剂性质进行选择。
（三）纯化提取得到的制品通常是混杂着其他成分的，因此需要进行纯化。
现代生物技术通常采用各种柱层析、电泳、过滤等方法对制品进行纯化。
将制品进行分离纯化可以去除对质量有害的杂质和副产物，并最大程度保持和提高制品的活性和稳定性。
（四）制剂和包装经过提取和纯化的制品需要进行制剂和包装。
针对不同的应用场景和目的，制剂的形式可以是固体、液体、冻干粉等。
同样的，包装方式也会因为制品性质而有所变化。
二、质量控制生物制品的质量控制包括源头管理、生产过程中的质量控制和产品出厂前的检测。
具体的措施包括：（一）生物安全生物制品的制备涉及到微生物等生物学实验，因此需要对源头进行生物安全控制。
涉及到微生物的实验需要进行生物安全评估，对实验室、材料、人员等进行管理。
（二）生产工艺和设备管理生产过程中的质量控制需要对生产工艺和设备进行管理。
第三章 生物制品的制备与常用技术
● 成本低。 ● 原料质量稳定、可以控制，易于得到目标产物。
● 对具有手性物的原料，要了解它的同分异构体。
手性药物(chiral drug)是指其分子立体结构和它的 镜像彼此不能够重合,将互为镜像关系而又不能重合的一 对药物结构称为对映体(enantiomer)。
分子手性在自然界生命活
动中起着极为重要的作用。如，
3、选择破碎方法的依据
(1) 细胞的处理量 (2) 细胞壁的强度和结构 (3) 目标产物对破碎条件的敏感性 (4) 破碎程度
适宜的操作条件应从高的产物释放率、 低的能耗和便于后步提取这三方面进行权 衡。
表 3－2 各种组织适用的细胞破碎方法
破碎方法
旋刀式匀浆 手动式匀浆 超声 高速匀浆 研磨 高速珠磨 酶溶 去垢剂渗透 有机溶剂渗透 低渗裂解 冻融裂解
● 保持制品的天然状态，不丧失其生物活性； ● 提高提取率。
即首先尽可能保存被提取物的生物活性，其次是尽 可能地把它提取出来, 保证提取率，让提取率尽可能的 高。
1、保护措施
生物活性物质大部分存在于生物组织或细胞 中，所以首先要将目标物释放出来。
许多生物活性物质，一旦离开了生物体的内 环境，很容易变性或被破坏。所以，所有的制备 环节都要采取措施保护目标产物。
卧式珠磨机
此法兼有破碎与冷却双重功能，减少了产物失 活的可能性；破碎效率高，适用范围较广，特别是 坚硬植物材料；但设计操作时要充分考虑冷却系统 的热交换能力；影响破碎率的参数较多，优化设计 较复杂。
② 高压匀浆法
作用机理是液体剪切作用。利用
高压使细胞悬浮液通过针形阀，由于
突然减压和高速冲击撞击环使细胞破
● 微生物的生长期
微生物原料应选择它的对数生长期，此时它的代谢 比较旺盛。
生物制品国家标准物质制备和标定规程
生物制品国家标准物质制备和标定规程一、定义生物制品标准物质，系指用于生物制品效价、活性或含量测定的或其特性鉴别、检查的生物标准品或生物参考物质。
二、标准物质的种类生物制品标准物质分为二类。
1研制的（尚无国际生物标准品者）用于定量测定某一制品效价、毒性或含量的标准物质，其生物学活性以国际单位（IU）、单位（U）或以重量单位（g, mg等）表示。
2研制的（尚无国际生物参考品者）用于微生物（或其产物）的定性鉴定或疾病诊断的生物试剂、生物材料或特异性抗血清；或指用于定量检测某些制品的生物效价的参考物质，如用于麻疹活疫苗滴度或类毒素絮状单位测定的参考品，其效价以特定活性单位表示，不以国际单位（IU）表示。
三、标准物质的制备和标定1规范》或《实验室操作规范》要求。
2制备和标定由国家药品检定机构负责。
3（1）原材料选择制备生物制品标准物质的原材料应与供试品同质，不应含有干扰性杂质，应有足够的稳定性和高度的特异性，并有足够的数量。
（2）标准物质的配制、分装、冻干和熔封根据各种标准物质的要求进行配制、稀释。
须要加保护剂等物质者，该类物质应对标准物质的活性、稳定性和试验操作过程无影响，并且其本身在干燥时不挥发。
经一般质量检定合格后，精确分装，精确度应在±1%以内。
需要干燥保存者应在分装后立即进行冻干和熔封。
除另有规定外，冻干者水分含量应低于3%。
标准品的分装、冻干和熔封过程，应保证对各安瓿间效价和稳定性的一致性不产生影响。
（3）标定①协作标定新建标准物质的研制或标定，一般需经3个有经验的实验室协作进行。
参加单位应采用统一的设计方案、统一的方法和统一的记录格式，标定结果须经统计学处理（标定结果至少需取得5次独立的有效结果）。
②活性值（效价单位或毒性单位）的确定一般用各协作单位结果的均值表示，由国家药品检定机构收集各协作单位的标定结果，整理统计，并上报国家药品监督管理部门批准。
（4）稳定性研究研制过程应进行加速破坏试验，根据制品性质放置不同温度（一般放置4℃、25℃、37℃、-20℃）、不同时间，做生物学活性测定，以评估其稳定情况。
生物制品的质量检验—生物制品的效力检验
将药物的供试品（T）和已知效价的标准品（S）对生物体 进行同时对比，以对T的效价（或毒力）进行检定的方法。 属于对比检定。
S— dS （标准品剂量）； PS （标准品效价） T— dT （供试品剂量）； PT （供试品效价）
常以产生等反应时的效价比值R得出
R= PT/PS
等反应对比检定原理
✓Reed-Muench法计算
(难点、重点)
病C毒C液IDC5P0E孔数 无CPE
累计
出现CPE孔
稀释度
孔数 CPE孔数 无CPE孔数 所占的%
10-1
8
0
27
0
100（27/27）
10 -2
8
0
19
0
100（19/19）
10 -3
7
1
11
1
91.6 （11/12）
10 -4
3
5
4
6
40（4/10）
2 随机区组设计
将分成8各区组（如来自8个窝的动物）的32个受试者随机分配到 A,B,C,D四个处理组各区组中的受试者被随机分配接受的不同处理
3 微量生理活性
物质测定
应用 范围
1 药物效价测定
2 某些有害杂质
限度检查
微量生理活性物质测定
一些神经介质，激素等微量生理活性物质，由于其很 强的生理活性，在体内的浓度很低，加上体液中各种物 质的干扰，很难用理化方法测定。
而不少活性物质的生物测定法由于灵敏度高、专一性 强，对供试品稍作处理即可直接测定。
整体动物
体外测定
(in vitro) 离体器官、组织,微生 物, 酶和细胞
定量、半定量、定性 药品的生物效价、 安全检查、鉴别
生物制品生产用动物细胞制备及检定规程
生物制品生产用动物细胞制备及检定规程Requirements for Preparation and Control of Animal Cell Substrates Used for Production of Biologics本规程适用于生产和/或检定疫苗等生物制品的细胞培养，其中包括二倍体细胞、传代细胞和原始细胞培养。
本规程对这些细胞的性质、质量及安全性检定提出了明确要求。
A 对各类细胞培养总的要求1 细胞库的建立来自人或动物的细胞，已经通过全面检定，并得到国家药品管理当局批准，方可用于生物制品生产及检定。
1.1原始细胞库由一个原始细胞群体，发展成细胞系（株）或经过克隆培养而形成拘泥的细胞群体，通过检定证明适用于生物制品生产及检定。
为了保证能持续使用而建立原始细胞库。
目的是使得制品每一生产周期，都能提供一个已标定好的相同质量的细胞源。
因此，在特定条件下由有一定数量、成分一致的细胞，按一定量均匀分装于安瓿，于液氮或-100℃以下冻存备用，即为原始细胞库。
1.2主细胞库（MCB）取原始细胞种子，通过相应方式进行细胞传代，增殖一定数量细胞，将所有细胞均匀混合成一批，定量分装安瓿，保存于液氮或-100℃以下备用。
这些细胞必须以其自身的特定质控要求进行全面检定，全部合格后即为主细胞库，为建立工作细胞库用。
1.3工作细胞库（WCB）工作细胞库的细胞由主细胞库细胞传代扩增而来。
主细胞库之细胞经传代增殖，达到一定代次水平的细胞，全部合并成一批均质细胞群体，再按要求的细胞数量分装安瓿，保存于液氮或-100℃以下备用。
冻存时细胞的传代水平须确保细胞复苏后传代增殖的细胞数量能满足生产一批或一个亚批产品。
此时传代的水平必须在该细胞用于生产限制最高代次之内。
工作细胞库细胞，必须按该细胞的检定要求，逐项进行全面检定，合格后方可用于生产。
1.4生产用细胞培养取出冻存的工作细胞库中一个或多个安瓿，混合后培养，传递一定代次后供生产制品使用。
一般生物制品的制备流程
一般生物制品的制备流程一、生物制品概述生物制品是指利用生物技术制备的具有药理活性的产品，包括生物药物、生物诊断试剂和生物材料等。
生物制品广泛应用于药物治疗、疾病诊断和生物材料等领域。
二、生物制品的制备流程1. 研发阶段研发阶段是生物制品制备的起点，主要包括以下步骤：（1）项目规划：确定研发目标、技术路线和时间计划等。
（2）生物材料采集：根据研发需求，采集相应的生物样品，如细胞、组织、血液等。
（3）基因克隆：利用分子生物学技术，将目标基因克隆到适当的载体中。
（4）表达系统构建：选择合适的表达系统，如细菌、酵母、哺乳动物细胞等，构建表达目标基因的系统。
（5）蛋白表达和纯化：通过培养表达系统，使目标基因转录和翻译成蛋白，并进行纯化和提取。
2. 生产阶段生产阶段是将研发成功的生物制品进行批量生产的过程，主要包括以下步骤：（1）菌种培养：根据所选择的表达系统，进行菌种的培养和扩增。
（2）发酵过程：将菌种接种到发酵罐中，进行培养和发酵，使目标蛋白大量表达。
（3）提取和纯化：对发酵液进行提取和纯化，得到目标蛋白。
（4）质量控制：对生产得到的生物制品进行质量检测，确保符合规定的质量标准。
（5）灭活和保存：根据生物制品的性质，进行灭活处理，并进行保存和储存。
3. 包装和分装阶段包装和分装阶段是将生产得到的生物制品进行包装和分装，以便于存储和使用，主要包括以下步骤：（1）包装设计：设计合适的包装形式，满足产品的保护和便利性。
（2）包装材料选择：选择符合食品药品包装要求的材料，确保产品的安全性和稳定性。
（3）包装过程：将生物制品进行包装，如注射器、玻璃瓶等。
（4）分装过程：将包装好的生物制品按照规定的剂量进行分装，方便患者使用。
4. 质量控制和质量保证质量控制和质量保证是生物制品制备过程中至关重要的环节，主要包括以下内容：（1）质量检测：对生物制品进行各项质量指标的检测，如纯度、活性、微生物污染等。
（2）质量记录和文件管理：建立完善的质量记录和文件管理体系，确保制备过程可追溯和质量可控。
一些生物制品的制造检定规程
重组人干扰素α2b注射液Chongzu Ren Ganraosuα2b Zhusheye Recombinant Human Interferon α2b Injection本品系由含有高效表达人干扰素α2b基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后制成。
含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。
1基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2制造2.1工程菌菌种2.1.1名称及来源重组人干扰素α2b工程菌株系由带有人干扰素α2b基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。
2.1.2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
2.1.3菌种检定主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。
2.1.3.l划种LB琼脂平板应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。
2.1.3.2染色镜检应为典型的革兰阴性杆菌。
2.1.3.3对抗生素的抗性应与原始菌种相符。
2.1.3.4电镜检查(工作种子批可免做)应为典型大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。
2.1.3.5生化反应应符合大肠杆菌生物学性状。
2.1.3.6干扰素表达量在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。
2.1.3.7表达的干扰素型别应用抗α2b型干扰素参考血清做中和试验，证明型别无误。
2.1.3.8质粒检查该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。
2.2原液2.2.1种子液制备将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基(可含适量抗生素)中培养。
2.2.2发酵用培养基采用适宜的不含任何抗生素的培养基。
2.2.3种子液接种及发酵培养2.2.3.1在灭菌培养基中接种适量种子液。
2.2.3.2在适宜的温度下进行发酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。
发酵液应定期进行质粒丢失率检查(附录ⅨG)。
2.2.4发酵液处理用适宜的方法收集处理菌体。
2.2.5初步纯化采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。
生物制品制造检定规程
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一、鉴别
例5（电泳法）：例如肝素是一个 酸性粘多糖，进行琼脂糖凝胶电 泳时，向正极方向移动，供试品 与肝素标准品进行对照，其移动 的位置应一致。注射用重组链激 酶，在等电聚焦电泳时主区带明 显清晰，可利用等电聚焦电泳得 到的等电点进行鉴别。 例6（生物鉴别法）：例如，用家兔惊厥试验来鉴别胰岛素 ，通过胰岛素降血糖作用进行鉴别。当计量大时，血糖降 低致一定水平，家兔发生惊厥，迅速注射葡萄糖注射液， 补充血糖，惊厥停止
鉴别就是依据生物制品的生物学特点，利 用免疫学等方法来判断与确证产品的真伪。 酶分析法要点：
1.以酶为工具,目的在于测定其他物质的含量 2.被测物可以是底物、辅酶、活化剂或抑制剂等 3.分析步骤： a.选择适宜的工具酶 b.测定酶反应 c.校正曲线 d.测定被测物的浓度或量
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结果 在上述色谱条件下，各杂质 与主峰能完全分离。色谱图见 图12-3。主要可见两类杂质， 即rh-PTH(1-34)主峰前出现的 杂质Z1~Z3和主峰后出现的杂 质Z4。经实验发现，Z1~Z3为 氧化产生的降解产物，Z4为生 产工艺中引入的杂质。
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§1
概述
（一） 生物制品（biological products）
定义：生物制品是以微生物、细胞、动物或人源组织 和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成 ，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的一类药物。
区分概念
生物药物 生化药物 生物技术药物 基因工程药物
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1982年 目前
2005年
（四）生物制品特点
生物产品的制备和应用
生物产品的制备和应用生物制品是指来源于生物体进行加工或提纯后制备成的生物学性能物质，在生命科学、生物医药、食品、环保等领域都有广泛应用。
其制备工艺主要分为两类：一类是生物反应法，即利用特定生物媒介进行反应制备；另一类是生物工程法，即通过重组技术将人工合成的基因序列进行插入、修改、合成等操作，制备出对应的生物制品。
本文将就生物反应法和生物工程法两种制备方法，以及生物制品的应用进行探讨。
一、生物反应法常用的生物反应法主要有三种：自然方法、发酵和药代动力学。
自然方法是指从生物体中提取所需成分，然后进行分离、纯化加工处理。
例如，蛇毒素、天然赖氨酸等都是通过人工提取方式获得的。
发酵法是指利用特定菌株进行反应，通过培养和发酵使生物体产生期望的反应产物。
与传统的卤化物发酵不同，现代生物发酵工艺具有设备小、投入少、产量高、无二次污染等优点。
因此，在食品、生物医学领域中，很多生物制品都是通过发酵法制备的，如乳酸菌、酵母菌、细菌等。
药代动力学是指将体内的代谢关系转化为数学模型，在研究新药物时，常用药代动力学来进行药效学评价。
药代动力学能够预测药物在体内的药代学性质，并对药物疗效起到指导作用。
药代动力学主要包括药代动力学参数的测量和药代动力学模型的构建。
二、生物工程法生物工程法是指利用现代生物技术手段，通过对基因、蛋白质等活体分子的改造来制备生物产品。
生物工程法的适用范围很广，既可生产药物、生物饲料，也能够开发新型生物材料等。
目前最常用的生物工程方法是重组DNA技术，其核心是利用酵母、细菌等宿主生物，将基因序列导入宿主生物细胞后进行表达和组装。
主要优点是可以实现大规模生产，速度快，成本低。
流行病毒疫苗是重组技术的代表性应用之一，具有安全性高、稳定性好等特点。
近年来，随着基因测序、转录组学等的发展，生物工程法将会得到广泛应用。
例如在生命科学领域，研究人员利用重组技术制备了多种抗生物质，可以广泛用于治疗感染、炎症和肿瘤等病症。
《生物制品的制备》课件
蛋白质工程技术广泛应用于生物制品制备，如蛋白质药物和酶等的生 产和改造。
蛋白质工程技术的优点
蛋白质工程技术可以精确地改造蛋白质的性质，提高产品的稳定性和 活性，降低生产成本。
蛋白质工程技术的挑战
蛋白质工程技术需要深入的蛋白质结构和功能认识，同时还需要解决 蛋白质生产和应用中的安全性和有效性问题。
纯化
进一步去除杂质，提高目标产物的纯 度。
浓缩与干燥
浓缩
减少目标产物的体积，提高浓度。
干燥
去除目标产物中的水分或其他溶剂，得到干燥的制品。
质量检测与储存
质量检测
通过理化指标和生物学活性检测，确保产品质量达标。
储存
选择合适的储存条件和方法细胞培养技术
重组蛋白的制备
重组蛋白概念
是指通过基因工程技术获 得的一种蛋白质，具有特 定结构和功能。
制备流程
包括基因克隆与表达载体 构建、转化与表达、蛋白 质纯化与复性等步骤。
关键技术
涉及基因克隆与表达载体 构建、蛋白质表达与纯化 等关键技术。
酶的制备
酶的概念
关键技术
是指具有生物催化功能的蛋白质，具 有高效性和专一性。
分类
根据用途和来源，生物制品可分为预防用生物制品、治疗用生物制品和诊断用 生物制品三大类。
生物制品的应用领域
预防传染病
通过接种疫苗预防传染病，如 卡介苗预防结核病。
治疗疾病
利用生物制品治疗肿瘤、自身 免疫性疾病等，如免疫疗法。
诊断疾病
生物制品在临床诊断中发挥重 要作用，如免疫诊断试剂。
科学研究
生物制品在生命科学研究中用 于研究细胞、基因、蛋白质等
。
生物制品的发展历程与趋势
生物制品检验大实验
生物制品检验技术实验总结报告前言：生物制品是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人工原组织和液体等生物材料制备的。
用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品[1]。
一、概述：生物制品的种类，根据采用的材料、制法或用途不同，可分为六类：疫苗类药物、抗毒素及抗血清类药物、血液制品、重组DNA制品、诊断制品以及其他制品[2]。
生物制品的特点，分子量不是定值、生化法结构确证、需检查生物活性、要求安全性检查、需做效价测定[3]。
生物制品检验的性质是运用化学或生物化学的方法和技术来研究生物制品的质量及其控制方法，是一门研究和开发生物制品及其质量控制的“技术学科”[4]。
此次生物制品检验技术实验主要包括生物制品中水分的测定、生物制品中蛋白质含量的测定、氨基酸的分离鉴定。
二、实验原理：实验一生物制品中水分的测定此次实验运用直接干燥法测量奶粉中水分的含量。
其原理基于生物制品中的水分受热以后,产生的蒸汽压高于空气在电热干燥箱重中的分压,使制品中的水分蒸发出来,同时,由于不断的加热和排走水蒸汽,而达到完全干燥的目的,制品干燥的速度取决于整个压差的大小[5]。
实验二生物制品中蛋白质含量的测定此次实验运用经典的凯氏定氮法测量蛋白质含量，其原理是样品用浓硫酸消化时，其中的含氮有机物分解放出氨，氨与硫酸化合生成硫酸铵。
在消化时常加入硫酸铜和硫酸钾作催化剂，以加速分解速度并提高消化的温度。
消化完毕，加入强碱使消化液中的硫酸铵分解，放出氨。
利用蒸汽蒸馏法，用硼酸溶液吸收蒸馏出来的氨，氨与硼酸溶液中的氢离子结合生成离子，使吸收液中的氨离子浓度下降，然后用标准酸溶液滴定，使吸收液中的氢离子恢复到原先的浓度，即可从消耗的酸量，计算样品中的含氮量。
样品消化，蒸馏的化学反应可归纳如下[16]：(NH4)2SO4+2NaOH→2NH3↑+Na2SO4+2H2O实验三氨基酸的分离鉴定——纸层析法此次试验运用纸层析法，其原理是用滤纸作为惰性支持物，层析溶剂由有机溶剂和水组成的物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的：Rf=原点到层析中心的距离/原点到层析剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数[10]。
常用生物制品的制备及检验.
佐剂种类：氢氧化铝、白油-Span、蜂胶等。
疫苗制备
• 细菌性灭活苗的制备 • 细菌性活疫苗的制备 • 病毒性组织苗的制备 • 病毒性禽胚苗的制备 • 病毒性细胞苗的制备
• 液氮保存 有些细胞结合毒须在－196C的液氮中保存 。
• 动物继代保存 虫种一般通过动物继代保存。
菌（毒）种的管理
• 生产检验用菌（毒）种实行分级管理制度，种子分 三级（原种、基础种子和生产种子）。
• 原种和由国家兽医微生物菌种保藏中心或分中心负 责保管；基础种子由菌种中心或分中心负责制备、 鉴定、保管和供应；生产种子由生产企业自行制备 、鉴定和保管。
细菌疫苗和类毒素制造工艺流程
Hale Waihona Puke 病毒性组织疫苗制造工艺流程
疫苗检验
• 纯度检验及活菌计数 • 安全与效力检验 • 物理性状检验 • 真空度检验 • 残余水分测定
免疫血清制备
• 1动物的选择 • 2免疫途径，剂量和免疫周期 • 3试血、测定抗体效价 • 4放血 • 5分离血清 • 6抗血清的保存
注射部位：腹部皮下多点注射，每点注入0.1 ml。
第三次免疫：再次免疫后两周内进行， 注射剂量和部位同第二次免疫
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试血，测定抗体效价
第三次免疫后7～10天兔耳静脉或小鼠尾尖取少量血。采用 环状沉淀试验、琼脂双向扩散、单项免疫扩散、溶血试验、 凝集反应、酶免疫测定及放射免疫分析等方法。
放血
放血前应停食12 h。
动物的选择
生物试剂的制备与应用
生物试剂的制备与应用生物试剂是指用于生物实验的化学品，主要分为分析试剂和实验试剂两类。
分析试剂是检测生物样品中特定成分的剂量，而实验试剂则是用于生物实验中的化学试剂。
生物试剂制备的科学和技术是一项重要的基础工作，它能够为生命科学和医学研究提供必要的工具和支撑。
下面，本文将主要介绍生物试剂的制备和应用。
一、生物试剂的制备1. 常用生物试剂生物试剂的种类非常广泛，包括荧光染料、蛋白质、抗体、酶、核酸、化合物等。
常用的荧光染料有荧光素、荧光素同工异构体、荧光蛋白、量子点及其衍生物等；常用的蛋白质包括卵白蛋白、牛血清蛋白、牛血清白蛋白等；常用的抗体包括单克隆和多克隆抗体等；常用的酶包括丝裂原酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等。
这些生物试剂在生物实验中具有重要的作用。
2. 生物试剂的制备方法生物试剂的制备是一项复杂的过程，需要严格的操作规程和高超的技术。
一般来说，生物试剂的制备可以通过以下几个步骤进行。
（1）试剂品质的确定试剂制备前必须确定所选化学物质的品质，包括纯度、结构、活性等。
只有选用纯度较高、结构合理、活性稳定的化学物质，才能制得高质量的生物试剂。
（2）试剂物质的提取和纯化试剂制备通常需要从相应的物质中提取目标物质。
在提取的过程中，需要采取一系列分离、富集、分级和纯化等步骤，以获取高纯度的目标物质。
（3）试剂的性质和特征确认在试剂制备过程中，需要对所制得的试剂进行性质和特征的确认，主要包括紫外可见光谱、荧光光谱、分子量测定、元素分析、质谱分析等。
（4）试剂容器和包装材料的选择对于常用的生物试剂，通常采用玻璃瓶、塑料瓶或铝箔袋等容器进行包装。
不同的试剂需要选择不同的容器，并在包装过程中采取相应的措施减少污染和破坏。
二、生物试剂的应用生物试剂在诊断和治疗疾病、基因技术、药物筛选、研究生化反应机制等领域有着广泛的应用。
下面将对生物试剂在生命科学和医学研究中的应用进行简单介绍。
1. 基因技术中的应用在基因技术中，常用的生物试剂包括DNA聚合酶、限制性内切酶、脱氧核糖核酸（DNA）和核酸酶等。
生物制品第三章
3.目的产物的分离纯化
固液分离之后，各种成分均以溶解状态 分散在提取液中，采用各种适宜的技术 手段加以分离。 分离纯化的实质与最终目的是在去除各 种杂质的同时将目的产品成分进行富集 与浓缩。
第二节
各类生物制品的分离纯化方法
一、蛋白质类制品的分离纯化方法 二、核酸类制品的分离纯化方法 三、糖类制品的分离纯化方法 四、脂类制品的分离纯化方法 五、氨基酸类制品的分离纯化方法
该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物
质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。 ③ 防腐剂保鲜 。常用乙醇、苯酚等。该法适用 于液体原料，如发酵液、提取液等。
二、生物制品的提取（extraction）
(1)生物组织与细胞的破碎（obtrude of tissue and
cell）：生物制品大部分存在于生物组织或细胞中，要
提高提取率，破碎过程是非常重要的。常用的破碎方
法： ①磨切法，该法属于机械破碎方法，设备有组织捣碎 机、胶体磨、匀浆器、匀质机、球磨机、乳钵等。 ②压力法，有加压与减压两种，常用的法兰西压釜使 用效果良好。
③反复冻融法，设备简便，活性保
持好，但用时较长。
④超声波振荡破碎法，该方法破碎
效果较好，但由于局部发热，对
三、糖类制品的分离纯化方法
（ Isolation and depuration of sugar ）
1.单糖及其衍生物的制备 游离单糖及小分子寡糖易溶于冷水及温乙醇。 单糖类有葡萄糖、果糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠 李糖，双糖类包括蔗糖、麦芽糖；三糖类有棉子 糖、龙胆糖，四糖类有来苏糖等。可在水中或中 性条件下以50％乙醇为提取溶剂，也可以用82％ 乙醇，在70～80℃下回流提取。
4.0时，分子则带有正电荷。由于具有该性质，利
第三章 生物制品的制备 生物制品学 教学课件
总 蛋 白 ： 6.27.9% 白 蛋 白 ： 3.84.8% 水：90-92%
血（无抗凝剂）→自然凝固→分离出血清（无纤维蛋白酶原、凝 血因子等）
（1）结构和性质 （structure and character）
➢白蛋白（albumin）又称人血浆白蛋白，约占血浆总 蛋白的65%。是维持血浆胶体渗透压的主要物质。
➢ 离子交换层析法（ion exchange chromatagraphy)：粘多糖的聚阴离子能 够很好地被阴离子交换剂吸附和分离，如 Dowex I-X2（商品名）离子交换树脂、 DEAE-离子交换纤维素（二乙胺乙基）等。 洗脱可用NaC1溶液进行梯度洗脱。
六、脂类制品的分离纯化方法
（Separation and purification of lipid）
②压力法，有加压与减压两种，常用的法兰西 压釜、细菌压等使用效果良好。
③反复冻融(freeze thawing)法，设备 简便，活性保持好，但用时较长。
④超声波振荡破碎(ultrasonic oscillation crash)法，该方法破碎效果 较好，但由于局部发热，对活性有损失。
⑤自溶法(autolyze method)或酶解法 (enzymolysis method)，用得较少。
➢离 子 交 换 层 析 法 (Ion exchange
chromatography) : 脂质分子的存在有非解离 、两性离子和酸式解离三种状态。根据它们 在一定pH条件下的解离情况，选择适当的离 子 交 换 剂 可 将 它 们 提 纯 。 如 TEAE— 纤 维 素
(Triethylaminoethyl cellulose)对分离脂 肪酸和胆汁酸等特别有效。
（2）氨基酸的分离方法(Separation of Aa )有 沉淀法(precipitation) 、吸附法(adsorption)和 离子交换法（ion-exchange ) 。
生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程(1)
生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程本规程适用于人用生物制品生产/检定用动物细胞基质，包括具有细胞库体系的细胞及原代细胞。
细胞基质系指可用于生物制品生产/检定的所有动物或人源的连续传代细胞系、二倍体细胞株及原代细胞。
生产非重组制品所用的细胞基质，系指来源于未经修饰的用于制备其主细胞库的细胞系/株和原代细胞。
生产重组制品的细胞基质，系指含所需序列的、从单个前体细胞克隆的转染细胞。
生产的细胞基质，系指通过亲本骨髓瘤细胞系与另一亲本细胞融合的杂交瘤细胞系。
一、对生产用细胞库细胞基质总的要求用于生物制品生产的细胞系/株均须通过全面检定，须具有如下相应资料，并经国务院药品监督管理部门批准。
（一）细胞系/株历史资料的要求1.细胞系/株来源资料应具有细胞系/株来源的相关资料，如细胞系/株制备机构的名称，细胞系/株来源的种属、年龄、性别和健康状况的资料。
这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献。
人源细胞系/株须具有细胞系/株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及生理状况的相关资料。
动物来源的细胞系/株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、病原体检测结果及供体的一般生理状况的相关资料。
如采用已建株的细胞系/株，应从具有一定资质的细胞保藏中心获取细胞，且应提供该细胞在保藏中心的详细传代过程，包括培养过程中所使用的原材料的相关信息，具有细胞来源的证明资料。
2．细胞系/株培养历史的资料应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系/株过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，是否有外源添加序列，以及细胞生长特征、生长液成分、选择细胞所进行的任何遗传操作或选择方法等。
同时还应具有细胞鉴别、检定、内源及外源因子检查结果的相关资料。
应提供细胞培养液的详细成分，如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物学活性的物质，应具有这些成分的来源、制备方法及质量控制、检测结果和质量保证的相关资料。
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第十二章免疫学应用第三节常用生物制品的制备及检验生物制品作为一类特殊的药品，其生产环节和质量检验必须按照严格的法规、程序和标准进行。
只有这样，才能保证其对动物疾病防治和诊断的可靠性和准确性，以及对人畜和环境的安全性。
生物制品种类繁多，生产中用量较大的有疫苗和免疫血清两大类。
一、疫苗的制备及检验（一）菌种、毒种的一般要求菌种、毒种是国家的重要生物资源，世界各国都为此设置了专业性保藏机构。
用于疫苗生产的菌种和毒种应该符合要求。
1．背景资料完整我国《兽医生物制品制造及检验规程》规定，经研究单位大量研究选出并用于生产的现有菌种、毒种，均由中国兽药监察所或中国兽药监察所委托分管单位负责供应，而且其分离地、分离纯化时间等背景资料必须记录完整。
2．生物学特性典型指形态、生化、培养、免疫学及血清学特性以及对动物的致病性和引起细胞病变等特征均应符合标准。
同时，用于制苗的菌种和毒种的血清型必须清楚。
3．遗传性状稳定菌种、毒种在保存、传代和使用过程中，因受各种因素影响容易变异，因此，菌种和毒种遗传性状必须稳定。
（二）菌种、毒种的鉴定与保存。
1．菌种、毒种的鉴定在疫苗生产之前，要鉴定所用菌（毒）种的毒力、免疫原性及稳定性，确定强毒菌（毒）种对本动物、实验动物或鸡胚的致死剂量，弱毒株的致死和不致死动物范围及接种的安全程度，通过强毒攻击免疫后动物，确定制造疫苗所用菌（毒）种的免疫原性；对制造弱毒活苗菌（毒）种需反复传代和接种易感动物，以检查其毒力是否异常增强。
2．菌种、毒种的保存为了保持稳定性，最好采用冷冻真空干燥法保存菌种和毒种。
冻干的细菌、病毒分别保存于4℃和-20℃以下，液氮是长期保存菌种的理想介质。
（三）灭活、灭活剂与佐剂1．灭活与灭活剂疫苗生产中的灭活是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，但尽可能保持其原有免疫原性的过程。
灭活的方法有物理法和化学法两种。
加热法是一种常见的物理灭活法，但疫苗生产上主要采用化学灭活法。
用来进行灭活的试剂称为灭活剂，如甲醛、苯酚、结晶紫及烷化剂等。
其中甲醛应用最为广泛。
甲醛的灭活作用是其醛基能够破坏微生物蛋白质和核酸的基本结构，导致微生物死亡而失去感染力。
一般需氧菌和厌氧菌所用甲醛的浓度分别为0.1%～0.2%和0.4%～0.5%，37～39℃处理24h以上，如气肿疽灭活苗常用0.5%甲醛37～38℃灭活72～96h；灭活病毒所用甲醛浓度为0.05%～0.4%（多数为0.1%～0.3%），而灭活类毒素多用0.3%～0.5%甲醛。
灭活的效果与温度、pH、微生物的种类和含氮量、灭活剂的特异性及浓度以及是否存在有机物等因素有关。
通常高温与碱性环境能加速灭活，但易破坏抗原性，而含氮量较高及有机物的存在会消耗部分灭活剂，使灭活速度减慢。
2．佐剂（1）佐剂的概念本身无免疫原性，但与抗原物质合用能增强抗原的免疫原性和机体免疫应答，或改变机体免疫应答类型的物质称为佐剂。
佐剂能提高抗原的免疫原性，增加抗原分子的表面积，延长抗原在体内的存留时间，增强机体特异性及非特异性免疫反应。
佐剂必须是无毒、无致癌性及其他副作用，而且易于吸收、吸附力强的纯净化学物质。
佐剂疫苗保存1-2年后应不引起不良反应，效力无明显改变。
（2）佐剂的分类与常用佐剂佐剂可简单地分为贮存型和非贮存型两类（表12-1）。
前者常与抗原混合成悬浊状态，使抗原在注射局部存留时间延长，通过抗原的缓慢释放，持续刺激机体免疫系统；后者不与抗原混合，两者分别在机体不同部位同时注射也可发挥佐剂的作用。
氢氧化铝和白油-Span佐剂是应用最为广泛的贮存性佐剂。
氢氧化铝胶，又称铝胶，是常用佐剂之一，它既有良好的吸附性，又能浓缩抗原，减少注苗剂量。
铝胶成本低，使用方便，且基本无毒，因而是动物疫苗的常用佐剂。
我国目前在生产猪瘟-猪丹毒-猪肺疫三联苗及单价猪肺疫苗时，三联苗中的猪肺疫苗和单价猪肺疫苗，用铝胶稀释比用生理盐水稀释的免疫效果更好。
不过，铝胶也有不足之处，如易引起轻度局部反应，冻后易变性，不引起明显的细胞免疫，可能对动物神经系统有影响等。
表12-1 常见各类佐剂类型佐剂贮存型佐剂不溶性胶体Al(OH)3，AlPO4，KAl(SO4)2·12H2O，Ca3(PO4)2，炭末等油乳剂弗氏完全佐剂，弗氏不完全佐剂，Span-白油佐剂等非贮存型佐剂生物佐剂分支杆菌，卡介苗，乳酸菌类，短小棒状杆菌，葡萄球菌，链球菌，百日咳杆菌，布氏杆菌，细菌脂多糖，酵母多糖，IL-1，IL-2等非生物佐剂表面活性剂吐温-80，溶血卵磷脂类似物，溴化十八烷基三甲铵等胺及其类似物癸胺，癸胍等核酸及其类似物DNA，RNA，低核苷酸，多聚核苷酸，cAMP等白油-Span佐剂是当前的主要油乳佐剂，该佐剂用轻质矿物油即白油作油相，Span-80或Span-85及吐温-80（Tween-80）作为乳化剂。
配制时可将白油与Span-80按94∶6比例混合，再加总重量2%的硬脂酸铝溶化混匀后，116℃高压灭菌30min 即为油相，将抗原溶液和吐温-80以96∶4比例混合作为水相，再将油相和水相按1∶1比例充分混匀，达到完全均质化即可。
有研究证明，同时含油相和水相乳化剂的疫苗比仅含油相的疫苗免疫效果好，在37℃体温条件下更稳定，黏度也低。
（四）疫苗的制备（图12-1，图12-2）1．细菌性灭活苗的制备（1）种子培养选取1～3个品系毒力强、免疫原性好的菌株，按规定定期复壮和鉴定，将合格菌种增殖培养并经无菌检验、活菌计数达到标准后作为种子液。
种子液保存于2～8℃冷暗处，在有效期内用完。
（2）菌液培养选用固体表面培养、液体静置培养、液体深层通气培养或连续培养法，对种子液进行培养。
一般固体培养易获得高浓度细菌悬液，含培养基成分少，但生产量较小，因此大量生产疫苗时常用液体培养法。
（3）灭活与浓缩灭活时要根据细菌的特性选用有效的灭活剂和最适灭活条件。
如猪丹毒氢氧化铝苗可加入0.2%～0.5%甲醛，37℃灭活18～24h。
此外，为提高某些灭活苗的免疫力，常采用离心沉降或氢氧化铝吸附沉淀等方法使菌液浓缩一倍以上。
（4）配苗与分装配苗即按比例加入佐剂，可根据具体情况在灭活同时或之后进行。
配苗须达到充分混匀，分装后立即加塞、贴签或印字。
上述制备过程都必须在无菌条件下按照无菌操作进行。
2．细菌性活疫苗的制备（1）种子液及菌液培养选择合格的弱毒菌种增殖培养形成种子液，种子液在0～4℃可保存2个月。
按1%～3%的比例将种子液接种于培养基，依不同菌苗的要求制备菌液。
如猪丹毒弱毒苗在深层通气培养中要加入适当植物油作消泡剂，并通入过滤除菌的热空气。
菌液于0～4℃暗处保存，经抽样无菌检验、活菌计数合格后使用。
（2）浓缩、配苗与冻干利用吸附剂吸附沉降和离心沉降等方法浓缩菌液可以提高单位活菌数，增强疫苗的免疫效果。
浓缩菌液应抽样作无菌检验及活菌计数。
将检验合格的菌液按比例加入冻干保护剂（如5%蔗糖脱脂乳）配苗，充分摇匀后立即分装。
随后将菌苗迅速放入冻干柜预冻和真空干燥，并立即加塞、抽空、封口，移入冷库保存后由质检部门抽样检验。
3．病毒性组织苗的制备（1）种毒与接种可选用抗原性优良、致病力强的自然毒株的脏器组织毒作为种毒，也可选用强毒株的增殖培养物，还可选用弱毒株组织毒种作为种毒，但都必须经纯度检验及免疫原性检验合格后才能使用。
被接种的动物应该是清洁级（二级）以上，且对种毒易感性高的动物，接种途径可依生产目的和病毒性质分别选用脑内、静脉、肌肉、皮下或腹腔注射等，如狂犬病疫苗是用兔脑毒种通过绵羊脑内接种途径获得。
此外，接种后应每天观察和检查动物的各项指标，如精神、食欲和体温等。
（2）收获与制苗根据观察和检查的结果选出符合要求的发病动物按规定方式剖杀，收集含毒量高的组织器官，如兔出血症组织灭活苗常收获病兔肝脏。
制备弱毒苗需按无菌操作剔除脏器上的脂肪与结缔组织，称重后剪碎并加适量保护剂制成匀浆，过滤和适当稀释后加余量保护剂及青霉素和链霉素各500～1000IU/ml，充分摇匀并置0～4℃处理，再检验纯度并测定毒价，合格者分装并冻干。
制备组织灭活苗可收获组织脏器，经纯度检验和毒价测定，合格者按比例加平衡液和灭活剂制成匀浆，分装和标记，0～4℃保存。
4．病毒性禽胚苗的制备（1）种毒与接毒目前，痘病毒、鸡新城疫、禽流感等疫苗仍利用禽胚特别是鸡胚制备。
适应于鸡胚的种毒多系弱毒且为冻干毒种，使用前需在鸡胚上继代复壮3代以上和检验合格后方可用于生产。
用于接毒的鸡胚必须来自SPF(无特定病原动物)鸡群，以免除母源抗体及残留抗生素的影响。
常用的接种途径有：卵黄囊接种（5～8日龄鸡胚）、尿囊腔接种（9～11日龄鸡胚）、羊膜腔接种（10～12日龄鸡胚）、绒毛尿囊膜接种（11～13日龄鸡胚），接种后观察胚的活力，记录鸡胚死亡时间。
（2）收获与配苗通常选择接毒后48～120h内死亡的鸡胚，收获的组织依接种途径、病毒种类而定，主要有绒毛尿囊膜、尿囊液、羊水及胎儿，冷却后经纯度检验，按比例加入抗生素后方可用于制造湿苗或冻干苗。
5．病毒性细胞苗的制备（1）培养液与细胞培养液包括细胞培养液与病毒增殖维持液，前者含5%～10%血清，而后者血清仅含2%～5%。
常用的细胞培养液有MEM、DMEM 等。
制造疫苗用细胞通常有原代细胞、二倍体细胞和传代细胞系。
常选用来源广、生命力强及病毒适应性强的细胞，如鸡胚成纤维细胞(生产鸡新城疫I系苗)、地鼠肾细胞(BHK21细胞)以及非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)等培养病毒。
（2）接毒、收获和配苗将种毒继代培养在适宜细胞的单层培养物上，适应后用作毒种。
通常先培养出完整的细胞单层，倾去培养液，然后接种病毒，如猪水疱病弱毒病毒，待病毒吸附后加入维持液继续培养，待出现70%以上细胞病变时即可收获病毒，这称为异步接种。
有的病毒采取同步接种，即在接种细胞同时或不久接种病毒，使细胞和病毒同时增殖，如细小病毒，培养一定时间后收获。
收毒的时间和方法依疫苗性质而定，有的将培养瓶冻融数次后收集，或者加入EDTA-胰蛋白酶液将细胞消化分散后收取。
收获的细胞毒经纯度检验和毒价测定合格后，按常规方法配制灭活苗或冻干苗。
（五）成品检验成品检验是保证疫苗品质的重要环节，一般由专门机构在接到检验通知书后执行。
按规定需对产品随机抽样，分别用于成品检验和留样保存。
我国规定灭活苗在500L以下、500～1000L以及1000L以上者分别每批抽样5瓶、10瓶和15瓶；冻干苗每批5瓶。
抽样后必须在规定期限内进行检验和出示结论。
1．纯度检验及活菌计数（1）纯度检验即无菌检验。
活菌苗及灭活苗灭活之前不得混有杂菌,为此，必须进行纯度检验。
凡含有防腐剂、灭活剂或抗生素的疫苗需用培养基稀释后再移植培养。
不同疫苗无菌检验所用培养基种类不同，通常选择最适合各种容易污染的需氧或厌氧杂菌生长而不适宜活菌苗细菌的培养基，如马丁肉汤琼脂斜面、普通琼脂斜面、血琼脂斜面及厌气肉肝汤和改良沙氏培养基等，分别将被检物0.2～lml接种到50～100ml培养基中。