SIGMA 葡萄糖HK检测试剂盒说明书

SIGMA 葡萄糖HK 检测试剂盒说明书

（Glucose (HK) Assay Kit; Product Code GAHK -20）

一、产品介绍

食品、生化和制药业普遍将酶作为分析工具。酶法具有特异性高、重现性好、敏感性高以及反应快速的特点，是用于分析的理想工具。由于酶具有高的特异性和敏感性，所以不需样品制备即可进行定量分析。本试剂盒以酶法定量测定食品和其他材料中的葡萄糖。 原理：

葡萄糖+ATP Hexokinase

→ 6-磷酸葡萄糖+ADP

G6P+NAD G6PDH → 6-磷酸葡萄糖酸+NADH

葡萄糖在己糖激酶催化反应中被A TP 磷酸化，然后G6P 在NAD 存在下被6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化，氧化为6-磷酸葡萄糖酸；反应中，等分子量的NAD 被还原为NADH 。随后的340nm 吸光度的增加与葡萄糖含量成正比。

二、试剂组成

1、葡萄糖检测试剂

用20ml 水溶解小瓶内粉剂；加水后立即盖紧瓶塞，反转混匀数次，不可震动。

加水20ml 溶解后，每瓶溶液含有1.5 mM NAD ，1.0 mM ATP ，1.0 U/ml G6PDH ；并含有防腐剂苯甲酸钠和山梨酸钾。

小瓶粉剂保存于2-8℃。如果粉剂受潮结块、加水不能充分溶解、或水溶液浑浊，则应将试剂弃用。

试剂水溶液比较稳定，18-26℃保存7天、2-8度保存4周不会有微生物生长。以水作为空白参照，新配置的溶液340nm 吸光度如果大于0.350，则溶液不适合使用。

2、葡萄糖标准溶液

D -葡萄糖，1.0mg/ml 溶于0.1%苯甲酸；该标准液为即用型，符合美国国家标准技术研究所标准；2-8℃可至少保存半年。期间如果溶液浑浊，则应弃用。

三、需自备的实验仪器

1、可测定340nm 吸光度的分光光度计

2、测量杯

3、10μl -1ml 量程的移液器

四、注意事项和免责声明

本试剂仅供科研使用，不能用于药品、家庭以及其他用途。涉及危害和使用安全性问题，参照材料安全数据表。

五、存储及稳定性

2-8℃保存。

六、实验步骤

1、样品制备

液体：以去离子水稀释样品至0.05-5mg 葡萄糖/ml 。可过滤或去蛋白处理使样品澄清；样品葡萄糖含量较低而颜色较浓时，应予以脱色处理。含碳酸或发酵样品，须脱气处理。 固体：称量0.1mg 样品，用去离子水提取样品。可以加温溶液（＜75℃）以助提取。以去离子水稀释提取液至0.05-5mg 葡萄糖/ml 。可过滤或去蛋白处理使样品澄清。

2、测定

吸取0.5-50μg 葡萄糖质量相当的溶液。为使ΔA360在0.03-1.6之间，必要时可重复测定并

改变溶液体积。

（2）混匀，室温（18-35℃）孵育15min

（3）去离子水调零，测量340nm吸光度，

3、计算

总空白对照应包括样品和试剂空白。

A Total Blank = A Sample Blank + A Reagent Blank

葡萄糖mg/ml = (ΔA) (TV) (Glucose Molecular Weigℎt) (F)

(ε)(d)(SV)(Conversion Factor for μg to mg)

葡萄糖mg/ml = (ΔA) (TV) (180.2) (F)

(6.22) (1) (SV) (1,000)

葡萄糖mg/ml = (ΔA) (TV) (F) (0.029)

(SV)

ΔA = A测试– A总空白

TV = Total Assay Volume (ml) 总测试体积

SV = Sample Volume (ml) 样品体积

Glucose MW = 180.2 g/mole（葡萄糖分子量）

F=制样稀释倍数

ε=NADH /mmol/cm在340nm的毫摩尔消光系数d=光径=1cm

1000=换算系数（μg到mg）

七、参考文献

（略）

翻译：Zhang Zhi-Qiang