临床免疫学检验技术PPT(共64页)

临床免疫学检验技术
• 江西省胸科医院：熊国亮
一、概述
• 免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学 检验领域应用的一门学科。免疫检验技术 则重点阐述各类免疫学技术的基本原理、 方法类型和临床应用。19世纪末相继建立 了凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等 三大经典血清学试验，用于检测病原微生 物的抗原或抗体对传染病的诊断起到重要 作用。
三、酶联免疫吸附试验（enzy发展，放射 免疫技术、荧光免疫技术、酶免疫技术、 化学发光免疫技术、流式细胞免疫分析技 术等免疫标记技术应用于临床免疫学检验， 加快了免疫学检验的自动化、标准化进程， 极大地提高了免疫学检验的灵敏度，拓展 了免疫学检测范围，从检测免疫相关物质 （抗原、抗体、补体、免疫活性细胞和细 胞因子等）到检测体液中的微量物质（激 素、酶、血浆微量蛋白、血药浓度、微量 元素等）。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 此法常用多孔聚苯乙烯反应板作为固相载 体，读取结果需用酶标仪。标记抗原或抗 体所用的酶常选择辣根过氧化物酶（HRP）、 碱性磷酸酶（AP）等，HRP常用的底物有 邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺 （TMB），碱性磷酸酶一般采用对硝基苯 磷酸酯（P-NPP）作为底物，产物为黄色的 对硝基酚，在405nm波长处有最高吸收峰。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 3.免疫球蛋白、循环免疫复合物和补体的测 定 包括测定五类免疫球蛋白的含量、血清 总补体活性及补体成分的含量和在多种疾 病时血清中升高的循环免疫复合物。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 4. 细胞免疫相关指标测定 检测淋巴细胞亚 群和淋巴细胞的功能以及白细胞介素—2等 多种细胞因子，用于判断机体细胞免疫功 能状况。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 3.竞争法 用于检测待检样本中未知抗原或抗 体。以测定抗体的竞争法为例，将已知抗体 吸附于固相载体，洗涤除去未结合抗体，； 加特异性抗原与包被抗体形成固相抗原抗体 复合物，洗涤除去游离抗原，加标本和酶标 抗体，标本中的抗体与酶标抗体竞争结合固 相复合物中的抗原。标本中的抗体越多，其 竞争力越强，与固相抗原结合的酶标抗体越 少，加酶底物显色，有色产物的多少与酶标 抗体量成正比，与被测抗体量成反比。如乙 型肝炎总抗HBc的检测、抗HBe的检测。
一、概述
• 免疫检验技术以其特有的特异性、敏感 性和微量、快速、稳定等优势被广泛应 用于临床医学。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 1.传染病的免疫学检查 机体被细菌、病毒、 支原体、衣原体、螺旋体等微生物感染后， 常可在血清中出现与病原体相对应的特异 性抗体，检测这类抗体有助于明确疾病的 诊断（血清学诊断）。此外，还可以用含 有特异性抗体的诊断血清鉴定相应的病原 体及有关抗原，为确定传染的病原提供依 据。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 原理 ：酶联免疫吸附试验是免疫酶技术固 相酶免疫测定的一种技术，是将待测抗原 或抗体先固定于固相载体表面，再用酶标 记的抗原或抗体与已被固定的相应抗体或 抗原发生特异性反应，加入酶底物及色原 后呈色，呈色程度用吸光度（A）值表示， 所测A值与待测抗体或抗原的水平呈相关关 系。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 5. 自身抗体测定 机体在发生自身免疫性疾 病时，常可出现各自身抗体，用免疫学方 法检测这些抗体，可为自身免疫性病的诊 断、疾病状态判断和疗效监测提供依据。
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 6. 肿瘤标志物测定 免疫学方法定性或定量 检测在肿瘤发生和增殖过程中由肿瘤细胞 合成、释放或机体对肿瘤反应产生的一些 生化物质，对肿瘤的筛查、鉴别诊断、治 疗后病情监测及预后判断均有重要意义。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 2.夹心法 夹心法有双抗体夹心法（测抗原）和双抗 原夹心法（测抗体），两者试验步骤相同，但包被 物、酶结合物和检测对象不同。双抗体夹心法用于 检测相对分子质量较大的蛋白质抗原。先将已知特 异性抗体包被于固相载体上，加待测样本，若其中 有相应的抗原则与固相抗体特异性结合；洗板后加 入酶标记特异性抗体，使成包被抗体—待测抗原— 酶标抗体复合物；抗原或抗体含量与所测吸光度（A） 值呈正相关。如乙型肝炎HBsAg的检测、抗HBs的检 测、HBeAg的检测。
三、酶联免疫吸附试验（enzyme-
linked immunosorbent assay,ELISA）
• 根椐方法和步骤不同可分为以下几种基本反应模式。
• 1.间接法 是检测样本中特异性抗体最常用的方法。 将已知特异性抗原包被于固相载体上，加待检样本， 若其中含特异性抗体则与固相抗原结合形成抗原— 抗体复合物；洗弃未反应的成分，加酶标记抗抗体 （一般为酶标记抗人IgG或葡萄球菌A蛋白），使在 固相载体上形成抗原—待检抗体—标记抗体（或SPA） 复合物；洗弃未反应的成分，加酶底物，终止反应 后，在一定波长下用酶标仪测吸光度（A）值判定待 测抗体的有无或含量。间接法的优点是制备 一种酶 标记抗抗体（或SPA），只需更换不同的固相抗原， 便可检测多种抗体。如HCV-IgG抗体的检测
二、免疫检验技术在临床免疫学 检验的应用
• 2.机体天然免疫的检测 主要是对各种吞噬 细胞如中性粒细胞、NK细胞、单核巨噬细 胞的功能进行检测以及检测在机体组织损 伤、局部缺血、急性感染与炎症反应时升 高的血浆蛋白，如C反应性蛋白，血浆中 CRP浓度在急性心肌梗死、创伤、感染、炎 症、外科手术、肿瘤浸润时迅速显著地增 高，可达正常水平的2000倍。CRP是引发心 脏病的最强烈的危险因素。