常用实验试剂配制

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1DEPC水(1‰) 1000ml 水

1ml DEPC

根据需要确定要配的体积,泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用,泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜,送至高压,然后配相关溶液。

20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水

用HCL调ph至7.5,高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右,搅拌之至完全溶解,注意温度不要超过65℃,否则PFA降解失效。

30.2% 甘油/0.1M tris

20ml 甘油

980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g

(ph 7.0)柠檬酸钠88.2g

DEPC水1000ml

分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用

5 HEPES 溶液HEPES 23.8g

(ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml

6 50X Denhaldt′s 液

聚蔗糖(Ficoll 400)0.2g

聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g

牛血清蛋白(BSA)0.2g

DEPC 水20ml

7 预杂交buffer

Deinoized formanmid 5ml

20X SSC 1.5ml

1M HEPES 0.5ml

50X Denhanldt′s液1ml

龟精DNA 0.6ml(4ug/ul)

DEPC水 1.4ml

龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性,随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。

8Washing buffer

(ph7.5) maleic acid 5.8g

NACL 4.4g

Tween(吐温) 1.5ml

定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween

9Maleic acid buffer

(ph7.5) Maleic acid 5.8g

Nacl 4.4g

定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl

10Detection buffer

(ph 9.5)0.1M Tris-Hcl 7.9g (9.0g)

0.1M Nacl 2.9g

定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1M Tris-Hcl ,0.1M nacl.

11blocking reagent(封闭液)(2-8℃保存)

(bottle 5) 5g

maleic acid buffer 50ml

12blocking solution

封闭液(新鲜配制)1ml

Maleic acid buffer 10ml

13抗体(AP)

10000rpm离心5min,吸上清,1:5000稀释,考虑先稀释100倍,用时再稀释。

✧LB培养基

加去离子水950ml搅拌使之完全溶解,用5mol/L的NaOH调PH值至7.0,定容至1L,高压蒸汽灭菌(15磅,1.034×105Pa)30min,4℃保存。

✧LB

高压蒸汽灭菌(15磅,1.034×105 Pa) 30 min,冷却至60℃,加入500 L 100mg/mL的氨苄青霉素(Amp),分铺20个平板。

✧100 mg/mL

用0.2um

用0.2um滤器过滤,-20℃储存。

琼脂糖凝胶电泳所用试剂

✧50×TAE(电泳缓冲液)

Tris碱242g

冰乙酸57.1 mL

0.5M EDTA(pH 8.0)100 mL

溶于终体积1000 mL去离子水中,使用时1:50稀释。

✧10×加样缓冲液

0.25% 溴酚兰

0.25% 二甲苯青

30% 甘油

保存于4℃。

✧10mg/mL EB 溶液

取溴化乙锭(EB)0.2g溶解于20mL去离子水中,混匀。4℃避光保存。使用时终浓度为

0.5μg/mL。

✧1%琼脂糖凝胶

琼脂糖1g

1×TAE 100 mL

微波炉加热至完全溶解,摇匀,当温度降至60℃时,即可铺制平板。

✓0.1mol CaCl2溶液:

1.1g无水氯化钙,溶于90ml三蒸水中,定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌置于

灭菌试剂瓶中,4℃保

✓氨苄青霉素(Amp)选择性培养基

LB培养基中加入1.5%的琼脂(15g/L),高压灭菌20min,取出,在无菌条件下,冷却至50℃左右时(烧手但尚可忍受)加入抗生素或其他必需成分,如为氨苄青霉素(Amp)选择性培养基,则以50mg/ml的氨苄青霉素贮存液按50μg/ml的量加入,即每ml培养基加入1μl氨基苄。

✓氨苄贮存液

将氨苄青霉素钠溶于三蒸水,配成50mg/ml溶液,以0.22μm滤纸过滤,1ml一份分装,存于-20℃。

质粒的少量提取

【试剂及配制】

1.溶液Ⅰ

葡萄糖(C6H12O6·H2O)1.982g

三蒸水160ml

0.5mol EDTA pH8.0 4ml

1mol Tris-Cl pH8.0 5ml

以三蒸水定容至200ml,高压灭菌,4℃保存

0.5 mol EDTA pH8.0 的配制:

Na2EDTA·H2O 186.1g (如无水,则为175g)

三蒸水700ml

边磁力搅拌边加入固体NaOH,缓慢少量加入,待充分溶解,pH接近8.0,用酸度计调节pH8.0 (HCl/NaOH);

1mol Tris-Cl pH8.0 的配制:

Tris 碱121g

三蒸水800ml

充分搅拌,用浓盐酸将pH调节至8.0,酸度计测量;

2.溶液Ⅱ

配制50ml的量,现用现配。

10 mol NaOH 1ml

三蒸水40ml

10% SDS 5ml

用三蒸水定容至50ml

10mol NaOH 的配制:

40g NaOH晶体加三蒸水至100ml;

10% SDS 的配制:

戴口罩,称10g SDS,溶于80ml三蒸水中,68℃助溶,加数滴1mol HCl,调pH7.2,定容至100ml;

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